הקמת מודל עכבר של רירית רחם דקה

Summary

מאמר זה מתאר פרוטוקול מפורט לייצור רירית רחם דקה אמינה וניתנת לשחזור עם שיעור תמותה נמוך מאוד והידבקויות תוך רחמיות מינימליות על ידי הזרקת 95% אתנול לרחם העכבר תוך 1-3 דקות.

Abstract

רירית רחם דקה (TE) הוכרה באופן נרחב כגורם קריטי לאי פוריות. עם זאת, הפתוגנזה של TE נותרה לא ברורה, ועדיין יש צורך בדחיפות באפשרויות טיפול מספקות. פותחו מספר מודלים של TE בבעלי חיים, אך מודל העכברים הכולל ניתוח בטן והזרקת 95% אתנול מהווה אתגר אדיר בשל שיעור התמותה הגבוה והסיכון להידבקויות תוך רחמיות אם לא מבוצע כהלכה. כאן, אנו מתארים פרוטוקול מפורט המייצר TE אמין וניתן לשחזור עם שיעור תמותה נמוך מאוד והידבקויות תוך רחמיות מינימליות על ידי הזרקת 95% אתנול לרחם העכבר עם זמני עירוי משתנים. התוצאות הראו כי כל העכברים פיתחו בהצלחה TE עם זמני עירוי שנעו בין 1-3 דקות, המאופיינים בירידה אופיינית בעובי רירית הרחם ובמספר הבלוטות, כמו גם פיברוזיס מוגזם של רירית הרחם. ממצאים אלה מצביעים על כך שמודל עכבר זה מתאים לחקר רירית הרחם הדקה ויכול לשמש פלטפורמה לפיתוח טיפולי TE עתידיים.

Introduction

רירית רחם דקה (TE) היא מצב חמור במיילדות וגינקולוגיה המשפיע לעתים קרובות על נשים בגיל הפוריות. TE מאובחן כאשר עובי רירית הרחם נמדד פחות מ-7 מ"מ בסריקת אולטרסאונד, מלווה בחלל רחם תקין, וקשור קשר הדוק לכשל בהריון ^1,2. ההערכה היא שכ-1.5%-9.1% מהנשים העוברות טיפולי הפריה חוץ גופית (IVF) יחוו TE, מה שהופך אותו לאתגר הולך וגובר ברפואת הרבייה ^3,4,5. הגורמים השכיחים ביותר ל-TE כוללים תיקון לא תקין של רירית הרחם לאחר הפרדה כירורגית של הידבקויות תוך רחמיות (IUA) וגרידה, אשר מלוות לעתים קרובות בהפרעה בחלוקת כלי הדם ובלוטות דלילות ^6,7,8. נכון להיום, המנגנונים התאיים והמולקולריים העומדים בבסיס TE נותרו לא ברורים. התאוששות רירית הרחם בחולי TE גוזלת זמן, אם כי טיפול באסטרוגן וטיפול באספירין במינון נמוך נחקרו כהתערבויות פוטנציאליות⁹. לכן, מחקר מעמיק של הפתוגנזה של TE הוא הגישה הישירה ביותר להתמודדות עם האתגרים של מצב זה. עם זאת, מחקרים על הפתוגנזה של TE מסתמכים על מודלים של בעלי חיים, מה שהופך את בחירת המודל המתאים לקריטית.

רוב המחקרים ההיסטופתולוגיים של רירית הרחם הדקה (TE) הראו כי התפשטות לקויה של תאי אפיתל ומקרופאגים, ירידה בביטוי של קולטני הורמון סטרואידים בשחלות, שקיעה מוגזמת של מטריצה חוץ-תאית והזדקנות תאית הם המאפיינים הפתולוגיים המשמעותיים ביותר של TE ^6,9,10. נכון לעכשיו, מודלים שונים של חולדות פותחו כדי לחקות TE, כולל מודלים שנגרמו על ידי גירוד 11,12,13, איסכמיה ¹⁴, פגיעה תרמית¹⁵ ופגיעה כימית 16,17,18,19. מודל חולדה מושרה על ידי גירוד רירית הרחם עם מחט או קטטר, מה שגורם לרוב להידבקויות תוך רחמיות (IUA) במקום TE 11,12,20,21,22. דווח גם על מודל TE המושרה על ידי איסכמיה בחולדות, שבו איסכמיה של רירית הרחם מושגת על ידי ביצוע קשירת עורק רחם דו-צדדית, מה שמוביל להפחתת עובי רירית הרחם. עם זאת, שיטה זו גוזלת זמן, דורשת שלושה חודשים, ואינה נמצאת בשימוש נרחב למחקר¹⁴. במודל המושרה על ידי פגיעה תרמית, נעשה שימוש בצינור הזרעה מלאכותי כדי להחדיר מים שחוממו מראש ב-85 מעלות צלזיוס לצד אחד של קרן הרחם דרך המפגש של שני הצדדים, מה שהופך אותו למורכב יותר משיטות אחרות¹⁵. המודל הכימי כולל הזרקת 95% אתנול לקרן הרחם החשופה כדי לפגוע בכל רירית הרחם. מודל זה מציע את היתרונות של עלות נמוכה ותקופת ניסוי קצרה לחקר המנגנונים והטיפולים הפתולוגיים ב-TE, אך הוא משמש בעיקר בחולדות ולא בעכברים 16,17,23. למרות שקיימים מודלים שונים של בעלי חיים, במיוחד מודלים של חולדות, לכל אחד מהם יש את המגבלות שלו. הם יכולים לדמות רק היבטים מסוימים של TE, ומעט מודלים של עכברים משכפלים מקרוב את מאפייני המחלה של TE תוך שהם נוחים ורב-תכליתיים למחקר.

בהקשר זה, פיתחנו מודל עכבר חדש של רירית רחם דקה (TE) על ידי החדרת 95% אתנול לחלל הרחם באמצעות גישת שיפוע זמן בשיטה שונה²⁴ (איור 1). התוצאות הראו כי כל העכברים פיתחו בהצלחה TE כאשר זמן העירוי נע בין 1-3 דקות, והציגו מאפיינים אופייניים כגון עובי רירית הרחם מופחת, הקטנת בלוטות ופיברוזיס מוגבר של רירית הרחם. ממצאים אלה מצביעים על כך שמודל העכברים שלנו הוא כלי מתאים לחקר TE ויכול לשמש כפלטפורמה לפיתוח טיפולים עתידיים ב-TE.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

מחקר זה אושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של בית החולים למיילדות וגינקולוגיה שנזן ז'ונגשאן (לשעבר בית החולים האורולוגי שנזן ז'ונגשאן), שם נערכו כל הניסויים בבעלי חיים. במחקר זה נעשה שימוש בעכברי C57BL/6 נקבות (בגילאי 6-8 שבועות, משקל 18-20 גרם). כל בעלי החיים שוכנו בסביבה ספציפית נטולת פתוגנים (SPF) באותו חדר והתאקלמו במשך שבוע לפני הניסויים בחדר ללא פתוגנים ספציפיים ב-22 ± 1 מעלות צלזיוס במחזור אור/חושך של 12 שעות. ניתנה להם גישה חופשית למזון ומים. פרטי הריאגנטים והציוד המשמשים במחקר זה מפורטים בטבלת החומרים.

1. זיהוי ייחום

הערה: שלב הייחום בעכברים דומה לשלב הלוטאלי המאוחר בבני אדם, עם רירית רירית רחם עבה יחסית בשלב זה. בחירת עכברים בייחום לאינדוקציה מודל מבטיחה שהם נמצאים במצב פיזיולוגי עקבי יחסית. בנוסף, התוצאות של דילול רירית הרחם בולטות יותר כאשר עובי רירית הרחם עבה יחסית. לפרטים על הליך זה, עיין בדוחות שפורסמו בעבר^25,26.

1. הכן 20 מיקרוליטר מלח בעזרת פיפטה. על ידי אחיזה משני צידי אוזני העכבר וקיבוע זנב העכבר, הכנס בעדינות את קצה הפיפטה לפתח הנרתיק לעומק של כ-2 מ"מ. להחדיר 20 מיקרוליטר מי מלח לנרתיק ולשטוף אותו בעדינות במשך 5 מחזורים.
2. משוך את מי המלח והעביר אותו באופן שווה על מגלשה נקייה. הניחו לו להתאדות ולהתייבש באופן טבעי בטמפרטורת החדר.
3. מרחו 30 מיקרוליטר אתנול על כל שקופית כדי לתקן את התאים. הניחו לאתנול להתאדות למשך 5 דקות עד שהמגלשה יבשה.
4. מרחו 50 מיקרוליטר של תמיסת צביעה סגולה קריסטל על כל שקופית וצבעו את התאים בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות.
5. שטפו כל שקופית במים נטולי יונים כדי להסיר עודפי צבע ולהפחית כתמים לא ספציפיים.
6. התבונן במורפולוגיה של התא וקבע את שיעור סוגי התאים במיקרוסקופ.
7. התבונן במחזורי הייחום של עכברים פעמיים ברציפות כדי להבטיח יציבות. בחר עכברים בייחום השלישי לניסוי.
   הערה: מחזור הייחום בעכברים נמשך בדרך כלל 4-5 ימים ומחולק לארבעה שלבים: פרואסטרוס, אסטרוס, מטסטרוס ודיסטרוס. פרואסטרוס נמשך כ-24 שעות ומאופיין בתאי אפיתל עגולים עד סגלגלים (איור 2A). אסטרוס נמשך בין 12 שעות ל-48 שעות ומאופיין בתאי אפיתל קרטיניים חסרי גרעין בעיקר (איור 2B). מטסטרוס נמשך עד 24 שעות ומאופיין בתערובת של תאי אפיתל קרטיניים ונויטרופילים (איור 3C). דיסטרוס נמשך בין 48 שעות ל-72 שעות ומאופיין בשילוב של נויטרופילים, תאי אפיתל גרעיניים וכמה תאים קרטיניים ללא גרעין (איור 2D).

2. עיצוב קבוצה

הערה: כדי להעריך את ההשפעה של משכי זמן שונים של עירוי אתנול 95% על יציבות מודל TE, הוקמו שש קבוצות טיפול. קבוצה אחת עברה ניתוח דמה ללא מתן אתנול כדי לשמש כבקרה על ההשפעות הפרוצדורליות. עכברים עם TE המושרה על ידי אתנול חולקו באופן אקראי לחמש קבוצות טיפול על סמך זמן העירוי (n = 5 לקבוצה) כדלקמן:

1. קבוצה של דקה: יש להזריק אתנול לחלל הרחם למשך דקה אחת.
2. קבוצה של 2 דקות: הזרקת אתנול לחלל הרחם למשך 2 דקות.
3. קבוצה של 3 דקות: הזרקת אתנול לחלל הרחם למשך 3 דקות.
4. קבוצה של 4 דקות: הזרקת אתנול לחלל הרחם למשך 4 דקות.
5. קבוצה של 5 דקות: הזרקת אתנול לחלל הרחם למשך 5 דקות.

3. אינדוקציה של מודל TE בעכברים

1. יש להרדים את העכברים באמצעות מכונת הרדמה עם 5% איזופלורן ו-100% חמצן למשך 3 דקות (בהתאם לפרוטוקול מאושר מוסדי). שמור על הרדמה באיזופלורן של 1%-3% באמצעות חרוט אף. מרחו משחה וטרינרית על עיני העכברים כדי למנוע יובש בזמן ההרדמה. עקוב אחר קצב הנשימה עם צביטה בבוהן לאורך כל ההליך.
2. השתמש בסרט רפואי כדי לאבטח את גפיהם של העכברים ולהשאיר אותם במצב שכיבה על שולחן הניתוחים שחומם מראש בשמיכה אלקטרונית. משוך בעדינות את לשון העכברים כדי למנוע חסימת דרכי הנשימה.
   הערה: שמירה על חום עכברים במהלך הניתוח מסייעת בשמירה על תפקוד החיסון וזרימת הדם, ומונעת קרישה. בנוסף, שליפת הלשונות של העכברים מבטיחה דרכי נשימה נקיות כדי למנוע חנק במהלך ההרדמה.
3. מרחו קרם להסרת שיער מן החי על הבטן התחתונה של העכברים למשך 3 דקות. הסר את השיער בעזרת מגבונים נקיים. יש לחטא את האזור עם 75% אתנול ויודופור.
4. בצע חתך של 1 ס"מ בבטן, 1 ס"מ מפתח השופכה. השתמש במספריים ובמלקחיים סטריליים כדי להאריך את החתך עד לחלל הצפק.
5. הזיזו בעדינות את הקרביים הצידה בעזרת מלקחיים סטריליים כדי לאתר את הרחם ולחשוף את קרן הרחם הימנית. החל מהדקים המוסטטיים בקצה הפרוקסימלי ליד צוואר הרחם ובקצה הדיסטלי ליד השחלה.
   הערה: הידוק שני קצוות קרן הרחם מבטיח שאין דליפה במהלך הזרקת אתנול, ומונע נזק לצוואר הרחם, לנרתיק ולשחלה.
6. להחדיר כ-50 מיקרוליטר של 95% אתנול²⁷ לחלל הרחם באמצעות מזרק 25 גרם, כאשר המחט מקבילה לכיוון קרן הרחם. הכנס את המחט לחלל הרחם בזווית של 30 מעלות. שמור על המזרק למשך 1 דקה, 2 דקות, 3 דקות, 4 דקות או 5 דקות, לפי הצורך. משוך את האתנול ושטוף את חלל הרחם במי מלח סטריליים 5 פעמים כדי להסיר את כל האתנול שנותר. באופן דומה, להחדיר נפח שווה של מי מלח סטריליים לקרן הרחם השמאלית כביקורת, לפי אותם נהלים.
   הערה: ודא שמחט המזרק מקבילה לכיוון קרן הרחם. הימנע מהכנסת המחט בזווית תלולה מדי כדי למנוע ממנה לחצות את כל קרן הרחם. משוך את האתנול באופן מוחלט ככל האפשר כדי למנוע נזק מתמשך וחוסר יציבות ניסיונית.
7. הסר את המהדקים והחזיר את הרחם והקרביים למקומם המקורי.
8. לתפור את הצפק עם 5-0 תפרים כירורגיים פוליגליקולידים נספגים, ולאחר מכן לתפור את האפידרמיס עם 5-0 תפרים כירורגיים של פוליגליקולידים שאינם נספגים.
9. יש לחטא את החתך ב-75% אתנול ויודופור, ולאחר מכן להחזיר את בעלי החיים לכלוב שלהם. אחרי הניתוח, התבוננו מקרוב אם קצב הלב של העכבר עולה בהדרגה ובהתמדה עד שהעכבר מתאושש לחלוטין ויכול לנוע באופן נורמלי (איור 3A-H).
   הערה: משכך כאבים דרך הפה (3.2 מ"ג/מ"ל אצטמינופן במי השתייה) ניתן ביום שלפני הניתוח והמשיך לאורך שארית המחקר.
10. התבוננו בעכברים בשעות 9:00 ו-15:00 בכל יום וחטאו את החתך ביודופור כדי לוודא שהם במצב טוב.

4. איסוף דוגמאות

1. המתת חסד של העכברים על ידי פריקת עמוד השדרה הצווארי בהרדמה עמוקה 7 ימים לאחר טיפול באתנול 95% (בהתאם לפרוטוקול מאושר מוסדי).
2. חותכים את התפרים כדי לחשוף את הרחם באמצעות מספריים כירורגיים.
3. יש להוציא בזהירות ובאיטיות את כל הרחם באמצעות מלקחיים כירורגיים. נתק את הרחם מהקרביים שמסביב.
4. הסר מיד את שתי קרני הרחם וחלק כל קרן ל 3-4 מקטעים קטנים.
5. הוסף 1 מ"ל של 4% פרפורמלדהיד לצינור מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מ"ל באמצעות פיפטה. שמור על רקמת הרחם ב-4% פרפורמלדהיד למשך 24 שעות לקיבוע.

5. התייבשות רקמות

הערה: התייבשות רקמות מושגת באמצעות מעבד רקמות אוטומטי (ראה טבלת חומרים).

1. הנח את הדגימות הקבועות בפורמלין בקלטות רקמה.
2. העבירו את קלטות הרקמה דרך סדרה של ריכוזי אתנול הולכים וגדלים כדי לייבש את הרקמה באופן הבא: 70% אתנול למשך שעה, 85% אתנול למשך שעה, 95% אתנול פעמיים (שעה כל אחת) ו-100% אתנול פעמיים (שעה כל אחת).
3. החלף את האתנול ב-100% קסילן (135 דקות לטבילה הראשונה, 20 דקות לכל טבילה שלאחר מכן פעמיים) כדי להבטיח שהפרפין יחדור לרקמה.
4. טבלו את קלטות הרקמה בפרפין בחממה בטמפרטורה של 60-65 מעלות צלזיוס (3 פעמים, 140 דקות כל אחת), ושמרו על הקסטות חמות עד להטמעה.

6. הטמעת פרפין

הערה: בצע שלבים אלה באמצעות מרכז הטמעת רקמות מודולרי (ראה טבלת חומרים).

1. ממלאים תבנית שעווה בשעוות פרפין מותכת המחוממת ל-55 מעלות צלזיוס.
2. השתמש במלקחיים מחוממים כדי להעביר במהירות את הקטעים שחדרו מקלטת ההטבעה לתבנית השעווה, ולהבטיח שהחתך של כל קטע מונח במקביל לבסיס התבנית.
3. לאחר שהקטעים ממוקמים כראוי, הנח את החלק התחתון של קלטת ההטבעה על גבי תבנית ההיסטולוגיה.
4. מניחים את התבנית ישירות על צלחת קירור המוגדרת ל-4 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות לפחות כדי לאפשר לפרפין להתמצק.
5. לאחר שהשעווה התמצקה, הסר את הדגימה מהתבנית והשתמש בגוזם פרפין כדי לקצץ את כל עודפי השעווה סביבה.

7. חתך פרפין

1. הכינו אמבט מים בטמפרטורה של 42 מעלות צלזיוס. מניחים את גושי הפרפין על צלחת קרה לפני החיתוך כדי לאפשר להם להתקרר ולהיות קלים יותר לקיצוץ.
2. מהדקים את הדגימה המוטבעת בפרפין על מיקרוטום סיבובי כשמשטח הרקמה פונה כלפי מעלה.
3. חתך 20 מיקרומטר בכל פעם להסרת עודפי פרפין המכסה את הרקמה עד להגעה למישור הרקמה הרצוי.
4. חותכים חלקים של 4 מיקרומטר בכל פעם.
5. העבירו את הסרט עם חתך הפרפין לאמבט המים החמים של 42 מעלות צלזיוס למשך 2 דקות.
6. הרם את החלקים מפני המים והנח אותם על שקופית מיקרוסקופ לאחר הפתיחה.
7. יבש את השקופיות באינקובטור של 60 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.

8. צביעת המטוקסילין ואאוזין

הערה: צביעת המטוקסילין ואאוזין מתבצעת באמצעות מכונת צביעת שקופיות אוטומטית (ראה טבלת חומרים).

1. הכן את כל הריאגנטים מראש לפני שמתחילים בהליך הצביעה.
2. משרים את השקופיות ב-100% קסילן למשך 10 דקות, 5 דקות ו -3 דקות, בהתאמה.
3. החזר את המגלשות בסדרת אתנול פוחתת במים נטולי יונים באופן הבא: 100% אתנול, 95% אתנול (פעמיים) ו-80% אתנול, למשך 2 דקות כל אחד.
4. שוטפים את השקופיות במים נטולי יונים.
5. מכתימים את השקופיות בתמיסת המטוקסילין למשך 10 דקות. שוטפים את השקופיות במים נטולי יונים למשך דקה אחת או עד שהמים כבר לא סגולים.
6. טבלו את השקופיות בתמיסת התמיינות אתנול חומצה של 0.5% פעמיים למשך 3-5 שניות בכל פעם. שוטפים את השקופיות במים נטולי יונים למשך דקה.
7. הנח את השקופיות במאגר כחול (תמיסת אמוניה 1%) למשך דקה אחת. שוטפים את השקופיות במים נטולי יונים למשך דקה.
8. ייבשו את המגלשות עם 80% אתנול ולאחר מכן טבלו אותן בתמיסת עבודה של אאוזין-Y למשך 10 שניות.
9. העבירו את השקופיות ל-95% אתנול ושטפו פעמיים למשך 10 שניות כל אחת. לאחר מכן, העבירו את השקופיות לאתנול מוחלט וייבשו אותן פעמיים למשך 10 שניות כל אחת.
10. טבלו את השקופיות ב-100% קסילן כדי לנקות את הרקמה פעמיים, למשך 2 דקות כל אחת.
11. הניחו כיסוי על הרקמה ואטמו אותה בשרף טבעי.

9. מכתים מאסון

1. הפחיתו את הרקמה על ידי השריית השקופיות ב-100% קסילן למשך 10 דקות, 5 דקות ו-3 דקות, בהתאמה.
2. לאחר הפירוק, יש להשרות את המגלשות בסדרת אתנול יורדת במים נטולי יונים: 100% אתנול, 95% אתנול (פעמיים) ו-80% אתנול, למשך 2 דקות כל אחד.
3. שוטפים את השקופיות במים נטולי יונים.
4. מכתים את השקופיות בתמיסת ההמטוקסילין מברזל של וייגרט למשך 5 דקות, ולאחר מכן שוטפים את השקופיות במים נטולי יונים למשך 30 שניות.
5. הבדיל בין צבעי מבני הרקמה המוכתמים על ידי דגירה של השקופיות באלכוהול חומצה הידרוכלורית 1% למשך 15 שניות.
6. שוטפים את המגלשות במים נטולי יונים למשך 30 שניות.
7. דגרו את הרקמה בתמיסת כחול למשך 3-5 דקות.
8. שוטפים את המגלשות במים נטולי יונים למשך 30 שניות.
9. מניחים את השקופיות בתמיסת פוקסין Ponceau-acid למשך 5-10 דקות.
   הערה: מערבבים מים נטולי יונים ותמיסת חומצה חלשה ביחס של 2:1 להכנת תמיסת העבודה החלשה של החומצה.
10. שוטפים את השקופיות בתמיסת העבודה החלשה של החומצה למשך 30 שניות.
11. הבדיל את הרקמה בתמיסת החומצה הפוספומוליבדית למשך 1-2 דקות, ולאחר מכן שטוף את החלקים בתמיסת עבודה חלשה של חומצה למשך 30 שניות.
12. מכתימים את קטעי הרקמה בתמיסה כחולה אנילין למשך 1-2 דקות.
13. יבש את חלקי הרקמה במהירות ב-95% אתנול למשך 2-3 שניות, ואחריו 100% אתנול פעמיים למשך 5-10 שניות כל אחד. נקה את השקופיות בקסילן פעמיים, למשך 1-2 דקות כל אחת.
14. הניחו כיסוי על הרקמה ואטמו אותה בשרף טבעי.
15. מסננים עודפי שרף ומניחים לשקופיות להתייבש.

10. הדמיה וניתוח

1. צלם תמונות של הקטעים באמצעות מערכת סורק שקופיות.
   הערה: השתמש במטרה פי 4 או פי 10 לסקירה כללית של הסעיפים; לקבלת תמונות מפורטות יותר, השתמש ביעדים של 20x עד 100x.
2. בצע ניתוח כמותי של עובי רירית הרחם, מספר הבלוטות ומידת פיברוזיס ברקמות באמצעות פלטפורמת ניתוח התמונה HALO.
   הערה: עובי ממוצע מתקבל על ידי מדידת המרחק האנכי מחלל הרחם לשריר הרחם ב-5 שדות ראייה שנבחרו באופן אקראי.

11. ניתוחים סטטיסטיים

1. ביצוע ניתוחים סטטיסטיים באמצעות SPSS גרסה 23.0 (SPSS Inc., שיקגו, אילינוי, ארה"ב).
2. להעריך את המובהקות הסטטיסטית של ההבדלים הניסיוניים בין קבוצת הביקורת לקבוצת המודל על ידי ביצוע בדיקת התפלגות נורמלית.
3. הצג נתונים המופצים בדרך כלל כממוצע ± SEM.
4. לנתח נתונים מקבוצות טיפול שונות באמצעות ANOVA חד כיווני. התאם להשוואות מרובות של מספר האללים שנבדקו בכל לוקוס באמצעות שיטת בונפרוני. שקול ערך P <0.05 כמובהק סטטיסטית.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

תוצאות

המאפיינים העיקריים של רירית הרחם הדקה (TE) הם ירידה בעובי רירית הרחם וצפיפות הבלוטות, יחד עם פיברוזיס מוגבר של רירית הרחם. שיטה זו שיכפלה בהצלחה את המאפיינים הללו בעכברי המודל. ניתוח הנתונים חשף ירידה משמעותית בעובי רירית הרחם בקבוצת הדקה (222.3 מיקרומטר ± 13.96 מיקרומטר לעו?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

TE מאופיין בריבוי תאים לא מספיק ותאים לא מתפקדים, הקשורים קשר הדוק לאי פוריות, הפלות חוזרות והפרעות שליה ^2,3. למרבה הצער, אין כיום טיפול יעיל ל-TE. מודלים של בעלי חיים ממלאים תפקיד מכריע בחקר מצב זה. בין השנים 2014 ל-2024, חולדות שימשו כאורגניזמים מו...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anesthesia Machine	RWD Life Science	R530	Mobile inhalation anesthesia machine for small animals
0.9% saline	Hubei Kelun Pharmaceutical	C230817A2	10 mL, medical injection
75% ethanol	LIRCON	6303060031	500 mL, disinfectant reagent
95% ethanol	Guangzhou Chemical Reagent Factory	64-17-5	500 mL, chemical reagent
Absorbable sutures	Jinhuan Medical	CR537	Thickness: 5-0; Length: 90 cm
Aqueous ammonia	MilliporeSigma	1336-21-6	1000 mL, chemical reagent
Automatic Tissue Processor	Leica	TP1020	100 embedding boxes can be processed at one time
C57BL/6 mice	Experimental Animal Center of Southern Medical University
Eosin-Y	BASO	BA4024	1000 mL, used for the staining of paraffin sections, frozen sections, etc
Haematoxylin	BASO	BA4041	1000 mL, used for the staining of paraffin sections, frozen sections, etc
HALO Image Analysis Platform	Indica labs		The instrument features ease-of-use and scalability, powerful analytical capabilities, and the fastest processing speed
Hemostatic clamps	HUAYON	18-5021	1.8 cm in total length with 0.7 cm jaw
Hemostatic forceps	HUAYON	18-5020	10 cm in total length
HistoCore Rotary Microtome	Leica	149BIO000C1	Slice thickness ranges from 1 to 60 μm
Indorphor	ADF	1005	500 mL, disinfectant reagent
Isoflurane	RWD Life Science	R510-22-10	100 mL, active ingredient 100% isoflurane
Masson's trichrome staining	SOLARBIO	G1340	7 × 100 mL for 100 tests
Microscope slide	Gene Tech	GT100511	Length: 75 cm; Width: 25 cm
Modular Tissue Embedding Center	Leica	EG1150 C	The instrument contains a cold stage and a heated paraffin distribution module, providing flexibility for the embedding work
Natural resin	SAKURA	4770	Resin-coated film, Suitable for histology staining
Olympus SLIDEVIEW VS200	PANOVUE	VS200	The instrument captures high-quality virtual slide images and enables advanced quantitative image analysis
Paraformaldehyde fix solution	Servicebio	G1011	500 mL, universal tissue fixative (neutral)
Surgical forceps	HUAYON	18-1300	2.2 mm straight, 12.5 cm wide
Surgical scissors	HUAYON	18-0110	10 cm, stainless steel surgical scissors
Syringe	Kindly	60017031	1 mL, disposable sterile syringe with needle
Tissue cassettes	CITOTEST	80106-1100-16	White; flow-through slots; 0ne-piece integral lid; labeling areas are located on three sides
Tissue-Tek Prisma Plus	SAKURA	DRS-Prisma-P-JCS	The processing capacity is 60 slides at one time
Xylene	Guangdong Guanghua Sci-Tech	1330-20-7	1000 mL, organic solvent