A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
פרוטוקול זה מפרט את הרכבת מערכי מיני-ביו-ריאקטור שישמשו לתרבית זרימה רציפה של קהילות צואה מורכבות בתנאים אנאירוביים. אנו דנים גם בשיטות ההרכבה, החיסון והדגימה של הכורים להמשך ניתוח.
המיקרוביוטה, במיוחד חיידקים, מגיבים לחשיפות סביבתיות שונות כגון מיקרו-מקרו-נוטריינטים, תרכובות פרמקולוגיות ומתווכים דלקתיים, המשנים באופן דינמי את הרכב הקהילה ואת התפוקה המטבולית המיקרוביאלית. הבנת האופן שבו תנאי תרבית פיזיולוגיים משפיעים על קהילות מיקרוביאליות ועל המגוון והיכולת המטבולית שלהם תתרום ידע חשוב על השפעתם על בריאות ומחלות. כאן, אנו מציגים פרוטוקול המותאם מהתבנית שפורסמה על ידי Auchtung et al. ליצירת מערכי מיני-ביו-ריאקטורים שיכולים לטפח קהילות צואה מורכבות, להגדיר קונסורציום חיידקים או זנים בודדים בתנאים מדויקים, כולל זמינות חומרים מזינים, טמפרטורה, קצב זרימה, pH ותכולת חמצן. אנו מתארים את תהליך בניית מערכת המיני-ביו-ריאקטור, כולל התאמות לשיפור המגבלות בפרוטוקול שפורסם. אנו דנים גם בהקמת מערכת המיני-ביו-ריאקטור בתנאים אנאירוביים עם שימוש במדיה MEGA (המבוססת על Han et al.), שהיא מדיה עשירה התומכת בגידול של חיידקים מגוונים. אנו מתארים חיסון של דגימות צואה של עכברים מואנשים במעיים למערכת המיני-ביו-ריאקטור, ולאחר מכן הקמת תרביות קהילתיות מורכבות בתוך מערכת המיני-ביו-ריאקטור, שניתן לגדל בזרימה רציפה עם דגימה אספטית כדי לנטר את הרכב הקהילה. מערכת זו ניתנת להתאמה לשינויים תזונתיים ושינויים תרבותיים אחרים. הטכניקות המתוארות כאן מאפשרות אפיון של קהילות צואה מגוונות וקפדניות בתנאים דינמיים או בתגובה להפרעה במנותק מגורמים שמקורם במארח.
מיקרוביוטת המעיים היא רשת עצומה של מיקרואורגניזמים, כולל חיידקים, פטריות, ארכאות ווירוסים, המכילים רפרטואר גנטי ומטבולי עצום שעולה בהרבה על זהשל מארח אנושי. היכולת המטבולית העשירה של המיקרוביום כוללת מטבוליטים המיוצרים מעיבוד חיידקי של חומרים מזינים תזונתיים, מטבוליטים מארחים שעברו שינוי כימי על ידי חיידקים, ומטבוליטים המסונתזים באופן ייחודי על ידי המיקרוביוטה2. המיקרוביוטה מעורבת כמעט בכל התהליכים הביולוגיים של המארח אך גם במצבי מחלה כמו מחלות מעי דלקתיות, סרטן, הפרעות מטבוליות ואפילו הפרעות נוירולוגיות 2,3. ניתוח תרומת המיקרוביוטה מזו של המארח חיוני להבנת תפקידם של מיקרואורגניזמים ספציפיים או קהילות מורכבות בבריאות ובחולי. גישה אחת המאפשרת נתיחה זו היא שימוש בביו-ריאקטורים מיקרוביאליים, המטפחים קהילות מיקרוביאליות מגוונות בתנאים דינמיים. ישנם ביו-ריאקטורים רבים הזמינים מסחרית המאפשרים גידול של קהילות חיידקים צואתיות כמעט לכל מטרה, כולל גידול מוצרים ביולוגיים בקנה מידה גדול או בקרה מדויקת של גורמים תזונתיים ספציפיים לחקר תהליכים מטבוליים. עם זאת, מערכות אלה יקרות מאוד ודורשות הכנה ממושכת, ואינן מאפשרות לבחון תנאי ניסוי מגוונים במקביל. לגישה פשוטה שהיא פחות יקרה, ניתנת להתאמה ומאפשרת תנאים מקבילים רבים, אנו מציגים כאן את הפרוטוקול להקמה ושימוש במערך מיני-ביו-ריאקטור בזרימה רציפה המותאם מ-Auchtung et al.4.
ההגדרה המלאה של מערכת המיני-ביו-ריאקטור מודגמת באיור 1A. מערכת מיני-ביו-ריאקטור זו משתמשת במערכים של 6 בארות כורים, שאינם תלויים לחלוטין זה בזה ומוגדרים בתא אנאירובי תחת זרימה פריסטלטית כדי לאפשר אספקה והסרה רציפה של מדיה (איור 1A). כל מערך כורים יושב על לוחית ערבול מגנטית של 60 מצבים, עם שתי משאבות פריסטלטיות של 48 קלטות המחזיקות צינורות 2 מצבים עבור מדיית המקור וזרימת הפסולת (איור 1A). התא האנאירובי מצויד במוניטור אנאירובי CAM-12 לתכולת חמצן, קופסת זרז להסרת חמצן עם יכולת חימום ועמוד להסרת מימן גופרתי לספיגת עודפי גז מחילוף החומרים של החיידקים. כל באר כור מצוידת בכניסת מדיית מקור, יציאת פסולת ויציאת דגימה, המאפשרת חיסון או דגימה של כל באר כור בודדת (איור 1B).
כפי שתואר, מערכת הביוריאקטור מאפשרת בקרה דינמית על הטמפרטורה, צריכת המדיה וזמינות החומרים המזינים כדי לתמוך בגידול ותחזוקה של קהילות צואה. הטמפרטורה מווסתת על ידי קופסת זרז בעלת יכולת חימום, המאפשרת לבצע שינויים בטמפרטורה בכל החדר האנאירובי במהירות. צריכת המדיה מווסתת על ידי קצבי זרימת משאבה פריסטלטית, הניתנים לשינוי כדי לשנות את תחלופת המדיה בכורים. ניתן להתאים את תחלופת המדיה לסוגי הקהילה המטופחים בכורים, למשל, מותאמים לזני מטרה שגדלים לאט או גדלים מהר מאוד. לבסוף, ניתן לשנות את זמינות החומרים המזינים באופן דינמי על ידי הוספת רכיבים דרך יציאות הדגימה הבודדות עבור כל באר כור. תנאים סטטיים הניתנים לשינוי בתחילת הניסוי, אך אין להם שליטה דינמית במערכת הם סוג המדיה, תכולת החמצן ומספר הכורים בו זמנית. חוקרים יכולים לבחור ליישם כל מדיה שהם רוצים, ובעוד שמדיה אחת מתוארת כאן, אינספור סוגי מדיה אחרים יושמו בהצלחה. ניתן להפעיל את הכורים בתנאים אירוביים או מיקרואירופיליים (בהתאם לזמינות תא מיקרואירופילים). לבסוף, ניתן להקים כמה שיותר או כמה שפחות כורים בהתאם לצרכי הניסוי של החוקר. בעוד שהכורים נמצאים בקבוצות של שישה בתוך מערך, כל כור פועל באופן עצמאי מהאחרים, וניתן לקשר כל אחד מהם למקור אחר אם תרצה.
ניתן להקים את מערכת הביוריאקטור המודולרית הזו בסביבות 25,000 דולר (לא כולל התא האנאירובי או רכיבים ספציפיים לתא), כאשר החלק היחיד שאינו ניתן לשימוש חוזר הוא הצינורות שניתן להחליף בפחות מ-100 דולר להפעלה של המערכת. המערכת היא אוטומטית ברובה, אך דורשת בדיקה יומית של רמות המדיה מכיוון שיהיה צורך להחליף בקבוקי מקור מדיה כאשר הם ריקים. בנוסף, יש להשלים כל דגימה באופן ידני, וכל שינוי מותנה דינמי במערכת יצטרך להתבצע באופן ידני (לדוגמה, שינוי הטמפרטורה). מפרוטוקול המערכת המקורי שפורסם על ידי Auchtung et al., יושמו כמה שינויים כדי לשפר את הביצועים והתועלתהכוללים 4. ראשית, החומר להדפסת תלת מימד של מערך הביוריאקטור שונה להיות פלסטיק שקוף שקוף דמוי ABS כדי לשפר את השלמות המבנית של המערכת באמצעות סבבים חוזרים ונשנים של חיטוי. בנוסף, במקום צינורות OD PTFE בגודל 1/8 אינץ' (3.2 מ"מ), נעשה שימוש בצינורות E-LFL, 2.06 מ"מ ID, 100 רגל בשל החומר היציב יותר, העמיד יותר בפני קריסה, מה שיגרום לחסימות בזרימה במערכת. לבסוף, אביזר נוסף באמצעות תבריג 1/4-28 מ"מ למתאמי זכר דוקרניים משמש להפחתת שינויים בהחלקת צינור מבקבוקי מקור מדיה. מבית Han et al., מתכון המדיה המותאם של MEGA מספק מדיה לא מוגדרת, מורכבת ועשירה ביותר המאפשרת גידול של מיקרואורגניזמים אנאירוביים קפדניים5. המדיה שונה כדי להשתמש בתכשיר חלופי של רכיב היסטידין-המאטין, מכיוון שהמקור אינו זמין עוד מסחרית. נתרן הידרוקסיד משמש גם ל-pH של המדיה ל-7.0 או כל pH רצוי. בסך הכל, מערכת זו היא תקציבית וידידותית למשתמש, מותאמת ונקודת כניסה מצוינת למערכות תרבות זרימה רציפה.
בפרוטוקול זה, אנו מתארים בפירוט את ההגדרה של מערכת מערך מיני ביו-ריאקטור זו, כולל חומרים, עיקור המערכת ושימוש לאחר מכן לגידול דגימות צואה של עכברים אנושיים במעיים. המטרה הכוללת של שיטה זו היא לבנות מערכת ביו-ריאקטור מסתגלת וחסכונית שניתן להשתמש בה לטיפוח קהילות מיקרוביאליות בתנאים מבוקרים. סכימה מפורטת של זרימת העבודה להרכבת מערכת המיני-ביו-ריאקטור מסופקת באיור 2 ומוזכרת בשלבים המתאימים בתוך הפרוטוקול. בדוגמה שלנו, אנו מחסנים שני כורים עם אותה דגימת צואה מעכברי מעיים אנושיים ומתארים מבנה קהילה מיקרוביאלית תחת זרימה רציפה של מדיה MEGA.
איור 1: דיאגרמה סכמטית של מערך מיני-ביו-ריאקטור בתא האנאירובי. (A) תצוגה מלאה של מערך המיני-ביו-ריאקטור שהושלם בתא האנאירובי. מערך הביוריאקטור בן 6 הבארות ממוקם על צלחת הערבוב המגנטית בת 60 המצבים. רשת טי המקור מחוברת למדיית המקור בצד שמאל דרך מכסה הבקבוק בעל שני החורים. שתי משאבות פריסטלטיות מחזיקות את הצינור בעל 2 התחנות מרשתות המקור והפסולת משמאל ומימין, בהתאמה. רשת טי הפסולת מתרוקנת לתוך בקבוק הפסולת בצד ימין. ציוד חיוני להפעלת התא האנאירובי, כולל צג CAM-12, תיבת זרז עם קיבולת חימום ועמוד להסרת מימן גופרתי, מסודרים בתוך התא סביב מערכת המערך. (ב) מבט מלמעלה על המקור, הדגימה ויציאות הפסולת המחוברות לבאר כור אחת עם מדיה בגובה המתאים בכור. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 2: דיאגרמה סכמטית של זרימת עבודה של הרכבת מערך מיני-ביו-ריאקטור. (A) מבט מלמעלה למטה של מערך המיני-ביו-ריאקטור, המראה את כיוון המקור, הפסולת ויציאות הדגימה. (B) מבט מהצד של מערך המיני-ביו-ריאקטור עם תצוגה הממחישה את שלבים 2.3-2.4 של הפרוטוקול. צינורות ה-PTFE וההתאמה בגודל 1/8 אינץ' (1) מחוברים ומוכנסים ליציאות הפסולת והדגימה. אביזר (1) ללא PTFE מוכנס ליציאת המקור. (C) מבט מהצד של מערך מיני-ביו-ריאקטור הממחיש את שלבים 2.5-2.6 של הפרוטוקול. אביזר (2) מחובר ליציאות המקור והפסולת. התאמה (3) מחוברת ליציאת הדגימה, ואליה מוכנס אביזר (4) למעלה. (D) מבט מהצד של מערך מיני-ביו-ריאקטור הממחיש את שלבים 2.9-2.11. צינורות E-LFL 2.06 מ"מ מחוברים ליציאות המקור והפסולת, והקצה השני מחובר לאביזרים (5) ולאחר מכן (6). לאחר מכן מחברים צינורות 2 עצירות בקוטר המתאים להתאמה (6). לאחר מכן חוזרים על החיבור ההפוך בסוף הצינור בעל 2 המצירות, כאשר התאמה (6) מתחברת לצינור 2 עצירות והתאמה (5) מתחברת אליו. לבסוף, צינורות E-LFL 2.06 מ"מ יחוברו למתקן (5) לחיבור לרשת ה-luer tee. (ה) מלמעלה למטה view של מערך מיני-ביו-ריאקטור המציג את הגדרת רשת המקור והפסולת המתוארת בשלבים 2.12-2.15. צינורות E-LFL 2.06 מ"מ המסתיימים בהתאמה (5) משמשים לחיבור כל כור למספר אביזרים (7), שפתחם האחרון מחובר למכסה שעל המקור או בקבוק הפסולת. (F) מבט מהצד של מכלול פקק בקבוק דו-חורי המתואר בשלבים 2.16-2.17. פתח אחד במכסה מחובר לצינור PTFE המונח בתוך הבקבוק. לפתח זה מוכנס אביזר (1), ואחריו התאמה (2), וצינורות E-LFL 2.06 מ"מ המחוברים להתאמה (5). אביזר זה מחובר לרשת המקור או לרשת הפסולת. לפתח שאינו מחובר לצינורות PTFE, מוכנס מתקן (1), ואחריו התאמה (2), וצינורות E-LFL 2.06 מ"מ מחוברים לאביזר אחר (5). קצה זה מכוסה בנייר כסף במהלך עיקור חיטוי לחיבור עתידי למסנן מזרק סטרילי של 0.22 מיקרומטר. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.
דגימות צואה ששימשו במחקר זה התקבלו מניסויים שאושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) באוניברסיטת פלורידה (UF) ובוצעו במתקני טיפול בבעלי חיים של UF (פרוטוקול IACUC #IACUC202300000005). בקצרה, סוג בר מעורב ללא חיידקים (GF WT; עכברי C57BL/6) (שגודלו ומתוחזקים במבודדים על ידי החטיבה ללא חיידקים של UF Animal Care Services) הועברו ממבודדי רבייה והוכנסו למערכת ההדרה הביולוגית של ISOcage P כדי לאפשר מניפולציה מיקרוביאלית. יחידות יוצרות מושבה שוות (CFU) מצואת תורם אנושי נאספו לעכברים. שבועיים לאחר החיסון, דגימות צואה נאספו מעכברים אלה באופן אספטי לאחסון ולשימוש לאחר מכן בפרוטוקול זה.
הערה: איסוף והכנת דגימות צואה המתוארות כאן נועדו רק כדוגמה להליך תקין, שכן בהתאם לסוג הדגימות שנאספו (אדם, עכבר, בעל חיים אחר) ואחסון הדגימות הללו, הליך זה יכול להשתנות מאוד. אנשים צריכים לעיין בספרות המתאימה כדי לעצב פרוטוקול לאיסוף ושימור דגימות צואה בהתבסס על הצרכים של החוקר הבודד.
1. הכנה אופיינית של דגימות צואה לאחסון של -80 מעלות צלזיוס
2. בניית מערך כורים בן 6 בארות
3. הכנת מדיה MEGA
4. הגדרת מערך בתא אנאירובי
הערה: חיוני לנקות את פנים מכסה המנוע ואת כפפות מכסה המנוע עם מי חמצן 3% ואחריו שטיפת מים משולשת ללא יונים כדי להבטיח שאין זיהום פני השטח לפני ההרכבה. אם החיבורים נעשים במהירות לאחר הסרת נייר הכסף, ולא נוצר מגע ישיר עם פנים האבזור וכפפות החדר האנאירובי, יש סיכוי מינימלי לזיהום
5. חיסון דגימת צואה
6. איסוף אספטי של דגימות מבארות כור
7. פירוק וניקוי מערכת המיני-ביו-ריאקטור
דגימות צואה נאספו מעכברים שהתיישבו בתמיסת צואה אנושית שבועיים לאחר החיסון ואוחסנו בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס. מערכת הביוריאקטור הוקמה עם זרימת מדיה MEGA רציפה עבור שתי בארות כורים משוכפלות (איור 3A). התרחיץ הצואתי הוכן מכדורי הצואה של ה?...
מערכת המיני-ביו-ריאקטור המתוארת בפרוטוקול זה מאפשרת גידול של קהילות צואה עצמאיות לניסויים מקבילים. יכולת זו לחקור קהילות מיקרוביאליות בבידוד של גורמים מארחים היא גישה חיונית להבנת היכולת הפנימית של מיקרואורגניזמים להסתגל לסביבתם. ניתן להתאים פרוטוקול זה בקלות לגידול ...
למחברים אין ניגודי אינטרסים.
המחברים אסירי תודה לג'וזי גוטייה על הסיוע בריצוף הגנים 16S rRNA. מחקר זה נתמך, בחלקו, על ידי קרנות מרכז הסרטן של UF (CJ) וקרן Gatorade של המחלקה לרפואה של UF (C.J). R.Z.G. נתמך על ידי קרנות מרכז הסרטן של UF Health. R.C.N. נתמך על ידי מענק ההכשרה TL1 של המכונים הלאומיים לבריאות באוניברסיטת פלורידה (TL1TR001428, UL1TR001427), המכון הלאומי לסרטן של המכונים הלאומיים לבריאות פרס תוכנית ההכשרה הבין-תחומית לחקר הסרטן המבוססת על צוות T32CA257923 ומרכז הסרטן של UF Health. המחקר המדווח בפרסום זה נתמך על ידי מרכז הסרטן של UF Health, נתמך בחלקו על ידי הקצאות המדינה הניתנות ב-Fla. Stat. § 381.915 והמכון הלאומי לסרטן של המכונים הלאומיים לבריאות תחת פרס מספר P30CA247796. התוכן הוא באחריות המחברים בלבד ואינו מייצג בהכרח את העמדות הרשמיות של המכונים הלאומיים לבריאות או מדינת פלורידה. למממנים לא היה תפקיד בתכנון המחקר, איסוף הנתונים וניתוחם; החלטה לפרסם; או הכנת כתב היד.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
1 mL BD Slip Tip Syringe sterile, single use | Fisher Scientific | 309659 | |
1/4-28 mm thread to barbed male adaptor (3.2 mm), 5/pack | Cole-Parmer | 008NB32-KD5L | To build 1 6-well array, need 2 packs |
10M NaOH (Sodium Hydroxide) | Sigma | 72068-100ML | |
2.0ml Screw Cap Tube, NonKnurl, Skirted,Natural, E-Beam Sterile tube w/ attached cap | Fisher Scientific | 14-755-228 | |
2mag MIXdrive 60 Stirring Drive | 2mag | 40060 | 60-position magnetic stir plate (optional addition of heating capacity- cat# 40260) |
6-well reactor arrray, ABS-Like Translucent Clear plastic | Protolabs | Custom | See supplementary files for .stl file for 3D printing |
Absolute Ethanol (200 Proof) | Fisher Scientific | BP2818 | |
Acetic acid, glacial | Sigma | A6283 | |
Adapter, nylon, male luer to 1/4-28 thread, 25/pack | Cole-Parmer | EW-45505-82 | To build 1 6-well array, need 6 (1 pack) |
Aluminum foil | Fisher Scientific | 01-213-100 | |
Anaerobic chamber | Coy Lab Products | Type B | |
Bel-Art SP Scienceware Flea Micro Spinbar Magnetic Stirring Bars (1/pk) | Fisher Scientific | 22-261679 | To build 1 6-well array, need 6 |
Biosafety cabinet class 2 | Nuaire | ||
Butyric acid | Sigma | B103500 | |
CaCl2 · 2H2O (Calcium Chloride Dihydrate) | Sigma | C7902 | |
Clorox Healthcare Germicidal Wipes With Bleach, Unscented, 6" x 5", Pack Of 150 Wipes | Office Depot | 129202 | |
D-(-)-Fructose | Sigma | F0127-100G | |
D-(+)-Cellobiose | Sigma | C7252-100G | |
D-(+)-Glucose | Sigma | G8270-100G | |
D-(+)-Maltose monohydrate | Sigma | M5885-100G | |
Drill America Plug Hand Tap DWTP1/4-28 | Home Depot | 305699489 | |
Dulbecco's Phosphate Buffered Saline, 1X without Ca and Mg, Sterile | Genesee | 25-508 | |
Female luer × 1/16″ hose barb adapter, Nylon, 25/pack | Cole-Parmer | EW-45502-00 | To build 1 6-well array, need 24 (1 pack) |
Female luer × 1/8″ hose barb adapter, Nylon 25/pack | Cole-Parmer | EW-45502-04 | To build 1 6-well array, need 6 (1 pack) |
Female luer × 3/32″ hose barb adapter, Nylon, 25/ pack | Cole-Parmer | EW-45502-02 | To build 1 6-well array, need 6 (1 pack) |
Female luer tee, Nylon, 25/pack | Cole-Parmer | EW-45502-56 | To build 1 6-well array, need 10 (1 pack) |
FeSO4 · 7H2O (Iron [II] Sulfate Heptahydrate) | Sigma | F8633 | |
Hematin | Sigma | H3281 | |
Histidine | Sigma | H7750 | |
Isovaleric acid | Sigma | 129542 | |
K2HPO4 dibasic (dipotassium hydrogen phosphate) | Sigma | P2222-1KG | |
KH2PO4 monobasic (potassium dihydrogen phosphate) | Sigma | P0662-500G | |
Large Orifice Pipet Tips | Fisher Scientific | 02-707-134 | |
L-Cysteine hydrochloride | Sigma | C1276-10G | |
Male luer with lock ring × 1/8″ hose barb adapter, Nylon, 25/pack | Cole-Parmer | EW-45505-04 | To build 1 6-well array, need 42 (2 packs) |
Meat extract | Sigma | 70164-500G | |
Med Vet International Exel Needle, 20G X 1", Hypodermic, 100/Box, 26417 | Fisher Scientific | 50-209-2532 | |
Menadione (Vitamin K3) | Sigma | M5625 | |
MgSO4 · 7H2O (Magnesium Sulfate Heptahydrate) | Sigma | M1880-500G | |
Milli-Q water | |||
NaCl (Sodium Chloride) | Sigma | S9888-500G | |
NaHCO3 (Sodium Bicarbonate) | Sigma | S5761-500G | |
Omnifi t Q-series two hole bottle cap | Cole-Parmer | 00945Q-2 | To build 1 6-well array, need 1 |
PMP IPC-N L 24CHNL 8RLR 115V | MasterFlex | ISM939C-115V | 24-channel peristaltic pump, require 1 for source and 1 for waste |
Precision Seal® rubber septa,white, 7 mm O.D. glass tubing (100/pk) | Millipore Sigma | Z553905-100EA | To build 1 6-well array, need 6 septa |
Propionic acid | Sigma | P5561 | |
Pump Tubing, 2-Stop, Tygon S3 E-Lab, 1.02 mm ID; 12/PK | VWR | MFLX96460-28 | To build 1 6-well array, need 6 (1 pack) |
Pump Tubing, 2-Stop, Tygon S3 E-Lab, 1.14 mm ID; 12/PK | VWR | MFLX96460-30 | To build 1 6-well array, need 6 (1 pack) |
Puritan Cary-Blair Medium, 5 ml | Fisher Scientific | 22-029-646 | |
PYREX 2L Round Media Storage Bottles, with GL45 Screw Cap | Fisher Scientific | 06-414-1E | |
Razor Blades | Genesee | 12-640 | |
Resazurin, sodium salt | ACROS Organics from ThermoFisher | AC41890-0010 | |
Soluble starch | Sigma | S9765-100G | |
Stainless Steel Micro Spatulas, spoon like blade | Fisher Scientific | S50823 | |
TBNG TYGON ELFL 2.06MMID 100' | VWR | MFLX06449-42 | To build 1 6-well array, need 205.5 cm |
Trace Mineral Supplement | ATCC | MD-TMS | |
Trypticase Peptone (BBL) | Fisher Scientific | B11921 | |
Tubing, PTFE, 1/8″ (3.2 mm) OD × 1.5 mm ID, 10 M | Cole-Parmer | 008 T32-150-10 | To build 1 6-well array, need 300 mm |
Tween 80 | Sigma | P1754 | |
Vitamin Supplement | ATCC | MD-VS | |
Yeast Extract (Bacto) | Fisher Scientific | DF0127-17-9 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved