המחברים מודים כריסטיאן Pahrmann לקבלת סיוע טכני אותה היסטולוגיה ביצוע.

<html> Balb / C עכברים במשקל מינימום של 20 גרם בגיל של 8 עד 12 שבועות נרכשים מ צ&#39;ארלס ריבר (Sandhofer מאייתים 7, D-97633 Sulzfeld). עכברים הם שוכנו בתנאים רגילים, נמאס כדורי תקן העכבר כרצונך מים. הרדימי עכבר עם isoflurane (2%) באמצעות תא אינדוקציה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את אזור הצוואר בצד השמאלי של בית החזה ולחטא באמצעות אתנול 80%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר על הגב שלה במקום facemask על האף והפה שלה כדי לשמור על הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את הרפלקסים צובט את הזנב והרגליים האחוריות כדי להיות בטוח כי העכבר הוא anesthesized מספיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת נוף מיקרוסקופי לבצע חתך קו האמצע המפריד בין צוואר הרחם, עור, שרירים ורקמות מכסה את קנה הנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר קנה הנשימה חשוף לחתוך חור קטן לתוך הרקמה בין שתי טבעות מחסנית מתחת מיתרי הקול להכניס את הצינור endotracheal (איור 1). הכנס את הצינור endotracheal מחזיק את החלק גולגולתי של קנה הנשימה באמצעות forecepts מיקרו כירורגי. בדוק את תנועת החזה כדי להיות בטוח כי הן הריאות הן מאוורר היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קצב הנשימה (RR) צריך להיות כ 110 לדקה, עם לחץ inspiratory של 17 עד 18cm H 2 O. הפעל את העכבר בזהירות, שוכב על צדו הימני, מול הצד השמאלי שלה. ביצוע פתיחת בית החזה leftsided בין ה -3 לבין צלע 4 ה, ו לנתח את רקמות השריר בקפידה, תוך שימוש cauter כדי למנוע דימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את בית החזה בזהירות, פעם בית החזה נפתח, למצוא את הלב, בלי לגעת ריאות עם כל חפץ חד. עכשיו להסיר את החלק של שק קרום הלב כי הוא מכסה את הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנער נמצא בין עורק הריאה לבין אפרכסת שמאל. השתמש 8-0 Prolene תפר (Ethicon, Norderstedt, גרמניה) ולקשור LAD הפרוקסימלי עם תפר אחד (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום צינור החזה (קטטר 28G, מושחתים), בין ה 4 ו 5 הצלעות ה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגירת החתך החזי בשכבות, באמצעות 6-0 תפרים ריצה Prolene (Ethicon, Norderstedt, גרמניה) על מנת להתאים את צלעות התפרים Prolene 4-0 ריצה (Ethicon, Norderstedt, גרמניה) כדי לסגור את העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסננים את החזה בעזרת מזרק 2ml בקפידה (איור 3). הנח את העכבר על גבו. עכשיו לקחת את הצינור endotracheal החוצה להתאים את טבעות מחסנית קנה הנשימה עם תפר אחד באמצעות 7-0 תפרים Prolene (Ethicon, Norderstedt, גרמניה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את המסכה על הפנים העכבר ולסגור את העור באמצעות Prolene 4-0 ריצה התפרים (Ethicon, Norderstedt, גרמניה). </li></ol> תוקף ישנן אפשרויות שונות כדי לאשר את ההצלחה של קשירת-LAD. בדיקת טרופונין ניתן לבצע 6-18 שעות לאחר הניתוח, תוך שימוש רק 150 בדם אני ללא צורך להרדימו. הדם מוחל על ערכת בדיקה אישית טרופונין (TROP T רגיש, רוש, מנהיים) (איור 4). טרופונין הוא חלבון הוויסות של סיבי אקטין של תא השריר, יש isotypes שונות שלושה סוגים של שרירים. Isotypes cTnI ו cTnT נמצאים הלב משתחררים לפגיעה ברקמות. מבחן סטנדרטי עבור טרופונין T (cTnT) מבוססת על שני נוגדנים חד שבטיים לב ספציפית, אחת המלכודות טרופונין במדגם דם, והשני הוא סמן. אזור infarcted ניתן לזהות macroscopically לאחר 3 ימים (איור 5). TTC (2,3,5-Triphenyltetrazolium כלוריד) מודד מכתים הכדאיות רקמות השתמשו כדי להעריך גודל האוטם. אוונס צבע כחול (1.5%, 1.0mL) ב פוספט בופר סליין (PBS) מוזרק לתוך חלל החדר השמאלי כדי למדוד את שטח איסכמי לבבי. העכבר הוא מורדמים והלב הוא לקצור מחולק לפרוסות. פרוסות הרקמה מודגרת בתמיסה של 1% PBS TTC, pH 7.4 ב 37 מעלות 20min. רקמות שתוקנו ב 10% PBS שנאגרו פורמלין לילה בשעה 2-8 ° C. TTC מנוהל vivo לשעבר לצבוע אוונס כחול שלילי אזורים (איור 6). עבור היסטולוגיה העכבר צריך להיות מורדמים והלב חייב להיות מוטבע לעיבוד נוסף. לאחר ביצוע סעיפים פרפין, מגלשות מגואלות H &amp; E (hematoxylin ו eosin) או trichrome לדמיין רקמות fibrotic (איור 7). <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig1.jpg" alt="איור 1" /> איור 1: צינור לקנה הנשימה. 1A: חשופים קנה הנשימה, לאחר חתך צוואר הרחם הגחון. 1B: קנה הנשימה נפתח שתי טבעות סחוס הזנב אל הגרון. 1C: צינור לקנה הנשימה מוכנס לתוך קנה הנשימה. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2: לב חשוף באמצעות פתיחת בית החזה השמאלי צדדית, הבחור הוא ligated. t &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig3.jpg" alt="איור 3" /> איור 3: לאחר החזה סגור, ניקוז הצדר מבוצע. העכבר הוא עדיין מורדם. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig4.jpg" alt="איור 4" /> איור 4: שני קווים להופיע אחרי כמה דקות כאשר הבדיקה טרופונין חיובית. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig5.jpg" alt="איור 5" /> איור 5: מציג את הלב explanted. 5 א: לצפות מקרוסקופית של הלב עם אזור איסכמי עם צבע לבנבן דהוי. 5B: חתך של הלב infarcted, אזור איסכמי מראה בפינה הימנית העליונה.

<ol>
	<li>Atkins, B. Z., Hueman, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+cardiomyoplasty+improves+diastolic+properties+of+injured+Heart.">Cellular cardiomyoplasty improves diastolic properties of injured Heart.</a> J Surg Res. 85 (2), 234-242 (1999).</li><li>Jaquet, K., KT, K. r. a. u. s. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+myocardial+scar+size+after+implantation+of+mesenchymal+stem+cells+in+rats:+what+is+the+mechanism.">Reduction of myocardial scar size after implantation of mesenchymal stem cells in rats: what is the mechanism.</a> Stem Cells Dev. 14 (3), 299-309 (2005).</li><li>Joung, B., Kim, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow+mononuclear+stem+cells+transplanted+in+rat+infarct+myocardium+improved+the+electrical+conduction+without+evidence+of+proarrhythmic+effects.">Bone marrow mononuclear stem cells transplanted in rat infarct myocardium improved the electrical conduction without evidence of proarrhythmic effects.</a> Yonsei Med J. 48 (5), 754-764 (2007).</li></ol>

מימון המחקר הנוכחי נתמך על ידי החולים האוניברסיטאי בהמבורג (ח&quot;כ, אישה Habilitation גרנט), DFG (SS, SCHR992/3-1), ISHLT (TD, פרס המחקר 2009). הצהרה כל החיות קיבלו טיפול אנושי מתיישב עם עקרונות של טיפול בבעלי חיים מעבדה, ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי האגודה הלאומית למחקר רפואי המדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה שפורסם על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (National Institutes of Health פרסום 85-23, מתוקנת 1985). כל החיות התקבלו צ&#39;ארלס ריבר מעבדות (Sulzfeld, גרמניה) נשמרו על מרכזים בעלי חיים של החולים האוניברסיטאי בהמבורג Eppendorf. החיות קיבלו תקן ושולחת כרצונך מים המודעה.

לסיכום, וידאו זה visualizes המודל LAD-קשירת צעד אחר צעד ומזהה LAD-ligations בעכברים כמו ניתוחים אפשרי בקלות.

lad-ligation: a murine model of myocardial infarction

מודלים מחקר של אוטם שריר הלב ואת חיוניים כדי לחקור את התהליכים pathobiological ו pathophysiological אקוטי וכרוני איסכמיה של שריר הלב כדי לפתח לייעל את הטיפול בעתיד. שתי שיטות שונות של יצירת איסכמיה בשריר הלב מבוצעות מכרסמים במעבדה. השיטה הראשונה היא ליצור cryo אוטם, טכניקה מהיר אבל לא מדויק, שם cryo-עט מוחל על פני השטח של הלב (1-3). באמצעות שיטה זו המדען אינו יכול להבטיח כי cryo-צלקת מוביל איסכמיה, גם פגיעה בשריר הלב העצום שנוצר המציג תופעות לוואי pathophysiological כי אינם קשורים לאוטם שריר הלב. השיטה השנייה היא קשירת קבועה של העורק השמאלי הקדמי היורד (LAD). כאן הנער הוא ligated עם תפר אחד, להרכיב איסכמיה כי ניתן לראות באופן כמעט מיידי. על ידי סגירת LAD, אין זרימת דם נוספת מותרת באזור זה, תוך רקמת שריר הלב שמסביב הוא כמעט לא השפיע. זה הליך כירורגי מחקה את ההיבטים pathobiological ו pathophysiological המתרחשים איסכמיה, אוטם שריר הלב קשור. השיטה הציג סרטון זה מדגים את הליך כירורגי של מודל אוטם העכבר על ידי ligating LAD. דגם זה נוח ללימודי pathobiological ו pathophysiological וכן immunobiological על אוטם לבבי. הטכניקה המוצגת מספקת דיוק גבוהה וקושרת היטב עם סעיפים היסטולוגית.

Watch this Scientific Journal Video about LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction at JoVE.com

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

וידאו זה מדגים כיצד להשתמש במודל מהיר ואמין ללמוד תהליכים pathobiological ו pathophysiological של שריר הלב.

LAD-קשירת: מודל Murine של אוטם שריר הלב

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes ...

lad-ligation-a-murine-model-of-myocardial-infarction

Research

JoVE Journal

Biology

44.3K Views.  University Heart Center Hamburg. וידאו זה מדגים כיצד להשתמש במודל מהיר ואמין ללמוד תהליכים pathobiological ו pathophysiological של שריר הלב.

Video: LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

Murine Pancreatic Islet Isolation

הלבלב Murine איילט בידוד

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide. Medical therapies for symptomatic relief are limited. Surgical or endovascular interventions are useful for some individuals, but long-term results are often disappointing. As a result, there is a need for developing new therapies to treat PAD. The murine hindlimb ischemia preparation is a model of PAD, and is useful for testing new therapies. When compared to other models of tissue ischemia such as coronary or cerebral artery ligation, femoral artery ligation provides for a simpler model of ischemic tissue. Other advantages of this model are the ease of access to the femoral artery and low mortality rate. 
In this video, we demonstrate the methodology for the murine model of unilateral hindimb ischemia. The specific materials and procedures for creating and evaluating the model will be described, including the assessment of limb perfusion by laser Doppler imaging. This protocol can also be utilized for the transplantation and non-invasive tracking of cells, which is demonstrated by Huang et al.1.

Murine Model of Hindlimb Ischemia

The surgical procedure for induction of unilateral hindlimb ischemia is demonstrated, with confirmation of ischemia by laser Doppler perfusion imaging.

דגם Murine של איסכמיה Hindlimb

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Murine Renal Transplantation Procedure

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell et al over 30 years ago (1) and refined by Zhang et al years later (2), few people in the world have mastered this procedure. In our laboratory we have successfully performed 1200 orthotopic kidney transplantations with &gt; 90% survival rate. The key points for success include stringent control of reperfusion injury, bleeding and thrombosis, both during the procedure and post-transplantation, and use of 10-0 instead of 11-0 suture for anastomoses.
Post-operative care and treatment of the recipient is extremely important to transplant success and evaluation. All renal graft recipients receive antibiotics in the form of an injection of penicillin immediately post-transplant and sulfatrim in the drinking water continually. Overall animal health is evaluated daily and whole blood creatinine analyses are performed routinely with a portable I-STAT machine to assess graft function.

Renal transplantation in mice is a technically challenging procedure that requires careful post-operative care and treatment for success.

Murine נוהל השתלת כליה

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell ...

Rodent Working Heart Model for the Study of Myocardial Performance and Oxygen Consumption

Isolated working heart models have been used to understand the effects of loading conditions, heart rate and medications on myocardial performance in ways that cannot be accomplished in vivo. For example, inotropic medications commonly also affect preload and afterload, precluding load-independent assessments of their myocardial effects in vivo. Additionally, this model allows for sampling of coronary sinus effluent without contamination from systemic venous return, permitting assessment of myocardial oxygen consumption. Further, the advent of miniaturized pressure-volume catheters has allowed for the precise quantification of markers of both systolic and diastolic performance. We describe a model in which the left ventricle can be studied while performing both volume and pressure work under controlled conditions. 
In this technique, the heart and lungs of a Sprague-Dawley rat (weight 300-500 g) are removed en bloc under general anesthesia. The aorta is dissected free and cannulated for retrograde perfusion with oxygenated Krebs buffer. The pulmonary arteries and veins are ligated and the lungs removed from the preparation. The left atrium is then incised and cannulated using a separate venous cannula, attached to a preload block. Once this is determined to be leak-free, the left heart is loaded and retrograde perfusion stopped, creating the working heart model. The pulmonary artery is incised and cannulated for collection of coronary effluent and determination of myocardial oxygen consumption. A pressure-volume catheter is placed into the left ventricle either retrograde or through apical puncture. If desired, atrial pacing wires can be placed for more precise control of heart rate. This model allows for precise control of preload (using a left atrial pressure block), afterload (using an afterload block), heart rate (using pacing wires) and oxygen tension (using oxygen mixtures within the perfusate).

Isolated working heart models can be used to measure the effect of loading conditions, heart rate, and medications on myocardial performance and oxygen consumption. We describe methods for preparation of a rodent left heart working model that permits study of systolic and diastolic performance and oxygen consumption under various conditions.

מכרסם עבודת לב דגם לחקר ביצועי שריר לב ואת צריכת חמצן

Isolated working heart models have been used to understand the effects of loading conditions, heart rate and medications on myocardial performance in ways ...

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual inflammation, progressive destruction and regeneration of the hepatic parenchyma, liver progenitor cell proliferation, and fibrosis. The end-stage of every chronic liver disease is cirrhosis, a major risk factor for the development of hepatocellular carcinoma. To study processes regulating disease initiation, establishment, and progression, several animal models are used in laboratories. Here we describe a six-week time course of the choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) mouse model, which involves feeding six-week old male C57BL/6J mice with choline-deficient chow and 0.15% DL-ethionine-supplemented drinking water. Monitoring of animal health and a typical body weight loss curve are explained. The protocol demonstrates the gross examination of a CDE-treated liver and blood collection by cardiac puncture for subsequent serum analyses. Next, the liver perfusion technique and collection of different hepatic lobes for standard evaluations are shown, including liver histology assessments by hematoxylin and eosin or Sirius Red stainings, immunofluorescent detection of hepatic cell populations as well as transcriptome profiling of the liver microenvironment. This mouse model is suitable for studying inflammatory, fibrogenic, and liver progenitor cell dynamics induced through chronic liver disease and can be used to test potential therapeutic agents that may modulate these processes.

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented CDE Diet Model of Chronic Liver Injury

Here we describe a common method to induce chronic liver injury in mice by feeding of a choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) diet. We demonstrate health monitoring, liver perfusion, isolation, and preservation. A time course of six weeks can inform about liver injury, pathohistology, fibrosis, inflammatory, and liver progenitor cell responses.

מאתר כולין לקויה, בתוספת Ethionine (CDE) דיאטה מודל של פגיעה כרונית בכבד

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual ...

A Murine Model of Vertical Sleeve Gastrectomy

Bariatric surgery, such as vertical sleeve gastrectomy (VSG), is a surgery of the gastrointestinal tract that is performed for the purpose of weight loss. Bariatric surgery is currently the most effective long-term treatment for obesity. In addition to weight loss, bariatric surgery produces additional health benefits such as remission of type 2 diabetes, remission of hypertension, and decreased risk of developing certain types of cancer. The mechanisms beyond weight loss for these benefits remain incompletely defined. Therefore, animal models of bariatric surgery are being developed and validated to identify the mechanisms leading to these benefits, with the goal of improving understanding of gastrointestinal physiology and identifying new therapeutic targets. VSG has become the most commonly performed bariatric procedure in the clinic in the United States because it is highly effective at producing weight loss and metabolic improvement, and is simpler to perform than other bariatric procedures. Therefore, we have developed and validated a murine model of VSG. This murine VSG model recapitulates many of the effects of VSG seen in humans, including improved glucose and blood pressure regulation. The method is based on isolation of the stomach, ligation of gastric vessels, and removal of 70% of the stomach by transecting along the greater curvature of the stomach. We have successfully applied this surgical protocol to various genetically modified mouse lines to define the mechanistic contributors to the benefits of VSG. Furthermore, this murine VSG model has been combined with other surgical techniques, to achieve deeper mechanistic insight. Therefore, this is a simple and versatile model for studying gastrointestinal physiology and the health benefits of bariatric surgery.

The following describes the performance of vertical sleeve gastrectomy in mice. This is a type of weight-loss surgery that involves removal of approximately 70% of the stomach.

מודל מאתר של ניתוח אנכי שרוול קיבה

Bariatric surgery, such as vertical sleeve gastrectomy (VSG), is a surgery of the gastrointestinal tract that is performed for the purpose of weight loss. ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer progression. How the chromosomal location and function of a centromere (i.e., centromere identity) are determined and participate in accurate chromosome segregation is a fundamental question. CENP-A is proposed to be the non-DNA indicator (epigenetic mark) of centromere identity, and CENP-A ubiquitylation is required for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability.
Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-CENP-A K124R mutant suggesting that ubiquitylation at a different lysine is induced because of the EYFP tagging in the CENP-A K124R mutant protein. Lysine 306 (K306) ubiquitylation in EYFP-CENP-A K124R was successfully identified, which corresponds to lysine 56 (K56) in CENP-A through mass spectrometry analysis. A caveat is discussed in the use of GFP/EYFP or the tagging of high molecular weight protein as a tool to analyze the function of a protein. Current technical limit is also discussed for the detection of ubiquitylated bands, identification of site-specific ubiquitylation(s), and visualization of ubiquitylation in living cells or a specific single cell during the whole cell cycle.
The method of mass spectrometry analysis presented here can be applied to human CENP-A protein with different tags and other centromere-kinetochore proteins. These combinatory methods consisting of several assays/analyses could be recommended for researchers who are interested in identifying functional roles of ubiquitylation.

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

CENP-A ubiquitylation is an important requirement for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability. Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) protein.

ניתוח ספקטרומטר המסה כדי לזהות את אוביקווילציה של EYFP-מתויג CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

Isolation of Human Ventricular Cardiomyocytes from Vibratome-Cut Myocardial Slices

The isolation of ventricular cardiac myocytes from animal and human hearts is a fundamental method in cardiac research. Animal cardiomyocytes are commonly isolated by coronary perfusion with digestive enzymes. However, isolating human cardiomyocytes is challenging because human myocardial specimens usually do not allow for coronary perfusion, and alternative isolation protocols result in poor yields of viable cells. In addition, human myocardial specimens are rare and only regularly available at institutions with on-site cardiac surgery. This hampers the translation of findings from animal to human cardiomyocytes. Described here is a reliable protocol that enables efficient isolation of ventricular myocytes from human and animal myocardium. To increase the surface-to-volume ratio while minimizing cell damage, myocardial tissue slices 300 &#181;m thick are generated from myocardial specimens with a vibratome. Tissue slices are then digested with protease and collagenase. Rat myocardium was used to establish the protocol and quantify yields of viable, calcium-tolerant myocytes by flow-cytometric cell counting. Comparison with the commonly used tissue-chunk method showed significantly higher yields of rod-shaped cardiomyocytes (41.5 &#177; 11.9 vs. 7.89 &#177; 3.6%, p &#60; 0.05). The protocol was translated to failing and non-failing human myocardium, where yields were similar as in rat myocardium and, again, markedly higher than with the tissue-chunk method (45.0 &#177; 15.0 vs. 6.87 &#177; 5.23 cells/mg, p &#60; 0.05). Notably, with the protocol presented it is possible to isolate reasonable numbers of viable human cardiomyocytes (9&#8211;200 cells/mg) from minimal amounts of tissue (&#60;50 mg). Thus, the method is applicable to healthy and failing myocardium from both human and animal hearts. Furthermore, it is possible to isolate excitable and contractile myocytes from human tissue specimens stored for up to 36 h in cold cardioplegic solution, rendering the method particularly useful for laboratories at institutions without on-site cardiac surgery.

Presented is a protocol for the isolation of human and animal ventricular cardiomyocytes from vibratome-cut myocardial slices. High yields of calcium-tolerant cells (up to 200 cells/mg) can be obtained from small amounts of tissue (&#60;50 mg). The protocol is applicable to myocardium exposed to cold ischemia for up to 36 h.

בידוד של קרדיומיוציטים חדריים אנושיים מפרוסות שריר הלב ויסטום-לחתוך

The isolation of ventricular cardiac myocytes from animal and human hearts is a fundamental method in cardiac research. Animal cardiomyocytes are commonly ...

A Murine Model of a Burn Wound Reconstructed with an Allogeneic Skin Graft

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and require surgical debridement and skin grafting. Successful integration of the donor graft into a recipient wound bed depends on timely recruitment of immune cells, robust angiogenic response and new extracellular matrix formation. The development of novel therapeutic agents, which target some key processes involved in wound healing, are hindered by the lack of reliable preclinical models with optimized objective assessment of wound closure. Here, we describe an inexpensive and reproducible model of experimental full thickness burn wound reconstructed with an allogeneic skin graft. The wound is induced on the dorsum surface of anaesthetized inbred wild type mice from the BALB/C and SKH1-Hrhr backgrounds. The burn is produced using a brass template measuring 10 mm in diameter, which is preheated to 80 &#176;C and delivered at a constant pressure for 20 s. Burn eschar is excised 24 hours after the injury and replaced with a full thickness graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse. No specialized equipment is required for the procedure and surgical techniques are straightforward to follow. The method may be effortlessly implemented and reproduced in most research settings. Certain limitations are associated with the model. Due to technical difficulties, the harvest of thinner split thickness skin grafts is not possible. The surgical method we describe here allows for the reconstruction of burn wounds using full thickness skin grafts. It may be used to carry out preclinical therapeutic testing.

The aim of this study was to develop a murine model of burn wound healing. A thermal burn was induced on the dorsal skin of mice using a preheated brass template. Burned tissue was debrided and overlaid with a skin graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse.

מודל מורנה של פצע צריבה שוחזר עם שתל העור Allogeneic

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and ...

The Establishment of a Murine Mandibular Molar Extraction Socket Healing Model

This study introduces the development of a molar extraction model in the murine mandible to provide a practicable model for studying alveolar bone regeneration and intramembranous ossification. C57/J6 mice were used to extract the mandibular first molar to establish this model. They were euthanized, and the bilateral mandibles harvested, at 1 week and 4 weeks post-surgery, respectively. Subsequent serial stereoscopic harvest, histological assessment, and immunofluorescence staining were performed to demonstrate successful surgery. Immediately after surgery, the stereoscopic images displayed an empty extraction socket. The hematoxylin and eosin (H&#38;E) at 1 week and Masson staining at 4 weeks post-surgery showed that the area of the original root was partially and fully filled with bone trabeculae, respectively. The immunofluorescence staining showed that, compared with the homeostasis side, the Sp7 expression increased at 1 week post-surgery, suggesting vigorous osteogenesis in the alveolar fossa. All these results demonstrated a practicable murine tooth extraction socket healing model. Upcoming studies revealing the mechanisms of jawbone defect healing or socket healing could adopt this method.

This protocol demonstrates step-by-step details of how to extract the mandibular first molar in the mouse. It provides an alternative method for researchers focusing on jawbone healing and regeneration.