המחברים מודים WJ לוני עבור בזהירות בדיקת כתב היד.

<html> תקן 2 של תקנים בינלאומיים לשחפת טיפול קובעת כי כל החולים חשודים שחפת ריאתית להגיש לפחות שתי דגימות כיח לבדיקה בקטריולוגית. במידת האפשר, לפחות בשעות הבוקר המוקדמות, הדגימה צריכה לקבל, כמו כיח שנאסף בשלב זה יש לו את התשואה הגבוהה ביותר. 11 assay MTB / RIF אקספרט ניתן להחיל על דגימות כיח או ליחה ומשקעים מרוכזות שהוכנו ספוטה יזומה או expectorated כי הם . או חומצה מהירה (AFB) החיידקים למרוח חיובי או שלילי 6, 12, 13 assay מיועד לשימוש עם דגימות מחולים שבשבילם קיים חשד קליני של שחפת ריאות שיש להם: 1) לא קיבלו טיפול נגד שחפת, 2 ) לא &lt;7 ימים של טיפול, או 3) לא קיבלו טיפול ב -60 הימים האחרונים. יש לציין כי זה לא אמור לשמש לניטור ההשפעה של טיפול תרופתי 7 כי ה-DNA החיידקי עלול להימשך בעקבות טיפול מיקרוביאלית. class = &quot;jove_content&quot;&gt; התייחס דגימות קליניות, כולל מחסניות משומשות, כאילו מסוגל לשדר חומרים מזהמים. השתמש באמצעי זהירות מתאימים, כגון ללבוש כפפות חד פעמיות מגן, מעילים מעבדה והגנה העין, ופעל נהלי הבטיחות המוסד שלך והנחיות. 1. כיח דוגמאות Expectorated הערה: תהליך רק דגימות רבות בבת אחת, כפי שיש GeneXpert מערכת Dx מודולים ניתן להפעיל את המבחן! <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרשום על כל MTB / RIF אקספרט מחסנית עם מזהה את הדגימה המתאימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת 1.0 מ&quot;ל expectorated כיח כדי צינור חרוטי בורג הכתיר, באמצעות פיפטה העברת סטרילית. לחלופין, הדגימה כולו עשוי להיות מעובד המכיל אוסף המקורי דליפה הוכחה כיח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 2.0 מ&quot;ל אקספרט MTB / RIF מגיב לדוגמא (02:01, V / V) כדי כיח expectorated באמצעות העברת פיפטה סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזר את המכסה, ולנער את הצינור במרץ 10-20 פעמים. לחלופין, התערובת ניתן vortexed (30 שניות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר צינור לעמוד זקוף במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נערו את הצינור במרץ 10-20 פעמים. לחלופין, להשתמש מערבולת (30 שניות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר צינור לעמוד זקוף 10 דקות אחר בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבדוק את דגימות: דגימות יש נוזלי ללא גושים הנראים של כיח. </li></ol> 2. ריכוז משקעים הערה: תהליך רק דגימות רבות בבת אחת כמו שיש GeneXpert מערכת Dx מודולים ניתן להפעיל את הבדיקות! <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרשום על כל MTB / RIF אקספרט מחסנית עם מזהה את הדגימה המתאימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת 1.5 מ&quot;ל אקספרט MTB / RIF מגיב מדגם צינור חרוטי בורג הכתיר, באמצעות פיפטה העברת סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף לפחות 0.5 משקעים מרוכזת מ&quot;ל למבחנה לדוגמא מגיב המכיל באמצעות פיפטה העברת סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזר את המכסה, ולנער את הצינור Vigorously 10-20 פעמים. לחלופין, להשתמש מערבולת (30 שניות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר צינור לעמוד זקוף במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נערו את הצינור במרץ 10-20 פעמים. לחלופין, להשתמש מערבולת (30 שניות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר צינור לעמוד זקוף 10 דקות אחר בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבדוק את דגימות: דגימות יש נוזלי ללא גושים הנראים של כיח. </li></ol> 3. טוען MTB / RIF אקספרט דיו הערה: הפעל את הבדיקה בתוך 30 דקות של הוספת מדגם למחסנית! <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את התוויות על MTB אקספרט / RIF מחסנית מזהה הדגימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את מכסה המחסנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת פיפטה העברת סטרילית בתנאי, לשאוב את הדגימה נוזלי לתוך פיפטה העברה עד המניסקוס היא מעל סימן המינימום ולהעביר מדגם ליציאת הפתוח של MTB / RIF אקספרט מחסנית. </li></ol> הערה:לוותר לאט כדי למזער את הסיכון להיווצרות אירוסול! <ol start="4" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את מכסה מחסנית. </li></ol> 4. החל מבחן הערה: לפני שמתחילים את המבחן, יש לוודא כי מערכת Dx GeneXpert מצויד בתוכנה GX2.1, ו assay MTB / RIF אקספרט מיובאים לתוך התוכנה 9! <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את המחשב ולאחר מכן להפעיל את המכשיר GeneXpert DX. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשולחן העבודה של Windows, לחץ פעמיים על סמל Dx GeneXpert הקיצור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> היכנס תוכנה GeneXpert מערכת Dx באמצעות שם המשתמש והסיסמה שלך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחלון System GeneXpert DX, לחץ על יצירת מבחן. ברקוד דיו סריקה מופיעה תיבת הדו שיח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתיבה מזהה לדוגמא, לסרוק או להקליד את מזהה המדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסרוק את הברקוד על MTB / RIF אקספרט מחסנית. חלון הבדיקה צור מופיע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על התחל מבחן </&gt; חזקה, הזן את הסיסמה שלך בתיבה שיח שמופיעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את מודול כלי הדלת עם אור ירוק מהבהב, וטען את המחסנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את הדלת. המבחן מתחיל ואור מפסיקה להבהב ונשאר ירוק כל הזמן. כאשר הבדיקה תסתיים, האור כבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחכות עד שהמערכת משחררת את המנעול הדלת בסוף הריצה, ולאחר מכן פתח את הדלת מודול להסיר את המחסנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השלך את מחסניות המשמשים את מיכלי פסולת המתאימים על פי שיטות סטנדרטיות המוסד שלך. </li></ol> 5. נציג תוצאות כל MTB / RIF אקספרט מחסנית הכוללת חומרים כימיים לגילוי של MTB מורכב התנגדות RIF כמו גם עיבוד מדגם הביקורת (SPC) כדי לשלוט על עיבוד מספקת של חיידקים היעד כדי לפקח על נוכחות של מעכבי (ים) בתגובה PCR . בקרת בדוק Probe (PCC) מאמתת להחזרת נוזלים מגיב, צינור מילוי PCRמחסנית, שלמות בדיקה, וצבע יציבות 9. primers ב assay אקספרט MTB / RIF להגביר את החלק של הגן rpoB המכיל בסיס 81 זוג &quot;הליבה&quot; באזור. חמישה צבעים שונים fluorogenic גרעין הכלאה חומצה בדיקות, המכונים אלומות מולקולריות, לחקור את הליבה כולה 81-BP. 14 כל המשואה מולקולרית נועד להיות ספציפי כך שהוא אינו מחייב את היעד שלה, אם את רצף היעד שונה rpoB wild-type רצף לאט כמו החלפת נוקלאוטיד יחיד. מאז הקרינה משואות מולקולרית רק כאשר הם קשורים למטרות שלהם, כלומר wild-type רצף rpoB, העדר כל אחד מחמשת הצבעים assay להבדיל בין רצף wild-type ו מוטציות משומר באזור הליבה המשויכים ההתנגדות RIF. 6 SPC צריכה להיות חיובית במדגם שלילית יכולה להיות שלילית או חיובית במדגם חיובית. מבחןהתוצאה תהיה &quot;לא חוקי&quot; אם SPC לא זוהה בבדיקה שלילית. לפני תחילת תגובת PCR, מערכת Dx GeneXpert מודד את אותות הקרינה של בדיקות כדי לפקח להחזרת נוזלים חרוז, התגובה, צינור מילוי, שלמות בדיקה ויציבות צבע. PCC עובר אם האות הקרינה מן הבדיקות עונה על הקריטריונים לקבלה שהוקצו. תוצאות מתפרשים על ידי מערכת GeneXpert Dx מ אותות הקרינה שנמדדו ואלגוריתמים חישוב מוטבעים מוצגים בחלון תצוגה תוצאות 9, כמפורט להלן: MTB זוהה: DNA היעד MTB מזוהה, גם שולט, SPC ו PCC, עומד בקריטריונים לקבלה שהוקצו. ערכים נמוכים מייצגים ה-CT ריכוז גבוה יותר של החל תבנית ה-DNA, ה-CT יותר ערכים מייצגים ריכוז נמוך יותר של תבנית ה-DNA. בתוצאות MTB נתגלה &quot;ההתנגדות RIF זוהה&quot; (איור 1 א), &quot;ההתנגדות RIF לא זוהה&quot; ( <strאונג&gt; איור 1 ב), או &quot;התנגדות RIF מוגדר&quot; יוצג בשורה נפרדת. MTB אינו מזוהה: DNA MTB היעד לא מזוהה, גם שולט, SPC ו PCC, עומד בקריטריונים לקבלה שהוקצו (איור 2). לא חוקי: קיומו או אי קיומו של MTB לא ניתן לקבוע: SPC אינו עומד בקריטריונים לקבלה, כלומר מדגם לא מעובד כראוי, או PCR היה עצור (איור 3). הערה: בדיקה חוזרת עם דגימה נוספת! שגיאה: אחד או יותר של תוצאות PCC נכשל (ולמטבעות FAIL). שניהם MTB ו SPC להציג שום תוצאות. הערה: בדיקה חוזרת עם דגימה נוספת! אם PCC עבר (י איי), השגיאה נגרמת עקב כשל מרכיב במערכת. איור 1: ה-DNA MTB מטרה מזוהה, גם שולט, SPC ו PCC, עומד בקריטריונים לקבלה שהוקצו. ערכים נמוכים מייצגים ה-CT מוצא גבוה יותרריכוז של תבנית ה-DNA, ה-CT יותר ערכים מייצגים ריכוז נמוך יותר של תבנית ה-DNA. בתוצאות MTB נתגלה &quot;ההתנגדות RIF לא זוהה&quot; (איור 1 א), &quot;ההתנגדות RIF זוהה&quot; (איור 1 ב), או &quot;התנגדות RIF מוגדר&quot; יוצג בשורה נפרדת. <img alt="איור 1 א" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig1A.jpg" /> . איור 1 א MTB המתגלים; ההתנגדות RIF אינו מזוהה, כלומר רק את רצף wild-type חומצות גרעין של RIF 81-BP התנגדות לקביעת האזור (RRDR) של הגן rpoB היה נוכח 6. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3547/3547fig1A.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג דמות גדולה</a> . <img alt="איור 1 ב &#39;" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig1B.jpg" /> . איור 1 ב MTB המתגלים; ההתנגדות RIF המתגלים. השלם לעזוב את Probe B (חץ), המשתרעת על פני העמדות 513-517 של ה-R<html> RDR של הגן rpoB. 6 בדוגמה, ריצוף חלקי, נמצא כי המוטציה בגן rpoB D516V זוהה. 8 <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3547/3547fig1Blarge.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג דמות גדולה</a> . <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig2.jpg" /> איור 2 דנ&quot;א MTB היעד לא התגלה,.. גם שולט, SPC ו PCC, עומד בקריטריונים לקבלה שהוקצו <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3547/3547fig2large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג דמות גדולה</a> . <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig3.jpg" /> . איור 3 תוצאות הבדיקה לא חוקית, כלומר העדר נוכחותם של MTB או לא ניתן לקבוע: SPC אינו עומד בקריטריונים לקבלה, כי המדגם לא היה מעובד כראוי, או בגלל PCR היה עצור.3547fig3large.jpg &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; לחץ כאן כדי להציג דמות גדולה.

<ol>
	<li>Sudre, P., Dam, t. e. n., Chan, G., C, A., Kochi, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuberculosis+in+the+present+time:+a+global+overview+of+the+tuberculosis+situation.">Tuberculosis in the present time: a global overview of the tuberculosis situation.</a> World Health Organisation Document WHO/TUB/91. 158, 1-47 (1991).</li><li>World Health Organisation. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+tuberculosis+control:+epidemiology,+strategy,+financing.">Global tuberculosis control: epidemiology, strategy, financing.</a> WHO report 2010. , (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The global plan to stop TB, 2006-2015. , (2006).</li><li>Morris, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+multiple+drug+resistance+in+clinical+isolates+of+Mycobacterium+tuberculosis.">Molecular mechanisms of multiple drug resistance in clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis.</a> J. Infect. Dis. 171, 954-960 (1995).</li><li>Traore, H., Fissette, K., Bastian, I., Devleeschouwer, M., Portaels, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+rifampicin+resistance+in+Mycobacterium+tuberculosis+isolates+from+diverse+countries+by+a+commercial+line+probe+assay+as+aninitial+indicator+of+multidrug+resistance.">Detection of rifampicin resistance in Mycobacterium tuberculosis isolates from diverse countries by a commercial line probe assay as aninitial indicator of multidrug resistance.</a> Int. J. Tuberc. Lung Dis. 4, 481-484 (2000).</li><li>Helb, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Detection+of+Mycobacterium+tuberculosis+and+Rifampin+Resistance+by+Use+of+On-Demand+Near-Patient+Technology.">Rapid Detection of Mycobacterium tuberculosis and Rifampin Resistance by Use of On-Demand Near-Patient Technology.</a> J. Clin. Microbiol. 48, 229-237 (2010).</li><li>Blakemore, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+Analytical+Performance+of+the+Xpert+MTB/RIF.">Evaluation of the Analytical Performance of the Xpert MTB/RIF.</a> Assay. J. Clin. Microbiol. 48, 2495-2501 (2010).</li><li>Telenti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+rifampicin-resistance+in+Mycobacterium+tuberculosis.">Detection of rifampicin-resistance in Mycobacterium tuberculosis.</a> Lancet. 341, 647-650 (1993).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> GeneXpert Dx System Operator Manual. , (2011).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> International Standards for Tuberculosis Care (ISTC). , (2009).</li><li>Boehme, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Molecular+Detection+of+Tuberculosis+and+Rifampin+Resistance.">Rapid Molecular Detection of Tuberculosis and Rifampin Resistance.</a> N. Engl. J. Med. 363, 1005-1015 (2010).</li><li>Marlowe, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+Cepheid+Xpert+MTB/RIF+assay+for+the+Direct+Detection+of+Mycobacterium+tuberculosis+Complex+from+Respiratory+Specimens.">Evaluation of the Cepheid Xpert MTB/RIF assay for the Direct Detection of Mycobacterium tuberculosis Complex from Respiratory Specimens.</a> J. Clin. Microbiol. 49, 1621-1623 (2011).</li><li>El-Hajj, H. H., Marras, S. A. M., Tyagi, S., Kramer, F. R., Alland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+rifampin+resistance+in+Mycobacterium+tuberculosis+in+a+single+tube+with+molecular+beacons.">Detection of rifampin resistance in Mycobacterium tuberculosis in a single tube with molecular beacons.</a> J. Clin. Microbiol. 39, 4131-4137 (2001).</li><li>Hillemann, D., Ruesch-Gerdes, S., Boehme, C., Richter, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+molecular+detection+of+extrapulmonary+tuberculosis+by+automated+GeneXpert+MTB/RIF+system.">Rapid molecular detection of extrapulmonary tuberculosis by automated GeneXpert MTB/RIF system.</a> J. Clin. Microbiol. 49, 1202-1205 (2011).</li></ol>

אין ניגוד עניינים הצהיר.

Assay MTB / RIF אקספרט משלב טיהור המדגם, דיבורית המבצע, ב-Board עיבוד המדגם, ו-Ultra-רגיש חמי מקונן PCR לזיהוי בו זמני של MTB והתנגדות RIF, בין כיח expectorated או משקעים מרוכזים, ב יחיד , קל לשימוש המערכת. גבול אנליטית של assay של זיהוי נמצא כי 131 CFU / מ&quot;ל של ליחה. 6 יחסים יומן ליניארי בין ערכים CT ו את מספר התאים MTB להציג נכון גם מן פבואר 10 - יולי 10 CFU / מ&quot;ל של כיח. כמו ריכוזים MTB רלוונטיות קלינית כולם נופלים בטווח הליניארי של assay, assay מספק וכמותיות הערכות של עומס חיידקי. 7 assay דורש תשתית המעבדה מתונה בלבד והדרכה. גבול גילוי שקרים לפחות בשני סדרי גודל נמוך מזה של מיקרוסקופ רגיל. 6 ספציפיות מצוין. יתר על כן, זיהוי בו זמני של RIF-resistanלא MTB הוא יתרון משמעותי בסביבה של בדיקות הצבע של טיפול בעידן של שחפת עמידה לתרופות. 3 עד כה רק נתונים שפורסמו מוגבלת על ביצועי assay לאבחון שחפת ריאתית במסגרות קליניות זמינים 12, 13. הרגישות הקלינית הכוללת assay MTB / RIF של אקספרט לזהות MTB ב ליחה של חולים עם שחפת ריאתית חשד היה 97.6% בהשוואה לתרבות כנקודת התייחסות. היו אלה ממצאיו של מחקר רב מרכזי פרוספקטיבי שכלל חמישה אתרי לימוד (לימה, פרו; בבאקו, אזרבייג&#39;ן, קייפטאון &amp; דרבן, דרום אפריקה, מומבאי, הודו) ובסך הכל של 1462 חולים. ההסתברות הכוללת לפני מבחן TB-התרבות אישר אוכלוסיית המחקר היה 50.7%. הרגישות הייתה 99.8% עבור מקרים למרוח-ותרבות חיובי ו 90.2% עבור כתם שלילי, תרבות חיובי המקרים. בקרב חולים עם HIV עם שחפת ריאתית, את הרגישות של הבדיקה MTB / RIF היה 93.9%, לעומת 98.4% בשנתHIV-שלילי. 12 חולים בסביבה של שכיחות נמוכה TB, ההסכם הכולל לאיתור MTB היה 89% בהשוואה לתרבות, רגישות היה 98% עבור% משטח חיובי ו 72 על משטח שלילי דגימות, בהתאמה, הספציפיות היה מצוין. 13 לא היה הבדל משמעותי בין רגישות בדיקות כיח מטופל לבין אלה מרוכזים על משקעים. 12 באותו מחקר, בדיקת MTB / RIF זוהה כהלכה התנגדות RIF ב 209 מתוך 211 חולים (99.1% רגישות) והן כל 506 חולים עם רגישות RIF (100 הספציפיות%), כאשר תוצאות רצף נלקחו בחשבון. 12 החוקרים מצאו כי ביצועי לגילוי הן במקרה, ואפליה של התנגדות RIF, היה דומה פני אתרים שונים, טוען כי הממצאים עשויים להיות ישימה באופן נרחב. 12 יתר על כן, המשקעים מרוכזים של דגימות נשימה שאינם ליחה, כגון broncho-מכתשיים שטיפה ו הסימפונותהפרשות L, נבדקו עם רגישות וספציפיות דומה ו. 13 נתונים על הביצועים של assay כאשר בודקים במיוחד שחפת ריאתית היא המתעוררים. 15 השליטה TB העולמית זקוקה בדחיפות כלים יעילים המאפשרים אבחון מהיר של מקרי שחפת חדשים זיהוי של MTB RIF עמיד ב גישה אוניברסלית נקודה של טיפול הגדרות. 3 שוטפות גרעין הגברה חומצה שיטות לגילוי MTB הם מורכבים, עתירי עבודה, מבחינה טכנית תובעני. Assay MTB / RIF אקספרט יש את הפוטנציאל להביא בדיקות אבחון סטנדרטי, רגיש וספציפי מאוד TB וגם עמידות לתרופות בהגדרות אלה, בתנאי שהם יוכלו להרשות זאת לעצמם. על מנת להקל את הגישה, קרן עבור אבחון חדשני חדשים (מצא) ניהלה מו&quot;מ ירידות מחירים משמעותיות עבור הבדיקה Xpert MTB / RIF. מחירי למצוא, משא ומתן הנוכחי, יחד עם רשימה של ארצות הזכאיות להנחות את, זמינים באינטרנט. 10 </sup&gt;

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> אקספרט MTB / RIF מבחן </td><td> קפאידים </td><td> GXMTB/RIF-10 </td></tr><tr><td> העברת בטפי להחדרת נוזלים </td><td> Sarstedt </td><td> 86.1172.001 </td></tr><tr><td> צינורות חרוטי, 15 מ&quot;ל, 120 x 17 מ&quot;מ, PS </td><td> Sarstedt </td><td> 62.553.542 </td></tr></tbody></table>

diagnosing pulmonary tuberculosis with the xpert mtb/rif test

שחפת (TB), בשל מחלת השחפת Mycobacterium (MTB) נותר נושא מרכזי בריאות הציבור: זיהום משפיע על עד כשליש מאוכלוסיית העולם 1, כמעט שני מיליון בני אדם נהרגים מדי שנה על ידי TB 2 גישה אוניברסלית באיכות גבוהה. , המטופל במרכז הטיפול בכל החולים שחפת מודגש על ידי מי זה אסטרטגיה TB עצור. 3 איתור מהיר של MTB בדגימות נשימה טיפול תרופתי על בסיס אמין ההתנגדות תוצאות בדיקות סמים הם תנאי הכרחי ליישום מוצלח של אסטרטגיה זו. עם זאת, באזורים רבים של העולם, אבחון שחפת עדיין מסתמך על חסר רגישות, שיטות מיקרוסקופיה סטנדרטיים גרוע כיח. TB איתור יעיל הופעתה והעברת סמים זנים עמידים יותר ויותר MTB לסכן גלובליים לשלוט בפעילות שחפת. 2 אבחון יעיל של שחפת ריאתית דורש זמינות - בקנה מידה עולמי - של מעמדardized, כלי אבחון קל לשימוש, חזקים שיאפשרו זיהוי ישיר של המתחם הן MTB ועמידות לאנטיביוטיקה מפתח, כגון ריפאמפיצין (RIF). תוצאה זו האחרונה יכולה לשמש סמן MTB multidrug עמיד (MDR TB) ו דווחה&gt; 95% של MDR-TB מבודד. 4, 5 זמינות מהירה של תוצאות הבדיקה אמינה צפוי ישירות לתרגם וניהול החולה קול החלטות שבסופו של דבר, ירפא את החולה היחיד לשבור את השרשרת של העברת שחפת בקהילה. 2 של קפאידים (Sunnyvale, קליפורניה, ארה&quot;ב) אקספרט MTB / RIF assay 6, 7 עונה על הדרישות שפורטו לעיל באופן יוצא דופן. זהו מבחן גרעין חומצות הגברה עבור 1) גילוי ה-DNA מורכב MTB ב כיח או משקעים כיח מרוכזים, ו 2) זיהוי של הרי&quot;ף התנגדות הקשורים מוטציות של הגן rpoB 8 היא מיועדת לשימוש עם Dx GeneXpert קפאידים של. מערכת הב משלבת לאוטומטי עיבוד המדגם, הגברה חומצות גרעין, וזיהוי של רצפי היעד באמצעות בזמן אמת ו-PCR הפוך transcriptase PCR. המערכת כוללת מכשיר, מחשב אישי, סורק ברקוד, ותוכנה מראש להפעלת בדיקות תצוגת התוצאות. 9 היא מעסיקה אחת לשימוש חד פעמי אקספרט MTB / RIF מחסניות אשר מחזיקים חומרים כימיים ה-PCR ולארח את תהליך ה-PCR. בגלל מחסניות הם בלתי תלוי, בין זיהום בין דגימות מתבטלת. 6 שוטפות גרעין הגברה חומצה שיטות לגילוי MTB הם מורכבים, עתירי עבודה, וטכנית תובעני. Assay MTB / RIF אקספרט יש את הפוטנציאל להביא בדיקות אבחון סטנדרטי, רגיש וספציפי מאוד TB וגם עמידות לתרופות גישה אוניברסלית נקודות של טיפול הגדרות 3, בתנאי שהם יוכלו להרשות זאת לעצמם. על מנת להקל את הגישה, קרן עבור אבחון חדשני חדשים (מצא) ניהלה מו&quot;מ מובהקירידות המחירים צביעות. מחירי למצוא, משא ומתן הנוכחי, יחד עם רשימה של ארצות הזכאיות להנחות את, זמינים באינטרנט. 10

Watch this Scientific Journal Video about Diagnosing Pulmonary Tuberculosis with the Xpert MTB/RIF Test at JoVE.com

Diagnosing Pulmonary Tuberculosis with the Xpert MTB/RIF Test

בדיקת MTB / RIF אקספרט משלב טיהור המדגם, דיבורית המבצע, ב-Board עיבוד המדגם, ו-Ultra-רגיש חמי מקונן PCR לזיהוי בו זמני של<em&gt; שחפת Mycobacterium</em&gt; והתנגדות ריפאמפיצין, בין expectorated כיח או ליחה משקעים מרוכזים, ב כשעתיים. בדיקה הוא סטנדרטי דורש תשתית המעבדה מתונה בלבד והדרכה.

אבחון שחפת ריאתית עם מבחן אקספרט MTB / RIF

Tuberculosis (TB) due to Mycobacterium tuberculosis (MTB) remains a major public health issue: the infection affects up to one third of the world ...

diagnosing-pulmonary-tuberculosis-with-the-xpert-mtbrif-test

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

80.1K Views.  University of Bern. בדיקת MTB / RIF אקספרט משלב טיהור המדגם, דיבורית המבצע, ב-Board עיבוד המדגם, ו-Ultra-רגיש חמי מקונן PCR לזיהוי בו זמני של שחפת Mycobacterium והתנגדות ריפאמפיצין, בין expectorated כיח או ליחה משקעים מרוכזים, ב כשעתיים. בדיקה הוא סטנדרטי דורש תשתית המעבדה מתונה בלבד והדרכה.

Video: Diagnosing Pulmonary Tuberculosis with the Xpert MTB/RIF Test

Growth of Mycobacterium tuberculosis Biofilms

Mycobacterium tuberculosis, the etiologic agent of human tuberculosis, has an extraordinary ability to survive against environmental stresses including antibiotics. Although stress tolerance of M. tuberculosis is one of the likely contributors to the 6-month long chemotherapy of tuberculosis 1, the molecular mechanisms underlying this characteristic phenotype of the pathogen remain unclear. Many microbial species have evolved to survive in stressful environments by self-assembling in highly organized, surface attached, and matrix encapsulated structures called biofilms 2-4. Growth in communities appears to be a preferred survival strategy of microbes, and is achieved through genetic components that regulate surface attachment, intercellular communications, and synthesis of extracellular polymeric substances (EPS) 5,6. The tolerance to environmental stress is likely facilitated by EPS, and perhaps by the physiological adaptation of individual bacilli to heterogeneous microenvironments within the complex architecture of biofilms 7.
In a series of recent papers we established that M. tuberculosis and Mycobacterium smegmatis have a strong propensity to grow in organized multicellular structures, called biofilms, which can tolerate more than 50 times the minimal inhibitory concentrations of the anti-tuberculosis drugs isoniazid and rifampicin 8-10. M. tuberculosis, however, intriguingly requires specific conditions to form mature biofilms, in particular 9:1 ratio of headspace: media as well as limited exchange of air with the atmosphere 9. Requirements of specialized environmental conditions could possibly be linked to the fact that M. tuberculosis is an obligate human pathogen and thus has adapted to tissue environments. In this publication we demonstrate methods for culturing M. tuberculosis biofilms in a bottle and a 12-well plate format, which is convenient for bacteriological as well as genetic studies. We have described the protocol for an attenuated strain of M. tuberculosis, mc27000, with deletion in the two loci, panCD and RD1, that are critical for in vivo growth of the pathogen 9. This strain can be safely used in a BSL-2 containment for understanding the basic biology of the tuberculosis pathogen thus avoiding the requirement of an expensive BSL-3 facility. The method can be extended, with appropriate modification in media, to grow biofilm of other culturable mycobacterial species.
Overall, a uniform protocol of culturing mycobacterial biofilms will help the investigators interested in studying the basic resilient characteristics of mycobacteria. In addition, a clear and concise method of growing mycobacterial biofilms will also help the clinical and pharmaceutical investigators to test the efficacy of a potential drug.

Growth of Mycobacterium tuberculosis Biofilms

Mycobacterium tuberculosis forms drug tolerant biofilms when cultured in certain conditions. Here we describe methods for culturing M. tuberculosis biofilms and determining the frequency of drug tolerant persisters. These protocols will be useful for further studies into the mechanisms of drug tolerance in M. tuberculosis.

גידול של שחפת Mycobacterium Biofilms

Mycobacterium tuberculosis, the etiologic agent of human tuberculosis, has an extraordinary ability to survive against environmental stresses including ...

Right Ventricular Systolic Pressure Measurements in Combination with Harvest of Lung and Immune Tissue Samples in Mice

The function of the right heart is to pump blood through the lungs, thus linking right heart physiology and pulmonary vascular physiology. Inflammation is a common modifier of heart and lung function, by elaborating cellular infiltration, production of cytokines and growth factors, and by initiating remodeling processes 1.
Compared to the left ventricle, the right ventricle is a low-pressure pump that operates in a relatively narrow zone of pressure changes. Increased pulmonary artery pressures are associated with increased pressure in the lung vascular bed and pulmonary hypertension 2. Pulmonary hypertension is often associated with inflammatory lung diseases, for example chronic obstructive pulmonary disease, or autoimmune diseases 3. Because pulmonary hypertension confers a bad prognosis for quality of life and life expectancy, much research is directed towards understanding the mechanisms that might be targets for pharmaceutical intervention 4. The main challenge for the development of effective management tools for pulmonary hypertension remains the complexity of the simultaneous understanding of molecular and cellular changes in the right heart, the lungs and the immune system.
Here, we present a procedural workflow for the rapid and precise measurement of pressure changes in the right heart of mice and the simultaneous harvest of samples from heart, lungs and immune tissues. The method is based on the direct catheterization of the right ventricle via the jugular vein in close-chested mice, first developed in the late 1990s as surrogate measure of pressures in the pulmonary artery5-13. The organized team-approach facilitates a very rapid right heart catheterization technique. This makes it possible to perform the measurements in mice that spontaneously breathe room air. The organization of the work-flow in distinct work-areas reduces time delay and opens the possibility to simultaneously perform physiology experiments and harvest immune, heart and lung tissues.
The procedural workflow outlined here can be adapted for a wide variety of laboratory settings and study designs, from small, targeted experiments, to large drug screening assays. The simultaneous acquisition of cardiac physiology data that can be expanded to include echocardiography5,14-17 and harvest of heart, lung and immune tissues reduces the number of animals needed to obtain data that move the scientific knowledge basis forward. The procedural workflow presented here also provides an ideal basis for gaining knowledge of the networks that link immune, lung and heart function. The same principles outlined here can be adapted to study other or additional organs as needed.

A specific and rapid protocol to simultaneously investigate right heart function, lung inflammation, and the immune response is described as a learning tool. Video and figures describe physiology and microdissection techniques in an organized team-approach that is adaptable to be used for small to large sized studies.

מדידות נכונות חדרית סיסטולי לחץ בשילוב עם קציר של ריאה ודגימות רקמה חיסוניות בעכברים

The function of the right heart is to pump blood through the lungs, thus linking right heart physiology and pulmonary vascular physiology. Inflammation is ...

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

Coinfections naturally occur due to the geographic overlap of distinct types of pathogenic organisms. Concurrent infections most likely modulate the respective immune response to each single pathogen and may thereby affect pathogenesis and disease outcome. Coinfected patients may also respond differentially to anti-infective interventions. Coinfection between tuberculosis as caused by mycobacteria and the malaria parasite Plasmodium, both of which are coendemic in many parts of sub-Saharan Africa, has not been studied in detail. In order to approach the challenging but scientifically and clinically highly relevant question how malaria-tuberculosis coinfection modulate host immunity and the course of each disease, we established an experimental mouse model that allows us to dissect the elicited immune responses to both pathogens in the coinfected host. Of note, in order to most precisely mimic naturally acquired human infections, we perform experimental infections of mice with both pathogens by their natural routes of infection, i.e. aerosol and mosquito bite, respectively.

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

Tuberculosis and malaria are two of the most prevalent infections in humans and major causes of morbidity and mortality in impoverished populations in the tropics. We established an experimental model system to study outcome of malaria-tuberculosis coinfection in mice after challenge with both pathogens via their natural route of infection.

מודל ניסיוני לחקר המלריה שחפת-coinfection על הילוכים טבעיים של חפת Mycobacterium ו Berghei Plasmodium</i

Coinfections naturally occur due to the geographic overlap of distinct types of pathogenic organisms. Concurrent infections most likely modulate the ...

Isolation and Characterization of Neutrophils with Anti-Tumor Properties

Neutrophils, the most abundant of all white blood cells in the human circulation, play an important role in the host defense against invading microorganisms. In addition, neutrophils play a central role in the immune surveillance of tumor cells. They have the ability to recognize tumor cells and induce tumor cell death either through a cell contact-dependent mechanism involving hydrogen peroxide or through antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC). Neutrophils with anti-tumor activity can be isolated from peripheral blood of cancer patients and of tumor-bearing mice. These neutrophils are termed tumor-entrained neutrophils (TEN) to distinguish them from neutrophils of healthy subjects or na&#239;ve mice that show no significant tumor cytotoxic activity. Compared with other white blood cells, neutrophils show different buoyancy making it feasible to obtain a &#62; 98% pure neutrophil population when subjected to a density gradient. However, in addition to the normal high-density neutrophil population (HDN), in cancer patients, in tumor-bearing mice, as well as under chronic inflammatory conditions, distinct low-density neutrophil populations (LDN) appear in the circulation. LDN co-purify with the mononuclear fraction and can be separated from mononuclear cells using either positive or negative selection strategies. Once the purity of the isolated neutrophils is determined by flow cytometry, they can be used for in vitro and in vivo functional assays. We describe techniques for monitoring the anti-tumor activity of neutrophils, their ability to migrate and to produce reactive oxygen species, as well as monitoring their phagocytic capacity ex vivo. We further describe techniques to label the neutrophils for in vivo tracking, and to determine their anti-metastatic capacity in vivo. All these techniques are essential for understanding how to obtain and characterize neutrophils with anti-tumor function.

Neutrophils play an important role not only in host defense against invading microorganisms, but are also involved in the immune surveillance of tumor cells. Here, we describe techniques related to the isolation of neutrophils with anti-tumor properties and methods for monitoring anti-tumor neutrophil function in vitro and in vivo.

בידוד ואפיון של נויטרופילים עם תכונות אנטי-סרטניים

Neutrophils, the most abundant of all white blood cells in the human circulation, play an important role in the host defense against invading ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte extravasation might result in pathophysiological changes in the CNS. Thus, investigation of lymphocyte migration into the CNS is important to understand inflammatory CNS diseases and to develop new therapy approaches. Here we present an in vitro model of the human blood-brain barrier to study lymphocyte extravasation. Human brain microvascular endothelial cells (HBMEC) are confluently grown on a porous polyethylene terephthalate transwell insert to mimic the endothelium of the blood-brain barrier. Barrier function is validated by zonula occludens immunohistochemistry, transendothelial electrical resistance (TEER) measurements as well as analysis of evans blue permeation. This model allows investigation of the diapedesis of rare lymphocyte subsets such as CD56brightCD16dim/- NK cells. Furthermore, the effects of other cells, cytokines and chemokines, disease-related alterations, and distinct treatment regimens on the migratory capacity of lymphocytes can be studied. Finally, the impact of inflammatory stimuli as well as different treatment regimens on the endothelial barrier can be analyzed.

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Here, we describe a human blood-brain barrier model enabling to investigate lymphocyte transmigration into the central nervous system in vitro.

ניתוח של לימפוציטים extravasation שימוש<em&gt; במבחנה</em&gt; דגם של מחסום אנושי דם-מוח

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes

Obesity and respiratory disorders are major health problems. Obesity is becoming an emerging epidemic with an expected number of over 1 billion obese individuals worldwide by 2030, thus representing a growing socioeconomic burden. Simultaneously, obesity-related comorbidities, including diabetes as well as heart and chronic lung diseases, are continuously on the rise. Although obesity has been associated with increased risk for asthma exacerbations, worsening of respiratory symptoms, and poor control, the functional role of obesity and perturbed metabolism in the pathogenesis of chronic lung disease is often underestimated, and underlying molecular mechanisms remain elusive. This article aims to present methods to assess the effect of obesity on metabolism, as well as lung structure and function. Here, we describe three techniques for mice studies: (1) assessment of intraperitoneal glucose tolerance (ipGTT) to analyze the effect of obesity on glucose metabolism; (2) measurement of airway resistance (Res) and respiratory system compliance (Cdyn) to analyze the effect of obesity on lung function; and (3) preparation and fixation of the lung for subsequent quantitative histological assessment. Obesity-related lung diseases are probably multifactorial, stemming from systemic inflammatory and metabolic dysregulation that potentially adversely influence lung function and the response to therapy. Therefore, a standardized methodology to study molecular mechanisms and the effect of novel treatments is essential.

The incidence of obesity is rising and increases the risk of chronic lung diseases. To establish the underlying mechanisms and preventive strategies, well-defined animal models are needed. Here, we provide three methods (glucose-tolerance-test, body plethysmography, and lung fixation) to study the effect of obesity on pulmonary outcomes in mice.

בדיקת עמידות הגלוקוז בקרום הבטן, מדידה של תפקודי ריאה של קיבעון של הריאה לחקור את ההשפעה של השמנת יתר, חילוף חומרים לקוי על תוצאות ריאתי

Obesity and respiratory disorders are major health problems. Obesity is becoming an emerging epidemic with an expected number of over 1 billion obese ...

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by fluorescence or bioluminescence. We utilize BlaC, an enzyme expressed constitutively by all M. tuberculosis strains. REF allows rapid quantification of bacteria in lungs of infected mice. The same group of mice can be imaged at many time points, greatly reducing costs, enumerating bacteria more quickly, allowing novel observations in host-pathogen interactions, and increasing statistical power, since more animals per group are readily maintained. REF is extremely sensitive due to the catalytic nature of the BlaC enzymatic reporter and specific due to the custom flourescence resonance energy transfer (FRET) or fluorogenic substrates used. REF does not require recombinant strains, ensuring normal host-pathogen interactions. We describe the imaging of M. tuberculosis infection using a FRET substrate with maximal emission at 800 nm. The wavelength of the substrate allows sensitive deep tissue imaging in mammals. We will outline aerosol infection of mice with M. tuberculosis, anesthesia of mice, administration of the REF substrate, and optical imaging. This method has been successfully applied to evaluating host-pathogen interactions and efficacy of antibiotics targeting M. tuberculosis.

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

We describe the optical imaging of mice infected with Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) using reporter enzyme fluorescence (REF). This protocol facilitates the sensitive and specific detection of M. tuberculosis in pre-clinical animal models for pathogenesis, therapeutics and vaccine research.

הדמיה שחפת Mycobacterium בעכברים עם הכתב אנזים קרינה פלואורסצנטית

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by ...

Modeling Tuberculosis in Mycobacterium marinum Infected Adult Zebrafish

Mycobacterium tuberculosis is currently the deadliest human pathogen causing 1.7 million deaths and 10.4 million infections every year. Exposure to this bacterium causes a wide disease spectrum in humans ranging from a sterilized infection to an actively progressing deadly disease. The most common form is the latent tuberculosis, which is asymptomatic, but has the potential to reactivate into a fulminant disease. Adult zebrafish and its natural pathogen Mycobacterium marinum have recently proven to be an applicable model to study the wide disease spectrum of tuberculosis. Importantly, spontaneous latency and reactivation as well as adaptive immune responses in the context of mycobacterial infection can be studied in this model. In this article, we describe methods for the experimental infection of adult zebrafish, the collection of internal organs for the extraction of nucleic acids for the measurement of mycobacterial loads and host immune responses by quantitative PCR. The in-house-developed, M. marinum-specific qPCR assay is more sensitive than the traditional plating methods as it also detects DNA from non-dividing, dormant or recently dead mycobacteria. As both DNA and RNA are extracted from the same individual, it is possible to study the relationships between the diseased state, and the host and pathogen gene-expression. The adult zebrafish model for tuberculosis thus presents itself as a highly applicable, non-mammalian in vivo system to study host-pathogen interactions.

Modeling Tuberculosis in Mycobacterium marinum Infected Adult Zebrafish

Here, we present a protocol to model human tuberculosis in an adult zebrafish using its natural pathogen Mycobacterium marinum. Extracted DNA and RNA from the internal organs of infected zebrafish can be used to reveal the total mycobacterial loads in the fish and the host&#39;s immune responses with qPCR.

מידול שחפת ב דג נגוע זברה בוגרת התחממות עולמית

Mycobacterium tuberculosis is currently the deadliest human pathogen causing 1.7 million deaths and 10.4 million infections every year. Exposure to this ...

Co-immunoprecipitation Assay for Studying Functional Interactions Between Receptors and Enzymes

Receptor-associated enzymes are the major mediators of cellular activation. These enzymes are regulated, at least in part, by physical interactions with cytoplasmic tails of the receptors. The interactions often occur through specific protein domains and result in activation of the enzymes. There are several methods to study interactions between proteins. While co-immunoprecipitation is commonly used to study domains that are required for protein-protein interactions, there are no assays that document the contribution of specific domains to activity of the recruited enzymes at the same time. Accordingly, the method described here combines co-immunoprecipitation and an on-bead enzymatic activity assay for simultaneous evaluation of interactions between proteins and associated enzymatic activation. The goal of this protocol is to identify the domains that are critical for physical interactions between a protein and enzyme and the domains that are obligatory for complete activation of the enzyme. The importance of this assay is demonstrated, as certain receptor protein domains contribute to the binding of the enzyme to the cytoplasmic tail of the receptor, while other domains are necessary to regulate the function of the same enzyme.

Here, we present a protocol for co-immunoprecipitation and an on-bead enzymatic activity assay to simultaneously study the contribution of specific protein domains of plasma membrane receptors to both enzyme recruitment and enzyme activity.

Co-immunoprecipitation Assay ללמוד אינטראקציות פונקציונלי בין קולטנים ואנזימים

Receptor-associated enzymes are the major mediators of cellular activation. These enzymes are regulated, at least in part, by physical interactions with ...

Application of Consistent Massage-Like Perturbations on Mouse Calves and Monitoring the Resulting Intramuscular Pressure Changes

Massage is generally recognized to be beneficial for relieving pain and inflammation. Although previous studies have reported anti-inflammatory effects of massage on skeletal muscles, the molecular mechanisms behind are poorly understood. We have recently developed a simple device to apply local cyclical compression (LCC), which can generate intramuscular pressure waves with varying amplitudes. Using this device, we have demonstrated that LCC modulates inflammatory responses of macrophages in situ and alleviates immobilization-induced muscle atrophy. Here, we describe protocols for the optimization and application of LCC as a massage-like intervention against immobilization-induced inflammation and atrophy of skeletal muscles of mouse hindlimbs. The protocol that we have developed can be useful for investigating the mechanism underlying beneficial effects of physical exercise and massage. Our experimental system provides a prototype of the analytical approach to elucidate the mechanical regulation of muscle homeostasis, although further development needs to be made for more comprehensive studies.

Here we describe the protocols for applying defined mechanical loads to mouse calves and for monitoring the concomitant intramuscular pressure changes. The experimental systems that we have developed can be useful for investigating the mechanism behind the beneficial effects of physical exercise and massage.

יישום של רטבאליות העיסוי העקבי של העכבר וניטור השינויים הנובעים בלחץ שרירי

Massage is generally recognized to be beneficial for relieving pain and inflammation. Although previous studies have reported anti-inflammatory effects of ...