מחקר Kaloshian המעבדה ממומנת על ידי מענק מטעם ארצות הברית המכון הלאומי המזון והחקלאות (2007-35607-17765). מחקר רוברטס המעבדה ממומנת על ידי תרומות של ארצות הברית הסוכנות לפיתוח בינלאומי (GDG-G-00-02-00012-00 ו-EDH-00-07-00005) ו יבש קליפורניה עמוד שעועית המייעצת.

1. שתיל עגבניות הצמיחה סירים ומגשים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשביל הדלי, מבחני עגבניות זרעי צמחים בסיר אחד אדמה אורגני עשיר כגון תמהיל סאנשיין. לשמור בחממה ב 22-28 ° C. לאחר הנביטה, לדשן פעם בשבוע עם נס-Gro. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כשבועיים לאחר הנביטה, בשלב נכון עלים 2, השתלת בנפרד את השתילים לתוך הסירים (10 ס&quot;מ קוטר ו -17 ס&quot;מ בעומק) מלא אדמה חולית סטרילית המכילה חול 90% ומערבבים אורגני 10%. הוסף Osmocote דשן שחרור איטי ולשמור בחממה ב 22-28 מעלות צלזיוס למשך שבועיים. המשך להפרות צמחים פעם בשבוע עם נס-Gro. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור תפוקה גבוהה המסכים, זרעי צמחים ישירות מגשי באדמה חולית, מכסים את המגש בניילון נצמד ולשמור עד נביטה לעיל. לאחר הנביטה, להוסיף Osmocote דשן שחרור איטי ולדשן פעם בשבוע עם נס-Gro. </li></ol> 2. Cowpea צמיחה בתיקי שתיל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Seeds הם מונבטים או בצלחת פטרי, מצופה בכמה שכבות של נייר Kimwipe, והועברו ביחידות אל שקיות או ממוקם ישירות לתוך חריץ הנייר של הכיס ואת מונבטים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את שקיות הפלסטיק הקובץ בתיקייה תלוי, 2 לכל תיקייה, ולסדר את התיקיות במעמד במצב אנכי. מניחים את המדף בחדר בסביבה מבוקרת, שמרו על טמפרטורה של 25-28 מעלות צלזיוס ו - 16 שעות אור / 8 מחזור H כהה. Racks גם יכול להישמר בחממה, אך דורשים נייר או עטיפת נייר נוקשה להציב על המדף משני צידי הגבעולים צמח, כדי להפחית את פוטנציאל זיהום פטרייתי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> את שקיות המים פעם או פעמיים ביום עם מים אוסמוזה הפוכה. בערך 10 עד 14 יום לאחר זריעה, כאשר מערכת שורשים נאותה עם טיפים שורש שלישוני פיתחה (איור 1), את השתילים מוכנים חיסון. </li></ol> 3. הפקת ביצים נמטודות הפקת הggs מהשורשים נגועים הוא שונה מכל פרוטוקול שפותח על ידי Hussey ו בארקר (1973). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלושה עד ארבעה ימים לפני חיסון נמטודות, לחלץ השורש קושר את הביצים נמטודות מהשורשים עגבניה נגועים. לפני תחילת שאיבת הביצית, לשטוף את אזור העבודה ביסודיות עם מים חמים, כדי למנוע זיהום. גם לשטוף במים חמים בלנדר, שני דליים, רשת תיל תמיכה, פטיש גומי, שלוש הנפות של 425, 90 ו 25 צמצם מיקרומטר, גליל המדורג ומספריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסדר את הנפות מלמעלה למטה בסדר הבא: 425, 90 ו 25 צמצם מיקרומטר. הביצים יאספו על מסננת 25 מיקרומטר בתחתית. שים את הנפות על רשת תיל נתמך בכיור. שים דלי מתחת רשת תיל לאסוף את הפתרון באמצעות ריצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את החלק העליון של הצמח הנגוע (ים), המשמש כמקור הבידוד, וזורקים. מוציאים בזהירות את הצמח מהסיר. לשטוף את השורשים על ידי טבילה בדלי פלסטיק מלאה במים. יש לשטוף את השורשים נוסף לפי לרוץנינג מים עד חלקיקי הקרקע נשטפים מן השורשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את השורשים עם מספריים לחתיכות קטנות. השלך את השורש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את השורשים הקצוצים מצמח אחד בצנצנת פלסטיק גדולה עם מכסה, להוסיף מספיק פתרון אקונומיקה 10% כדי לכסות את השורשים ולסגור את המכסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנער את הצנצנת המכילה את השורשים של 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את הצנצנת ושופכים את השורשים על גבי מסננת העליון ולשטוף עם צינור מחובר נחיר ערפול. לשטוף היטב עד שכל ריח אקונומיקה נעלם. השתמש בפטיש כדי לנצל את הצדדים של הנפות כדי למנוע סתימת נקבוביות מסננת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את מסננת למעלה לשטוף את הפסולת על מסננת 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את מסננת 2 ולאסוף את הפסולת בסדר, הכולל את הביצים, מן מסננת האחרון. עם זרם עדין מבקבוק המים, להעביר את הפסולת בצד אחד של המסננת. איסוף פסולת ביצים לתוך כוס נקייה עם כמות מינימלית של מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסננת שוב מים שנאספודלי דרך מסננת 25 מיקרומטר לאסוף את כל הביצים שאולי נמלטים. יש לשטוף היטב עם מים בכוס לאסוף אותו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשליך את פסולת צמח מ מסננת למעלה לשטוף ביסודיות את כל שלושת הנפות עם מים בלחץ. אל תיגע חלק רשת הנפות אשר יהא לעוות את גודל הנקבוביות. </li></ol> 4. נמטודות דגירה ביצים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקו סל מתכת נקייה עם כמה שכבות של נייר Kimwipe ולהתאים על צלחת פטרי מזכוכית. אפשר במרחק 1 ס&quot;מ בין החלק התחתון של הסל ואת המנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים את הביצים נמטודות שחולצו על הנייר בסל תיל. הוסף נוזלי מספיק כך את תחתית סל חוט נוגע פני המים אך אינו שקוע במים. תכסה את חלקו העליון עם מכסה פלסטיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל יום לבדוק אם יש אידוי מים ומוסיפים מעט מים בצלחת פטרי כדי התחתון של הסל נוגעת במים. זה ימנע את הביצים מהתייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בכל יום אחר, לאסוף WAter המכיל את J2s מן צלחות פטרי לתוך הכוס. אם לא נעשה שימוש באופן מיידי, לאורר הבידוד שנאספו בטמפרטורת החדר בעזרת אוויר או במעבדה אספקת האוויר הנוצר על ידי משאבת האקווריום. השתמש הבידוד aerated בתוך 2 ימים. J2s ניתן לגבות מן הבקיעה להקים על פני תקופה של 6-8 ימים. </li></ol> 5. רוט עגבניות זיהום בעציצים או מגשים והערכת זיהום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש שלוש aliquots של נמטודות שנאספו כדי לספור את מספר J2s בשקופית לספור או צלחת, לחשב את הממוצע ולקבוע את עוצמת הקול הרצויה חיסון. בדרך כלל 3000 J2s משמשים לכל צמח בעציצים ו -500 J2s עבור הצמחים הגדלים מגשי שתיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים את הבידוד על צלחת ערבוב המגנטי במהירות נמוכה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני לחסן את הצמחים, לוודא כי הקרקע לחה אך לא רטובה מדי. עבור חיסון הסיר, לעשות שלושה חורים בעומק של 1/2 סיר על בחול סביב כל מערכת עגבניות שורש באמצעות עיפרון (איור 2 </strong&gt;). לחסן כל צמח על ידי אספקת J2s לתוך שלושת החורים בעזרת פיפטה. לאחר מכן, לכסות את החורים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור תפוקה גבוהה מסכי במגשים, השתמש במחט שונה עצה חתום עם חורים בצידי דבוקות עצה פיפטה של 5 מ&quot;ל יחד pipetter (איור 3) כדי לספק את J2s לתוך האדמה. לחלופין, ניתן לשלוח נמטודות כמו בשלב 5.3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על הצמחים בחממה ב 24-27 מעלות צלזיוס למשך שישה עד שמונה שבועות. המשך להפרות פעמיים בחודש עם הנס-Gro. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להערכת זיהום, להסיר בזהירות את הצמחים מן הסירים לשטוף את השורשים (כפי שמתואר בשלב 3.3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כתם ההמונים ביצים כחולות על ידי הצללה השורשים של 1 מ&quot;ג / ל &#39;erioglaucine, במשך 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את השורשים במים ולהעריך על ידי ספירת ההמונים ביצה צבעונית במערכת השורש היחיד. זכוכית מגדלת שולחן מואר יכול לשמש כדי לעזור לדמיין את המוני ביצים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הצמחים הוקרן יש צורך גרם נוסףמחקרים enetic, לא לחתוך את צמרות לפני הכביסה השורשים להערכה. לאחר מכתים והספירה ההמונים ביצה, לשתול את השתילים בקרקע אורגנית, לגזום את ראשי בכבדות כדי להפחית את הדיות, ולשמור בחממה. </li></ol> 6. Cowpea זיהום רוט בתיקי והערכת זיהום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספור את הבידוד נמטודות ומערבבים בצלחת בחישה מגנטי, כמתואר לעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציאים את שקיות מהתיקיות תלויים ומניחים על משטח אופקי. מחסן לכל כיס עם 1500 J2s ב 5 מ&quot;ל. הרם את מכסה הפלסטיק של כיס ולהפיץ את נמטודות באופן שווה על פני השטח של השורשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור את שקיות במצב מאוזן על 24 שעות לאחר חיסון, מכוסה בנייר כהה כדי להוציא לאור, ולאחר מכן לחזור התיקיות תלויים בתא הגידול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשקות את הצמחים לפי הצורך, פעם ביום או פעמיים, עם פתרון חצי כוח של הוגלנד (הוגלנד &amp; ארנון, 1950, טבלה מס &#39;1 </&gt; חזק) עד בתגובה דשן הוא ציין, הורקה העלווה משופרת בדרך כלל וצמיחה לירות נמרצת יותר. בדרך כלל הצמחים להשקות עם חצי כוח הוגלנד 3 ימים ברציפות. לאחר מכן לשמור על לחות שקיות עם מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כ 30 ימים (טווח 28-35 ימים) לאחר חיסון, להחדיר בכל כיס עם כ 10-20 מ&quot;ל של erioglaucine מ&quot;ג / ל &#39;75. לשמור את שקיות מוצפים עם צבע במצב אופקי בין לילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסננים את שקיות ולהעריך את מערכות השורשים על ידי ספירת ההמונים ביצה תחת זכוכית מגדלת שולחן מואר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הצמחים הוקרן יש צורך במחקרים גנטיים נוספים או עבודה פורייה, שלוף בזהירות את השורשים מהשתלת נייר, באדמה אורגנית סירים ולשמור בחממה. </li></ol> 7. נציג תוצאות בשלבים המתאימים של צמחי עגבניות cowpea עבור חיסונים נמטודות עבור שתי מערכות המתוארות מוצגות דמויות1 ו 2. בנוסף, דוגמאות היטב נגועים שורשי עגבניות cowpea מוצגים איורים 4 ו -5. כמו רוב מסכי עמידות למחלות, מומלץ להשתמש לפחות 6-10 צמחים לכל גנוטיפ עבור חיסון נמטודות כדי לחשב את הממוצע של שיעור זיהום. וריאציה זיהום נמטודות בין צמחים, של גנוטיפ זהה, ניתן להפחית באמצעות גודל המפעל אחיד סכום מדויק מסירה של הבידוד. השימוש מגשי שקיות צמיחה מאפשר הקרנה של מאות עד אלפי צמחים בחלל גידול קטן. שקיות הצמיחה גם לאפשר מהיר ויעיל שאינו הרסני הערכה של השורש קושר זיהומים נמטודות ללא צורך שורשים כביסה (איור 4). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig1.jpg" /> באיור 1. 2 בת שבוע במפעל cowpea גדל בכיס ומוכן שורש הקשר NEMAtode חיסון. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig2.jpg" /> איור 2. 3 שבועות בן צמח עגבניות מוכן חיסון שורש הקשר נמטודות. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig3.jpg" /> איור 3. מחט שונה עצה ו פיפטה המשמש חיסון תפוקה גבוהה של נמטודות. בתחתית המחט נחתם ושלוש קבוצות של חורים שנקדחו מחט באמצעות קרן לייזר. ואז, המחט שונה היה מודבק על קצה פיפטה של ​​5 מ&quot;ל. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig4.jpg" /> איור 4. שורש עגבניות מערכת נגוע השורש קושר את נמטודות. <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig5.jpg" /> איור 5. מערכת השורש cowpea עם המוני מוכתמים ביצה erioglaucine 30 יום לאחר חיסון גדל ב28 ° C.

<ol>
	<li>Bhattarai, K. K., Xie, Q. G., Mantelin, S., Bishnoi, U., Girke, T., Navarre, D. A., Kaloshian, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tomato+susceptibility+to+root-knot+nematodes+requires+an+intact+jasmonic+acid+signaling+pathway.">Tomato susceptibility to root-knot nematodes requires an intact jasmonic acid signaling pathway.</a> Mol. Plant Microbe Interact. 21, 1205-1214 (2008).</li><li>Ehlers, J. D., Matthews, W. C., Hall, A. E., Roberts, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inheritance+of+a+broad-based+form+of+root-knot+nematode+resistance+in+cowpea.">Inheritance of a broad-based form of root-knot nematode resistance in cowpea.</a> Crop Sci. 40, 611-618 (2000).</li><li>Hoagland, D. R., Arnon, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+water-culture+method+for+growing+plants+without+soil.">The water-culture method for growing plants without soil.</a> Calif. Agric. Exp. Stn. Circ. 347, (1950).</li><li>Hussey, R. S., Barker, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+methods+of+collecting+inocula+of+Meloidogyne+spp.,+including+a+new+technique.">A comparison of methods of collecting inocula of Meloidogyne spp., including a new technique.</a> Plant Dis. Rep. 57, 1025-1028 (1973).</li><li>Martinez de Ilarduya, O., Moore, A. E., Kaloshian, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tomato+Rme1+locus+is+required+for+Mi-1-mediated+resistance+to+root-knot+nematodes+and+the+potato+aphid.">The tomato Rme1 locus is required for Mi-1-mediated resistance to root-knot nematodes and the potato aphid.</a> Plant J. 27, 417-425 (2001).</li><li>Matkin, O. A., Chandler, P. A., Baker, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+U.C.-type+soil+mixes.+In:+The+U.C.+system+for+producing+healthy+container-grown+plants.">The U.C.-type soil mixes. In: The U.C. system for producing healthy container-grown plants.</a> Calif. Agric. Exp. Stn. Manual. 23, 68-85 (1957).</li><li>Omwega, C. O., Roberts, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inheritance+of+resistance+to+Meloidogyne+spp.+in+common+bean+and+the+genetic+basis+of+its+sensitivity+to+temperature.">Inheritance of resistance to Meloidogyne spp. in common bean and the genetic basis of its sensitivity to temperature.</a> Theor. Appl. Genet. 83, 720-726 (1992).</li><li>Omwega, C. O., Thomason, I. J., Roberts, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+nondestructive+technique+for+screening+bean+germplasm+for+resistance+to+Meloidogyne+incognita.">A nondestructive technique for screening bean germplasm for resistance to Meloidogyne incognita.</a> Plant Dis. 72, 970-972 (1988).</li><li>Perry, R. N., Moens, M., Starr, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Root-Knot Nematodes. , (2009).</li><li>Starr, J. L., Cook, R., Bridge, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Resistance to Parasitic Nematodes. , (2002).</li></ol>

אין לנו מה למסור.

יש שני שלבים קריטיים עבור המסך נמטודות מוצלח: הכנת הבידוד זיהומיות מאוד באמצעות צמחים בשלב התפתחותי תקין. שיעור הבקיעה של שורש, פקעת ביצים נמטודות הוא משתנה מאוד ונע בין 5 ל - 50%. לכן כדי להשיג רמות אופטימליות של הפתח J2s זיהומיות ביותר, תשומת לב רבה יש לשלם מיצוי הליכים ביצה הבקיעה. הביצים צריכים להיות חשופים אקונומיקה למשך זמן מינימלי אקונומיקה יש לשטוף היטב את התערובת מן השורש. כאשר הבקיעה את הביצים, slurry המכיל את הביצים לא צריך להיות שקוע במים. בנוסף, יש להימנע לשפוך את הביצים לתוך צלחת פטרי הבסיסי שבו בקעו צעירים נאספים. דרך אחת להימנע לשפוך את הביצים תוך כדי תהליך הבקיעה הוא לא להוסיף מים ישירות Kimwipe כמו נייר עשוי להישבר. במקום להוסיף את המים ישירות אל צלחת פטרי. לקבלת התוצאות הטובות ביותר, השתמש J2s שבקעו זה עתה. אם hatcשיעור H נמוך הבידוד יותר יש צורך, J2s ניתן לאחסן על 15 מעלות צלזיוס למשך תקופה ארוכה. לחמם את הבידוד המאוחסן בטמפרטורת החדר כדי להחיות את נמטודות שקדמו חיסון. עם זאת, אין לאחסן את J2s לתקופות ממושכות אפילו 15 מעלות צלזיוס כ J2s מורעבים לא להדביק ביעילות. שתילים צעירים בשלב ההתפתחותי הטוב ביותר עבור חיסון שורש הקשר נמטודות. עם זאת, זה צריך להיות מאוזן עם הקמתה של מערכת שורשים נאותה לספק בכמות מספקת של טיפים שורש כמו נקודות הכניסה עבור J2s את. שמירה על מצב אופטימלי גידול צמחים חיוני גם עבור המסכים. הימנע יתר משקים צמחים במיוחד אלה גדל שקיות. יתר משקה את שקיות, כפי שצוין על ידי מים עומדים בבית התחתון של הנרתיק, יכול לקדם את צמיחת הפטרייה ולצמצם בריאות השורש. עם הערכה מבחני הן עוד יותר של זיהום נמטודות וחישוב של מספר ביצים / מערכת שורש וביצים / גרם freהשורש ש ניתן לבצע. עבור מבחני העגבניות, שורשים בודדים שקל וביצים שחולצו כפי שתואר על הבידוד הכנה (סעיף 3). בעת עיבוד של מספר גדול של דגימות צמחים, מערכות שורש בודדים ניתן macerated באמצעות בלנדר להפקת הביצים. מספר הביצים יש לספור לפחות שלושה aliquots והביצים / גרם שורש טרי של מערכת מחושב. עבור מבחני כיס, מערכת השורשים היא הסירה את הכנס נייר, שקל, וביצים חילוץ.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Compound </td>
			<td>Concentration </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KNO3</td>
			<td>5 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ca(NO3)2 &bull; 4 H2O</td>
			<td>5 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4 &bull; 7H2O</td>
			<td>2 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>1 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamp-ene Fe EDTA 13.0%</td>
			<td>1 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H3BO3</td>
			<td>46 &mu;M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl2 &bull; 4H2O</td>
			<td>9 &mu;M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnSO4 &bull; 7H2O</td>
			<td>0.00076 &mu;M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO4 &bull; 5H2O</td>
			<td>0.00032 &mu;M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(NH4)6Mo7O24 &bull; 4H2O</td>
			<td>0.00016 &mu;M</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Table 1. Reagents for Hoagland's solution.
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of the reagent </td>
			<td>Company </td>
			<td>Catalogue number </td>
			<td>Comments </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erioglaucine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC22973-0250</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Miracle-Gro for tomato</td>
			<td>Scotts Miracle-Gro</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>18-18-21</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmocote</td>
			<td>Scotts Miracle-Gro</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seedling growth pouches</td>
			<td>Mega International</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sieve 25 &mu;m</td>
			<td>H &amp; C Sieving Systems</td>
			<td>3886</td>
			<td>US standard #500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sieve 90 &mu;m</td>
			<td>H &amp; C Sieving Systems</td>
			<td>3880</td>
			<td>US standard #170</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sieve 425 &mu;m</td>
			<td>H &amp; C Sieving Systems</td>
			<td>3871</td>
			<td>US standard #40</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sunshine mix</td>
			<td>Sun Gro Horticulture Canada</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Table 2. Table of specific reagents and equipment.

high and low throughput screens with root-knot nematodes meloidogyne spp.

השורש קושר את נמטודות (הסוג Meloidogyne) הם טפילים צמחים המחייבות. הם polyphagous מאוד נחשב לאחד החשובים ביותר נמטודות צמחים טפילים מבחינה כלכלית. מיקרוסקופית השלב השני נעורים (J2), נשל פעם הביצה, הוא השלב של התולעת. J2s את בוקעים מן הביצים, לנוע בחופשיות באדמה בתוך הסרט של מים, ולאתר טיפים שורש של מיני צמחים מתאימים. לאחר חדירה שורש הצמח, הם נודדים אל הגליל כלי הדם שם הם להקים אתר האכלה וליזום האכלה באמצעות stylets שלהם. האתר האכלה תאיים מורכב מספר תאים הנקראים multinuclear מוגדלים של התאים ענק של דבר נוצרים תאים שעברו karyokinesis (חזר מיטוזה) ללא cytokinesis. תאים pericycle השכנות הפרד להגדלה בגודל והוליד המרה רגילה או הקשר שורש, סימפטום אופייני של זיהום שורש הקשר נמטודות. לאחר ההאכלה הוא יזם, J2s להיות פעילים ובטלdergo שלושה molts נוספים להיות מבוגרים. הנקבה הבוגרת מטילה ביצים 150-250 במטריצה ​​דביקות או מתחת לפני השטח של השורש. מן הביצים בוקעים J2s זיהומיות חדשים ולהתחיל מחזור חדש. שורש הקשר מחזור החיים נמטודות הושלמה ב 4-6 שבועות 26-28 ° C. כאן אנו מציגים את הפרוטוקול המסורתית להדביק צמחים הגדלים בעציצים, עם השורש, ומשלב את נמטודות ואת שתי שיטות מבחני תפוקה גבוהה. השיטה הראשונה תפוקה גבוהה משמש בצמחים בעלי זרעים קטנים כגון עגבניות ואילו השני הוא לצמחים בעלי זרעים גדולים כגון שעועית cowpea משותף. זרעים גדולים לתמוך בצמיחה שתיל ממושך עם תוסף תזונתי מינימלי. Assay 1 תפוקה גבוהה מנצל שתילים שגודלו חול מגשי בעוד הצמחים assay השני מגדלים שקיות בהעדר אדמה. נרתיק גידול שתיל עשוי הפתיל 15.5 x 12.5cm נייר, מקופל בראש להקים שוקת 2 ס&quot;מ עמוק שבו זרע או שתיל ממוקמת.הפתיל נייר נכלל בתוך כיס פלסטיק שקוף. אלה שקיות הצמיחה לאפשר תצפית ישירה של זיהום תסמיני נמטודות, מהחוצפה של שורשים לייצור המוני ביצה, מתחת לפני השטח של כיס שקוף. שתי השיטות לאפשר את השימוש הצמחים הוקרן, לאחר phenotyping, למעבר או הזרעים הייצור. יתרון נוסף של השימוש שקיות הצמיחה היא הדרישה שטח קטן בגלל שקיות מאוחסנים בתיקיות פלסטיק תלויים מדפים מסודרים.

Watch this Scientific Journal Video about High and Low Throughput Screens with Root-knot Nematodes Meloidogyne spp. at JoVE.com

High and Low Throughput Screens with Root-knot Nematodes Meloidogyne spp.

שתי שיטות שונות על צמחים מסך עם השורש קושר את נמטודות מתוארים. הגישות שתוארו כוללות תפוקה גבוהה מסכים עם נמטודות באופן הורסות להקל על השימוש בצמחים אלה בתוכניות רבייה.

קצב העברה גבוה ונמוך מסכים עם השורש קושר את נמטודות Meloidogyne spp.</em

Root-knot nematodes (genus Meloidogyne) are obligate plant parasites. They are extremely polyphagous and considered one of the most economically important ...

high-low-throughput-screens-with-root-knot-nematodes-meloidogyne

Google

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

High and Low Throughput Screens with Root-knot Nematodes Meloidogyne spp.

27.7K Views.  University of California, Riverside. שתי שיטות שונות על צמחים מסך עם השורש קושר את נמטודות מתוארים. הגישות שתוארו כוללות תפוקה גבוהה מסכים עם נמטודות באופן הורסות להקל על השימוש בצמחים אלה בתוכניות רבייה.

Video: High and Low Throughput Screens with Root-knot Nematodes Meloidogyne spp.

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, precise diagnosis of the infecting strain and rapid high-throughput screening of vast numbers of clinical samples is paramount to control the spread of pandemic infections. Current clinical diagnoses of influenza infections are based on serologic testing, polymerase chain reaction, direct specimen immunofluorescence and cell culture 1,2.
Here, we report the development of a novel diagnostic technique used to detect live influenza viruses. We used the mouse-adapted human A/PR/8/34 (PR8, H1N1) virus 3 to test the efficacy of this technique using MDCK cells 4. MDCK cells (104 or 5 x 103 per well) were cultured in 96- or 384-well plates, infected with PR8 and viral proteins were detected using anti-M2 followed by an IR dye-conjugated secondary antibody. M2 5 and hemagglutinin 1 are two major marker proteins used in many different diagnostic assays. Employing IR-dye-conjugated secondary antibodies minimized the autofluorescence associated with other fluorescent dyes. The use of anti-M2 antibody allowed us to use the antigen-specific fluorescence intensity as a direct metric of viral quantity. To enumerate the fluorescence intensity, we used the LI-COR Odyssey-based IR scanner. This system uses two channel laser-based IR detections to identify fluorophores and differentiate them from background noise. The first channel excites at 680 nm and emits at 700 nm to help quantify the background. The second channel detects fluorophores that excite at 780 nm and emit at 800 nm. Scanning of PR8-infected MDCK cells in the IR scanner indicated a viral titer-dependent bright fluorescence. A positive correlation of fluorescence intensity to virus titer starting from 102-105 PFU could be consistently observed. Minimal but detectable positivity consistently seen with 102-103 PFU PR8 viral titers demonstrated the high sensitivity of the near-IR dyes. The signal-to-noise ratio was determined by comparing the mock-infected or isotype antibody-treated MDCK cells.
Using the fluorescence intensities from 96- or 384-well plate formats, we constructed standard titration curves. In these calculations, the first variable is the viral titer while the second variable is the fluorescence intensity. Therefore, we used the exponential distribution to generate a curve-fit to determine the polynomial relationship between the viral titers and fluorescence intensities. Collectively, we conclude that IR dye-based protein detection system can help diagnose infecting viral strains and precisely enumerate the titer of the infecting pathogens.

This method describes the use of Infrared dye based imaging system for detection of H1N1 in bronchioalveolar lavage (BAL) fluid of infected mice at a high sensitivity. This methodology can be performed in a 96- or 384-well plate, requires &lt;10 &mu;l volume of test material and has the potential for concurrent screening of multiple pathogens.

תפוקה גבוהה איתור שיטת וירוס השפעת

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

Cancer immunotherapy can harness the specificity of immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT) based on the adoptive transfer of T cells genetically modified to express a chimeric antigen receptor (CAR) has shown considerable promise in clinical trials1-4. There are several advantages to using CAR+ T cells for the treatment of cancers including the ability to target non-MHC restricted antigens and to functionalize the T cells for optimal survival, homing and persistence within the host; and finally to induce apoptosis of CAR+ T cells in the event of host toxicity5.
Delineating the optimal functions of CAR+ T cells associated with clinical benefit is essential for designing the next generation of clinical trials. Recent advances in live animal imaging like multiphoton microscopy have revolutionized the study of immune cell function in vivo6,7. While these studies have advanced our understanding of T-cell functions in vivo, T-cell based ACT in clinical trials requires the need to link molecular and functional features of T-cell preparations pre-infusion with clinical efficacy post-infusion, by utilizing in vitro assays monitoring T-cell functions like, cytotoxicity and cytokine secretion. Standard flow-cytometry based assays have been developed that determine the overall functioning of populations of T cells at the single-cell level but these are not suitable for monitoring conjugate formation and lifetimes or the ability of the same cell to kill multiple targets8.
Microfabricated arrays designed in biocompatible polymers like polydimethylsiloxane (PDMS) are a particularly attractive method to spatially confine effectors and targets in small volumes9. In combination with automated time-lapse fluorescence microscopy, thousands of effector-target interactions can be monitored simultaneously by imaging individual wells of a nanowell array. We present here a high-throughput methodology for monitoring T-cell mediated cytotoxicity at the single-cell level that can be broadly applied to studying the cytolytic functionality of T cells.

We describe a single-cell high-throughput assay to measure cytotoxicity of T cells when incubated with tumor target cells. This method employs a dense, elastomeric array of sub-nanoliter wells (~100,000 wells/array) to spatially confine the T cells and target cells at defined ratios and is coupled to fluorescence microscopy to monitor effector-target conjugation and subsequent apoptosis.

Assay כמותית תפוקה גבוהה מתא בודד Cytotoxicity לתאי T

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

ScanLag: High-throughput Quantification of Colony Growth and Lag Time

Growth dynamics are fundamental characteristics of microorganisms. Quantifying growth precisely is an important goal in microbiology. Growth dynamics are affected both by the doubling time of the microorganism and by any delay in growth upon transfer from one condition to another, the lag. The ScanLag method enables the characterization of these two independent properties at the level of colonies originating each from a single cell, generating a two-dimensional distribution of the lag time and of the growth time. In ScanLag, measurement of the time it takes for colonies on conventional nutrient agar plates to be detected is automated on an array of commercial scanners controlled by an in house application. Petri dishes are placed on the scanners, and the application acquires images periodically. Automated analysis of colony growth is then done by an application that returns the appearance time and growth rate of each colony. Other parameters, such as the shape, texture and color of the colony, can be extracted for multidimensional mapping of sub-populations of cells. Finally, the method enables the retrieval of rare variants with specific growth phenotypes for further characterization. The technique could be applied in bacteriology for the identification of long lag that can cause persistence to antibiotics, as well as a general low cost technique for phenotypic screens.

ScanLag is a high-throughput method for measuring the delay in growth, namely lag time, as well as the growth rate of colonies for thousands of cells in parallel. Screening using ScanLag enables the discrimination between long lag-time and slow growth at the level of a single variant.

ScanLag: כימות תפוקה גבוהה של המושבה צמיחה ול&quot;ג בזמן

Growth dynamics are fundamental characteristics of microorganisms. Quantifying growth precisely is an important goal in microbiology. Growth dynamics are ...

Scalable High Throughput Selection From  Phage-displayed Synthetic Antibody Libraries

The demand for antibodies that fulfill the needs of both basic and clinical research applications is high and will dramatically increase in the future. However, it is apparent that traditional monoclonal technologies are not alone up to this task. This has led to the development of alternate methods to satisfy the demand for high quality and renewable affinity reagents to all accessible elements of the proteome. Toward this end, high throughput methods for conducting selections from phage-displayed synthetic antibody libraries have been devised for applications involving diverse antigens and optimized for rapid throughput and success. Herein, a protocol is described in detail that illustrates with video demonstration the parallel selection of Fab-phage clones from high diversity libraries against hundreds of targets using either a manual 96 channel liquid handler or automated robotics system. Using this protocol, a single user can generate hundreds of antigens, select antibodies to them in parallel and validate antibody binding within 6-8 weeks. Highlighted are: i) a viable antigen format, ii) pre-selection antigen characterization, iii) critical steps that influence the selection of specific and high affinity clones, and iv) ways of monitoring selection effectiveness and early stage antibody clone characterization. With this approach, we have obtained synthetic antibody fragments (Fabs) to many target classes including single-pass membrane receptors, secreted protein hormones, and multi-domain intracellular proteins. These fragments are readily converted to full-length antibodies and have been validated to exhibit high affinity and specificity. Further, they have been demonstrated to be functional in a variety of standard immunoassays including Western blotting, ELISA, cellular immunofluorescence, immunoprecipitation and related assays. This methodology will accelerate antibody discovery and ultimately bring us closer to realizing the goal of generating renewable, high quality antibodies to the proteome.

A method is described with visual accompaniment for conducting scalable, high throughput selections from phage-displayed combinatorial synthetic antibody libraries against hundreds of antigens simultaneously. Using this parallel approach, we have isolated antibody fragments that exhibit high affinity and specificity for diverse antigens that are functional in standard immunoassays.

גבוהה Scalable תפוקה בחירה מספריות נוגדן סינטטיים-מוצג הפאג

The demand for antibodies that fulfill the needs of both basic and clinical research applications is high and will dramatically increase in the future. ...

Establishment and Optimization of a High Throughput Setup to Study Staphylococcus epidermidis and Mycobacterium marinum Infection as a Model for Drug Discovery

Zebrafish are becoming a valuable tool in the preclinical phase of drug discovery screenings as a whole animal model with high throughput screening possibilities. They can be used to bridge the gap between cell based assays at earlier stages and in vivo validation in mammalian models, reducing, in this way, the number of compounds passing through to testing on the much more expensive rodent models. In this light, in the present manuscript is described a new high throughput pipeline using zebrafish as in vivo model system for the study of Staphylococcus epidermidis and Mycobacterium marinum infection. This setup allows the generation and analysis of large number of synchronous embryos homogenously infected. Moreover the flexibility of the pipeline allows the user to easily implement other platforms to improve the resolution of the analysis when needed. The combination of the zebrafish together with innovative high throughput technologies opens the field of drug testing and discovery to new possibilities not only because of the strength of using a whole animal model but also because of the large number of transgenic lines available that can be used to decipher the mode of action of new compounds.

Establishment and Optimization of a High Throughput Setup to Study Staphylococcus epidermidis and Mycobacterium marinum Infection as a Model for Drug Discovery

This video article describes the high throughput pipeline that has been successfully established to infect and analyze large numbers of zebrafish embryos providing a new powerful tool for compound testing and drug discovery using a whole animal vertebrate organism.

הקמה ואופטימיזציה של הגדרת תפוקה גבוהה ללמוד<em&gt; סטפילוקוקוס epidermidis</em&gt; ו<em&gt; Marinum Mycobacterium</em&gt; זיהום כמודל לגילוי תרופות

Zebrafish are becoming a valuable tool in the preclinical phase of drug discovery screenings as a whole animal model with high throughput screening ...

Microscopy-based Assays for High-throughput Screening of Host Factors Involved in Brucella Infection of Hela Cells

Brucella species are facultative intracellular pathogens that infect animals as their natural hosts. Transmission to humans is most commonly caused by direct contact with infected animals or by ingestion of contaminated food and can lead to severe chronic infections.
Brucella can invade professional and non-professional phagocytic cells and replicates within endoplasmic reticulum (ER)-derived vacuoles. The host factors required for Brucella entry into host cells, avoidance of lysosomal degradation, and replication in the ER-like compartment remain largely unknown. Here we describe two assays to identify host factors involved in Brucella entry and replication in HeLa cells. The protocols describe the use of RNA interference, while alternative screening methods could be applied. The assays are based on the detection of fluorescently labeled bacteria in fluorescently labeled host cells using automated wide-field microscopy. The fluorescent images are analyzed using a standardized image analysis pipeline in CellProfiler which allows single cell-based infection scoring.
In the endpoint assay, intracellular replication is measured two days after infection. This allows bacteria to traffic to their replicative niche where proliferation is initiated around 12 hr after bacterial entry. Brucella which have successfully established an intracellular niche will thus have strongly proliferated inside host cells. Since intracellular bacteria will greatly outnumber individual extracellular or intracellular non-replicative bacteria, a strain constitutively expressing GFP can be used. The strong GFP signal is then used to identify infected cells.
In contrast, for the entry assay it is essential to differentiate between intracellular and extracellular bacteria. Here, a strain encoding for a tetracycline-inducible GFP is used. Induction of GFP with simultaneous inactivation of extracellular bacteria by gentamicin enables the differentiation between intracellular and extracellular bacteria based on the GFP signal, with only intracellular bacteria being able to express GFP. This allows the robust detection of single intracellular bacteria before intracellular proliferation is initiated.

Microscopy-based Assays for High-throughput Screening of Host Factors Involved in Brucella Infection of Hela Cells

Two assays for microscopy-based high-throughput screening of host factors involved in Brucella infection are described. The entry assay detects host factors required for Brucella entry and the endpoint assay those required for intracellular replication. While applicable for alternative approaches, siRNA screening in HeLa cells is used to illustrate the protocols.

מיקרוסקופי מבוססת מבחנים עבור הקרנת תפוקה גבוהה של גורמי מארח המעורבים<em&gt; Brucella</em&gt; זיהום של תאים הלה

Brucella species are facultative intracellular pathogens that infect animals as their natural hosts. Transmission to humans is most commonly caused by ...

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

Improvements in mass spectrometry, sequencing and bioinformatics have generated large datasets of potentially interesting genes. Tagging these proteins can give insights into their function by determining their localization within the cell and enabling interaction partner identification. We recently published a fast and scalable method to generate Trypanosoma brucei cell lines that express a tagged protein from the endogenous locus. The method was based on a plasmid we generated that, when coupled with long primer PCR, can be used to modify a gene to encode a protein tagged at either terminus. This allows the tagging of dozens of trypanosome proteins in parallel, facilitating the large-scale validation of candidate genes of interest. This system can be used to tag proteins for localization (using a fluorescent protein, epitope tag or electron microscopy tag) or biochemistry (using tags for purification, such as the TAP (tandem affinity purification) tag). Here, we describe a protocol to perform the long primer PCR and the electroporation in 96-well plates, with the recovery and selection of transgenic trypanosomes occurring in 24-well plates. With this workflow, hundreds of proteins can be tagged in parallel; this is an order of magnitude improvement to our previous protocol and genome scale tagging is now possible.

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

Addition of a tag to a protein is a powerful way of gaining insight into its function. Here, we describe a protocol to endogenously tag hundreds of Trypanosoma brucei proteins in parallel such that genome scale tagging is achievable.

תפוקה גבוהה ג&#39;ין תיוג ב<em&gt; Trypanosoma brucei</em

Improvements in mass spectrometry, sequencing and bioinformatics have generated large datasets of potentially interesting genes. Tagging these proteins ...

A High-throughput, High-content, Liquid-based C. elegans Pathosystem

The number of new drugs identified by traditional, in vitro screens has waned, reducing the success of this approach in the search for new weapons to combat multiple drug resistance. This has led to the conclusion that researchers do not only need to find new drugs, but also need to develop new ways of finding them. Amongst the most promising candidate methods are whole-organism, in vivo assays that use high-throughput, phenotypic readouts and hosts that range from Caenorhabditis elegans to Danio rerio. These hosts have several powerful advantages, including dramatic reductions in false positive hits, as compounds that are toxic to the host and/or biounavailable are typically dropped in the initial screen, prior to costly follow up.
Here we show how our assay has been used to interrogate host variation in the well-documented C. elegans&#8212;Pseudomonas aeruginosa liquid killing pathosystem. We also demonstrate several extensions of this well-worked out technique. For example, we are able to carry out high-throughput genetic screens using RNAi in 24- or 96-well plate formats to query host factors in this host-pathogen interaction. Using this assay, whole genome screens can be completed in only a few months, which can dramatically simplify the task of identifying drug targets, potentially without the need for laborious biochemical purification approaches.
We also report here a variation of our method that substitutes the gram-positive bacterium Enterococcus faecalis for the gram-negative pathogen P. aeruginosa. Much as is the case for P. aeruginosa, killing by E. faecalis is time-dependent. Unlike previous C. elegans&#8212;E. faecalis assays, our assay for E. faecalis does not require preinfection, improving its safety profile and reducing the chances of contaminating liquid-handling equipment. The assay is highly robust, showing ~95% death rates 96 h post infection.

A High-throughput, High-content, Liquid-based C. elegans Pathosystem

Here we describe a protocol that is an adaptable, whole host, high-content screening tool that can be utilized to study host-pathogen interactions and be used for drug discovery.

תפוקה גבוהה, גבוהה-תוכן, בנוזל C. elegans Pathosystem

The number of new drugs identified by traditional, in vitro screens has waned, reducing the success of this approach in the search for new weapons to ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella spp./Shigella spp. The gold standard method for the detection of Salmonella spp./Shigella spp. is direct culture but this is labor-intensive and time-consuming. Here, we describe a high-throughput platform for Salmonella spp./Shigella spp. screening, using real-time polymerase chain reaction (PCR) combined with guided culture. There are two major stages: real-time PCR and the guided culture. For the first stage (real-time PCR), we explain each step of the method: sample collection, pre-enrichment, DNA extraction and real-time PCR. If the real-time PCR result is positive, then the second stage (guided culture) is performed: selective culture, biochemical identification and serological characterization. We also illustrate representative results generated from it. The protocol described here would be a valuable platform for the rapid, specific, sensitive and high-throughput screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Salmonella spp./Shigella spp. are common pathogens attributed to diarrhea. Here, we describe a high-throughput platform for the screening of Salmonella spp./Shigella spp. using real-time PCR combined with guided culture.

פלטפורמה תפוקה גבוהה להקרנה של סלמונלה spp /שיגלה spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

Serum bactericidal assays (SBAs) measure the functional activity of antibodies and have been used for many decades. SBAs directly measure antibody killing activity by assessing the ability of antibodies in serum to bind to bacteria and activate complement. This complement activation results in the lysis and killing of the target bacteria. These assays are valuable because they go beyond quantifying antibody production to elucidate the biological functions that these antibodies have, allowing researchers to study the role that antibodies may play in preventing infection. SBAs have been used to study immune responses for many human pathogens, but there is no widely accepted methodology for Shigella at present. Historically, SBAs have been very labor-intensive, requiring many time-consuming steps to accurately quantify surviving bacteria. This protocol describes a simple, robust, and high-throughput assay that measures functional antibodies specific for Shigella in serum in vitro. The method described here offers many advantages over traditional SBAs, including the use of frozen bacterial stocks, 96 well assay plates, a micro-culture system, and automated colony-counting. All of these modifications make this assay less labor-intensive and more high-throughput. This protocol is simpler and faster to perform than traditional SBAs while still using simple technologies and readily available reagents. The protocol has been successfully applied in multiple independent laboratories and the assay is robust and reproducible. The assay can be used to assess immune responses in pre-clinical as well as clinical studies. Quantifying shigellacidal antibody titers both before and after antigen exposure (either by immunization or infection) allows for a broader understanding of how functional antibody responses are generated and their contribution to protective immunity. The development of this standardized, well-characterized assay may greatly facilitate Shigella vaccine design.

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

Here we present a protocol to measure Shigellacidal activity of antibodies in serum. Serum is mixed with bacteria and exogenous complement, incubated, and the reaction mixture is plated on agar plates. Viable bacteria form colonies which are counted, using an automated colony enumerator, and used to determine the bactericidal titer.

תפוקה גבוהה שיגלה-Assay אחרים ספציפיים

Serum bactericidal assays (SBAs) measure the functional activity of antibodies and have been used for many decades. SBAs directly measure antibody killing ...