Name: measurement of tactile allodynia in a murine model of bacterial prostatitis
Uploaded: 2013-01-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis at JoVE.com

מחקר זה נתמך על ידי המענק 1K01DK079019A2 (PT) מ-NIH / NIDDK.

1. הכנת חיידקים להרכבת חיסון מאוס הבא חייב להיעשות בתנאים אספטיים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח 1 17 100 צינורות פוליפרופילן מ&quot;מ x עם כובעים ולהוסיף 3 מ&quot;ל של תקשורת הטריה וריא מרק (LB). באמצעות טיפי autoclaved, לקחת כמה מניות גליצרול חיידקים קפוא של זן CP1 2 ולהעביר כמות קטנה של התרבות לתוך המבחנה המכילה את המדיה LB. החזר את מכסה צינור החמצן כך שעדיין תוכל להיכנס לצינור - התרבות צריכה לגדול בתנאים אירוביים. צינור מקום ב 37 ° C בחממה רועדת ב220 סל&quot;ד לילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת, להעביר 5 μl של תרבות הלילה לצינור טרי עם 3 מדיה LB מ&quot;ל ולגדול בתנאים סטטיים בחממת לילה בשעת 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 3 העברה 40 μl של התרבות לתוך צינור מיליליטר aa 50 המכילה 40 מ&quot;ל LB תקשורת כל אחת. מקום במעלות צלזיוס למשך לילה חממת סטטי 37. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל ולהגדיר צנטריפוגה עד 4 ° C.לאחר צנטריפוגה הגיעה טמפרטורה סופית, להעביר כל תרבות מ&quot;ל 40 לתוך צינור צנטריפוגה 40 מ&quot;ל Nalgene. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל צינורות לאזן צנטריפוגה - להתאים את עוצמת קול עם תקשורת LB לפי צורך. ספין צינורות ב6000 סל&quot;ד במשך 20 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציא בזהירות את supernatant ועדינות להשעות גלולת חיידקים ב40 המ&quot;ל סטרילי PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 1.5 עם PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב את supernatant ולהשעות את החיידקים ב500 PBS סטרילי μl. להעביר את הפתרון לתוך צינור 1.5 מיליליטר microfuge. קח 10 μl של השעיה ולדלל ב990 μl של PBS קר כקרח. השתמש ספקטרופוטומטר לקרוא את ננומטר OD 420 כדי לקבוע את הנפח הדרוש לחיסון. כדי לקבוע את הנפח המתאים לקר כקרח PBS להשעות גלולה ב: קח את מספר 420 ננומטר OD (במ&quot;ל) ולחסר את הנפח המשוער של גלולת החיידקים [לשעבר. OD 420 ננומטר = 0.545, גלולה כ 0.075 מ&quot;ל. 0.545-0.075 = 0.470]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להסיר 10 μl של השעית חיידקים ודיהלאוטה 990 PBS μl קר כקרח. קראו את ננומטר OD 420. המטרה היא להשיג שווי 420 ננומטר OD להשעיה המדוללת של 1.000 ± .010. אם המספר שלך הוא הדילול מעל היעד זה, להוסיף יותר נפח להשעיה ולקחת עוד קריאה. אם המספר הוא מתחת .990 אז ספין למטה ההשעיה וקריאת ננומטר 420 OD חוזר עד לקבלת קריאה רצויה. </li></ol> 2. זיהום בעלי חיים עכברים (5 עד 7 שבועות ישנים, 10 לכל קבוצה) נרכשו מג&#39;קסון המעבדה (הבר הרבור, ME). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים מורדמים על ידי שאיפה של 1-4% isoflurane בתא פרספקס ומנוטרים עד שכיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר אחד בכל פעם הוא נלקח להחדרה של חיידקים באמצעות צנתור עם פוליאתילן (PE10) צנתר המחובר למחט 30 G שונה של זכוכית המילטון מזרק (אורך של 1.5-2.0 סנטימטר). הצנתר המוחדר לרכזת של המחט. העכבר הוא Placאד על פני השטח הגבי שלה תחת הרדמה נשמר באמצעות חרטום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפין של העכבר הוא שמפריש לחץ עדינים וכמויות נדיבות של חומר סיכה על ספוגיות כותנה משמש לשימון של הכניסה לשופכה בפין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10 μl של פוספט נאגר מלוח המכיל 1 x 10 8 חיידקים מוחדר לשופכה של עכברים מורדמים לאחר צנתור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים נשמרים במדינה הרדימה במשך 15 דקות בתא פרספקס לאחר הקדמת חיידקים כדי לאפשר מצורף חיידקים וכדי למנוע הטלת שתן מיידית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים מוצבים בחזרה בכלוביהם ומעקב במשך 24 השעות הבאות. </li></ol> 3. בדיקת התנהגות עכברים נבדקו לפני הזיהום (בסיסי) ובימים 3, 7, 14, 21 ו 28 לאחר הדבקה. hyperalgesia התייחס והמישוש allodynia נבדק באמצעות חוטי פון פריי הוחלו על הבטן 11,12 וr הפלנטריegion של רגלו האחורית 13. בדיקה הייתה מעודה בזמן של יום קבוע, מתודולוגיה סטנדרטית ובדיקת הנסיינית אחת של כל בעלי החיים היו מועסקות. בדיקות מסונוור מקבוצות נוצלו כדי להילחם על המגבלות של בדיקות כאב מבוססות התנהגות במודלים של בעלי חיים. חמישה חוטי פריי פון בודדים עם כוחות של 0.04, 0.16, 0.4, 1.0 ו 4.0 גרם (Stoelting, ארה&quot;ב) היו מוחלים על הבטן והתדירות של תגובות גמילה היה מחושב. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר תקופה של 30 דקות של התאקלמות, עכברים ממוקמים בתאי פרספקס בודדים (6 x 10 סנטימטר X12) שנעשו בבית עם רצפת רשת תיל פלדה אל חלד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> hyperalgesia התייחס והמישוש allodynia נבדקו באמצעות החמישה חוטי פון פריי. כל חוט היה מוחל על 1-2 שניות עם מרווח בין גירוי של 5 שניות למשך 10 פעמים כלל, ואת השערות נבדקו בסדר עולה של כוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל נימה מוחלת על אזור הבטן התחתונה באזור הכללי של הערמונית וטיפול נלקח כדי לגרות אזורים שונים בתוך אזור זה, כדי למנוע הפחתת רגישות או &quot;לסכם&quot; אפקטים. חוטים היו מיושמים בהגדלת סדר כוחות ל1-2 שניות עם לפחות 5 שניות מרווחים בין גירויים לסך הכל 10 פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלושה סוגים של התנהגות נחשבים תגובה חיובית לגירוי חוט: 1) נסיגה חדה של הבטן, 2) מלקקים מיידי או גירוד באזור של גירוי חוט; 3) קפיצות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תדירות תגובה הייתה מחושבת כאחוז מתגובה חיובית (מתוך 10, למשל 5 תגובות של 10 = 50%) ונתונים שדווחו כאחוז הממוצע של תדר התגובה ± SE </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיות עם יותר מ 25 תגובות בסיסיות כלל חיוביות הוצאו מהמחקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המישוש allodynia נבדק על האזור הפלנטרי של רגלו האחורית באמצעות חוטי פון פריי עם כוחות של 0.04, 0.16, 0.4, 1.0 ו 4.0 גר &#39;. 50% סף הנסיגה החציוני (5) הוערך באמצעות למעלה למטהשיטה שבה בדיקות התחילו עם חוט 0.04 גרם מיושמת בניצב לפני השטח הפלנטרי של רגלו האחורית עד הנימים הכפופים מעט. חוטים נבדקו בסדר עולים עד תגובה חיובית נצפתה. תגובה חיובית לנימה הוגדרה כאחד נסיגה חדה של כפה או ללקק מכפת המבחן. כאשר תגובה חיובית נרשמה הנימה החלשה הבאה יושמה, ואם תשובה שלילית נצפתה, אז החוט החזק הבא יושם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הניסויים ומתודולוגיה שתוארו כבר נבדקו ואושרו על ידי הטיפול בבעלי החיים באוניברסיטת נורת&#39;ווסטרן ולהשתמש ועדה. </li></ol>

<ol>
	<li>Yamamoto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+epidemiology+of+uropathogenic+Escherichia+coli.">Molecular epidemiology of uropathogenic Escherichia coli.</a> Journal of infection and chemotherapy official journal of the Japan Society of Chemotherapy. 13, 68-73 (2007).</li><li>Rudick, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uropathogenic+Escherichia+coli+induces+chronic+pelvic+pain.">Uropathogenic Escherichia coli induces chronic pelvic pain.</a> Infect. Immun. 79, 628-635 (2011).</li><li>Pontari, M. A., Ruggieri, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+in+prostatitis/chronic+pelvic+pain+syndrome.">Mechanisms in prostatitis/chronic pelvic pain syndrome.</a> The Journal of urology. 172, 839-845 (2004).</li><li>Schaeffer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+practice.+Chronic+prostatitis+and+the+chronic+pelvic+pain+syndrome.">Clinical practice. Chronic prostatitis and the chronic pelvic pain syndrome.</a> The New England journal of medicine. 355, 1690-1698 (2006).</li><li>Rudick, C. N., Schaeffer, A. J., Thumbikat, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+prostatitis+induces+chronic+pelvic+pain.+American+journal+of+physiology.">Experimental autoimmune prostatitis induces chronic pelvic pain. American journal of physiology.</a> Regulatory, integrative and comparative physiology. 294, R1268-R1275 (2008).</li><li>Elkahwaji, J. E., Ott, C. J., Janda, L. M., Hopkins, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+for+acute+bacterial+prostatitis+in+genetically+distinct+inbred+strains.">Mouse model for acute bacterial prostatitis in genetically distinct inbred strains.</a> Urology. 66, 883-887 (2005).</li><li>Hultgren, S. J., Porter, T. N., Schaeffer, A. J., Duncan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+type+1+pili+and+effects+of+phase+variation+on+lower+urinary+tract+infections+produced+by+Escherichia+coli.">Role of type 1 pili and effects of phase variation on lower urinary tract infections produced by Escherichia coli.</a> Infect. Immun. 50, 370-377 (1985).</li><li>Jarrell, J., Giamberardino, M. A., Robert, M., Nasr-Esfahani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bedside+testing+for+chronic+pelvic+pain:+discriminating+visceral+from+somatic+pain.">Bedside testing for chronic pelvic pain: discriminating visceral from somatic pain.</a> Pain research and treatment. 2011, 692102 (2011).</li><li>Jarrell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demonstration+of+Cutaneous+Allodynia+in+Association+with+Chronic+Pelvic+Pain.">Demonstration of Cutaneous Allodynia in Association with Chronic Pelvic Pain.</a> J. Vis. Exp. (28), e1232 (2009).</li><li>Giamberardino, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viscero-visceral+hyperalgesia:+characterization+in+different+clinical+models.">Viscero-visceral hyperalgesia: characterization in different clinical models.</a> Pain. 151, 307-322 (2010).</li><li>Laird, J. M., Martinez-Caro, L., Garcia-Nicas, E., Cervero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+visceral+pain+and+referred+hyperalgesia+in+the+mouse.">A new model of visceral pain and referred hyperalgesia in the mouse.</a> Pain. 92, 335-342 (2001).</li><li>Laird, J. M., Souslova, V., Wood, J. N., Cervero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficits+in+visceral+pain+and+referred+hyperalgesia+in+Nav1.8+(SNS/PN3)-null+mice.">Deficits in visceral pain and referred hyperalgesia in Nav1.8 (SNS/PN3)-null mice.</a> J. Neurosci. 22, 8352-8356 (2002).</li><li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw.">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of neuroscience. 53, 55-63 (1994).</li><li>Schaeffer, A. J., Schwan, W. R., Hultgren, S. J., Duncan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+type+1+pilus+expression+in+Escherichia+coli+to+ascending+urinary+tract+infections+in+mice.">Relationship of type 1 pilus expression in Escherichia coli to ascending urinary tract infections in mice.</a> Infect. Immun. 55, 373-380 (1987).</li><li>Boehm, B. J., Colopy, S. A., Jerde, T. J., Loftus, C. J., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+bacterial+inflammation+of+the+mouse+prostate.">Acute bacterial inflammation of the mouse prostate.</a> The Prostate. 72, 307-317 (2012).</li><li>Rivero, V. E., Cailleau, C., Depiante-Depaoli, M., Riera, C. M., Carnaud, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-obese+diabetic+(NOD)+mice+are+genetically+susceptible+to+experimental+autoimmune+prostatitis+(EAP).">Non-obese diabetic (NOD) mice are genetically susceptible to experimental autoimmune prostatitis (EAP).</a> Journal of autoimmunity. 11, 603-610 (1998).</li><li>Pakarainen, T., Zhang, F. P., Makela, S., Poutanen, M., Huhtaniemi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testosterone+replacement+therapy+induces+spermatogenesis+and+partially+restores+fertility+in+luteinizing+hormone+receptor+knockout+mice.">Testosterone replacement therapy induces spermatogenesis and partially restores fertility in luteinizing hormone receptor knockout mice.</a> Endocrinology. 146, 596-606 (2005).</li><li>Taguchi, O., Kojima, A., Nishizuka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+prostatitis+after+neonatal+thymectomy+in+the+mouse.">Experimental autoimmune prostatitis after neonatal thymectomy in the mouse.</a> Clinical and experimental immunology. 60, 123-129 (1985).</li></ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

דלקת של ערמונית העכבר עם UPEC מאפשרת בדוגמנות vivo של אירועים שעשויים להיות מעורב בפתוגנזה של ערמונית חיידקים, CP / CPPS או כאירוע predisposing בדלקת כרונית. השיטות מתוארות להכנת חיידקים ותיקו החדרה על גוף גדול של ספרות על מודלי UPEC בדלקת בדרכי שתן נשית 7,14. המודל יש תחולה...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td></tr><tr><td> צינורות תרבות </td><td> BD פלקון </td><td> 352059 </td></tr><tr><td> LB מרק מילר </td><td> EMD </td><td> EM1.10285.0500 </td></tr><tr><td> צינורות Nalgene צנטריפוגות </td><td> Thermo </td><td> 3118-0050 </td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td> שיין באטלר </td><td> NDC 11695-6776-1 </td></tr><tr><td> 30G המחט קטטר </td><td> המילטון </td><td> 91030 </td></tr><tr><td> PE10 צינורות </td><td> BD intramedic </td><td> 427400 </td></tr><tr><td> חוטי זכרונות פון פריי </td><td> Stoelting </td><td> 58025-31 </td></tr></tbody></table>

measurement of tactile allodynia in a murine model of bacterial prostatitis

coli Escherichia Uropathogenic (UPEC) הם פתוגנים שמשחקים תפקיד חשוב בדלקות בדרכי שתן וערמונית חיידקי 1. אנחנו הראינו לאחרונה שUPEC יש תפקיד חשוב בייזום של כאבי אגן כרוניים 2, תכונה של ערמונית כרונית / תסמונת כאב כרונית באגן (CP / CPPS) 3,4. הדלקת של הערמונית על ידי UPEC הרלוונטי קליני יכולה ליזום ולהקים כאב כרוני דרך מנגנונים שעשויים לכלול ניזק לרקמות וחניכה של מנגנוני אוטואימוניות 5. אתגר להבנת הפתוגנזה של UPEC בערמונית הוא נגישותו היחסית של בלוטת הערמונית למניפולציה. אנו מנוצלים שיטה שתוארה לעיל intraurethral זיהום 6 כדי לספק מתח קליני של UPEC לעכברים ממין זכר ובכך הקמת זיהום עולה של הערמונית. כאן, אנו מתארים הפרוטוקולים שלנו לתקנון bacterial 7 בידוד, כמו גם את ההליך לcatheterizing עכברי זכרים מורדמים להחדרה של חיידקים. CP / CPPS מאופיין בעיקר על ידי הנוכחות של המישוש allodynia 4. בדיקת התנהגות הייתה מבוססת על הרעיון של hyperalgesia עורית כתוצאה 8-10 כאבים קרביים הופנו. התמקדות ברקמות מעי רגיז מפחיתה את סף כאב עוריות המאפשרים לתגובה מוגזמת לגירויים בדרך כלל אינם כואבים (allodynia). יישום של כוח נורמלי לתוצאות בעור תגובות חריגות שנוטות להגדיל עם עוצמת כאב הבטן הבסיסית. אנו מתארים מתודולוגיה בעכברי NOD / ShiLtJ לנצל סיבי פון פריי לכמת allodynia מישוש לאורך זמן בתגובה לזיהום חיידקים בודד עם UPEC.

<html> בחנו הנהון / ShiLtj וC57BL/6J עכברי זכרים לנוכחות של כאב כרוני על זיהום חיידקים. עכברי זכרים (5 עד 7 שבועות ישנים) החדירו עם מי מלח או חיידקים לתוך השופכה (איור 1). גירוי מכאני של אזור האגן עם חוטי פון פריי של עכברים מלוחים החדירו C57BL/6J ועכברי C57BL/6J UPEC נגועים הביא לתדיר...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis at JoVE.com

Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis

דלקת של הערמונית עלולה להיות גורם תורם בתיווך כאב באגן בערמונית כרונית. אנו מתארים את הליך ההכנה של בידוד חיידקים טופל, החדרה של חיידקים לתוך השופכה של עכברי זכרים ומתודולוגיה למדידת allodynia מישוש בעכברים לאורך זמן.

מדידה של Allodynia משושים בדגם Murine של ערמונית קטריאלי

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently ...

measurement-tactile-allodynia-murine-model-bacterial

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

15.8K Views.  Northwestern University Feinberg School of Medicine. דלקת של הערמונית עלולה להיות גורם תורם בתיווך כאב באגן בערמונית כרונית. אנו מתארים את הליך ההכנה של בידוד חיידקים טופל, החדרה של חיידקים לתוך השופכה של עכברי זכרים ומתודולוגיה למדידת allodynia מישוש בעכברים לאורך זמן.

Video: Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis

Chronic Post-Ischemia Pain Model for Complex Regional Pain Syndrome Type-I in Rats

Complex regional pain syndrome type-I (CRPS-I) is a neurological disease that causes severe pain among patients and remains an unresolved medical condition. However, the underlying mechanisms of CRPS-I have yet to be revealed. It is known that ischemia/reperfusion is one of the leading factors that causes CRPS-I. By means of prolonged ischemia and reperfusion of the hind limb, the rat chronic post-ischemia pain (CPIP) model has been established to mimic CRPS-I. The CPIP model has become a well-recognized animal model for studying the mechanisms of CRPS-I. This protocol describes the detailed procedures involved in the establishment of the rat model of CPIP, including anesthesia, followed by ischemia/reperfusion of the hind limb. Characteristics of the rat CPIP model are further evaluated by measuring the mechanical and thermal hypersensitivities of the hind limb as well as the nocifensive responses to acute capsaicin injection. The rat CPIP model exhibits several CRPS-I-like manifestations, including hind limb edema and hyperemia in the early stage after establishment, persistent thermal and mechanical hypersensitivities, and increased nocifensive responses to acute capsaicin injection. These characteristics render it a suitable animal model for further investigation of the mechanisms involved in CRPS-I.

Provided here is a protocol that details steps to establish an animal model of chronic post-ischemia pain (CPIP). This is a well-recognized model mimicking human complex regional pain syndrome type-I. Mechanical and thermal hypersensitivities are further evaluated, as well as capsaicin-induced nocifensive behaviors observed in the CPIP rat model.

כרונית לאחר איסכמיה כאב מודל עבור מורכבות אזור תסמונת כאב הסוג-אני בחולדות

Complex regional pain syndrome type-I (CRPS-I) is a neurological disease that causes severe pain among patients and remains an unresolved medical ...

Behavior

The Sciatic Nerve Cuffing Model of Neuropathic Pain in Mice

Neuropathic pain arises as a consequence of a lesion or a disease affecting the somatosensory system. This syndrome results from maladaptive changes in injured sensory neurons and along the entire nociceptive pathway within the central nervous system. It is usually chronic and challenging to treat. In order to study neuropathic pain and its treatments, different models have been developed in rodents. These models derive from known etiologies, thus reproducing peripheral nerve injuries, central injuries, and metabolic-, infectious- or chemotherapy-related neuropathies. Murine models of peripheral nerve injury often target the sciatic nerve which is easy to access and allows nociceptive tests on the hind paw. These models rely on a compression and/or a section. Here, the detailed surgery procedure for the &#34;cuff model&#34; of neuropathic pain in mice is described. In this model, a cuff of PE-20 polyethylene tubing of standardized length (2 mm) is unilaterally implanted around the main branch of the sciatic nerve. It induces a long-lasting mechanical allodynia, i.e., a nociceptive response to a normally non-nociceptive stimulus that can be evaluated by using von Frey filaments. Besides the detailed surgery and testing procedures, the interest of this model for the study of neuropathic pain mechanism, for the study of neuropathic pain sensory and anxiodepressive aspects, and for the study of neuropathic pain treatments are also discussed.

Neuropathic pain is a consequence of a lesion or disease affecting the somatosensory system. The &#8220;cuff model&#8221; of neuropathic pain in mice consists of the implantation of a polyethylene cuff around the main branch of the sciatic nerve. Mechanical allodynia is tested using von Frey filaments.

דגם השת עצב איזוק של כאב נוירופתי בעכברים

Neuropathic pain arises as a consequence of a lesion or a disease affecting the somatosensory system. This syndrome results from maladaptive changes in ...

Medicine

Measuring Changes in Tactile Sensitivity in the Hind Paw of Mice Using an Electronic von Frey Apparatus

Measuring inflammation-induced changes in thresholds of hind paw withdrawal from mechanical pressure is a useful technique to assess changes in pain perception in rodents. Withdrawal thresholds can be measured first at baseline and then following drug, venom, injury, allergen,&#160;or otherwise evoked inflammation by applying an accurate force on very specific areas of the skin. An electronic von Frey apparatus allows precise assessment of mouse hind paw withdrawal thresholds that are not limited by the available filament sizes in contrast to classical von Frey measurements. The ease and rapidity of measurements allow for incorporation of assessment of tactile sensitivity outcomes in diverse models of rapid-onset inflammatory and neuropathic pain as multiple measurements can be taken within a short time period. Experimental measurements for individual rodent subjects can be internally controlled against individual baseline responses and exclusion criteria easily established to standardize baseline responses within and across experimental groups. Thus, measurements using an electronic von Frey apparatus represent a useful modification of the well-established classical von Frey filament-based assays for rodent mechanical allodynia that may also be applied to other nonhuman mammalian models.

Electronic von Frey measurements are an effective and improved alternative to classical von Frey filaments, as they allow rapid and precise measurement of changes in rodent mechanical withdrawal thresholds to continuously applied pressure stimuli before and after an inflammatory event.

מדידת שינויים במגע רגישות בכף הרגל האחורית של עכברים באמצעות מנגנון אלקטרוני פון פריי

Measuring inflammation-induced changes in thresholds of hind paw withdrawal from mechanical pressure is a useful technique to assess changes in pain ...

Neuroscience

An Improved Assay and Tools for Measuring Mechanical Nociception in Drosophila Larvae

Published assays for mechanical nociception in Drosophila have led to variable assessments of behavior. Here, we fabricated, for use with Drosophila larvae, customized metal nickel-titanium alloy (nitinol) filaments. These mechanical probes are similar to the von Frey filaments used in vertebrates to measure mechanical nociception. Here, we demonstrate how to make and calibrate these mechanical probes and how to generate a full behavioral dose-response from subthreshold (innocuous or non-noxious range) to suprathreshold (low to high noxious range) stimuli. To demonstrate the utility of the probes, we investigated tissue damage-induced hypersensitivity in Drosophila larvae. Mechanical allodynia (hypersensitivity to a normally innocuous mechanical stimulus) and hyperalgesia (exaggerated responsiveness to a noxious mechanical stimulus) have not yet been established in Drosophila larvae. Using mechanical probes that are normally innocuous or probes that typically elicit an aversive behavior, we found that Drosophila larvae develop mechanical hypersensitization (both allodynia and hyperalgesia) after tissue damage. Thus, the mechanical probes and assay that we illustrate here will likely be important tools to dissect the fundamental molecular/genetic mechanisms of mechanical hypersensitivity.

An Improved Assay and Tools for Measuring Mechanical Nociception in Drosophila Larvae

The goal of this protocol is to show how to perform an improved assay for mechanical nociception in Drosophila larvae. We use the assay here to demonstrate that mechanical hypersensitivity (allodynia and hyperalgesia) exists in Drosophila larvae.

מבחנים וכלים משופרים למדידת תפיסה מכנית בזחלי דרוזופילה

Published assays for mechanical nociception in Drosophila have led to variable assessments of behavior. Here, we fabricated, for use with Drosophila ...

Assessment of Morphine-induced Hyperalgesia and Analgesic Tolerance in Mice Using Thermal and Mechanical Nociceptive Modalities

Opioid-induced hyperalgesia and tolerance severely impact the clinical efficacy of opiates as pain relievers in animals and humans. The molecular mechanisms underlying both phenomena are not well understood and their elucidation should benefit from the study of animal models and from the design of appropriate experimental protocols. 
We describe here a methodological approach for inducing, recording and quantifying morphine-induced hyperalgesia as well as for evidencing analgesic tolerance, using the tail-immersion and tail pressure tests in wild-type mice. As shown in the video, the protocol is divided into five sequential steps. Handling and habituation phases allow a safe determination of the basal nociceptive response of the animals. Chronic morphine administration induces significant hyperalgesia as shown by an increase in both thermal and mechanical sensitivity, whereas the comparison of analgesia time-courses after acute or repeated morphine treatment clearly indicates the development of tolerance manifested by a decline in analgesic response amplitude. This protocol may be similarly adapted to genetically modified mice in order to evaluate the role of individual genes in the modulation of nociception and morphine analgesia. It also provides a model system to investigate the effectiveness of potential therapeutic agents to improve opiate analgesic efficacy.

We describe a protocol to examine the development of opioid-induced hyperalgesia and tolerance in mice. Based on the measurement of thermal and mechanical nociceptive responses of na&#239;ve and morphine-treated animals, it allows to quantify the increase in pain sensitivity (hyperalgesia) and decrease in analgesia (tolerance) associated with chronic opiate administration.

הערכה של סובלנות hyperalgesia ומשככי כאבים הנגרם מורפיום בעכברים באמצעות שיטות nociceptive תרמיים ומכאניות

Opioid-induced hyperalgesia and tolerance severely impact the clinical efficacy of opiates as pain relievers in animals and humans. The molecular ...

Back Mechanical Sensitivity Assessment in the Rat for Mechanistic Investigation of Chronic Back Pain

Low back pain is the leading cause of disability worldwide, with dramatic personal, economic, and social consequences. To develop novel therapeutics, animal models are needed to examine the mechanisms and effectiveness of novel therapies from a translational perspective. Several rodent models of back pain are used in current investigations. Surprisingly, however, no standardized behavioral test was validated to assess mechanical sensitivity in back pain models. This is critical to confirm that animals with presumed back pain present local hypersensitivity to nociceptive stimuli, and to monitor sensitivity during interventions designed to relieve back pain. The objective of this study is to lay down a simple and accessible test to assess mechanical sensitivity in the back of rats. A test cage was fabricated specifically for this method; length x width x height: 50 x 20 x 7 cm, having a stainless-steel mesh on the top. This test cage allows the application of mechanical stimuli to the back. To perform the test, the back of the animal is shaved in the region of interest, and the test area is marked to repeat the test on different days, as needed. The mechanical threshold is determined with Von Frey filaments applied to the paraspinal muscles, utilizing the up-down method described previously. The positive responses include (1) muscle twitching, (2) arching (back extension), (3) rotation of the neck (4) scratching or licking the back, and (5) escaping. This behavioral test (Back Mechanical Sensitivity (BMS) test) is useful for mechanistic research with rodent models of back pain for the development of therapeutic interventions for the prevention and management of back pain.

To develop novel therapeutic interventions for the prevention and management of back pain, animal models are required to examine the mechanisms and effectiveness of these therapies from a translational perspective. The present protocol describes the BMS test, a standardized method to assess back mechanical sensitivity in the rat.

הערכת רגישות מכנית של הגב בחולדה לחקירה מכניסטית של כאבי גב כרוניים

Low back pain is the leading cause of disability worldwide, with dramatic personal, economic, and social consequences. To develop novel therapeutics, ...

Urokinase-type Plasminogen Activator-induced Mouse Back Pain Model

A model of persisting lower back pain can be induced in mice with the simple methodology described herein. Step-by-step methods for simple, rapid induction of a persisting back pain model in mice are provided here using an injection of urokinase-type plasminogen activator (urokinase), a serine protease present in humans and other animals. The methodology for induction of persisting lower back pain in mice involves a simple injection of urokinase along the ligamentous insertion region of the lumbar spine. The urokinase inflammatory agent activates plasminogen to plasmin. Typically, the model can be induced within 10 min and hypersensitivity persists for at least 8 weeks.
Hypersensitivity, gait disturbance, and other standard anxiety- and depression-like measures can be tested in the persisting model.&#160;Back pain is the most prevalent type of pain. To improve awareness of back pain, the International Association for the Study of Pain (IASP) named 2021 the &#34;Global Year about Back Pain&#34; and 2022 the &#34;Global Year for Translating Pain Knowledge to Practice.&#34; One limitation of the therapeutic advancement of pain therapeutics is the lack of suitable models for testing persistent and chronic pain. The&#160;features of this model&#160;are suitable for testing potential therapeutics aimed at the reduction of back pain and its ancillary characteristics, contributing to IASP&#39;s naming 2022 as the Global Year for Translating Pain Knowledge to Practice.

Methods for simple, rapid induction of a back pain model in mice are provided here using an intraligament injection of urinary plasminogen activator.

מודל כאב גב עכבר הנגרם על ידי מפעיל אורוקינאז

A model of persisting lower back pain can be induced in mice with the simple methodology described herein. Step-by-step methods for simple, rapid ...

Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation

Chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome (CP/CPPS) has a lifetime prevalence of 14% and is the most common urological diagnosis for men under the age of 50, yet it is the least understood and studied chronic pelvic pain disorder. A significant subset of patients with chronic pelvic pain report having experienced early life stress or abuse, which can markedly affect the functioning and regulation of the hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) axis. Mast cell activation, which has been shown to be increased in both urine and expressed prostatic secretions of CP/CPPS patients, is partially regulated by downstream activation of the HPA axis. Neonatal maternal separation (NMS) has been used for over two decades to study the outcomes of early life stress in rodent models, including changes in the HPA axis and visceral sensitivity. Here we provide a detailed protocol for using NMS as a preclinical model of CP/CPPS in male C57BL/6 mice. We describe the methodology for performing NMS, assessing perigenital mechanical allodynia, and histological evidence of mast cell activation. We also provide evidence that early psychological stress can have long-lasting effects on the male urogenital system in mice.

We are measuring perigenital mechanical sensitivity and mast cell activation in the prostate of male C57BL/6 mice that underwent an early life stress paradigm &#8211; neonatal maternal separation, in order to induce a preclinical model of chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome.

הערכה של הפעלת תא Perigenital רגישות וערמונית תורן במודל עכבר של הפרדה אימהית עובריים

Chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome (CP/CPPS) has a lifetime prevalence of 14% and is the most common urological diagnosis for men under the ...

Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse

Transurethral instillation can be used to deliver different solutions with active ingredients (e.g., drugs, chemicals, bacteria, and viruses) locally into the urinary bladder to either induce animal models of bladder pathologies or evaluate the effectiveness of intravesical treatments. Most rodent models of lower urinary tract (LUT) pathologies are induced in female mice due to ease of intravesical instillation of the substances via the female urethra. However, due to anatomical differences between the female and male LUT, transurethral instillation in a male mouse has been deemed a very challenging procedure, and it has not been previously described. In this manuscript, we provide a detailed description of how to prepare polyethylene (PE) tubing for subsequent insertion into the urethra of a male mouse. In addition, we discuss the ideal types of PE tubing to be used depending on the desired site of inoculation. Furthermore, we describe point by point how to prepare an animal for a successful transurethral instillation to avoid injury to the urethra and ensure the delivery of the solution to the desired location. The procedure is started by retracting the prepuce and the glans to expose the opening of the urethral meatus. Next, the glans are grasped by blunt non-crushing forceps to stabilize the penis and the PE tubing. The PE tubing is first inserted into the urethral meatus parallel to the animal body, then its angle is adjusted by tilting the catheter to maneuver it to follow the natural curvature of the urethra. This technique can be used to induced murine models of bladder pathologies and/or evaluate the effectiveness of intravesical treatments in male mice.

Transurethral instillation is a challenging procedure and has not been well described in the literature. The aim of this manuscript is to describe a technique for transurethral insertion of a catheter for intravesical delivery of liquids with active substances into the urinary bladder and/or prostate in adult male mice.

הליך ההתקנה-transurethral עכבר זכר בוגר

Transurethral instillation can be used to deliver different solutions with active ingredients (e.g., drugs, chemicals, bacteria, and viruses) locally into ...

הערכת כאב ואלודיניה בבעלי חיים נגועים ב- T. evansi

Electronic von Frey associated with the Mouse Grimace Scale to Assess Allodynia and Pain in Trypanosoma evansi-Infected Mice

Infectious disease pathogenesis is still a complex field to study. The course of several clinical signs, such as allodynia and pain, may be observed in domestic animals. However, the knowledge of their pathways and correct treatment need controlled experiments, many of them using laboratory animals. Measuring changes in mechanical thresholds of the hind paw and viscera is a useful technique to observe changes in pain perception in rodents. Withdrawal response can be measured first in baseline tests, which creates better control of experimental groups. Subsequent tests can be performed after inducing infection and adding drugs to the protocol. The use of an electronic von Frey apparatus associated with the use of a facial scale to observe pain-like changes allows a simple, precise, and consistent assessment to evaluate allodynia and pain in mice. Thus, experiments using the present methodology for Trypanosoma evansi infection represent a useful method to evaluate allodynia and pain in laboratory-infected animals, which can be applied to the conventional treatment for livestock animals.

מחבר זרקור: הערכת כאב וקידום רווחת בעלי חיים בחיות מעבדה נגועות Trypanosoma evansi

Here, we present a protocol to evaluate nociception in mice infected with Trypanosoma evansi, using the electronic von Frey apparatus as a tool, measuring mechanical thresholds of the hind paw and viscera.

פון פריי האלקטרוני קשור לסולם גרימס עכבר להערכת אלודיניה וכאב בעכברים נגועים בטריפנוסומה אוונסי

Infectious disease pathogenesis is still a complex field to study. The course of several clinical signs, such as allodynia and pain, may be observed in ...