The authors would like to thank Janelle Ryals, Rachel Supple, and Frank Wang for technical assistance. This work was supported by NIH grants R03 DK080182 (JAC), R01 DK099611 (JAC), R01 DK103872 (JAC), Center of Biomedical Research Excellence (COBRE) grant P20 GM104936 (JAC), start-up funds and core support from the Kansas Institutional Development Award (IDeA) P20 GM103418, core support from the Kansas IDDRC P30 HD002528, and The Madison and Lila Self Fellowship Program (ANP).

כל הניסויים שתוארו בפרוטוקול זה תואמים את הנחיות NIH בהתאם להנחיות שצוינו על ידי המרכז הרפואי של אוניברסיטת קנזס מוסדית טיפול בבעלי חיים ושימוש הוועדה. 1. הפרדת ילודים אימהית (NMS) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג סכרים בהריון יומי ללידות המלטה. הערה: יום ההמלטה נולדה נחשבת P0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על P1, להסיר את הסכר מהכלוב בבית ואת המקום לתוך מיכל המשני נקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשפשף את קומץ המצעים בין ידיים בכפפות נקיות כדי לשמור על ריח של הכלוב בבית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף עומק של 1 - 2 סנטימטר של מצעי כלוב בבית לנקי, כראוי שכותרת 2 כוס זכוכית L. להוסיף כמחצית מכל חומר נוסף להעשרת מצעים שנמצא בכלוב בבית, למשל, נייר nestlet, להתקמט, לכוס הזכוכית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח בעדינות את כל הגורים מהמלטה אחת, בנפרד, באותו הכוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד למקוםהכוס בחממה שנערכה בלחות 33 מעלות צלסיוס ו -50% עבור 180 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הסכר מיכל המשני ולהחזיר אותה לכלוב בבית. להחזיר את הכלוב בבית למיקום הדיור המתאים בתוך ביבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על תהליך זה עבור כל המלטה עוברת NMS, באמצעות כפפות נקיות ומכולות המשניות עבור כל המלטה / סכר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסוף תקופת ההפרדה 180 דקות, להחזיר את ההמלטות לכלובים בביתם באותו סדר כפי שהם הוסרו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחזר את הכלוב בבית של ההמלטה הראשונה שהופרדה מוקדם יותר ביום. הסר את הסכר מהכלוב בבית ואת המקום לתוך מיכל המשני נקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הכוס הראשונה מהחממה ולשפשף קומץ של מצעים בין ידיים בכפפות נקיות כדי לשמור על ריח של הכלוב בבית בזמן טיפול הגורים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להזיז את הגורים, בנפרד, מהכוס לכלוב בבית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחזור כל העשרה ומצעים שנותר בכוס להכלוב בבית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיר את הסכר מיכל המשני לכלוב בבית ולהחזיר אותו למיקום הדיור המתאים בתוך ביבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את הכוס עם מים ולהחזיר אותו לחממה. השתמש באותה כוס לכל המלטה לאורך כל הליך ההפרדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על תהליך זה עבור כל המלטה עוברת NMS באותו סדר כפי שהם הושמו באינקובטור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על הליך כל זה עבור כולם מצויה המלטה NMS כל יום דרך P21. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגמול את גורי NMS ונאיביים על P22 על ידי הצבת המלטה מאותו המין יחד בכלובים נקיים מלאים במזון ובמים. צריכים להיוולד גורים נאיביים ושוכנו באותם תנאים כמו עכברי NMS, אבל לא לעבור טיפול נוסף מחוץ למשימות גידול בעלי חיים נורמלים. </li></ol> 2. Perigenital מכאני רגישות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקנת מכשירי פון פריי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להביא את העכברים לחדר הבדיקות ולאפשר להם להסתגל ל30דקות בעוד שנותרו בכלובים בביתם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את אזור הבדיקה על ידי הצבת underpad סופג מתחת שולחן מוגבה רשת תיל העליון (79 סנטימטרים X 28 סנטימטרים) שמספק מספיק מקום על מנת לאפשר לחוקר להתקרב מן החלק התחתון בלי להבהיל את העכברים, כ 55 סנטימטר בגובה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח עד 12 עכברים, בנפרד, תחת תאי פלסטיק שקופים, מחוררים (11 סנטימטרים X 5 סנטימטרים X 3.5 סנטימטרים) בחלק העליון של טבלת רשת תיל. מניחים חפץ כבד על גבי התאים כדי למנוע עכברים לברוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להסתגל לעכברים 30 דקות נוספות על המסך לפני הערכת סף נסיגה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערכת Perigenital מכאנית רגישות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את השיטה למעלה למטה באמצעות סט סטנדרטי של monofilaments פון פריי המדורג 43. השתמש בmonofilaments הבא: 1.65 גר &#39;, 2.36 גר&#39;, 2.83 גר &#39;, 3.22 גר&#39;, 3.61 גר &#39;, 4.08 גר&#39;, 4.31 גר &#39;, וגרם 4.74. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את הבסיס של monofilament גרם 3.22 ולחשוף את מונו חזר בונימה. הערה: בדגמים מסוימים לא יכולים להיות חוט חד חזר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למקם את החללית כדי שהחוט חד הוא בכיוון אנכי וכאשר העכבר הוא ערני, חסר תנועה, ומשקל הגוף שלה מחולק באופן שווה בין רגליו האחוריות להחיל אותו אל צד ימין או השמאל של כיס האשכים, הימנעות קו האמצע, עד קל העיקול הוא ציין בנימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את החוט חד במקום במשך 10 שניות או עד שהחיה מראה תגובה חיובית. הערה: תגובה חיובית נחשבת לאידיוט או לקפוץ נמרצים בתגובה לבקשת monofilament או ליקוק או נשיכת התנהגות המכוונת לחוט חד. אם מהלכי העכבר במהלך יישום monofilament 10 שניות מבלי להציג התנהגויות אלו, monofilament יש הערכה מחדש לאחר תקופה שאר 1 דקות ארוכות מינימום. אם עכבר לא מהלכים ולא מציג כל מעל התנהגויות המופיעות ביישום monofilament 10 שניות, זה נחשב תגובה שלילית. </li><html><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את התגובה, שלילי או חיובי, במחברת מעבדה או מחשב נייד ולחזור על הליך זה על כל העכברים שנותרו באמצעות החוט חד 3.22 גר &#39;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבדוק את כל העכברים שוב באמצעות החוט חד המתאים הבא. הערה: אם העכבר הציג תגובה שלילית לmonofilament 3.22 גר &#39;, להחיל את החוט חד 3.61 גר&#39;, באותו אופן ולהקליט את התגובה. אם העכבר הציג תגובה חיובית לmonofilament 3.22 גר &#39;, להחיל את החוט חד 2.83 גר&#39; ולהקליט את התגובה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך בדיקה של כל עכבר באמצעות החוט חד גדול יותר או קטן יותר הבא, כפי שמתאים, ל4 אפליקציות נוספות לאחר התשובה החיובית הראשונה הוא ציינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור עכברים בכלובים הביתה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בשווי של החוט חד פון פריי הסופי שיושם בסדרת המשפט ביחידות יומן לחשב 50% סף נסיגה גרם כפי שמתואר בet al Chaplan. 43. </li></ol></li></ol>כותרת &quot;&gt; 3. מכתים תא acidified toluidine הכחול הפיטום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עיבוד רקמות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח רקמת ערמונית 44 מעכברים שכבר perfused intracardially עם paraformaldehyde 4% קרים כקרח 45. Postfix הרקמה paraformaldehyde 4% עבור שעה 1 ב RT ואז cryoprotect בסוכרוז 30% ב1x PBS על 4 מעלות CO / N. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן אמבט (30 מיליליטר) קטן של heptane ולמקם אותו על קרח יבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את רקמת הערמונית ב1x PBS ולייבש באמצעות אור החובה למחות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את רקמת הערמונית לheptane הקר עד שהוא קפוא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד למקם את רקמת הערמונית הקפואה בcryomold מכיל תקשורת ומקום לתלייה על קרח יבש עד שקפא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות cryomolds ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוחבי לחתוך את רקמת הערמונית ל7 cryosections מיקרומטר עבה באמצעות cryostat. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח 8-12 cryosections אינו סידורי כי היקף האורך של הרקמה, על גבי שקופיות מיקרוסקופ חיובי טעונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות סיימה שקופיות ב -20 ° C עד עיבוד נוסף. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת acidified toluidine הכחול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 1 גרם של toluidine הכחול O 100 מיליליטר 70% אתנול ו מערבולת עד בפתרון להכין פתרון מניות 1%. פתרון המניות יכול להיות מאוחסן על RT עד שלושה שבועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 גרם NaCl למים 100 מיליליטר בכוס מונחת על גבי צלחת ומערבבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את ה- pH של תמיסת NaCl באמצעות 12 M HCl עד טווח pH של 0.5-1.0 מושגת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את פתרון toluidine הכחול 0.25% עובד על ידי שילוב של 8 מיליליטר של פתרון מניות toluidine הכחול ו -32 מיליליטר של 1% פתרון NaCl. פיפטה מעלה ומטה כדי להבטיח שילוב כולל של פתרון מניות toluidine הכחול ומערבבים בעזרת מערבולת. הפתרון עובד חייב להיעשות טרי ומושלך לאחר השימוש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכתים cryosections הערמונית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את השקופיות להיות מעובד מהמקפיא ולאפשר לאזן לRT לכ -30 מ &#39;ב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את חלקי רקמות על ידי בנפרד טבילת השקופיות עבור כ 1 שניות לתוך צינור חרוטי 50 מיליליטר המכיל נפח מספיק של 1x PBS על מנת להבטיח כי סעיפי רקמות רכוב שקופיות יהיו שקועים לחלוטין. לאפשר שקופיות לאוויר יבשות במגבת נייר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מגלשות מקום בצנצנת מכתימה זכוכית המכילה 0.25% פתרון toluidine הכחול עובד מספיק כדי להבטיח שסעיפי רקמות רכוב שקופיות יהיו שקועים לחלוטין ודגירה במשך 10 - 15 דקות ואילו על כיסא נדנדה פלטפורמה נקבעה על 15 סל&quot;ד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות ב1x PBS כ 1 שניות כדי לשטוף את עודף toluidine הכחול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים שקופיות בתיבת שקופיות או מדף בצורה כזו כי השקופיות על צדם, כדי לאפשר ניקוז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ייבש את השקופיות בתנור על 37 מעלות צלזיוס למשך תקופה מינימאלית של 2 שעות או O / N ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייבשים שקופיות באמצעות אלכוהול במהירות, מה שמאפשרים את השקופיות להתייבש לחלוטין בין חשיפות אלכוהול. מגלשות יבשים על ידי ניקוז על מגבת ניירND גב וקצות מנגב עם אור חובה למחות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את השקופיות ב -95% EtOH כ 1 שניות ולאפשר לו להתייבש לחלוטין. חזור על תהליך זה 1 - 10 פעמים עד שהרקמה מתייבשת יותר כחולה יותר מסגול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את השקופיות בEtOH 100% לכ 1 שניות ולאפשר לו להתייבש לחלוטין. חזור על תהליך זה 1 - 10 פעמים עד שהרקמה היא כהה לכחול בינוני, אבל לא סגולה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את הכתם על ידי דוגרים שקופיות קסילן 100% במשך 3 דקות. לאפשר לו להתייבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Coverslip השקופיות עם גליצרול, PBS, או תקשורת הרכבה קבועה מבוסס קסילן. מסננים תקשורת וחנות עודפות בRT. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי פיטום כימות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דמיינו את סעיפי רקמות כחולים-הצבעוניים toluidine בהגדלה 20X באמצעות מיקרוסקופ אור (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספור את המספר הכולל של תאי הפיטום הנוכחיים בתחום דמיין ולהבדיל בין תאי פיטום הלא degranulated וdegranulated. מגניפיקט 40Xיון עשוי להיות נחוץ כדי לאשר מעמד פרור בכמה תאי פיטום. הערה: תאי פיטום ללא degranulated תערוכה metachromasia הצפוף עם קלוש אין או מתווה גרעינית ו / או לא חול גרגירים סביב התא. תאי פיטום Degranulated התערוכה metachromasia פחות אינטנסיבי ויש לי מתווה ברורה ברורה של הגרעין ו / או גרגירים חופשיים בתוך הציטופלסמה ומחוץ לגבול התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמשיך להעריך את המספר הכולל של תאי פיטום הלא degranulated וdegranulated בשלמות של סעיף הרקמה הנוכחי. חזור על הליך זה על לפחות 7 סעיפים נפרדים נוספים, המשתרע לכל האורך כל רקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב אחוזי degranulated (DG) לסך תאי פיטום לכל רקמה / עכבר על פי המשוואה הבאה: (תאי פיטום DG / תאי פיטום סה&quot;כ) x 100. </li></ol></li></ol>

The authors have nothing to disclose.

פרוטוקול זה מספק מתודולוגיה לשימוש בלחץ בילוד, בצורה של NMS, כדי לגרום לsymptomology מעיד על CP / CPPS בעכברי זכרים בוגרים. כמבוגרים, עכברי NMS להציג אלודיניה המשמעותית perigenital המכנית, כמו גם ראיות של degranulation תא תורן ברקמת ערמונית. השימוש בNMS הוא גישה חדשנית לפיתוח מודל פרה-קליני של C...

כאבי אגן כרוניים הוא לא בעצמו מחלה, אלא לטווח הקשורים לכאב המתמשך הספונטני ו / או עורר של חולים שאובחנו עם תסמונת מעי רגיז (IBS), דלקת שלפוחית ​​השתן / תסמונת שלפוחית ​​השתן כואבת ביניים (IC / PBS), vulvodynia, או ערמונית כרונית / תסמונת כאב כרונית באגן (CP / CPPS). תסמונות אלה לעתים קרובות נלווים וחולקים מאפיינים רבים שבאין להם פתולוגיה קשורה או אטיולוגיה הבסיסית מזוהה, למרות בעיות בתפקוד במערכת החיסונית, מערכת עצבים מרכזית, ומערכת עצבים היקפית הוכחו לתרום לתחזוקה וההתקדמות של הפרעות אלה 1 -3. חולים עם כאבי אגן כרוניים נוטים יותר להציג עם סימפטומים של נוסף, הפרעות תפקודיות כאב והפרעות במצב רוח, כולל חרדה, דיכאון, והפרעת פאניקה 4-6, אשר נקשרה עם תפקוד שינה של hypothalamic- שאינו קשור-אגן- pituitary-ציר יותרת הכליה (HPA) 7-10. חשיפה ללחץ חיים מוקדם או טראומה מהווה גורם סיכון משמעותי לפיתוח הפרעות HPA ותסמונות כאב כרוניים קשורות 10,11 ו, כאמורים, משנה משמעותי של חולים עם הפרעות כאבי אגן פונקציונליות מדווח על אירועי ילדות שליליים כגון התעללות או הזנחה חווה 12-14. מודלים של מכרסמים של הפרדת ילוד אימהית (NMS), הכולל הסרת הגורים מסכרם לתקופה קצובה של זמן במהלך תקופת preweaning, שימשו במשך שני העשורים האחרונים כדי ללמוד את התוצאות של מתח בתחילת חיים. באופן כללי, NMS הוכח להגדיל הפעלת HPA ציר, והתנהגויות כמו חרדה-תוצאה, ישירות על ידי המשפיע על ביטוי גנים בהיפותלמוס, כמו גם שיבוש רגולציה במורד הזרם ממבנים הלימבית 15-18. שיבוש תפקוד ציר HPA הנכון הוכח לתרום למעי גס עלה 19-22 </sup&gt; ונרתיק 16 רגישות המוצגת על ידי מודלים NMS מכרסמים, אך למרות אפיון נרחב של ההשפעה לטווח הארוך של דלקת בשלפוחית ​​השתן לאחר לידה 23-25, את ההשפעה של לחץ בתחילת חיים במידה רבה הלכה לא נחקרה באיברים ואברי המין. לכן, המחקר הבא יתאר כיצד לבצע NMS בעכברים, ולאחר מכן להעריך רגישות perigenital מכאנית וחדירת תא תורן / הפעלה בערמונית כדי לאמת את השימוש בעכברי NMS גבריים כמודל פרה-קליני עבור CP / CPPS. של כל הפרעות כאבי אגן אובחנו כרוניות, CP / CPPS היא אולי תסמונת לפחות מוכרת היטב ומאופיינת, למרות שיש שכיחות לאורך חיים של כ 14% -26 ועלויות מטופל שנתיות נאמדו ב$ 4400 (כפול מזו של כאב גב תחתון או שגרונית דלקת פרקים 27). חולים עם CP כאב דו&quot;ח / CPPS בחיץ הנקבים, רקטום, ערמונית, איבר מין, אשכים, ו / או 28 בטן, לחוות הייתוארן גר בלחץ פסיכולוגי בהשוואה לחולי שליטת 29, ובהווה נפוץ עם סימפטומים של או אובחן עם הפרעות נלוות כרוניות אגן כאב או מצב רוח 5,29-31. זיהום חוזר ונשנה, האפיתל הדולף, דלקת עצבית, ואוטואימוניות יש כל שיערו כגורמים אפשריים הבסיסיים של CP / CPPS 2,32,33, כמו גם הפעלת תא פיטום וdegranulation 34. הפרשות של הערמונית הביעו מהגברים עם CP / CPPS עלו רמות tryptase תא פיטום וגורם גדילה עצבית (NGF) 34, ומחקר מאוחר יותר אישר כי tryptase וקרבוקסיפפטידאז (CPA3), סמן של הפעלת תא פיטום, גם הוגדלו ב שתן של חולי CP / CPPS 35. התפקיד הפוטנציאלי לתאי פיטום בתחילה והתחזוקה של CP / CPPS היה מוקד עיקרי של מחקר בבעלי חיים בתסמונת זו עד כה. המודל המכרסם הנפוצה ביותר מועסק בשימוש ללמוד CP / CPPS הוא ערמונית אוטואימוניות ניסיונית (EAP) המודל generated על ידי הזרקה תת עורית של אנטיגן הערמונית באדג&#39;ובנט של פרוינד המלא, מה שגורם בדרגות שונות של דלקת ערמונית תלוי במין וזן המשמש 34,36-39. חדירת תא פיטום והפעלה / degranulation הוכח להגדיל אינדוקציה של EAP 34,35,40 הבאה. עכברים מהונדסים חסרים או תאי פיטום 34 או קולט tryptase 35 PAR2 לא לפתח רגישות ערמונית טקטיקה הבאה EAP, בניגוד לעכברי EAP wildtype. בעוד מודל פרה-קליני זה משכפל רב של המאפיינים של CP האדם / CPPS, פרוטוקול האינדוקציה הוא לא מעיד על מצבו של האדם, שבו יש אטיולוגיה מגוונת ולעתים קרובות אינו כרוכות דלקת ישירה, זיהום או פציעה של הערמונית. ההשפעה של מתח בתחילת חיים על התפתחות CP / CPPS בבני אדם במידה רבה הלכו נחקרת; עם זאת, מחקר על ידי הו, et al. 41, הוכיח כיn שדיווח על היסטוריה של ילדות פיזית, רגשי, ו / או התעללות מינית היתה באופן משמעותי סיכוי גבוה יותר לחוות סימפטומים המעידים על CP / CPPS. יתר על כן, הם הראו כי הן כאב ועשרות שתן היו גבוהים יותר בחולים עם היסטוריה של התעללות פיזית ורגשית. אנחנו הוכחנו בעבר כי באותו הפרדיגמה NMS בC57BL / 6 נקבות עכברים מייצרת רגישות יתר בנרתיק וביטוי גנים לא תקין בשני נרתיק ושלפוחית ​​שתן מרמז על תפוקת ציר HPA מתפקד 16. עדות זו בשילוב עם השכיחות הגבוהה של CP חולים / CPPS הצגה עם מחלות רקע אחרים 42, כוללים IC / PBS והפרעות במצב רוח, שברורים יותר הוכחו להיות מקושר עם חשיפת מתח חיים המוקדמים 12-14, מספקת רציונל לשימוש ב מודל NMS לחקור CP / CPPS בעכברים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Pregnant C57BL/6 female mice&#160;</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>027</td>
			<td>Timed or untimed pregnant females should be monitored daily for in-house birth.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2L glass beaker(s)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS10002L</td>
			<td>Each NMS litter will be held in the same beaker throughout the 21 day separation period.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Forced Air Incubator, Basic</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>414005-124</td>
			<td>The incubator should be held at 33&#176;C and 50% humidity.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Touch Test Sensory Evaluator, Kit of 20 (Semmes-Weinstein Von Frey Aesthesiometer for touch assessment)</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>58011</td>
			<td>The following monofilaments should be used for perigenital sensitivity assessment: 1.65 g, 2.36 g, 2.83 g, 3.22 g, 3.61 g, 4.08 g, 4.31 g, and 4.74 g.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Enclosure (12 mice 6 rats)</td>
			<td>IITC</td>
			<td>435</td>
			<td>Be sure to place a heavy object on top of the individual, acrylic animal enclosures to prevent mice from escaping.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh Stand for mice and rats (12 mice 6 rats)</td>
			<td>IITC</td>
			<td>410</td>
			<td>Place stand on a stable table top for comfortable access.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5493</td>
			<td>Dilute the 10x PBS stock to 1x PBS.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td>A 4% paraformaldehyde solution is needed to intracardially perfuse mice and postfix tissue in preparation for mast cell staining.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5016</td>
			<td>Cryoprotect fixed tissue in 30% sucrose solution at 4&#176;C overnight.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heptane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>246654</td>
			<td>Chill heptane on dry ice to freeze tissue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Cryomold&#160;</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>4557</td>
			<td>To assist in freezing prostate tissue prior to cryostat sectioning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek OCT Compound</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td>12 x 125 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Superfrost Plus Micro Slide</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>48311-703</td>
			<td>75 x 25 x 1 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine Blue O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>198161</td>
			<td>Certified by the Biological Stain Commission. Suitable for use as a metachromatic stain for mast cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, Absolute (200 Proof)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2818-4</td>
			<td>Molecular Biology Grade, Fisher Bioreagents; 95% and 100% solutions will be needed to dehydrate stained cryosections before mast cell visualization.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td>Acidified NaCl solution should be made fresh before staining cryosections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GeneMate Sterile 50 mL Centrifuge Tubes&#160;</td>
			<td>BioExpress</td>
			<td>C-3394</td>
			<td>Disposable tubes used to mix toulidine blue elements or dip slides into 1xPBS.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin staining dish for 10 slides, with ground glass cover</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-815</td>
			<td>Hold up to 10 standard 3 x 1 in. (75 x 25mm) slides back-to-back. Use separate dishes for Toluidine Blue working solution, 95% EtOH, 100% EtOH, and xylene.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylenes (Histological)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>X3P</td>
			<td>Once dehydrated, tissue is cleared with xylene.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slide Boxes, 100-Place</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>82003</td>
			<td>Boxes can be used for storage and transportation of slides.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Microscope Slide Box</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-400</td>
			<td>These slide boxes are typically small enough to fit inside a cryostate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5516</td>
			<td>Glycerol is a traditional mounting medium.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting Medium, Richard-Allan Scientific</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>4111</td>
			<td>Mounting medium firmly bonds the coverslip to the slide.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Cover Glasses, Rectangular, No. 1</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>48393-106</td>
			<td>A coverslip is placed over the dehydrated and cleared tissue to protect the sample.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>The Advanced Automated Research Microscope Eclipse 90i, used by our lab, has been discontinued and replaced Eclipse Ni-E.&#160;&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of perigenital sensitivity and prostatic mast cell activation in a mouse model of neonatal maternal separation

ערמונית כרונית / תסמונת כאב כרונית באגן (CP / CPPS) יש שכיחות לאורך חיים של 14%, והוא אבחון האורולוגים הנפוץ ביותר עבור גברים מתחת לגיל 50, ובכל זאת היא הפרעת כאבי אגן לפחות הבינה ולמד כרונית. משנה משמעותי של חולים עם כאבי אגן כרוני דו&quot;ח שחווה מתח מוקדם חיים או התעללות, אשר במידה ניכרת יכול להשפיע על התפקוד והרגולציה של ציר ההיפותלמוס בלוטת יותרת המוח-יותרת הכליה (HPA). הפעלת תא פיטום, שהוכחה להיות מוגבר בשני השתן והביעה הפרשות של הערמונית של חולים / CPPS CP, מוסדרת באופן חלקי על ידי הפעלה במורד הזרם של ציר HPA. הפרדה אימהית יילודים (NMS) הייתה בשימוש כבר למעלה משני עשורים ללמוד את התוצאות של מתח בתחילת חיים במודלים של מכרסמים, לרבות שינויים בציר HPA והרגישות קרביים. כאן אנו מספקים פרוטוקול מפורט לשימוש בNMS כמודל פרה-קליני של CP / CPPS בC57BL / 6 עכברי זכרים. אנו מתארים את המתודולוגיהלביצוע NMS, הערכת אלודיניה perigenital המכנית, וראיות היסטולוגית של הפעלת תא פיטום. כמו כן אנו מספקים ראיות לכך שלחץ פסיכולוגי מוקדם יכול להיות השפעות ארוכות טווח על המערכת ואברי המין הגברית בעכברים.

עכברים שעברו NMS הראו ראיות התנהגותיות מעידות על CP / CPPS. כאשר נבדק עם סדרה מדורגת של monofilaments פון פריי, עכברי NMS 8 שבוע-ישנים (n = 4) מוצג אלודיניה המכנית perigenital בהשוואה לעמיתיהם נאיביים (n = 5, איור 2). עדות לכך שהפחתה משמעותית (p &lt;0.01; מבחן t) בסף הנסיגה המכני שעורר ת?...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation at JoVE.com

Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation

אנו מודדים הפעלת perigenital מכאנית רגישות ותורן תא בערמונית של C57BL / 6 עכברי זכרים שעברו הפרדיגמה מתח בתחילת חיים - הפרדה אימהית יילודים, על מנת לגרום למודל פרה-קליני של תסמונת ערמונית כרונית / כרוני כאבים באגן.

הערכה של הפעלת תא Perigenital רגישות וערמונית תורן במודל עכבר של הפרדה אימהית עובריים

Chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome (CP/CPPS) has a lifetime prevalence of 14% and is the most common urological diagnosis for men under the ...

assessment-perigenital-sensitivity-prostatic-mast-cell-activation

Research

JoVE Journal

Medicine

9.2K Views.  University of Kansas Medical Center.  אנו מודדים הפעלת perigenital מכאנית רגישות ותורן תא בערמונית של C57BL / 6 עכברי זכרים שעברו הפרדיגמה מתח בתחילת חיים - הפרדה אימהית יילודים, על מנת לגרום למודל פרה-קליני של תסמונת ערמונית כרונית / כרוני כאבים באגן. 

Video: Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus. For example, in utero transplantation (IUT) of hematopoietic stem cells has been used to successfully treat patients with severe combined immunodeficiency.1,2 In several other conditions, however, IUT has been attempted without success.3 Given these mixed results, the availability of an efficient non-human model to study the biological sequelae of stem cell transplantation and gene therapy is critical to advance this field. We and others have used the mouse model of IUT to study factors affecting successful engraftment of in utero transplanted hematopoietic stem cells in both wild-type mice4-7 and those with genetic diseases.8,9 The fetal environment also offers considerable advantages for the success of in utero gene therapy. For example, the delivery of adenoviral10, adeno-associated viral10, retroviral11, and lentiviral vectors12,13 into the fetus has resulted in the transduction of multiple organs distant from the site of injection with long-term gene expression. in utero gene therapy may therefore be considered as a possible treatment strategy for single gene disorders such as muscular dystrophy or cystic fibrosis. Another potential advantage of IUT is the ability to induce immune tolerance to a specific antigen. As seen in mice with hemophilia, the introduction of Factor IX early in development results in tolerance to this protein.14 
In addition to its use in investigating potential human therapies, the mouse model of IUT can be a powerful tool to study basic questions in developmental and stem cell biology. For example, one can deliver various small molecules to induce or inhibit specific gene expression at defined gestational stages and manipulate developmental pathways. The impact of these alterations can be assessed at various timepoints after the initial transplantation. Furthermore, one can transplant pluripotent or lineage specific progenitor cells into the fetal environment to study stem cell differentiation in a non-irradiated and unperturbed host environment.
The mouse model of IUT has already provided numerous insights within the fields of immunology, and developmental and stem cell biology. In this video-based protocol, we describe a step-by-step approach to performing IUT in mouse fetuses and outline the critical steps and potential pitfalls of this technique.

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The mouse model of in utero transplantation is a versatile tool that can be used to study the potential clinical applications of stem cell transplantation and gene therapy in the fetus. In this protocol, we present a general approach to performing this technique

במודל עכבר של בתוך הרחם השתלה

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

Multi-פוטון הדמיה של הפלישה תאים סרטניים במודל עכבר orthotopic של קרצינומה של תאים קשקשיים אוראלי

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

A Swine Model of Neonatal Asphyxia

Annually more than 1 million neonates die worldwide as related to asphyxia. Asphyxiated neonates commonly have multi-organ failure including hypotension, perfusion deficit, hypoxic-ischemic encephalopathy, pulmonary hypertension, vasculopathic enterocolitis, renal failure and thrombo-embolic complications. Animal models are developed to help us understand the patho-physiology and pharmacology of neonatal asphyxia. In comparison to rodents and newborn lambs, the newborn piglet has been proven to be a valuable model. The newborn piglet has several advantages including similar development as that of 36-38 weeks human fetus with comparable body systems, large body size (&tilde;1.5-2 kg at birth) that allows the instrumentation and monitoring of the animal and controls the confounding variables of hypoxia and hemodynamic derangements.
We here describe an experimental protocol to simulate neonatal asphyxia and allow us to examine the systemic and regional hemodynamic changes during the asphyxiating and reoxygenation process as well as the respective effects of interventions. Further, the model has the advantage of studying multi-organ failure or dysfunction simultaneously and the interaction with various body systems. The experimental model is a non-survival procedure that involves the surgical instrumentation of newborn piglets (1-3 day-old and 1.5-2.5 kg weight, mixed breed) to allow the establishment of mechanical ventilation, vascular (arterial and central venous) access and the placement of catheters and flow probes (Transonic Inc.) for the continuously monitoring of intra-vascular pressure and blood flow across different arteries including main pulmonary, common carotid, superior mesenteric and left renal arteries. Using these surgically instrumented piglets, after stabilization for 30-60 minutes as defined by Z&lt;10% variation in hemodynamic parameters and normal blood gases, we commence an experimental protocol of severe hypoxemia which is induced via normocapnic alveolar hypoxia. The piglet is ventilated with 10-15% oxygen by increasing the inhaled concentration of nitrogen gas for 2h, aiming for arterial oxygen saturations of 30-40%. This degree of hypoxemia will produce clinical asphyxia with severe metabolic acidosis, systemic hypotension and cardiogenic shock with hypoperfusion to vital organs. The hypoxia is followed by reoxygenation with 100% oxygen for 0.5h and then 21% oxygen for 3.5h. Pharmacologic interventions can be introduced in due course and their effects investigated in a blinded, block-randomized fashion.

Large animal models have good translational values in the examination of physiology and pharmacology of neonatal asphyxia. Using newborn piglets, we develop an experimental protocol to simulate neonatal asphyxia which has advantages of studying the systemic and regional hemodynamics, oxygen transport with biochemical and pathologic pathways and correlations.

דגם חזירים של חנק ילודים

Annually more than 1 million neonates die worldwide as related to asphyxia. Asphyxiated neonates commonly have multi-organ failure including hypotension, ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the world&#8217;s 2.9 million neonatal deaths. Animal models of HIE have contributed to the understanding of the pathophysiology in HIE, and have highlighted the dynamic process that occur in brain injury due to perinatal asphyxia. Thus, animal studies have suggested a time-window for post-insult treatment strategies. Hypothermia has been tested as a treatment for HIE in pdiglet models and subsequently proven effective in clinical trials. Variations of the model have been applied in the study of adjunctive neuroprotective methods and piglet studies of xenon and melatonin have led to clinical phase I and II trials1,2. The piglet HIE model is further used for neonatal resuscitation- and hemodynamic studies as well as in investigations of cerebral hypoxia on a cellular level. However, it is a technically challenging model and variations in the protocol may result in either too mild or too severe brain injury. In this article, we demonstrate the technical procedures necessary for establishing a stable piglet model of neonatal HIE. First, the newborn piglet (&#60; 24 hr old, median weight 1500 g) is anesthetized, intubated, and monitored in a setup comparable to that found in a neonatal intensive care unit. Global hypoxia-ischemia is induced by lowering the inspiratory oxygen fraction to achieve global hypoxia, ischemia through hypotension and a flat trace amplitude integrated EEG (aEEG) indicative of cerebral hypoxia. Survival is promoted by adjusting oxygenation according to the aEEG response and blood pressure. Brain injury is quantified by histopathology and magnetic resonance imaging after 72 hr.

Hypoxic-ischemic encephalopathy following perinatal asphyxia can be studied using animal models. We demonstrate the procedures necessary for establishing a piglet model of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy.

דגם חזרזיר של ילודים חוסר חמצן-איסכמי אנצפלופתיה

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal cord. A major current area of research is focused on the mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous or induced functional recovery following SCI. Spontaneous functional recovery is reported to be greater early in life, raising interesting questions about how adaptive plasticity changes as the spinal cord develops. To facilitate investigation of this dynamic, we have developed a SCI model in the neonatal mouse. The model has relevance for pediatric SCI, which is too little studied. Because neural plasticity in the adult involves some of the same mechanisms as neural plasticity in early life1, this model may potentially have some relevance also for adult SCI. Here we describe the entire procedure for generating a reproducible spinal cord compression (SCC) injury in the neonatal mouse as early as postnatal (P) day 1. SCC is achieved by performing a laminectomy at a given spinal level (here described at thoracic levels 9-11) and then using a modified Yasargil aneurysm mini-clip to rapidly compress and decompress the spinal cord. As previously described, the injured neonatal mice can be tested for behavioral deficits or sacrificed for ex vivo physiological analysis of synaptic connectivity using electrophysiological and high-throughput optical recording techniques1. Earlier and ongoing studies using behavioral and physiological assessment have demonstrated a dramatic, acute impairment of hindlimb motility followed by a complete functional recovery within 2 weeks, and the first evidence of changes in functional circuitry at the level of identified descending synaptic connections1.

This article describes a method for generating a reproducible spinal cord compression injury (SCI) in the neonatal mouse. The model provides an advantageous platform for studying mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous functional recovery.

חוט השדרה עכבר בילוד דגם פגיעה דחיסה

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

A Battery of Motor Tests in a Neonatal Mouse Model of Cerebral Palsy

As the sheer number of transgenic mice strains grow and rodent models of pediatric disease increase, there is an expanding need for a comprehensive, standardized battery of neonatal mouse motor tests. These tests can validate injury or disease models, determine treatment efficacy and/or assess motor behaviors in new transgenic strains. This paper presents a series of neonatal motor tests to evaluate general motor function, including ambulation, hindlimb foot angle, surface righting, negative geotaxis, front- and hindlimb suspension, grasping reflex, four limb grip strength and cliff aversion. Mice between the ages of post-natal day 2 to 14 can be used. In addition, these tests can be used for a wide range of neurological and neuromuscular pathologies, including cerebral palsy, hypoxic-ischemic encephalopathy, traumatic brain injury, spinal cord injury, neurodegenerative diseases, and neuromuscular disorders. These tests can also be used to determine the effects of pharmacological agents, as well as other types of therapeutic interventions. In this paper, motor deficits were evaluated in a novel neonatal mouse model of cerebral palsy that combines hypoxia, ischemia and inflammation. Forty-eight hours after injury, five tests out of the nine showed significant motor deficits: ambulation, hindlimb angle, hindlimb suspension, four limb grip strength, and grasping reflex. These tests revealed weakness in the hindlimbs, as well as fine motor skills such as grasping, which are similar to the motor deficits seen in human cerebral palsy patients.

Presented is a concise battery of mouse neonatal motor tests. Using these tests, neonatal motor deficits can be demonstrated in a variety of neonatal motor disorders. By having a standardized set of tests, results from different studies can be compared, allowing for better and accurate reporting between groups.

סדרת מבחנים Motor במודל של עכברים ילודים של שיתוק מוחין

As the sheer number of transgenic mice strains grow and rodent models of pediatric disease increase, there is an expanding need for a comprehensive, ...

Myocardial Infarction in Neonatal Mice, A Model of Cardiac Regeneration

Myocardial infarction induced by coronary artery ligation has been used in many animal models as a tool to study the mechanisms of cardiac repair and regeneration, and to define new targets for therapeutics. For decades, models of complete heart regeneration existed in amphibians and fish, but a mammalian counterpart was not available. The recent discovery of a postnatal window during which mice possess regenerative capabilities has led to the establishment of a mammalian model of cardiac regeneration. A surgical model of mammalian cardiac regeneration in the neonatal mouse is presented herein. Briefly, postnatal day 1 (P1) mice are anesthetized by isoflurane and placed on an ice pad to induce hypothermia. After the chest is opened, and the left anterior descending coronary artery (LAD) is visualized, a suture is placed around the LAD to inflict myocardial ischemia in the left ventricle. The surgical procedure takes 10-15 min. Visualizing the coronary artery is crucial for accurate suture placement and reproducibility. Myocardial infarction and cardiac dysfunction are confirmed by triphenyl-tetrazolium chloride (TTC) staining and echocardiography, respectively. Complete regeneration 21 days post myocardial infarction is verified by histology. This protocol can be used to as a tool to elucidate mechanisms of mammalian cardiac regeneration after myocardial infarction.

This protocol describes a highly reproducible model of cardiac regeneration by surgical induction of myocardial infarction in the left ventricle of postnatal day 1 mice. The method involves induction of hypothermic anesthesia and ligation of the left anterior descending coronary artery.

אוטם שריר לב עכברים ילודים, מודל התחדשות לב

Myocardial infarction induced by coronary artery ligation has been used in many animal models as a tool to study the mechanisms of cardiac repair and ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we demonstrate a murine cryoinjury infarct model that generates precise infarct sizes with high reproducibility and replicability. In brief, after intubation and sternotomy of the animal, the heart is lifted from the thorax. The probe of a handheld liquid nitrogen delivery system is applied onto the myocardial wall to induce cryoinjury. Impaired ventricular function and electrical conduction can be monitored with echocardiography or optical mapping. Transmural myocardial remodeling of the infarcted area is characterized by collagen deposition and loss of cardiomyocytes. Compared to other models (e.g., LAD-ligation), this model utilizes a handheld liquid nitrogen delivery system to generate more uniform infarct sizes.

This article demonstrates a model to study cardiac remodeling after myocardial cryoinjury in mice.

מודל לפציעה בהקפאה לחקור אוטם שריר הלב בעכבר

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...

A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight infants, with high mortality and unclear pathogenesis. The cause of NEC may be related to inflammatory immune regulatory system abnormalities. An NEC animal model is an indispensable tool for NEC disease immune research. NEC animal models usually use C57BL/6J neonatal mice; BALB/c neonatal mice are rarely used. Related studies have shown that when mice are infected, Th2 cell differentiation is predominant in BALB/c mice compared to C57BL/6J mice. Studies have suggested that the occurrence and development of NEC are associated with an increase in T helper type 2 (Th2) cells and are generally accompanied by infection. Therefore, this study used neonatal BALB/c mice to induce an NEC model with similar clinical characteristics and intestinal pathological changes as those observed in children with NEC. Further study is warranted to determine whether this animal model could be used to study Th2 cell responses in NEC.

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight infants, with high mortality and unclear pathogenesis. The cause of NEC may be related to inflammatory immune regulatory system abnormalities. An NEC animal model is an indispensable tool for NEC disease immune research. NEC animal models usually use C57BL/6J neonatal mice; BALB/c neonatal mice are rarely used. Related studies have shown that when mice are infected, Th2 cell differentiation is predominant in BALB/c mice compared to C57BL/6J mice. Studies have suggested that the occurrence and development of NEC are associated with an increase in T helper type 2 (Th2) cells and are generally accompanied by infection. Therefore, this study used neonatal BALB/c mice to induce an NEC model with similar clinical characteristics and intestinal pathological changes as those observed in children with NEC. Further study is warranted to determine whether this animal model could be used to study Th2 cell responses in NEC.

מודל עכבר BALB /c יילודים של דלקת אנטרוקוליטיס נמק

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight ...