המחברים אין כל תודות.

כל ההליכים עם בעלי חיים, כולל את השיטה ואת משך ההרדמה, כמו גם טיפול לאחר הניתוח, היו שנדונו עם וטרינר ואושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC)- מוסד קשורות. כתב יד זה, כל הפרוצדורות בוצעו עם 8 בת שבוע 15 C57BL/6 לעכברים זכרים, הפרוטוקול מנחים את טיפול בבעלי חיים שאושרו על-ידי IACUC ב מאוניברסיטת קולורדו.
 1. הכנה של אבובים הערה: להחדיר את inoculum, מחט המצורפת לאורך צינור פוליאתילן (PE) ( איור 1 א') או לאמוד קטן (&#60; 24 G) angiocatheter יכול להיות בשימוש ( איור 1 ג'י). השימוש angiocatheter דורש ללא הכנה חוץ עיקור עם 70% אתנול (EtOH). Inoculum הוא חומר זה הוא החדירו/מוזרק/והופקדו בדרכי השתן. זה יכול להיות פתרון המכיל חיידקים, וירוסים או חומר כימי. זה מוכן מראש ועל פי פרוטוקול המחקר. לדוגמה, אם המחקר נועד להעריך את ההשפעות של e. coli חדירתו בדרכי השתן התחתונה, החוקר יהיה עליך להכין את inoculum המכיל חיידקים, אשר יכול להיות מחוסן/החדירו בדרכי השתן התחתונה.
<ol><li>הכנה של המחט המחוברים לצנרת PE היא פשוטה והיא מורכבת הבאות: לבחור את הגודל של צינורות PE מבוסס על האיבר היעד והתקופה של חיה. לשימוש חיים צעיר יותר 12 שבועות, צינורות PE-10 (מחוץ בקוטר הוא 0.024 ס מ והוא בתוך קוטר 0.011 סנטימטרים). צינורות PE-10 הוא הציע להיות ישימים עבור (1) זריעה העיקרי של inoculum anterior הערמונית (AP), vesicles הזרע (SV), או (2) זריעה העיקרי של inoculum בשלפוחית השתן של חיים צעיר יותר בגיל 12 שבועות. PE צינורות בקוטר גדול של עד מידה 50 PE (מחוץ בקוטר עד ס מ 0.038 ובתוך בקוטר עד 0.023 ס מ) יכול לשמש זריעה העיקרי של inoculum בשלפוחית השתן של בעלי החיים ישנים יותר.</li>
	<li>לחתוך כ 2.5 סנטימטרים של צינורות PE.</li>
	<li>בחר מחט שיתאים לקוטר PE שנבחר לשמש. מחט 27 G יכול להתאים לתוך לומן של צינורות PE-10 ולאחר מחט 22 גרם מתאים לומן של צינורות PE-50-
	<ol><li>להכין המחט לפני הכניסה לתוך לאורך צינור PE על ידי שפשוף על חדות קצה המחט על אבן שמן זמינים מסחרית ( איור 1A -B) שזה משעמם, או להשתמש סיגריה זמינים מסחרית המחט.</li>
	</ol></li> <li>להציג את המחט משעמם ( איור 1C) לתוך לומן צינורות PE. למנוע נזק לומן או כניסתו לומן שווא על-ידי הבטחת השרידים מחט במרכזה של לומן. ( איור 1D -E). אם לאורך צינור PE פגום במהלך החדרת המחט משעמם, לחתוך הסוף פגום ולהפעיל מחדש את התהליך.</li>
	<li>למקם את צינורות PE צמוד-מחט ב- 70% של EtOH עבור עיקור עד השימוש עבור ההליך. סומק 70% EtOH דרך הצנרת מחט-PE לחטא לומן, כדי להבטיח שם זה אין זליגות לאורך צינור PE של נזק במהלך התהליך של הכנסת המחט. אם יש דליפה, מושלך לאורך צינור מחט-PE- 
	הערה: קצה לאורך צינור PE צריכה להיות חלקה לפני צנתור. כדי למנוע בעיות עם מציגה את צינורות PE לתוך השופכה, מומלץ לחתוך את קצה צינורות PE מייד לפני צנתור ( איור 1F). אורך מינימלי המוצע לאורך צינור PE הוא 1.5 אינץ ', אשר כוללת את החלק המקיפים את המחט.</li>
</ol> 2. הליך צנתור <ol><li>לפני אינדוקציה של הרדמה, לרוקן את השלפוחית של העכבר.
	<ol><li>להפעיל לחץ עדין ועיסוי אל הבטן התחתונה של העכבר. תמרונים אלה בדרך כלל להוביל הרקה ספונטנית. שלפוחית שתן מלאה עלולה לגרום לדילול או דליפה מיידית כל מושתל inoculum. 
		הערה: אפשרות נוספת כדי להבטיח שלפוחית ריקה ב עכבר הוא לשלול את החיה של מים במשך לפחות שעה לפני תחילת ההליך החדרה-transurethral. מניעת מים צריך יאושרו על-ידי המוסד במסגרת פרוטוקול בעלי חיים-</li>
	</ol></li> <li>להשתמש מכונת הרדמה עם זרימה איזופלוריין (2%) כדי לגרום הרדמה.
	<ol><li>ברגע החיה. הוא מורדם, הנח אותו על שמיכה חמה חימום ומכסים אותו עם כרית כחול עם האף שלה בתוך nosecone לשם קיום מתמשך הרדמה.</li>
		<li>מאשרים כי החיה הוא בהרדמה על-ידי בדיקת את רפלקס פדלים (הבוהן צביטה).</li>
	</ol></li> <li>פעם רפלקס פדלים נעדר, המשך על ידי מפסק ערלה.
	<ol><li>העיתונות באזור הערווה עם האגודל והן האצבע המורה. של יד אחת ( דמויות 2A ו- 2B), יצא אל הפין בלוטות באמצעות באגודל ובאצבע של (יד אחרים איור 2C). כאשר מטרה זו מושגת כראוי, עורלה, הפין העטרה וגוף הפין נותרים חשופים. ( איור 2D ו- 2F איור). אל תשתמש מלקחיים כדי להוציא את הפין בלוטות כפי זה יגרום נזק לרקמות.</li>
	</ol></li> <li>לשמן את קצה הקטטר, העטרה עם חומר סיכה כירורגי סטרילי לפני החדרת הקטטר. זה יקל על החדרת צינורות PE. 
	הערה: ריבועים ארוזים בנפרד של חומר סיכה כירורגי, במקום שפופרת גדולה אחת, מומלץ עבור כל שימוש לשמור על תנאים סטריליים.</li>
	<li>בעדינות להחזיק את קצה הפין באמצעות מלקחיים משעמם וללחוץ בעדינות את העטרה לגרום את meatus השופכה לפתוח.</li>
	<li>להחזיק את המזרק עם מחט-attached PE-אבובים או PE צינורות עצמה ולהוסיף את צינורות PE באמצעות השופכה meatus. 
	הערה: אחיזה חצובה של המזרק עם מחט-attached PE-הצנרת או על PE צינורות עצמה באמצעות האגודל, אינדקס, באצבעות מומלצת יציבות. 
	הערה: הנתיב של צנתור צריך להיות מעוקל בגלל שכדור הטבעי של השופכה מוקף הפין העטרה וגוף הפין העכבר זכרים בוגרים, כפי שמוצג באיור 3A ו- 3B איור. לאורך צינור PE catheterized. אולי אתקל בהתנגדות במהלך צנתור, לכן, מומלץ לכוון את הזווית בהטיית הצנרת למעלה או למטה כדי לעזור מראש את צינורות PE בנוסף לאיבר המטרה. במידת הצורך, צינורות PE ניתן לסובב מעט לעזור לו לתמרן דרך פניות חדות שונים של השופכה. כאשר יש בהתנגדות רבה מדי, הצנרת צריך לשוחרר בחזרה, ואז להתקדם שוב עם לחץ מינימלי. משיכת PE-אבובים בחוץ לגמרי, באמצעות שימון נוסף עשוי להיות מועיל.</li>
	<li>לבצע החדרה של inoculum ברגע PE-אבובים הגיעה האיבר הרצוי על-ידי לחיצה על הבוכנה המחט להחדיר האחסון הרצוי של inoculum (5-200 µL אמצעי האחסון הוא הציע).
	<ol><li>עבור החדרה של inoculum אל שלפוחית השתן, לקדם את צינורות PE עד כ- 0.75 ס מ של צינורות PE מוכנס ( איור 3 א). 
		הערה: עבור החדרה של inoculum AP, SV, בדרך כלל, the מוכנס אבובים פוגש את ההתנגדות ברגע שהוא מגיע לנקודה של פתיחת לתוך הערמונית הקדמי. על-ידי התאמת הזווית בהטיית הצנרת למעלה או למטה, צינורות PE להתקדם עוד עד כ 1 אינץ ' של צינורות PE היה מוכנס ( איור 3B).</li>
	</ol></li></ol> 3. אין ויוו הדמיה של מערכת השתן התחתונה, הכליות הערה: מטרת ויוו הדמיה בכתב היד: (1) כדי לאשר לוקליזציה המרחבי של inoculum; ו- (2) כדי להעריך את השכיחות של ריפלוקס של inoculum הכליות. למטרה זו, ניתן להשתמש גם בעכבר מרדימים או לאללה.
<ol><li>להמחיש בדרכי השתן התחתונה עכבר זכר בוגר, לבצע פתיחת בטן קו האמצע בבטן התחתונה כדי לחשוף את שלפוחית השתן, ערמונית, שלפוחית הזרע.
	<ol><li>תחתכי את העור של האמצע של עצם הערווה עד מתחת הסרעפת באמצעות מספריים.</li>
		<li>העלה את כל העור הרקמה התת עורית.</li>
		<li>לזהות את avascular linea alba ממוקם האמצע, תחתכי את זה כדי להזין את החור בצפק שבו כל האיברים נמצאים.</li>
		<li>לאשר את ההתאמה המרחבית ויזואליזציה של צבע כחול או סוכן מתאים מעקב אחר.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Lee, S., Yang, G., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostatic+inflammation+induces+urinary+frequency+in+adult+mice.">Prostatic inflammation induces urinary frequency in adult mice.</a> PLoS One. 10 (2), e0116827 (2015).</li><li>Wong, L., Hutson, P. R., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostatic+inflammation+induces+fibrosis+in+a+mouse+model+of+chronic+bacterial+infection.">Prostatic inflammation induces fibrosis in a mouse model of chronic bacterial infection.</a> PLoS One. 9 (6), e100770 (2014).</li><li>Elkahwaji, J. E., Zhong, W., Hopkins, W. J., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+bacterial+infection+and+inflammation+incite+reactive+hyperplasia+in+a+mouse+model+of+chronic+prostatitis.">Chronic bacterial infection and inflammation incite reactive hyperplasia in a mouse model of chronic prostatitis.</a> Prostate. 67 (1), 14-21 (2007).</li><li>Boehm, B. J., Colopy, S. A., Jerde, T. J., Loftus, C. J., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+bacterial+inflammation+of+the+mouse+prostate.">Acute bacterial inflammation of the mouse prostate.</a> Prostate. 72 (3), 307-317 (2012).</li><li>Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+inflammation+of+the+lower+urinary+tract.">Models of inflammation of the lower urinary tract.</a> Neurourol Urodyn. 30 (5), 673-682 (2011).</li><li>Thai, K. H., Thathireddy, A., Hsieh, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transurethral+induction+of+mouse+urinary+tract+infection.">Transurethral induction of mouse urinary tract infection.</a> J Vis Exp. (42), (2010).</li><li>Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Boldon, K., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+cystitis+is+accompanied+by+increased+peripheral+thermal+sensitivity+in+mice.">Bacterial cystitis is accompanied by increased peripheral thermal sensitivity in mice.</a> J Urol. 179 (2), 759-763 (2008).</li><li>Hopkins, W. J., Gendron-Fitzpatrick, A., Balish, E., Uehling, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+and+host+responses+to+Escherichia+coli+urinary+tract+infection+in+genetically+distinct+mouse+strains.">Time course and host responses to Escherichia coli urinary tract infection in genetically distinct mouse strains.</a> Infect Immun. 66 (6), 2798-2802 (1998).</li><li>Dinis, P., Charrua, A., Avelino, A., Cruz, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravesical+resiniferatoxin+decreases+spinal+c-fos+expression+and+increases+bladder+volume+to+reflex+micturition+in+rats+with+chronic+inflamed+urinary+bladders.">Intravesical resiniferatoxin decreases spinal c-fos expression and increases bladder volume to reflex micturition in rats with chronic inflamed urinary bladders.</a> BJU Int. 94 (1), 153-157 (2004).</li><li>Cayan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Botulinum+toxin+type+A+may+improve+bladder+function+in+a+rat+chemical+cystitis+model.">Botulinum toxin type A may improve bladder function in a rat chemical cystitis model.</a> Urol Res. 30 (6), 399-404 (2003).</li><li>Jerde, T. J., Bjorling, D. E., Steinberg, H., Warner, T., Saban, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+mouse+bladder+inflammatory+response+to+E.+coli+lipopolysaccharide.">Determination of mouse bladder inflammatory response to E. coli lipopolysaccharide.</a> Urol Res. 28 (4), 269-273 (2000).</li><li>Saban, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPS-sensory+peptide+communication+in+experimental+cystitis.">LPS-sensory peptide communication in experimental cystitis.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 282 (2), F202-F210 (2002).</li><li>Schilling, J. D., Mulvey, M. A., Vincent, C. D., Lorenz, R. G., Hultgren, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+invasion+augments+epithelial+cytokine+responses+to+Escherichia+coli+through+a+lipopolysaccharide-dependent+mechanism.">Bacterial invasion augments epithelial cytokine responses to Escherichia coli through a lipopolysaccharide-dependent mechanism.</a> J Immunol. 166 (2), 1148-1155 (2001).</li><li>Saban, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discriminators+of+mouse+bladder+response+to+intravesical+Bacillus+Calmette-Guerin+(BCG).">Discriminators of mouse bladder response to intravesical Bacillus Calmette-Guerin (BCG).</a> BMC Immunol. 8, 6 (2007).</li><li>Bjorling, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+acrolein-induced+cystitis+in+mice.">Acute acrolein-induced cystitis in mice.</a> BJU Int. 99 (6), 1523-1529 (2007).</li><li>Sadler, K. E., Stratton, J. M., Kolber, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+bladder+distention+evoked+visceromotor+responses+as+a+model+for+bladder+pain+in+mice.">Urinary bladder distention evoked visceromotor responses as a model for bladder pain in mice.</a> J Vis Exp. (86), (2014).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

כתב יד זה מתאר בפירוט שיטה של החדרה-transurethral עכבר זכר בוגר. דיפרנציאלית אזור זריעה הראשי ניתן להגיע באמצעות צינורות PE של קטרים שונים. PE-50 מומלץ להגיע בהצלחה לומן שלפוחית השתן, בעוד קוטר גדול יותר ש-PE-10 משמש כדי להגיע AP של SV (איור 3 א-ב). בנוסף, הבחירה של גודל של צינורות PE ...

הגישה החדרה-transurethral שימשה במחקרים קודמים באחת השיטות ליצירת מודלים מכרסם של שלפוחית השתן פתולוגיות1,2,3,4 והוא יכול לשמש כדי להעריך יעילות הטיפולים באופן מקומי ונמסרו בעכברים. למרות בבעלי חיים לא יכול לסכם באופן מלא פתולוגיות אנושי, זיהוי של המנגנונים שבבסיס במחקרים שנעשו בבעלי חיים מספקת הבנה טובה יותר של הפרעות LUT אנושיים כגון תסמונת כאב דלקת שלפוחית השתן interstitial/שלפוחית השתן, neurogenic דלקת שלפוחית השתן, דלקת שלפוחית השתן אוטואימוניות ו דלקת הערמונית5.
ההליך החדרה-transurethral לבצע על העכבר זכר בוגר הוא מאתגר יותר מבחינה טכנית מאשר intravesical החדרה העכבר נקבה בוגרת6. באופן טבעי מעוקל האנטומיה של השופכה הגברית יחד עם קוטר קטן שלה להקשות טכנית לבצע החדרת קטטר-transurethral. לכן, מפורטות הוראות אינדוקציה-transurethral של זיהום בדרכי השתן העכבר6 ו LUT דלקת7,8,9,10,11 , 12 , 13 , 14 , 15 באמצעות קטטר מוכנס לשלפוחית השתן היו בעבר המתוארים עבור עכברים נקבה בלבד. כתב יד זה שואפת לספק תיאור צעד אחר צעד של הטכניקה-transurethral החדרה של חומרים בעכברים זכרים, לרבות קטעי וידאו, תמונות, איורים. החדרה-transurethral הליכים עכבר זכר בוגר יכול להתבצע עם משתנה inoculates דומה לזה בעבר תיאר את העכבר נקבה7 , התמזגה עם טכניקות נוספות כגון electromyogram הקלטות של תגובות visceromotor (VMR)16.

<table><tbody><tr><td>BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 10</td><td>BD Medical</td><td>63019-004</td><td></td></tr><tr><td>BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 50</td><td>BD Medical</td><td>63019-048</td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte-N Autoguard/ Angiocath</td><td>BD Medical</td><td>311411</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol (EtOH)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818500</td><td></td></tr><tr><td>BD Needle Only 22 Gauge (G) 1 inch</td><td>Becton Dickson</td><td>205155</td><td></td></tr><tr><td>BD Needle Only 27 Gauge (G) 1/2 inch</td><td>Becton Dickson</td><td>305129</td><td></td></tr><tr><td>Luer stub, 22 G X 0.5 in / Blunt Needle</td><td>Instech</td><td>LS22</td><td></td></tr><tr><td>Luer stub, 27 G X 0.5 in / Blunt Needle</td><td>Instech</td><td>LS27</td><td></td></tr><tr><td>6&quot; Long x 2&quot; Wide x 1&quot; Thick, Aluminum Oxide Sharpening Stone / Oil Stone</td><td>Norton</td><td>40204034</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Lubricant Sterile Bacteriostatic Folilpac</td><td>Surgilube</td><td>281020543</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Fluriso</td><td>13985-528-60</td><td></td></tr><tr><td>SomnoSuite Low-Flow Anesthesia System</td><td>Kent Scientific</td><td>SS-01</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting Forceps, Curved</td><td>vwr</td><td>82027-392</td><td></td></tr><tr><td>BD 1 ml Syringe</td><td>BD Medical</td><td>309626</td><td></td></tr><tr><td>India Ink Solution., 0.2% in PBS buffer</td><td>Alfa Aesar</td><td>J61007</td><td></td></tr><tr><td>8~12 weeks old male C57B/6 Mice</td><td>Jackson Lab</td><td>#000664</td><td></td></tr></tbody></table>

transurethral instillation procedure in adult male mouse

החדרה-transurethral יכול לשמש כדי לספק פתרונות שונים עם חומרים פעילים (למשל, תרופות, כימיקלים, בקטריה, וירוסים) באופן מקומי לתוך שלפוחית השתן זירוז מודלים חייתיים של פתולוגיות בשלפוחית השתן או להעריך יעילות הטיפולים intravesical. ביותר מכרסמים מודלים של פתולוגיות בדרכי השתן (LUT) התחתון הם המושרה בעכברים הנשי בשל הקלות של intravesical החדרה של החומרים באמצעות לשופכה הנשית. עם זאת, בשל ההבדלים אנטומיים בין LUT נשי, החדרה-transurethral ב עכבר זכר שסברו שהוא הליך מאוד מאתגר, זה לא תוארה בעבר. כתב יד זה, אנו מספקים תיאור מפורט של איך להכין צינורות פוליאתילן (PE) עבור הכניסה הבאים לתוך השופכה של עכבר זכר. בנוסף, נדון בסוגי צינורות PE כדי לשמש בהתאם האתר הרצוי של חיסון אידיאלי. יתר על כן, אנו מתארים נקודת בנקודה כיצד להכין חיה על החדרה-transurethral מוצלח למנוע פציעה של השופכה ולהבטיח המסירה של הפתרון למיקום הרצוי. ההליך מופעל על ידי מפסק את העורלה, העטרה לחשוף את הפתיחה של meatus השופכה. בשלב הבא, העטרה הם אחז על ידי מלקחיים בוטה שאינו מוחצת לייצב את הפין, לאורך צינור PE. צינורות PE הוכנס לראשונה meatus השופכה מקבילה לגוף בעלי חיים, אז הזווית שלו מכוונן בהטיית הקטטר לתמרן אותו ללכת בעקבות את עקמומיות טבעית של השופכה. טכניקה זו יכולה לשמש המושרה מאתר מודלים של פתולוגיות בשלפוחית השתן ו/או להעריך את האפקטיביות של טיפולים intravesical בעכברים זכרים.

החדרה-transurethral של צבע כחול דרך צינורות PE 50 גרם החדרה של לצבוע לתוך על שלפוחית השתן (איור 4A), ועל דרך צינורות PE 10 ב הצביעה של SV ו- AP (איור 4B), בהתאמה. להעריך החדרה-transurethral שבוצעו גורם של ריפלוקס מיידית של inoculum לכליות או לא, הכליות ואת שופכן נצפו ולא...

Watch this Scientific Journal Video about Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse at JoVE.com

Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse

החדרה-transurethral תהליך מאתגר, לא טוב תואר בספרות. מטרתו של כתב יד זה הוא לתיאור טכניקה עבור החדרת צנתר למסירה intravesical של נוזלים עם חומרים פעילים אל תוך שלפוחית השתן ו/או הערמונית בעכברים זכרים בוגרים של-transurethral.

הליך ההתקנה-transurethral עכבר זכר בוגר

Transurethral instillation can be used to deliver different solutions with active ingredients (e.g., drugs, chemicals, bacteria, and viruses) locally into ...

transurethral-instillation-procedure-in-adult-male-mouse

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

15.4K Views.  University of Colorado School of Medicine. החדרה-transurethral תהליך מאתגר, לא טוב תואר בספרות. מטרתו של כתב יד זה הוא לתיאור טכניקה עבור החדרת צנתר למסירה intravesical של נוזלים עם חומרים פעילים אל תוך שלפוחית השתן ו/או הערמונית בעכברים זכרים בוגרים של-transurethral.

Video: Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse

Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on Luria-Bertani (LB) agar at 37&deg;C in ambient air. UPEC strains grow as yellowish-white translucent colonies on LB agar. Following confirmation of appropriate colony morphology, single colonies are then picked to be cultured in broth. LB broth can be used for most uropathogenic bacterial strains. Two serial, overnight LB broth cultures can be employed to enhance expression of type I pili, a well-defined virulence factor for uropathogenic bacteria. Broth cultures are diluted to the desired concentration in phosphate buffered saline (PBS). Eight to 12 week old female mice are placed under isoflurane anesthesia and transurethrally inoculated with bacteria using polyethylene tubing-covered 30 gauge syringes. Typical inocula, which must be empirically determined for each bacterial/mouse strain combination, are 106 to 108 cfu per mouse in 10 to 50 microliters of PBS. After the desired infection period (one day to several weeks), urine samples and the bladder and both kidneys are harvested. Each organ is minced, placed in PBS, and homogenized in a Blue Bullet homogenizer. Urine and tissue homogenates are serially diluted in PBS and cultured on appropriate agar. The following day, colony forming units are counted.

This video will demonstrate methods to transurethrally induce mouse urinary tract infections and quantify the extent of resulting infections.

אינדוקציה Transurethral של דלקת בדרכי השתן עכבר

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on ...

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified to secrete human Prostate Specific Antigen (PSA), and the procedure for the confirmation of tumor implantation. In brief, mice are anesthetized using injectable drugs and are made to lay in the dorsal position. Urine is vacated from the bladder and 50 &#181;L of poly-L-lysine (PLL) is slowly instilled at a rate of 10 &#181;L/20 s using a 24 G IV catheter. It is left in the bladder for 20 min by stoppering the catheter. The catheter is removed and PLL is vacated by gentle pressure on the bladder. This is followed by instillation of the murine bladder cancer cell line (1 x 105 cells/50 &#181;L) at a rate of 10 &#181;L/20 s. The catheter is stoppered to prevent premature evacuation. After 1 h, the mice are revived with a reversal drug, and the bladder is vacated. The slow instillation rate is important, as it reduces vesico-ureteral reflux, which can cause tumors to occur in the upper urinary tract and in the kidneys. The cell line should be well re-suspended to reduce clumping of cells, as this can lead to uneven tumor sizes after implantation.
This technique induces tumors with high efficiency. Tumor growth is monitored by urinary PSA secretion. PSA marker monitoring is more reliable than ultrasound or fluorescence imaging for the detection of the presence of tumors in the bladder. Tumors in mice generally reach a maximum size that negatively impacts health by about 3 - 4 weeks if left untreated. By monitoring tumor growth, it is possible to differentiate mice that were cured from those that were not successfully implanted with tumors. With only end-point analysis, the latter may be mistakenly assumed to have been cured by therapy.

This protocol describes the generation of murine orthotopic bladder tumors in female C57BL/6J mice and the monitoring of tumor growth.

מודל גידול Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן סרטן מערכת איתור

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

Cancer Research

Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, which accurately reflect disease establishment and progression, permit dissection of host-pathogen interactions and generation of immunity to infection. In mice, intravesical instillation of uropathogenic E. coli, the causative agent in more than 85% of community acquired UTI, recapitulates many of the stages of infection observed in humans. Until recently, however, UTI could only be modeled in female animals. This limitation has hindered the study of sex-related differences in UTI, as well as other bladder pathologies, such as cancer. Here, we describe a method to instill male mice that allows direct comparison between female and male animals and provide a detailed protocol to assess bladder tissue by flow cytometry as a means to better understand host responses to infection. Together, these approaches will aid in the identification of host factors that contribute to sex biases observed in UTI and other bladder-associated diseases.

The established model of transurethral catheterization of mice allows the study of bladder pathologies, including urinary tract infection, but can only be performed in females. A new model of male transurethral instillation, presented here, will enable research in an area marked by strong clinical and epidemiological differences between the sexes.

זיהום בדרכי השתן במודל בעלי חיים קטנים: צנתור-Transurethral של זכר ונקבה עכברים

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, ...

Longitudinal Follow-Up of Urinary Tract Infections and Their Treatment in Mice using Bioluminescence Imaging

Urinary tract infections (UTI) rank among the most common bacterial infections in humans and are routinely treated with empirical antibiotics. However, due to increasing microbial resistance, the efficacy of the most used antibiotics has declined. To find alternative treatment options, there is a great need for a better understanding of the UTI pathogenesis and the mechanisms that determine UTI susceptibility. In order to investigate this in an animal model, a reproducible, non-invasive assay to study the course of UTI is indispensable.
For years, the gold standard for the enumeration of bacterial load has been the determination of Colony Forming Units (CFU) for a particular sample volume. This technique requires post-mortem organ homogenates and serial dilutions, limiting data output and reproducibility. As an alternative, bioluminescence imaging (BLI) is gaining popularity to determine the bacterial load. Labeling pathogens with a lux operon allow for the sensitive detection and quantification in a non-invasive manner, thereby enabling longitudinal follow-up. So far, the adoption of BLI in UTI research remains limited.
This manuscript describes the practical implementation of BLI in a mouse urinary tract infection model. Here, a step-by-step guide for culturing bacteria, intravesical instillation and imaging is provided. The in vivo correlation with CFU is examined and a proof-of-concept is provided by comparing the bacterial load of untreated infected animals with antibiotic-treated animals. Furthermore, the advantages, limitations, and considerations specific to the implementation of BLI in an in vivo UTI model are discussed. The implementation of BLI in the UTI research field will greatly facilitate research on the pathogenesis of UTI and the discovery of new ways to prevent and treat UTI.

This manuscript describes the intravesical administration of uropathogenic bacteria with a lux operon to induce a urinary tract infection in mice and subsequent longitudinal in vivo analysis of the bacterial load using bioluminescence imaging.

מעקב אורך של דלקות בדרכי השתן והטיפול שלהם בעכברים באמצעות הדמיית ביו-לומינציה

Urinary tract infections (UTI) rank among the most common bacterial infections in humans and are routinely treated with empirical antibiotics. However, ...

Ultrasonography of the Adult Male Urinary Tract for Urinary Functional Testing

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting in a significant economic and quality of life burden. Transgenic and other mouse models have been developed to recreate various aspects of this multifactorial disease; however, methods to accurately quantitate urinary dysfunction and the effectiveness of new therapeutic options are lacking. Here, we describe a method that can be used to measure bladder volume and detrusor wall thickness, urinary velocity, void volume and void duration, and urethral diameter. This would allow for the evaluation of disease progression and treatment efficacy over time. Mice were anesthetized with isoflurane, and the bladder was visualized by ultrasound. For non-contrast imaging, a 3D image was taken of the bladder to calculate volume and evaluate shape; the bladder wall thickness was measured from this image. For contrast-enhanced imaging, a catheter was placed through the dome of the bladder using a 27-gauge needle connected to a syringe by PE50 tubing. A bolus of 0.5 mL of contrast was infused into the bladder until a urination event occurred. Urethral diameter was determined at the point of the Doppler velocity sample window during the first voiding event. Velocity was measured for each subsequent event yielding a flow rate. In conclusion, high frequency ultrasound proved to be an effective method for assessing bladder and urethral measurements during urinary function in mice. This technique may be useful in the assessment of novel therapies for BPH/LUTS in an experimental setting.

We describe the use of high frequency ultrasound with contrast imaging as a method to measure bladder volume, bladder wall thickness, urine velocity, void volume, void duration, and urethral diameter. This strategy can be used to assess voiding dysfunction and treatment efficacy in various mouse models of lower urinary tract dysfunction (LUTD).

Ultrasonography של בוגרים זכר בדרכי השתן עבור בדיקות פונקציונליות השתן

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting ...

Medicine

Novel Method of Plasmid DNA Delivery to Mouse Bladder Urothelium by Electroporation

Genetically engineered mouse models (GEMMs) are extremely valuable in revealing novel biological insights into the initiation and progression mechanisms of human diseases such as cancer. Transgenic and conditional knockout mice have been frequently used for gene overexpression or ablation in specific tissues or cell types in vivo. However, generating germline mouse models can be time-consuming and costly. Recent advancements in gene editing technologies and the feasibility of delivering DNA plasmids by viral infection have enabled rapid generation of non-germline autochthonous mouse cancer models for several organs. The bladder is an organ that has been difficult for viral vectors to access, due to the presence of a glycosaminoglycan layer covering the urothelium. Here, we describe a novel method developed in lab for efficient delivery of DNA plasmids into the mouse bladder urothelium in vivo. Through intravesical instillation of pCAG-GFP DNA plasmid and electroporation of surgically exposed bladder, we show that the DNA plasmid can be delivered specifically into the bladder urothelial cells for transient expression. Our method provides a fast and convenient way for overexpression and knockdown of genes in the mouse bladder, and can be applied to building GEMMs of bladder cancer and other urological diseases.

We describe a novel method for the delivery of DNA plasmid into the urothelial cells of mouse bladder in vivo through urethra catheterization and electroporation. It offers a fast and convenient way for generating autochthonous mouse models of bladder diseases.

הרומן שיטת המסירה דנ א פלסמיד העכבר Urothelium שלפוחית השתן על ידי אלקטרופורציה

Genetically engineered mouse models (GEMMs) are extremely valuable in revealing novel biological insights into the initiation and progression mechanisms ...

Biology

Modeling Orthotopic Bladder Tumor in Mouse Model: A Procedure for Intravesical Administration of Cancer Cells into Murine Bladder

Source: Tham, S. M. et al. <a href="https://www.jove.com/video/55078" target="_blank">A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System.</a>&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2017)
In this video, we describe the intravesical procedure of delivering cancer cells into the bladder of a mouse model. This procedure helps generate an orthotopic bladder tumor model that can be used to develop therapeutic strategies.

מידול גידול אורתוטופי בשלפוחית השתן במודל עכבר: הליך למתן תוך שלפוחית של תאים סרטניים לשלפוחית השתן

Source: Tham, S. M. et al. A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System.&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2017)
In this video, we describe ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Urinary Tract Cancer

In vivo studies

Urine Depletion and Bladder Rinsing in Mouse Model: A Catheter-based Procedure to Empty and Wash Murine Urinary Bladder

Source: Yu, C. et al. <a href="https://www.jove.com/video/57649" target="_blank">Novel Method of Plasmid DNA Delivery to Mouse Bladder Urothelium by Electroporation.</a> J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we describe a catheter-based procedure to empty and rinse the urinary bladder of a mouse model. The prepped mouse can then be used for further experimental procedures.

דלדול שתן ושטיפת שלפוחית השתן בעכבר מודל: הליך מבוסס קטטר לריקון ושטיפת שלפוחית השתן

Source: Yu, C. et al. Novel Method of Plasmid DNA Delivery to Mouse Bladder Urothelium by Electroporation. J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we describe ...

Transurethral Catheterization and Bacterial Inoculation to Generate a Urinary Tract Infection Model in Male Mice

Source: Zychlinsky Scharff, A., et al. <a href="https://app.jove.com/v/54432">Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice.</a> J. Vis. Exp. (2017).
This video demonstrates the establishment of uropathogenic Escherichia coli infection in a female mouse bladder through transurethral catheter instillation. The injected bacteria successfully establish a urinary tract infection within the bladder, providing a valuable platform for studying healthcare-associated diseases related to the urinary tract.

צנתור דרך השופכה וחיסון חיידקי ליצירת מודל דלקת בדרכי השתן בעכברים זכרים

All procedures involving animal models have been reviewed by the local institutional animal care committee and the JoVE veterinary review board.
1. ...

Immunology

Immunopathology

Host-Pathogen Interaction Models

Establishment of a Urinary Tract Infection Model in Female Mice

Source: Zychlinsky Scharff, A. et al., <a href="https://app.jove.com/v/54432">Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice.</a>&#160;J. Vis. Exp. (2017)
This video demonstrates the establishment of uropathogenic Escherichia coli infection in a female mouse bladder through transurethral catheter instillation. The injected bacteria successfully establish a urinary tract infection within the bladder, providing a valuable platform for studying healthcare-associated diseases related to the urinary tract.

הליך ההתקנה-transurethral עכבר זכר בוגר

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

אינדוקציה Transurethral של דלקת בדרכי השתן עכבר

מודל גידול Murine Orthotopic שלפוחית השתן סרטן מערכת איתור

זיהום בדרכי השתן במודל בעלי חיים קטנים: צנתור-Transurethral של זכר ונקבה עכברים

מעקב אורך של דלקות בדרכי השתן והטיפול שלהם בעכברים באמצעות הדמיית ביו-לומינציה

Ultrasonography של בוגרים זכר בדרכי השתן עבור בדיקות פונקציונליות השתן

הרומן שיטת המסירה דנ א פלסמיד העכבר Urothelium שלפוחית השתן על ידי אלקטרופורציה

מידול גידול אורתוטופי בשלפוחית השתן במודל עכבר: הליך למתן תוך שלפוחית של תאים סרטניים לשלפוחית השתן

דלדול שתן ושטיפת שלפוחית השתן בעכבר מודל: הליך מבוסס קטטר לריקון ושטיפת שלפוחית השתן

צנתור דרך השופכה וחיסון חיידקי ליצירת מודל דלקת בדרכי השתן בעכברים זכרים

הקמת מודל של דלקת בדרכי השתן בעכברות

הליך ההתקנה-transurethral עכבר זכר בוגר

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

אינדוקציה Transurethral של דלקת בדרכי השתן עכבר

מודל גידול Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן סרטן מערכת איתור

זיהום בדרכי השתן במודל בעלי חיים קטנים: צנתור-Transurethral של זכר ונקבה עכברים

מעקב אורך של דלקות בדרכי השתן והטיפול שלהם בעכברים באמצעות הדמיית ביו-לומינציה

Ultrasonography של בוגרים זכר בדרכי השתן עבור בדיקות פונקציונליות השתן

הרומן שיטת המסירה דנ א פלסמיד העכבר Urothelium שלפוחית השתן על ידי אלקטרופורציה

מידול גידול אורתוטופי בשלפוחית השתן במודל עכבר: הליך למתן תוך שלפוחית של תאים סרטניים לשלפוחית השתן

דלדול שתן ושטיפת שלפוחית השתן בעכבר מודל: הליך מבוסס קטטר לריקון ושטיפת שלפוחית השתן

צנתור דרך השופכה וחיסון חיידקי ליצירת מודל דלקת בדרכי השתן בעכברים זכרים

הקמת מודל של דלקת בדרכי השתן בעכברות

מודל גידול Murine Orthotopic שלפוחית השתן סרטן מערכת איתור