אנחנו מכירים את עבודתו של ד&quot;ר Adlah Sukkar, MD בסיוע עם הליהוק של הריאה. עבודה זו כבר במימון NHLBI, HL088005.

כל הפרוטוקולים שבוצעו על חולדות שאושרו על ידי הטיפול באוניברסיטת ג&#39;ונס הופקינס בבעלי החיים ושימוש בועדה ובהתאם להנחיות NIH. במידת ההאפשר, את החיה צריכה להיות בניתוח prepped באזור נפרד מאזור הניתוח כדי למזער את הזיהום של האתר כירורגית. 1. הרדמה / אלחוש <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברוש פלייס (חולדות ספרג Dawley גברים, 125-150 G; הרלן, אינדיאנפוליס, אינדיאנה) בלשכת גיוס חדור 3% isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח עכברוש הרדים על לוח הניתוח מחובר לחרטום והנשמה עם הרדמת isoflurane 3%. השתמש בטכניקה סטרילית לכל הנהלים. לעטוף חולדה כדי להבטיח הפעלת שדה סטרילי. </li></ol> 2. צנרור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשתק איברים במצב שכיבה באמצעות קלטת כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר עכברוש מחרטום, להאריך לשון עם מלקחיים מרופדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במד intracath 14 עם stilet מתכת קהה כמדריך. הסט מאחור כדיngue, לתוך קנה הנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר stilet מתכת עוזבת intracath פלסטיק לבן בקנה הנשימה. ודא חולדת הנשימה והאוויר זורם דרך הצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף חרטום עם מתאם ישיר לקטטר, חבר חולדה להנשמה (90 נשימות / דקות; נפח 8 מ&quot;ל / קילו גאות; מאוורר מכרסמי דגם 683, הרווארד Apparatus, Holliston, מסצ&#39;וסטס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל Puralube (אטלר שיין, דבלין, אוהיו) משחת וטרינרית בעיניים. </li></ol> 3. פתיחת בית החזה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צד ימני חולדת מקום למטה, לשתק איברים באמצעות קלטת כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שבי אזור בית החזה מצד שמאל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת פרווה עודפת עם ואקום קטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך שדה סטרילי ידי ניגוב למטה עם אלכוהול אחרי swabstick Povidone-יוד (Dynarex תאגיד, Orangebur, ניו יורק). חזור על תהליך זה עוד פעמים (בהיקף כולל של 3 סקראבס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך חתך רוחבי במספריים סטריליות מבתרים או אזמל סטרילי במרכז השדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקהות לנתח באמצעות lאיירס של רקמת שומן ועד לצלעות (השכבה האחרונה היא קרום דק המכסה צלעות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת צלעות כדי לקבוע מקום 3 בצלעי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במלקחיים סטריליים 45 ° גרפו, לעשות חתך בוטה בין 3 ובצלע ה 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכניסו מפרידי צלעות, ומשוך בעדינות יצירת חלל פתוח עם הדמיה מלאה של ריאות, קלטת מקום בתפרים להשאיר פתוח. </li></ol> 4. קשירת עורק ריאה שמאלית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם 90 ° מלקחיים גרפו, להעביר ריאה שמאלית אחורי עם יד ימין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות דפוס דומון # 5 מלקחיים ישרים, לתפוס עורק ריאה שמאלי ודרכי נשימה עם יד שמאל. עורק ריאה שמאלי שכבה על גבי דרכי נשימה. ודא שמלקחיים הם ישירות בניצב לשולחן. בנוסף, הוא יעיל ביותר כדי להרים את עורק הריאה השמאלי / הסמפונות mainstem שמאל במיקום המרוחק ביותר (הקרוב ביותר לparenchyma). דחוף את הריאה השמאלית האוורור בצד עם יד שמאל תמרון זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש דומוןדפוס # 5 45 ° מלקחיים מעוקלים להפריד עורק הריאה השמאלי מהסמפונות mainstem שמאל בגבולות הטבעיים שלהם. קו הפרדה זה מופיע דק ולבן בין שני מבנים הבודדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד ישירות תחת עורק מבלי לעבור דרך הכלי; חלק להחליק את קצות המלקחיים מוחזקים יחד לאורך ההפרדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך עד קצות מלקחיים להפריד את עורק הריאה השמאלי ואת הסמפונות mainstem שמאל בעליל. רק נקודה קטנה של קצה צריכה להיות מלא דרך. אם ניתן דמיין דם על קצה המלקחיים, אז זה לא באופן מלא ובאמצעות קשירה לא צריכה להיות ניסתה. אחרי שעבר בחלל, עורק הריאה השמאלי שכב על העקומה של המלקחיים. להחזיק בעמדה זו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משחרר בעדינויות את אחיזת מלקחיים ישרים בוטה (יד שמאל) ולתפוס פיסת תפר חתוך מראש (~ 2-3 סנטימטרים; גודל תפר פוליפרופילן 6-0; Myco רפואי, Cary, NC). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח מלקחיים מעוקלים חובקים עורק ריאה שמאלי וגרםתפר ראב. משוך בעדינות בחלל תפר בין עורק ריאה השמאלי והסמפונות mainstem שמאל בתנועה יחסית לעקומה של המלקחיים כלפי מעלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכבול את occluding ריאה השמאלית עם קשר מרובע, יתר הזהירות סניפ של תפר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלעות סגורות באמצעות מלקחיים בוטים להחזיק צלעות ותפר פעמים עם פוליפרופילן (monofilament הכחול) גודל 4-0 צורפו ל19 מ&quot;מ, הפוך המעגל 3/8 חיתוך מחט (Myco רפואי, Cary, NC) במלקחיים, ונזהר שלא עור תפר (רק צלעות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השלם קשר מרובע משוחרר, לנפח את הריאות, מקום על לחץ חיובי בסוף הנשיפה (PEEP; 2-5 CMH 2 O), hyperinflate ריאות קשר אז מאובטח בחוזקה, ולעשות עוד קשר מלא לפני חיתוך שארית תפר. הסר מPEEP ולדמיין למשך 30 שניות כדי לוודא שהריאות לא תקרוסנה. החל 5 טיפין Bupivicaine (APP Pharmaceuticals, Schaumbur, אילינוי). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עור סגור על ידי נחת דבק רקמות על פצע ולדחוף את העור יחד באמצעות חזרה enד של מוליך קצה כותנה. תן Bupivicaine (2.0 מ&quot;ג / ק&quot;ג תת עורי) באתר של חתך לאחר מכן כל 8 שעות למשך 24 שעות או עד שהחיה תתחדש פעילות נורמלית. כשכבה התת עורית באזור זה היא דקה מאוד, זה לא קל כדי לתפור בעצמו. כאשר דבק הרקמות מוחל והעור הוא דחף את זה ביחד גם סוגר את השכבה התת עורית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את גז isoflurane אך ממשיך לאוורר את החולדה ל1-2 דקות באוויר חדר עד בואה של תנועה רצונית. ניתק את הצינור קנה נשימה ממכונת ההנשמה ולהבטיח כי העכברוש נושם באופן ספונטני לפני הסרתו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנגב Puralube מעיניים עם מקלון צמר גפן ותנועה לפקח והתאוששות. הזרק הידרוכלוריד עצירות (0.05 מ&quot;ג / קילו intraperitoneal, באטלר שיין, דבלין OH). המשך אספקה ​​של משכך כאבים בכל 12 שעות עבור 48 שעות לאחר ניתוח. </li></ol> 5. Cannulation עורק צוואר שמאלי כדי להעריך את גודל perfus סימפונותיון של הריאה השמאלית איסכמי בנקודתי זמן רצוי לאחר קשירת עורק ריאה שמאלית, להזריק microspheres מתויג דרך עורק הצוואר השמאלי לתוך קשת אב העורקים. הכן את החולדות כאמורות 1-2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך קו אמצע לאורך צוואר, להקהות לנתח לחשוף קנה נשימה ועורק צוואר שמאלי (אתר ההזרקה microsphere). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס קטטר מלא בקצה heparinized מלוח, בוטה של ​​PE20 צינורות (הקיטון דיקינסון, ספארקס MD) לתוך הכלי המחובר למחט 25 גרם, 4-way ברזלים, מזרק 1 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקבוק מקום microspheres (15 מיקרומטר הארגמן קלקר ניאון microspheres, 1 x 10 6 כדורים / מ&quot;ל; Invitrogen, יוג&#39;ין, OR) בsonicator מים למשך 30 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר בקבוק, מערבולת ולמשוך עד 0.5 מ&quot;ל (500,000 microspheres) למילטון מיליליטר זכוכית מזרק 1 (המילטון חברה, רינו, NV) באמצעות מחט 20 גרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף מזרק המילטון לברזלי 4-דרך ולהחדיר microspheres עם משאבת מזרק (שיעור: 500 μl / דקה; Genie בנוסף, קנט המדעי, Torringtב, CT). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר מזרק המילטון ומכשירים מיושרים עם 1 מ&quot;ל של תמיסת מלח heparized ב 500 μl / דקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבצע פתיחת בית חזה חזה מלאה ולגרום לדימום מחודש חולדה על ידי ניתוק הווריד הנבוב הנחותה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הריאה השמאלית וברקמות אחרות של עניין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לחלץ microspheres מרקמות, לקחת את כל הריאה השמאלית של העכבר לאחר exsanguination ולמקם אותו בKOH 2M (4-6 מ&quot;ל). מקום באמבטית 55 ° C מים ולהשאיר למשך הלילה לעיכול רקמה. הוסף Tween 80 (0.25%) כדי לשטוף את החרוזים, מערבולת (10 שניות) וצנטריפוגה (2000 סל&quot;ד; 20 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות). הסר את supernatant, להוסיף תצטט 2-ethoxyethyl (מ&quot;ל 1), מערבולת ולתת לעמוד לשעה 1. מערבולת ההשעיה וצנטריפוגה (2000 סל&quot;ד; (20 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות) הסרת שכבת 2-ethoxyethyl יצטטו מימית המכילה את הקרינה, המקום בקובט ומידה באמצעות ספקטרופוטומטר היטאצ&#39;י F-2500 פלואורסצנטי (612/emission העירור 618. ; Digilab, Holliston, MA). </li></ol>

<ol>
	<li>Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+stages+in+the+development+of+collateral+circulation+to+the+lung+in+the+rat.">Early stages in the development of collateral circulation to the lung in the rat.</a> Circulation Research. 8, 353-376 (1960).</li><li>Li, X., Wilson, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+vascularity+of+the+bronchial+mucosa+in+mild+asthma.">Increased vascularity of the bronchial mucosa in mild asthma.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156, 229-233 (1997).</li><li>Turner-Warwick, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precapillary+systemic-pulmonary+anastomoses.">Precapillary systemic-pulmonary anastomoses.</a> Thorax. 18, 225-237 (1963).</li><li>Muller, K. M., Meyer-Schwickerath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchial+arteries+in+various+stages+of+bronchogenic+carcinoma.">Bronchial arteries in various stages of bronchogenic carcinoma.</a> Pathol. Res. Pract. 163, 34-46 (1978).</li><li>Remy-Jardin, M., Duhamel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+Collateral+Supply+in+Patients+with+Chronic+Thromboembolic+and+Primary+Pulmonary+Hypertension:+Assessment+with+Multi-Detector+Row+Helical+CT+Angiography.">Systemic Collateral Supply in Patients with Chronic Thromboembolic and Primary Pulmonary Hypertension: Assessment with Multi-Detector Row Helical CT Angiography.</a> Radiology. , 274-281 (2005).</li><li>Karsner, H., Ghoreyeb, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+in+infarction:+The+circulation+in+experimental+pulmonary+embolism.">Studies in infarction: The circulation in experimental pulmonary embolism.</a> J. Exp. Med. 18, 507-522 (1913).</li><li>Endrys, J., Hayat, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+bronchopulmonary+collaterals+and+collateral+blood+flow+in+patients+with+chronic+thromboembolic+and+primary+pulmonary+hypertension.">Comparison of bronchopulmonary collaterals and collateral blood flow in patients with chronic thromboembolic and primary pulmonary hypertension.</a> Heart. 78, 171-176 (1997).</li><li>Virchow, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uber+die+Standpunkte+in+den+Wissenschaftlichen+Medizin.">Uber die Standpunkte in den Wissenschaftlichen Medizin.</a> Virchow Archiv. 1, 1-19 .</li><li>Fadel, E., Mazmanian, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+reperfusion+injury+after+chronic+or+acute+unilateral+pulmonary+artery+occlusion.">Lung reperfusion injury after chronic or acute unilateral pulmonary artery occlusion.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 157, 1294-1230 (1998).</li><li>Charan, N. B., Carvalho, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+in+bronchial+circulatory+system+after+unilateral+pulmonary+artery+obstruction.">Angiogenesis in bronchial circulatory system after unilateral pulmonary artery obstruction.</a> J. Appl. Physiol. 82, 284-291 (1997).</li><li>Shi, W., Hu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+reactivity+of+pulmonary+vessels+in+postobstructive+pulmonary+vasculopathy.">Altered reactivity of pulmonary vessels in postobstructive pulmonary vasculopathy.</a> J. Appl. Physiol. 88, 17-25 (2000).</li><li>Shi, W., Giaid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+reactivity+to+endothelin+of+pulmonary+arteries+in+long-term+post-obstructive+pulmonary+vasculopathy+in+rats.">Increased reactivity to endothelin of pulmonary arteries in long-term post-obstructive pulmonary vasculopathy in rats.</a> Pulm. Pharmacol. Ther. 11, 189-196 (1998).</li><li>Sukkar, A., Jenkins, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+CXCR2+Attenuates+Bronchial+Angiogenesis+in+the+Ischemic+Rat+Lung.">Inhibition of CXCR2 Attenuates Bronchial Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung.</a> J. Appl. Physiol. 104, 1470-1475 (2008).</li><li>Mitzner, W., Lee, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+in+the+mouse+lung.">Angiogenesis in the mouse lung.</a> Am. J. Pathol. 157, 93-101 (2000).</li><li>Wagner, E. M., Jenkins, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+and+vascular+function+during+chronic+severe+pulmonary+ischemia.">Lung and vascular function during chronic severe pulmonary ischemia.</a> J. Appl. Physiol. 110, 538-544 (2011).</li><li>Remy-Jardin, M., Bouaziz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchial+and+nonbronchial+systemic+arteries+at+multi-detector+row+CT+angiography:+comparison+with+conventional+angiography.">Bronchial and nonbronchial systemic arteries at multi-detector row CT angiography: comparison with conventional angiography.</a> Radiology. 233, 741-749 (2004).</li><li>Baluk, P., Tammela, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+persistent+lymphatic+vessel+hyperplasia+in+chronic+airway+inflammation.">Pathogenesis of persistent lymphatic vessel hyperplasia in chronic airway inflammation.</a> J. Clin. Invest. 115, 247-257 (2005).</li><li>Bailey, S. R., Boustany, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Airway+vascular+reactivity+and+vascularisation+in+human+chronic+airway+disease.">Airway vascular reactivity and vascularisation in human chronic airway disease.</a> Pulm. Pharmacol. Ther. 22, 417-425 (2009).</li></ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

קשירת עורק ריאה שמאלית בכל המינים שנבדקו מובילה לneovascularization המערכתי החזק של ריאת איסכמי. יש לנו הצגנו את פרטי הגישה כירורגית במודל עכברים. התוצאות שלנו מיוצרות על ידי יציקת כלי דם, היסטופתולוגיה, ובתיוג vivo להוכיח שעורקי סימפונות להתרבות ותנקבנה parenchyma ריאתי. לפיכ...

אנגיוגנזה המערכתית בריאות מוכרת היטב. במצבי מחלה כמו אסטמה 2, פיברוזיס ריאתי ביניים 3, 4 סרטן, ותרומבואמבוליזם כרוני ריאות 5, מערכת כלי דם המערכתית ובמקיף את הריאות ומתרבה פולש parenchyma ריאתי. עם זאת, מודלים של בעלי חיים כדי ללמוד הפעלה זה הפרש של מערכתי ולא מחזור הדם הריאתי הם מעטים. אולי המודל לשחזור ביותר של neovascularization המערכתי בריאות של היונקים הבוגרים הוא זו שמתרחשת לאחר גרימת איסכמיה עורק ריאה כרונית. התגובה לחסימת עורק ריאה שמאלית בבני אדם 5-7, 8 כלבים, חזירים 9, 10 כבשים, חזירי ים 11, 1 חולדות, 12, 13, 14 ועכברים היא ההתרבות המהירה של עורק הסימפונות כמו גם עורקים הבינו צלעיים. המנגנונים האחראים לneovasculari המערכתיאספקת המפעלי של הריאות לאחר איסכמיה ריאתי אינן ידועות ולא נחקרה בהרחבה. כמובן הזמן של אנגיוגנזה סימפונות בחולדה לאחר חסימת עורק ריאה שמאלית שתואר היטב בעבודה היסטולוגית של 1 Weibel. הרחבת העבודה בחולדה, המעבדה שלנו התמקדה בשני גורמי הצמיחה החשובים בתהליך זה, כמו גם את התוצאה הפיזיולוגית של neovasculature זה של הריאה. תוצאות מדגימות הכמוקין CXC CINC-3 הוא גבוה מוקדם לאחר איסכמיה וטיפול בחולדות עם נוגדנים לCXCR2, הקולטן לCINC-3, פוחת אנגיוגנזה 13. Vasculature הסימפונות חדשים שהוקם 14 ימים לאחר תחילתה של איסכמיה ריאתית הוצג להיות נורמלי עם חדירות החלבון גדלו באופן משמעותי 15. תפקוד ריאה שמאלי לא היה מראה רגיל ירד היכולת לשדר וירידה בנפח ריאות 15. למרות neovasculature יכול להיות שותףntributed לשמירה על רקמת ריאות במהלך איסכמיה ריאה הכרונית, נראה שלא יהיה נורמלי ועשויים לתרום לירידה מתמשכת בתפקוד הריאתי. אולי אחד ההיבטים המוזרים ביותר במודל זה מתייחס לפריסה המרחבית של ריבוי כלי דם. למרות שחרורו של גורמי גדילה בתוך parenchyma הריאות עקב איסכמיה, neovasculature מקורו בעורקי סימפונות זרם גדולים יחסית. עורק הסימפונות הרגיל עולה כסניף קטן מאב העורקים ופולש לעץ בדרכי נשימת קארינה. כך המנגנון שבאמצעותו גורמי גדילה לגרום לשלב הראשוני של arteriogenesis לא ברור. אנו מציעים כי החולדה, האנטומיה דומה לבני האדם וסקולרית, מספקת הזדמנות ייחודית לבחון את המנגנונים האחראים לאנגיוגנזה המערכתית במהלך איסכמיה ריאתי. למרות חסימה מלאה של עורק הריאה השמאלי היא תופעה נדירה בבני אדם,כלי דם מוגבר סימפונות נראה להיגרם דומה בחולים כל האתר והגודל של חסימת עורק ריאת 16. לכן, אנו מספקים תיאור מפורט של הגישה כירורגית לקשור את עורק הריאה השמאלי בחולדות ואמצעים לכמת את סדר הגודל של אנגיוגנזה.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> ריאגנטים: </td><td> חברה </td><td></td><td></td></tr><tr><td> hydrochloride עצירות, Puralube </td><td> שיין באטלר </td><td></td><td></td></tr><tr><td> bupivicaine </td><td> תרופות APP </td><td></td><td></td></tr><tr><td> swabstick Povidone-יוד </td><td> Dynarex תאגיד </td><td></td><td></td></tr><tr><td> גודל תפר פוליפרופילן 6-0, מחט המעגל 3/8 הפוכה חיתוך </td><td> Myco רפואי </td><td></td><td></td></tr><tr><td> PE20 צינורות </td><td> הקיטון דיקינסון </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 15 fluorospheres קלקר ארגמן מיקרומטר </td><td> Invitrogen </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 1 מ&quot;ל המילטון זכוכית מזרק </td><td> חברת המילטון </td><td> &lt;/ Td&gt; <td></td></tr><tr><td> ציוד: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> משאבת מזרק פלוס Genie </td><td> קנט מדעי </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ספקטרופוטומטר פלואורסצנטי </td><td> Digilab </td><td></td><td></td></tr><tr><td> מאוורר מכרסם דגם 683 </td><td> הרווארד Apparatus </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> טבלת 1. טבלה של חומרים כימיים וציוד ספציפיים. </td></tr></tbody></table>

angiogenesis in the ischemic rat lung

ריאות מבוגר perfused על ידי שני עורקי סימפונות המערכתיים והחזרה ורידית כל זורמת בעורקי הריאה. ברוב מחל ריאה, היא מערכת כלי הדם המערכתית הקטנה יותר שמגיבה לצורך זלוף ריאה המשופרת ומראה neovascularization החזק. איסכמיה בכלי דם הריאתיים הנגרמת על ידי חסימת עורק ריאה הוכחה לגרום לאנגיוגנזה עורקים המערכתיות המהירה באדם כמו גם בכמה מודלים של בעלי חיים. למרות ההערכה היסטולוגית של קורס הזמן של תפוצת עורק סימפונות בחולדות שתוארה היטב על ידי 1 Weibel, מנגנונים אחראים לצמיחה מאורגנת זו של כלי דם חדשים אינם ברורים. אנו מספקים פרטים ניתוחיים של גרימת איסכמיה עורק ריאה השמאלית בעכבר שמוביל לneovascularization סימפונות. כימות היקף אנגיוגנזה מציגה אתגר נוסף בשל נוכחותם של שני ערוצי כלי דם בתוך הריאות. שיטותכדי לקבוע אנגיוגנזה הפונקציונלית המבוססת על הזרקת microsphere כותרתו מסופקים.

גבס כלי דם: תוצאות של ההשפעות של איסכמיה עורק ריאה השמאלית בעכבר מתוארים באיור 1. הראה הוא גבס methacrylate של vasculature הסימפונות וכלי דם הנרחבים של עץ נתיב האוויר השמאלי 28 ימים לאחר LPAL. כדי להשיג את הפסל, מערכת כלי הדם המערכתית הוזרקה תערובת methacrylate (אדום), מדרדרת לתוך ?...

Watch this Scientific Journal Video about Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung at JoVE.com

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

ריאות perfused על ידי שני עורקי סימפונות המערכתיים ועורקי ריאה. ברוב מחל ריאה, היא מערכת כלי הדם המערכתית הקטנה המציגה neovascularization החזק. הפסקה של זרימת דם ריאתי מקדמת אנגיוגנזה סימפונות נמרצות. אנו מספקים פרטים ניתוחיים של גרימת איסכמיה עורק ריאה השמאלית שמקדמת neovascularization סימפונות.

באנגיוגנזה ריאות עכברוש איסכמי

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

Research

JoVE Journal

Medicine

15.5K Views.  Johns Hopkins University. ריאות perfused על ידי שני עורקי סימפונות המערכתיים ועורקי ריאה. ברוב מחל ריאה, היא מערכת כלי הדם המערכתית הקטנה המציגה neovascularization החזק. הפסקה של זרימת דם ריאתי מקדמת אנגיוגנזה סימפונות נמרצות. אנו מספקים פרטים ניתוחיים של גרימת איסכמיה עורק ריאה השמאלית שמקדמת neovascula...

Video: Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

Multi-modal Imaging of Angiogenesis in a Nude Rat Model of Breast Cancer Bone Metastasis Using Magnetic Resonance Imaging, Volumetric Computed Tomography and Ultrasound

Angiogenesis is an essential feature of cancer growth and metastasis formation. In bone metastasis, angiogenic factors are pivotal for tumor cell proliferation in the bone marrow cavity as well as for interaction of tumor and bone cells resulting in local bone destruction. Our aim was to develop a model of experimental bone metastasis that allows in vivo assessment of angiogenesis in skeletal lesions using non-invasive imaging techniques.
For this purpose, we injected 105 MDA-MB-231 human breast cancer cells into the superficial epigastric artery, which precludes the growth of metastases in body areas other than the respective hind leg1. Following 25-30 days after tumor cell inoculation, site-specific bone metastases develop, restricted to the distal femur, proximal tibia and proximal fibula1. Morphological and functional aspects of angiogenesis can be investigated longitudinally in bone metastases using magnetic resonance imaging (MRI), volumetric computed tomography (VCT) and ultrasound (US).
MRI displays morphologic information on the soft tissue part of bone metastases that is initially confined to the bone marrow cavity and subsequently exceeds cortical bone while progressing. Using dynamic contrast-enhanced MRI (DCE-MRI) functional data including regional blood volume, perfusion and vessel permeability can be obtained and quantified2-4. Bone destruction is captured in high resolution using morphological VCT imaging. Complementary to MRI findings, osteolytic lesions can be located adjacent to sites of intramedullary tumor growth. After contrast agent application, VCT angiography reveals the macrovessel architecture in bone metastases in high resolution, and DCE-VCT enables insight in the microcirculation of these lesions5,6. US is applicable to assess morphological and functional features from skeletal lesions due to local osteolysis of cortical bone. Using B-mode and Doppler techniques, structure and perfusion of the soft tissue metastases can be evaluated, respectively. DCE-US allows for real-time imaging of vascularization in bone metastases after injection of microbubbles7.
In conclusion, in a model of site-specific breast cancer bone metastases multi-modal imaging techniques including MRI, VCT and US offer complementary information on morphology and functional parameters of angiogenesis in these skeletal lesions.

In the pathogenesis of bone metastasis, angiogenesis is a crucial process and therefore represents a target for imaging and therapy. Here, we present a rat model of site-specific breast cancer bone metastasis and describe strategies to non-invasively image angiogenesis in vivo using magnetic resonance imaging, volumetric computed tomography and ultrasound.

רב מודלי הדמיה של אנגיוגנזה מודל עכברים עירום של גרורות סרטן השד עצם באמצעות דימות תהודה מגנטית, טומוגרפיה ממוחשבת נפחית ו אולטראסאונד

Angiogenesis is an essential feature of cancer growth and metastasis formation. In bone metastasis, angiogenic factors are pivotal for tumor cell ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the occurrence of subretinal hemorrhage can affect photoreceptor cell death in the detached retina. Hence, it is advantageous to create reproducible RDs without subretinal hemorrhage for evaluating photoreceptor cell death. We modified a previously reported method to create bullous and persistent RDs in a reproducible location with rare occurrence of subretinal hemorrhage. The critical step of this modified method is the creation of a self-sealing scleral incision, which can prevent leakage of sodium hyaluronate after injection into the subretinal space. To make the self-sealing scleral incision, a scleral tunnel is created, followed by scleral penetration into the choroid with a 30 G needle. Although choroidal hemorrhage may occur during this step, astriction with a surgical spear reduces the rate of choroidal hemorrhage. This method allows a more reproducible and reliable model of photoreceptor death in diseases that involve RD such as rhegmatogenous RD, retinopathy of prematurity, diabetic retinopathy, central serous chorioretinopathy, and age-related macular degeneration (AMD).

Creating experimental retinal detachments with a reproducible and sustained height of detachment, and without subretinal hemorrhage, is important for studying the pathophysiology of photoreceptor cell loss in retinal disease and evaluating potential therapeutic interventions. Here, we report such a method in detail.

רשתית דגם ניתוק במכרסמים על ידי הזרקת subretinal של נתרן Hyaluronate

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Implantation of Fibrin Gel on Mouse Lung to Study Lung-specific Angiogenesis

Recent significant advances in stem cell research and bioengineering techniques have made great progress in utilizing biomaterials to regenerate and repair damage in simple tissues in the orthopedic and periodontal fields. However, attempts to regenerate the structures and functions of more complex three-dimensional (3D) organs such as lungs have not been very successful because the biological processes of organ regeneration have not been well explored. It is becoming clear that angiogenesis, the formation of new blood vessels, plays key roles in organ regeneration. Newly formed vasculatures not only deliver oxygen, nutrients and various cell components that are required for organ regeneration but also provide instructive signals to the regenerating local tissues. Therefore, to successfully regenerate lungs in an adult, it is necessary to recapitulate the lung-specific microenvironments in which angiogenesis drives regeneration of local lung tissues. Although conventional in vivo angiogenesis assays, such as subcutaneous implantation of extracellular matrix (ECM)-rich hydrogels (e.g., fibrin or collagen gels or Matrigel - ECM protein mixture secreted by Engelbreth-Holm-Swarm mouse sarcoma cells), are extensively utilized to explore the general mechanisms of angiogenesis, lung-specific angiogenesis has not been well characterized because methods for orthotopic implantation of biomaterials in the lung have not been well established. The goal of this protocol is to introduce a unique method to implant fibrin gel on the lung surface of living adult mouse, allowing for the successful recapitulation of host lung-derived angiogenesis inside the gel. This approach enables researchers to explore the mechanisms by which the lung-specific microenvironment controls angiogenesis and alveolar regeneration in both normal and pathological conditions. Since implanted biomaterials release and supply physical and chemical signals to adjacent lung tissues, implantation of these biomaterials on diseased lung can potentially normalize the adjacent diseased tissues, enabling researchers to develop new therapeutic approaches for various types of lung diseases.

Recapitulation of the organ-specific microenvironment, which stimulates local angiogenesis, is indispensable for successful regeneration of damaged tissues. This report demonstrates a novel method to implant fibrin gels on the lung surface of living mouse in order to explore how the lung-specific microenvironment modulates angiogenesis and alveolar regeneration in adult mouse.

השרשה של הפיברין ג&#39;ל על עכבר ריאות לחקר אנגיוגנזה ריאות ספציפית

Recent significant advances in stem cell research and bioengineering techniques have made great progress in utilizing biomaterials to regenerate and ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. As this technology expands and improves, the ability to potentially evaluate and improve the quality of substandard lungs prior to transplant is a critical need. In order to more rigorously evaluate these approaches, a reproducible animal model needs to be established that would allow for testing of improved techniques and management of the donated lungs as well as to the lung-transplant recipient. In addition, an EVLP animal model of associated pathologies, e.g., ventilation induced lung injury (VILI), would provide a novel method to evaluate treatments for these pathologies. Here, we describe the development of a rat EVLP lung program and refinements to this method that allow for a reproducible model for future expansion. We also describe the application of this EVLP system to model VILI in rat lungs. The goal is to provide the research community with key information and &#8220;pearls of wisdom&#8221;/techniques that arose from trial and error and are critical to establishing an EVLP system that is robust and reproducible.

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. Here, we describe the development of a rat EVLP program and refinements that allow for a reproducible model for future expansion.

שיטה של ​​מבודד<em&gt; Ex Vivo</em&gt; ריאות זלוף במודל עכברוש: ​​לקחים מפיתוח תכנית EVLP עכברוש

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Rat Model of Photochemically-Induced Posterior Ischemic Optic Neuropathy

Posterior Ischemic optic neuropathy (PION) is a sight-devastating disease in clinical practice. However, its pathogenesis and natural history have&#160;remained poorly understood. Recently, we developed a reliable, reproducible animal model of PION and tested the treatment effect of some neurotrophic factors in this model1. The purpose of this video is to demonstrate our photochemically induced model of posterior ischemic optic neuropathy, and to evaluate its effects with retrograde labeling of retinal ganglion cells. Following surgical exposure of the posterior optic nerve, a photosensitizing dye, erythrosin B, is intravenously injected and a laser beam is focused onto the optic nerve surface. Photochemical interaction of erythrosin B and the laser during irradiation damages the vascular endothelium, prompting microvascular occlusion mediated by platelet thrombosis and edematous compression. The resulting ischemic injury yields a gradual but pronounced retinal ganglion cell dieback, owing to a loss of axonal input - a remote, injury-induced and clinically relevant outcome. Thus, this model provides a novel platform to study the pathophysiologic course of PION,&#160;and can be further optimized for testing therapeutic approaches for optic neuropathies as well as other CNS ischemic diseases.

The goal of this protocol is to photochemically induce ischemic injury to the posterior optic nerve in rat. This model is critical to studies of the pathophysiology of posterior ischemic optic neuropathy, and therapeutic approaches for this and other optic neuropathies, as well as of other CNS ischemic diseases.

מודל עכברוש של אחורי איסכמי אופטי נוירופתיה המושרית photochemically

Posterior Ischemic optic neuropathy (PION) is a sight-devastating disease in clinical practice. However, its pathogenesis and natural history ...

Rat Heterotopic Abdominal Heart/Single-lung Transplantation in a Volume-loaded Configuration

Herein, we describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The configuration of the transplant graft involves anastomosis of donor inferior vena cava (IVC) to recipient IVC, and donor ascending aorta (Ao) to recipient abdominal Ao. The right upper and middle lung lobes are preserved and function as conduits for blood flow from right heart to left heart.
There are several advantages to using this technique, and it lends itself to a broad range of applications. Because the graft is transplanted in a configuration that allows for dyamic volume-loading, cardiac function may be directly assessed in vivo. The use of pressure-volume conductance catheters permits characterization of load-dependent and load-independent hemodynamic parameters. The graft may be converted to a loaded configuration by applying a clamp to the recipient&#8217;s infra-hepatic IVC. We describe modified surgical techniques for both donor and recipient operations, and an ideal myocardial protection strategy. Depending on the experimental aim, this model may be adapted for use in both acute and chronic studies of graft function, immunologic status, and variable ventricular loading conditions. The conducting airways to the transplanted lung are preserved, and allow for acute lung re-ventilation. This facilitates analysis of the effects of the mixed venous and arterial blood providing coronary perfusion to the graft.
A limitation of this model is its technical complexity. There is a significant learning curve for new operators, who should ideally be mentored in the technique. A surgical training background is advantageous for those wishing to apply this model. Despite its complexity, we aim to present the model in a clear and easily applicable format. Because of the physiologic similarity of this model to orthotopic transplantation, and its broad range of study applications, the effort invested in learning the technique is likely to be worthwhile.

We describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The transplant configuration results in a partially loaded graft circulation, allowing direct functional assessment. This model may be employed for acute or chronic studies of function and immunologic status of the transplanted graft.

עכברוש Heterotopic בטן לב / השתלת ריאה בודדת בתצורה טעונה נפח

Herein, we describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The configuration of the transplant graft ...

Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and unrelieved pressure due to immobility. Animal models have been developed that attempt to mimic these conditions for the purpose of furthering our understanding of the complexity of chronic wounds. The model described herein is a rat ischemic skin flap model that permits a prolonged reduction of blood flow resulting in wounds that become ischemic and resemble a chronic wound phenotype (reduced vascularization, increased inflammation and delayed wound closure). It consists of a bipedicled dorsal flap with 2 ischemic wounds placed centrally and 2 non-ischemic wounds lateral to the flap as controls. A novel addition to this ischemic skin flap model is the placement of a silicone sheet beneath the flap that functions as a barrier and a splint to prevent revascularization and reduce contraction as the wounds heal. Despite the debate of using rats for wound healing studies due to their quite distinct anatomic and physiologic differences compared to humans (i.e., the presence of a panniculus carnosus muscle, short life-span, increased number of hair follicles, and their ability to heal infected wounds) the modifications employed in this model make it a valuable alternative to previously developed ischemic skin flap models.

The rat, due to its size, availability, and rather docile behavior, has been utilized as a research model for many years. The goal of this protocol is to utilize the rat as an ischemic skin wound healing model to provide valuable insight into the pathophysiology of chronic wounds.

הפגנה של דגם פצע עור העכברוש איסכמי

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects in these vessels represent severe health risks such as in atherosclerosis, which can lead to myocardial infarctions and heart failures in patients. Consequently, coronary artery disease is one of the leading causes of death worldwide. Despite its clinical importance, relatively little progress has been made on how to regenerate damaged coronary arteries. Nevertheless, recent progress has been made in understanding the cellular origin and differentiation pathways of coronary vessel development. The advent of tools and technologies that allow researchers to fluorescently label progenitor cells, follow their fate, and visualize progenies in vivo have been instrumental in understanding coronary vessel development. In vivo studies are valuable, but have limitations in terms of speed, accessibility, and flexibility in experimental design. Alternatively, accurate in vitro models of coronary angiogenesis can circumvent these limitations and allow researchers to interrogate important biological questions with speed and flexibility. The lack of appropriate in vitro model systems may have hindered the progress in understanding the cellular and molecular mechanisms of coronary vessel growth. Here, we describe an in vitro culture system to grow coronary vessels from the sinus venosus (SV) and endocardium (Endo), the two progenitor tissues from which many of the coronary vessels arise. We also confirmed that the cultures accurately recapitulate some of the known in vivo mechanisms. For instance, we show that the angiogenic sprouts in culture from SV downregulate COUP-TFII expression similar to what is observed in vivo. In addition, we show that VEGF-A, a well-known angiogenic factor in vivo, robustly stimulates angiogenesis from both the SV and Endo cultures. Collectively, we have devised an accurate in vitro culture model to study coronary angiogenesis.

In vitro models of coronary angiogenesis can be utilized for the discovery of the cellular and molecular mechanisms of coronary angiogenesis. In vitro explant cultures of sinus venosus and endocardium tissues show robust growth in response to VEGF-A and display a similar pattern of COUP-TFII expression as in vivo.

מודל מבחנה של אנגיוגנזה כלילית

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods for choosing appropriate cuff sizes for the pulmonary vein (PV), pulmonary artery (PA), or bronchus (Br) are varied, thus making the determination of proper cuff size during rat lung transplantation an exercise of trial and error. By standardizing the cuffing technique to use the smallest effective cuff appropriate for the size of the vessel or bronchus, one can make the transplantation procedure safer, faster, and more successful. Since diameters of the PV, PA, and Br are related to the body weight of the rat, we present a strategy to choosing an appropriate size using a weight-based guide. Since lung volume is also related to body weight, we recommend that this relationship should also be considered when choosing the proper volume of air for donor lung inflation during warm ischemia as well as for the proper volume of PBS to be instilled during bronchoalveolar lavage (BAL) fluid collection. We also describe methods for 4th intercostal space dissection, wound closure, and sample collection from both the native and transplanted lobes.

Here, we present optimizations to a rat lung transplantation model that serve to improve outcomes. We provide a size guide for cuffs based on body weight, a measurement strategy to ascertain the 4th intercostal space, and methods of wound closure and BAL (bronchoalveolar lavage) fluid and tissue collection.

מודל השתלת ריאה של חולדה של איסכמיה חמה / פגיעה ברפרפוזיה: אופטימיזציות לשיפור התוצאות

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods ...

<meta charset="utf8"></head><body>ניטור בזמן אמת של דינמיקה תאית בהשתלת ריאות עכבר

Intravital Two-Photon Microscopy of the Transplanted Mouse Lung

Complications after lung transplantation are largely related to the host immune system responding to the graft. Such immune responses are regulated by crosstalk between donor and recipient cells. A better understanding of these processes relies on the use of preclinical animal models and is aided by an ability to study intra-graft immune cell trafficking in real-time. Intravital two-photon microscopy can be used to image tissues and organs for depths up to several hundred microns with minimal photodamage, which affords a great advantage over single-photon confocal microscopy. Selective use of transgenic mice with promoter-specific fluorescent protein expression and/or adoptive transfer of fluorescent dye-labeled cells during intravital two-photon microscopy allows for the dynamic study of single cells within their physiologic environment. Our group has developed a technique to stabilize mouse lungs, which has enabled us to image cellular dynamics in na&#239;ve lungs and orthotopically transplanted pulmonary grafts. This technique allows for detailed assessment of cellular behavior within the vasculature and in the interstitium, as well as for examination of interactions between various cell populations. This procedure can be readily learned and adapted to study immune mechanisms that regulate inflammatory and tolerogenic responses after lung transplantation. It can also be expanded to the study of other pathogenic pulmonary conditions.

<meta charset="utf8"></head><body>מחבר זרקור: קידום אימונולוגיה של השתלות ריאה באמצעות הדמיה תוך חיונית

Here, we present a protocol to intravitally image the transplanted mouse left lung using two-photon microscopy. This represents a valuable tool for studying cellular dynamics and interactions in real-time following murine lung transplantation.

מיקרוסקופ תוך-ויטלי דו-פוטוני של ריאת העכבר המושתל

Complications after lung transplantation are largely related to the host immune system responding to the graft. Such immune responses are regulated by ...