This study was supported by NIH grants R21HL118661, R56HL124444, and R01HL124444 to CDK, and by NIH grants R00HL103797 and R01HL125695 to JMM.

כל הניסויים בבעלי החיים בוצעו על פי פרוטוקול שאושר על ידי ועדת הטיפול בבעלי החיים המוסדית הדיוק והשימוש. עכברי זכרים שמשו במחקר זה, למרות שכל אחד מהמינים יכולים לשמש כמצוין לצורך המדעי של המחקר. הסרת שיער 1. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני אינדוקציה של הרדמה, להקים אזור הכנת טרום ניתוחית המורכב כרית חימום מכוסה נקבע על 37 מעלות צלזיוס, יציאת nosecone מחובר זרימה רציפה של isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר בתא אינדוקציה הרדמה. הגדר את מד זרימת O 2 עד 1 ליטר / דקה ו isoflurane ל 3 - 1%. הערה: הרדמה בדרך כלל מושרת עכבר 25 גרם עם 2% isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את גירוי התגובה של העכבר על ידי נדנדת התא בעדינות ולשמור על היעדר רפלקס ליישר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את החדר עם O 2 כדי לנקות את isoflurane לפני הפתיחה. במהירות להזיז את העכבר אל p חימוםהמודעה ולחבר אותו isoflurane דרך nosecone. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את isoflurane ל -1.5%. בדוק את הגירוי תגובה על ידי רפלקס דוושת (קמצוץ הבוהן). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל סיכה עיניים בנדיבות על שתי העיניים כדי למנוע התייבשות במהלך הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את השיער משני הגפיים האחוריים באמצעות גוזם חשמלי קטן. מתח את העור בזמן הגילוח, כדי למנוע קרע את העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל קרם להסרת שיער מחומם מראש ולתת לשבת במשך דקות 1. נגב בעדינות משם באמצעות פד גזה לחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור הליך כירורגי במועד מאוחר יותר, לכבות את isoflurane להזיז את העכבר כדי כלוב התאוששות ריק נייר מצופה מגבת כדי להבטיח את העכבר לא לשאוב מצעים בכלוב. צג את החיה עד שהוא מסוגל לשמור על שכיבה sternal. אחרת, להזיז את העכבר אל שולחן הניתוחים. הערה: תהליך הסרת השיער יכול לגרות את העור על מדידות זלוף. מומלץ לחכות 1 - 2 ימים לאחר הסרת השיער של בעלי החיים לפני performing סריקה זלוף טרום ניתוחית או ביצוע ניתוחים. </li></ol> 2. הכנה טרום כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בכלים הבאים במהלך הליך זה; מספרי כירורגיות ישרים קטנים, 2 קנס שקצו מלקחי זווית, מלקחיים גרפו קטנים, מלקחי נהג מחט, 3 כתיבה, מספריים באביב קטנים, צמר גפן קנס שקצו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את כל הכלים באמצעות חיטוי לפני תחילת הניתוח. השתמש מעקר חם חרוז לפני ובין כל הליך כירורגי, עד 5 חיות. לעקר מנות כלי כירורגיות לניתוחים של קבוצות גדולות מ -5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן שדה כירורגי סטרילי מורכב כרית חימום מכוסית יציאת isoflurane. בצע את כל העבודה תחת מיקרוסקופ לנתיחה 10 סטריאו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים ולהכין את העכבר כמתואר בשלבים 1.1 1.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק כי העכבר הוא מסומם לגמרי ומניחים לתנוחת שכיבה על שולחן הניתוחים. Secure שתי הרגליים באמצעות פלסטר. &lt;/ Li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם באמצעות כרית חימום מבוקר טמפרטורה, לצרף את בדיקת הטמפרטורה ומאובטח אותו לבסיס של הפלטפורמה כירורגית באמצעות פלסטר כדי לוודא שהוא לא יהיה שלף בטעות במהלך ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את אתר החתך באמצעות מגבוני povidone- יוד ואלכוהול חילופין 3. כסה את בעל החיים עם וילון ניתוח סטרילי וחותכים חור לחשוף את האתר החתך. </li></ol> 3. אינדוקציה של לימב איסכמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש אזמל לעשות חתך ראשוני לאורך במרכז הירך המדיאלי, ריצה מהברך כלפי הבטן, וכן להאריך את החתך כ 1 סנטימטר עם מספריים בסדר (איור 1 א). </li></ol><img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/54166/54166fig1.jpg" /> איור 1. אתר כירורגי ציוני דרך אנטומיים דם עבור עכבר Hindlimb איסכמיה כירורגיה. (א) מראה חיצוני שלhindlimb של עכבר במצב שכיבה. השורה בקע מציינת את אתר החתך כדי לבצע את הליכי איסכמיה hindlimb כראוי. (ב) צפייה של כלי דם hindlimb העכבר הפרוקסימלי. סוף הפרוקסימלי של עורק הירך (FA) נובע מתחת הרצועה מפשעתי (IL). בקצה הדיסטלי של FA ממוקם ההסתעפות שלה לתוך עורק popliteal (PA) עורק saphenous (SA). העורקים בטחונות הגדולים הנחה של FA הם עורקים ירך גג לרוחב (LCFA), עורק ירך הזנב הפרוקסימלית (PCFA), ואת העורק ברום בטן הזנב השטחי (SCEA). וריד הירך (ע&quot;ע) פועל בצמוד FA, וענפי ורידים ניתן לראות במקביל לסניפי העורקים המרכזיים. כוכביות (*) יציין את אתרי הפרוקסימלית ומ דיסטלי עבור מיקום של נחשי ameroid או ליגטורות, תלוי אם subacute או איסכמיה חריפה יהיה מושרה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54166/54166fig1large.jpg" target="_blank">אנא CLI</a>CK כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <ol start="2" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים, פתח את החתך ולחשוף את הקרום המכסה את רקמת השומן מפשעתי (IFT). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש-מלקחיים סגורים, פירס דרך הממברנה אל תוך ההפרדה בין IFT ואת הבטן. בעדינות לשחרר את הלחץ על מלקחיים כדי להפריד את IFT מן שרירי הבטן, לחשוף את צרור העצבים וכלי הדם מתחת. שים את הפרוקסימלי וענפי זנב שטחיים כציוני דרך אנטומיים חשובה (איור 1B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מפשק ולמשוך את רקמת בטן proximally לחשוף את האתר הכווץ או קשירת ameroid הפרוקסימלי, רק הפרוקסימלי עורק הירך גג לרוחב (איור 1 ב). עורק הגג לרוחב שקרים על 5 מ&quot;מ הפרוקסימלי הפרוקסימלי ועורק זנב שטחי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכניסו שתי כתיבה יותר לתוך החלק הדיסטלי של החתך, המדיאלי אחד לרוחב, כדי למשוך את IFT distally הרחקאתר כירורגית כדי להרחיב את שדה הניתוח. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בשני במלקחיים בסדר להסיר את הקרום החיצוני המכסה את צרור העצבים וכלי הדם. הכנס בעדינות מחצית קצה מלקחיים בסדר בין הוורידים והעורקים, הזזה קצה מלקחיים תחת קרום שקושר אותם יחד. סגור את המלקחיים בעדינות לקרוע את הקרום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את קצה מלקחיים הסגור שבין הוורידים והעורקים וליצור פער ביניהם על ידי שחרור הלחץ על מלקחיים. חזור על הטכניקה הזו כדי ליצור פער בין העורק והעצב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור איסכמיה איבר subacute, למקם הכווץ ameroid על עורק הירך הפרוקסימלית (איור 2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתקין את הכווץ ameroid הפרוקסימלי, להחליק את קצה מלקחיים תחת עורק הירך לבודד אותה מהחבילה העצבים וכלי הדם. השתמש סט שני של מלקחי angled- לאחוז בשולי הכווץ ולהדריך אותו תחת עורק הירך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את עורק הירך לתוך היםהרבה של הכווץ. חזור על הכווץ דיסטלי, מיקומה מיד הפרוקסימלי הסתעפות של עורק הירך לתוך העורק popliteal ועורקים saphenous (איור 2). </li></ol></li></ol><img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/54166/54166fig2.jpg" /> איור 2. מיקום של Ameroid נחשים ו ליגטורות. (א) דוגמא של שני נחשים ameroid דגש על עורק הירך לגרום איסכמיה hindlimb subacute. הכווץ הפרוקסימלי מושם רק הפרוקסימלי עורק הירך גג לרוחב (LCFA). הכווץ דיסטלי מושם רק הפרוקסימלי הסתעפות של popliteal (PA) ועורקים saphenous (SA). נחשים מותקנים עם החריץ פונה כלפי מעלה על מנת להבטיח את העורק מוגדר כראוי בתוך הכווץ. (ב) דוגמא של קשירות של עורק הירך לגרום איסכמיה hindlimb החריפה. Ligatures (חיצים צהובים) ממוקם כך שהם לאגף את עמדת הנחשים בלוח (B), ואת עורק הירך הוא transected בין כל סט של שנייה ליגטורה (כוכביות). בר, 1 מ&quot;מ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54166/54166fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <ol start="8" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור איסכמיה איבר חריפה, ולקשור ו transect עורק הירך הפרוקסימלי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי transect עורק הירך, חוט 7 - O תפר מתחת העורק רק הפרוקסימלי עמדת הכווץ הפרוקסימלית (ראה שלב 3.7) ולקשור. לקשור ליגטורה שני על דיסטלי 1 מ&quot;מ עד הראשון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במספריים באביב כדי transect העורק בין שתי ליגטורות. עבור חיתוך רוחב עורקי דיסטלי, לחזור על שלבים אלה, נחת שתי ליגטורות על 1 מ&quot;מ זה מזה, רק הפרוקסימלי ההסתעפות של עורק הירך לתוך עורק popliteal ועורק saphenous אלא בהבטחה שהם דיסטלי caud השטחיתאל העורק ברום הבטן (ראה איור 1) </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגירת החתך באמצעות קטע 5 - O התפרים vicryl. </li></ol> 4. הדמיה זלוף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזיז את העכבר כדי כרית חימום 37 ° C להגדיר מתחת תרמי זלוף דופלר לייזר (LDPI) ולחבר באמצעות nosecone למקור isoflurane. אם אין לעקוב אחר הטמפרטורה זמין, לאפשר 5 דקות עבור בעכבר כדי להתחמם עד 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את תרמי ופתח את התוכנה לכידת תמונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על הסמל &#39;רווקה תמונה חדשה&#39; כדי לפתוח את החלון &#39;סורק ההגדרה&#39;. הגדר את &#39;גודל סריקה&#39; ל &#39;גדולים&#39; ו &#39;מהירות סריקה&#39; ל &#39;4 ms / פיקסל&#39;. הגדר את אזור הסריקה על ידי שינוי ערכי x ו- y תחת בחלונית &#39;שטח סריקה (יחידות) &quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על הכרטיסייה &#39;וידאו המרחק&#39; כדי להציג את הזנת וידאו, ולסדר את העכבר כדי להתאים לאזור הסריקה שמציין מתאר אדום. לחץ על &#39;מרחק אוטומטי&#39; כדי לכיילהמרחק בין לייזר לנושא. לחץ על &#39;הבא&#39; כדי לפתוח את החלון &#39;פרטי נושא&#39;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזן את המידע הנושא וכל הערות רלוונטיות. לחץ על כפתור &quot;הבא&quot; כדי להמשיך הלאה אל חלון הסריקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחצו על כפתור &quot;התחל מדידה &#39;כדי לפתוח את&#39; אישור או בטל סריקה מרחק &#39;הדו-שיח. לחץ על &#39;אישור&#39; כדי לאשר מרחק סריקה. שים את תהליך הסריקה להתחיל ולרוץ 4 - 8 דקות, בהתאם לגודל של אזור הסריקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שהסריקה הושלמה, להתבונן בחלון &#39;שמירה בשם&#39;. תן שם לקובץ ושמור אותו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את isoflurane להזיז את העכבר כדי כלוב התאוששות ריק ולפקח עד שהחיה היא מסוגלת לשמור על שכיבה sternal. אין למקם עכבר מתאושש מההרדמה לכלוב עם עכברים אחרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את תוכנת ניתוח תמונה. לחץ על הסמל &#39;Open&#39; ולעיין כדי לפתוח את קובץ התמונה לניתוח. בחלון הקובץ, לקיים את השטף,תמונות צילום, והצבע של העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לסמן את האזור של עניין (ROI) על התמונה השטף, לחץ על הסמל &#39;הצג ROIs&#39;. הבא לחץ על לחצן &#39;הוסף מצולע&#39; וגרור את הסמן סביב הגפה לא ניתוחי לצייר את ההחזר על ההשקעה. לחץ לחיצה ימנית כדי לסגור את הצורה. בחר &#39;הוסף מצולע&#39; שוב לצייר ROI התאמת סביב הגפה כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על הסמל &#39;הסטטיסטיקה&#39; כדי לפתוח את &#39;תמונת תוצאות הסטטיסטיות ROIs (PU)&#39; חלון. לראות את הבדל אחוזי השטף בעמודת &#39;שטף% &quot;. הערה: ROI הראשונים הערוכים ישמש כנקודת התייחסות. הערה: לפני כל סריקת זלוף הבאה פעלה לפי השלבים המפורטים בסעיף 1 כדי להרדים את העכבר ב צעדי 4.1 ל 4.11 לתמונת החיה. </li></ol>

<ol>
	<li>Criqui, M. H., Aboyans, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+peripheral+artery+disease.">Epidemiology of peripheral artery disease.</a> Circ. Res. 116, 1509-1526 (2015).</li><li>Thukkani, A. K., Kinlay, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endovascular+intervention+for+peripheral+artery+disease.">Endovascular intervention for peripheral artery disease.</a> Circ. Res. 116, 1599-1613 (2015).</li><li>Vartanian, S. M., Conte, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+intervention+for+peripheral+arterial+disease.">Surgical intervention for peripheral arterial disease.</a> Circ. Res. 116, 1614-1628 (2015).</li><li>Bonaca, M. P., Creager, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+treatment+and+current+management+of+peripheral+artery+disease.">Pharmacological treatment and current management of peripheral artery disease.</a> Circ. Res. 116, 1579-1598 (2015).</li><li>Conte, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+rationale+of+the+PREVENT+III+clinical+trial:+edifoligide+for+the+prevention+of+infrainguinal+vein+graft+failure.">Design and rationale of the PREVENT III clinical trial: edifoligide for the prevention of infrainguinal vein graft failure.</a> Vasc Endovascular Surg. 39, 15-23 (2005).</li><li>Pomposelli, F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+decade+of+experience+with+dorsalis+pedis+artery+bypass:+analysis+of+outcome+in+more+than+1000+cases.">A decade of experience with dorsalis pedis artery bypass: analysis of outcome in more than 1000 cases.</a> J. Vasc. Surg. 37, 307-315 (2003).</li><li>Willigendael, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smoking+and+the+patency+of+lower+extremity+bypass+grafts:+a+meta-analysis.">Smoking and the patency of lower extremity bypass grafts: a meta-analysis.</a> J. Vasc. Surg. 42, 67-74 (2005).</li><li>Schillinger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Balloon+angioplasty+versus+implantation+of+nitinol+stents+in+the+superficial+femoral+artery.">Balloon angioplasty versus implantation of nitinol stents in the superficial femoral artery.</a> N. Engl. J. Med. 354, 1879-1888 (2006).</li><li>Marmagkiolis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=12-month+primary+patency+rates+of+contemporary+endovascular+device+therapy+for+femoro-popliteal+occlusive+disease+in+6,024+patients:+beyond+balloon+angioplasty.">12-month primary patency rates of contemporary endovascular device therapy for femoro-popliteal occlusive disease in 6,024 patients: beyond balloon angioplasty.</a> Catheter. Cardiovasc. Interv. 84, 555-564 (2014).</li><li>Rosenfield, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trial+of+a+Paclitaxel-Coated+Balloon+for+Femoropopliteal+Artery+Disease.">Trial of a Paclitaxel-Coated Balloon for Femoropopliteal Artery Disease.</a> N. Engl. J. Med. 373, 145-153 (2015).</li><li>Tepe, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug-coated+balloon+versus+standard+percutaneous+transluminal+angioplasty+for+the+treatment+of+superficial+femoral+and+popliteal+peripheral+artery+disease:+12-month+results+from+the+IN.PACT+SFA+randomized+trial.">Drug-coated balloon versus standard percutaneous transluminal angioplasty for the treatment of superficial femoral and popliteal peripheral artery disease: 12-month results from the IN.PACT SFA randomized trial.</a> Circulation. 131, 495-502 (2015).</li><li>Couffinhal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+angiogenesis.">Mouse model of angiogenesis.</a> Am. J. Pathol. 152, 1667-1679 (1998).</li><li>Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M. D., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+model+of+hindlimb+ischemia.">Murine model of hindlimb ischemia.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>McClung, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle-specific+genetic+determinants+contribute+to+the+differential+strain-dependent+effects+of+hindlimb+ischemia+in+mice.">Skeletal muscle-specific genetic determinants contribute to the differential strain-dependent effects of hindlimb ischemia in mice.</a> Am. J. Pathol. 180, 2156-2169 (2012).</li><li>Dokun, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+trait+locus+(LSq-1)+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia.">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li><li>Rivard, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-dependent+impairment+of+angiogenesis.">Age-dependent impairment of angiogenesis.</a> Circulation. 99, 111-120 (1999).</li><li>Hazarika, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+angiogenesis+after+hindlimb+ischemia+in+type+2+diabetes+mellitus:+differential+regulation+of+vascular+endothelial+growth+factor+receptor+1+and+soluble+vascular+endothelial+growth+factor+receptor+1.">Impaired angiogenesis after hindlimb ischemia in type 2 diabetes mellitus: differential regulation of vascular endothelial growth factor receptor 1 and soluble vascular endothelial growth factor receptor 1.</a> Circ. Res. 101, 948-956 (2007).</li><li>Couffinhal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+collateral+vessel+development+associated+with+reduced+expression+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+ApoE-/-+mice.">Impaired collateral vessel development associated with reduced expression of vascular endothelial growth factor in ApoE-/- mice.</a> Circulation. 99, 3188-3198 (1999).</li><li>Tang, G. L., Chang, D. S., Sarkar, R., Wang, R., Messina, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+gradual+or+acute+arterial+occlusion+on+skeletal+muscle+blood+flow,+arteriogenesis,+and+inflammation+in+rat+hindlimb+ischemia.">The effect of gradual or acute arterial occlusion on skeletal muscle blood flow, arteriogenesis, and inflammation in rat hindlimb ischemia.</a> J. Vasc. Surg. 41, 312-320 (2005).</li><li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+mechanism+regulating+blood+flow+recovery+in+acute+versus+gradual+femoral+artery+occlusion+are+distinct+in+the+mouse.">Cellular and molecular mechanism regulating blood flow recovery in acute versus gradual femoral artery occlusion are distinct in the mouse.</a> J. Vasc. Surg. 48, 1546-1558 (2008).</li><li>Litvak, J., Siderides, L. E., Vineberg, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+experimental+production+of+coronary+artery+insufficiency+and+occlusion.">The experimental production of coronary artery insufficiency and occlusion.</a> Am. Heart J. 53, 505-518 (1957).</li><li>Bredee, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+ameroid+constrictor.+Preliminary+communication.">An improved ameroid constrictor. Preliminary communication.</a> J. Surg. Res. 9, 107-112 (1969).</li><li>McClung, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subacute+limb+ischemia+induces+skeletal+muscle+injury+in+genetically+susceptible+mice+independent+of+vascular+density.">Subacute limb ischemia induces skeletal muscle injury in genetically susceptible mice independent of vascular density.</a> J. Vasc. Surg. , (2015).</li><li>Hellingman, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variations+in+surgical+procedures+for+hind+limb+ischaemia+mouse+models+result+in+differences+in+collateral+formation.">Variations in surgical procedures for hind limb ischaemia mouse models result in differences in collateral formation.</a> Eur. J. Vasc. Endovasc. Surg. 40, 796-803 (2010).</li><li>Kochi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+arterial+anatomy+of+the+murine+hindlimb:+functional+role+in+the+design+and+understanding+of+ischemia+models.">Characterization of the arterial anatomy of the murine hindlimb: functional role in the design and understanding of ischemia models.</a> PloS one. 8, e84047 (2013).</li></ol>

The authors have no conflicts of interest to disclose.

אולי הצעד הכי מאתגר בהליך זה הוא ההפרדה של העורק הפמורלי מ וריד הירך. הקוטר הגדול קירות דקים של וריד הירך בהשוואה לאלו של העורק להגדיל את הרגישות שלו לנקב וקורע במהלך מניפולציה כירורגית. הסבירות של שיבוש וריד יכול להיות מופחת על ידי שמירה על הפצע לח באמצעות ספוגית סטר...

מחלת עורקים היקפיים (PAD) הוא גורם מוביל לתחלואה ותמותה קרדיו-וסקולרית במדינות מפותחות 1. תוצאות PAD מחסימה טרשתית של העורקים ההיקפיים שמוביל איסכמיה איבר עם כאב exertional או שאר כתוצאה וכיבים שאינו נרפא מדי פעם נמק המחייבים מכריתת גפיים. טיפולי מיקוד PAD מכוונים בעיקר כלפי endovascular 2 או רה-ווסקולריזציה כירורגית 3, שהוא במהותו לא לטיפולים רפואיים יעילים קיימים 4. למרבה הצער, revascularization הוא לעתים קרובות של תועלת מוגבלת, כמו שתלי מעקף יש שיעור כישלון גבוה (עד 50% תוך 5 שנים) 5, גרועים באוכלוסיות מסוימות (למשל, מעשנים, נשים, שתל וריד הלא saphenous) 6,7. גישות Endovascular, כגון אנגיופלסטיקה ו סטנט, נפגמו גם על ידי תעריפים restenosis גבוהה (מעל 50% בתוך שנה 1), particulary in femoropopliteal מחלה 8, אם כי שימוש בלונים סטנטים סמי משחררים השתפר תוצאות במקצת 9-11. על מנת לפתח טיפולים חדשים עבור PAD זה הכרחי כדי לפתח מודלים של בעלי חיים כי לשחזר את המחלה האנושית באופן מהימן. נכון להיום, המודל הנפוץ ביותר של PAD הוא המודל איסכמיה hindlimb (HLI), אשר רוב מבוצע לעתים קרובות בעכברים 12,13. בדמותו הנפוצה ביותר שלה, המודל כרוך קשירת כירורגית של עורק הירך הפרוקסימלית ומ דיסטלי ו-הענפים בצד התערבותה ואחריו כריתה של כלי השיט, וכתוצאה מכך חסימה של זרימת הדם ואת אינדוקציה של איסכמיה איבר חריפה. HLI נעשה ברוב המקרים ללמוד תגובות angiogenic ו arteriogenic ברקמת שריר איבר פריפריה ואת ההשפעות של טיפולים שונים (למשל, תרופות, למסירת הגן, תאי גזע) על התגובות הללו. לאחרונה, הקבוצה שלנו השתמשה במודל זה כדי לבחון את התפקיד של תאי שריר שלד in התגובה אחר ענף איסכמיה ואת ההשפעות של הבדלים גנטיים על תוצאות 14. מודל HLI יש להקל ההבנה הנוכחית שלנו שהתגובות וסקולרית ושרירים לאיסכמיה תלויות בגנטיקה (כלומר, זן מולד) 15, גיל 16, ואת קיומו או אי קיומו של מחלות אחרות או בתנאים המתייחסים טרשת עורקת, כוללים סוכרת 17 היפרכולסטרולמיה 18. עם זאת, על חולשה מהותית של מודל HLI המסורתי היא שזה מודל של איבר איסכמיה חריפה 12,13, בעוד PAD האנושי גורם איסכמיה כרונית כתוצאה של ההתפתחות ההדרגתית של טרשת עורקי occlusive בעורקים ההיקפיים. בניסיון לעקוף את החולשה הזאת, טאנג והעמיתים בתחילה פתחו מודל עכברוש של חסימת עורקית ירך הדרגתית באמצעות נחשי ameroid 19, ואת אותה הקבוצה ובהמשך ד20 eveloped במודל של עכברים דומה. נחשי Ameroid תוארו בתחילה בשנת 1950 במודל כלבים של איסכמיה לבבית כרונית 21,22. להתקנים אלה יש שרוול מתכת חיצוני העוטף שכבה פנימית של חומר היגרוסקופי, בדרך כלל קזאין, וכאשר להציב סביב עורק הוא לגרום לחסימת כלי הדרגתית כפי שהוא לספוג לחות מכל הרקמות הסובבות. ב השינוי שלהם של המודל, ואח יאנג. להציב נחשים הוא הפרוקסימלית ומ עורק ירך הדיסטלי באתרים מקבילים באתרי הקשירה כירורגית, והם ligated ענפים בצד של עורק הירך, כמו במודל המסורתי. לעומת HLI החריף, איסכמיה הכווץ הנגרמת ameroid מביע תחתון של גני מתח תלוי דלקתיים גזירה, שחזור זרימת דם נמוך 4 - 5 שבועות לאחר ניתוח, ופחות שרירים נימק 20. בהתבסס על תצפיות אלה, זה הורגש כי חסימת עורקית הדרגתית עשויה לספק מודל של PAD יותר רלוונטי המחלה האנושית. יש לציין, כי הדו&quot;ח המקורי, ההשפעות של איסכמיה ameroid הנגרמת הכווץ נבדקו רק C57BL / 6 עכברים 19, אשר עמידים יחסית נמק שריר-induced איסכמיה 15. אנחנו לאחרונה שונים מודל איסכמיה ההדרגתי נוספים ובחנו השפעותיו זן עכבר BALB / ג איסכמיה-רגישה יותר 23. בשנת הביטוי הראשון של המודל, מיקמנו נחשי הן הפרוקסימלית ומ עורק הירך הדיסטלי אבל עזבו את כל-הענפים בצד פגע. בשנת מודיפיקציה שנייה, מתונה יותר, מקמנו הכווץ אחת בלבד על עורק הפרוקסימלי ירך ושוב השארתי את כל תופעות braches של העורק ללא פגע. בשני השינויים של מודל זה, מצאנו כי עכברי BALB / c, אבל לא C57BL / 6 עכברים, מוצג נימק שריר רב, למרות שיש זרימת דם דומה וצפיפות כלי דם. בדומה למחקר הקודם שלנו 14, ממצאים אלו הוכיחו כי שריר איברפציעה אינה מושפעת אך ורק על ידי זרימת דם, אבל היא בחלקה תלויה רקע גנטי. יתר על כן, מצאנו כי זרימת הדם באיבר נפל לשפל תוך 3 ימים, ובכך המודל שנראה יותר אחד &#39;subacute&#39; ולא איסכמיה איבר הדרגתית. בהתבסס על מחקרים קודמים אלה, נראה ברור כי שיטה אחת גרימת איסכמיה hindlimb ואינו מתאים בכל המקרים. בגלל מגוון רחב של מצבים (למשל, הבדלים גנטיים קיומו או אי קיומו של תנאי שיתוף חולני) שפעה הוא כלי הדם ותגובות שרירים ספציפיים שלד, שחוקרים מוצאים לנכון לשנות את הכרוניות ו / או חומרת איסכמיה hindlimb הטובה ביותר לצרכיהם. יתר על כן, תיאורים מראש של המודל בדרך כלל חסרים ציונים דרך אנטומיים מתאימים כדי להקל שחזור הבין-חוקר אמין של הטכניקה. במאמר זה, שיטות גרימה או איסכמיה hindlimb חריפה או subacute בתוך העכברמתוארים, והם סיפקו לו ציוני דרך אנטומיים מדויקים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="698">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dumont #5/45 Forceps</td>
			<td style="width:176px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:139px;">11251-35</td>
			<td style="width:167px;">Dumoxel</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dumont Style 5 Mini Forceps</td>
			<td style="width:176px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:139px;">11200-14</td>
			<td>Inox</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Extra Fine Bonn Scissors</td>
			<td style="width:176px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:139px;">14084-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">7-0 Silk Suture</td>
			<td style="width:176px;">Sharpoint</td>
			<td style="width:139px;">DA-2527N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">5-0 Coated Vicryl Suture</td>
			<td style="width:176px;">Ethicon</td>
			<td style="width:139px;">J463G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Graefe Forceps</td>
			<td style="width:176px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:139px;">11053-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vannas Spring Scissors</td>
			<td style="width:176px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:139px;">15000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:216px;">Artifical Tears Ointment</td>
			<td style="width:176px;">Rugby Laboratories</td>
			<td>0536-6550-91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Surgical Tape</td>
			<td style="width:176px;">3M</td>
			<td style="width:139px;">1530-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fine Cotton Swabs</td>
			<td style="width:176px;">Contec</td>
			<td style="width:139px;">SC-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Temperature Controller</td>
			<td style="width:176px;">Physitemp</td>
			<td style="width:139px;">TCAT-2DF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Ameroid Constrictors</td>
			<td style="width:176px;">Research Instruments SW</td>
			<td style="width:139px;">MMC-0.25 x 1.00-SS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hot Bead Sterilizer</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Deltaphase Isothermal Pad</td>
			<td style="width:176px;">Braintree Scientific</td>
			<td style="width:139px;">39DP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Needle Driver</td>
			<td style="width:176px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Phosphate Buffered Saline&#160;</td>
			<td style="width:176px;">Gibco</td>
			<td style="width:139px;">10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Moor LDPI</td>
			<td style="width:176px;">Moor Instruments</td>
			<td style="width:139px;">moorLDI2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">moorLDI Measurement software</td>
			<td style="width:176px;">Moor Instruments</td>
			<td style="width:139px;">v. 6.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hair Removal Cream</td>
			<td style="width:176px;">Nair</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods for acute and subacute murine hindlimb ischemia

מחלת עורקים היקפיים (PAD) הוא גורם מוביל לתחלואה ותמותה קרדיווסקולארית במדינות מפותחות, במודלים של בעלי החיים כי באופן מהימן לשחזר את המחלה האנושית נחוצים כדי לפתח טיפולים חדשים למחלה זו. המודל איסכמיה העכבר hindlimb כבר בשימוש נרחב למטרה זו, אך בפועל רמת גרימת איסכמיה איבר חריפה על ידי קשירת עורק הירך יכול לגרום נמק רקמות משמעותית, להתפשר על היכולת של החוקרים ללמוד את התגובות של כלי הדם ואת רקמת שריר השלד לאיסכמיה . גישה חלופית כדי קשירת עורק הירך היא אינדוקציה של חסימה בעורק הירך הדרגתית באמצעות נחשי ameroid. כאשר הניח סביב עורק הירך במיקומים זהים או שונים כמו באתרי של קשירת עורק הירך, התקנים אלה לחסום את העורק מעל 1 - 3 ימים, וכתוצאה מכך איסכמיה הדרגתית יותר, subacute. התוצאה היא נמק רקמות משמעותית פחות שריר השלד, which יכול לחקות באופן הדוק יותר את התגובות לראות PAD האדם. בגלל השפעות רקע גנטיות ותוצאות בשני הדגמים איסכמיה החריפים subacute, השיקול של זן העכבר נלמד חשוב בבחירת המודל הטוב ביותר. מאמר זה מתאר את ההליך הנכון ומיקום האנטומי של קשירות או נחשי ameroid על עורק עכבר הירך לגרום subacute או איסכמיה hindlimb החריפה בתוך העכבר.

זיהוי נכון של כלי דם hindlimb העכבר הוא קריטי כדי להבטיח שחזור של הטכניקות להשרות את שני subacute ו איסכמיה hindlimb החריפה, כפי שמתואר כאן. בנוסף השוני הפנימי במחקרים בבעלי חיים, גורמים אחרים יכולים להציג השתנות הדמיה זלוף דופלר לייזר (LDPI), כולל סוג של הרדמה, עמד...

Watch this Scientific Journal Video about Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia at JoVE.com

Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia

Surgical induction of hindlimb ischemia in the mouse is useful to examine angiogenesis, however this is compromised in certain inbred mouse strains that display marked ischemia-induced tissue necrosis. Methods are described to induce subacute limb ischemia using ameroid constrictors to circumvent this problem through the induction of gradual arterial occlusion.

שיטות חריפה subacute Murine Hindlimb איסכמיה

Peripheral artery disease (PAD) is a leading cause of cardiovascular morbidity and mortality in developed countries, and animal models that reliably ...

methods-for-acute-and-subacute-murine-hindlimb-ischemia

Research

JoVE Journal

Medicine

16.2K Views.  Duke University Medical Center. Surgical induction of hindlimb ischemia in the mouse is useful to examine angiogenesis, however this is compromised in certain inbred mouse strains that display marked ischemia-induced tissue necrosis. Methods are described to induce subacute limb ischemia using ameroid constrictors to circumvent this problem through the induction of gradual arterial occlusion. 

Video: Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia

Expired CO2 Measurement in Intubated or Spontaneously Breathing Patients from the Emergency Department

Carbon dioxide (CO2) along with oxygen (O2) share the role of being the most important gases in the human body. The measuring of expired CO2 at the mouth has solicited growing clinical interest among physicians in the emergency department for various indications: (1) surveillance et monitoring of the intubated patient; (2) verification of the correct positioning of an endotracheal tube; (3) monitoring of a patient in cardiac arrest; (4) achieving normocapnia in intubated head trauma patients; (5) monitoring ventilation during procedural sedation. The video allows physicians to familiarize themselves with the use of capnography and the text offers a review of the theory and principals involved. In particular, the importance of CO2 for the organism, the relevance of measuring expired CO2, the differences between arterial and expired CO2, the material used in capnography with their artifacts and traps, will be reviewed. Since the main reluctance in the use of expired CO2 measurement is due to lack of correct knowledge concerning the physiopathology of CO2 by the physician, we hope that this explanation and the video sequences accompanying will help resolve this limitation.

Expired CO2 Measurement in Intubated or Spontaneously Breathing Patients from the Emergency Department

This video describes how to perform CO2 measurement in intubated as well as spontaneously breathing patients. The main clinical indications refer to emergency situations: (1) verifying adequate positioning of an endotracheal tube; (2) achieving normocapnia in trauma patients; (3) monitoring ventilation in the case of procedural sedation.

פג תוקף CO 2 מדידה בחולים מחובר לצינורות נשימה באופן ספונטני או מהמחלקה חירום

Carbon dioxide (CO2) along with oxygen (O2) share the role of being the most important gases in the human body. The measuring of expired CO2 at the mouth ...

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ischemia and reperfusion. Immune response includes cytokine expression and release or secretion of endogenous ligands of innate immune receptors. Activation of innate immunity can potentially modulate infarct size. We have modified an existing murine closed-chest model using hanging weights which could be useful for studying myocardial pre- and postconditioning and the role of innate immunity in myocardial ischemia and reperfusion. This model allows animals to recover from surgical trauma before onset of myocardial ischemia.
Volatile anesthetics have been intensely studied and their preconditioning effect for the ischemic heart is well known. However, this protective effect precludes its use in open chest models of coronary artery ligation. Thus, another advantage could be the use of the well controllable volatile anesthetics for instrumentation in a chronic closed-chest model, since their preconditioning effect lasts up to 72 hours. Chronic heart diseases with intermittent ischemia and multiple hit models are other possible applications of this model.
For the chronic closed-chest model, intubated and ventilated mice undergo a lateral blunt thoracotomy via the 4th intercostal space. Following identification of the left anterior descending a ligature is passed underneath the vessel and both suture ends are threaded through an occluder. Then, both suture ends are passed through the chest wall, knotted to form a loop and left in the subcutaneous tissue. After chest closure and recovery for 5 days, mice are anesthetized again, chest skin is reopened and hanging weights are hooked up to the loop under ECG control.
At the end of the ischemia/reperfusion protocol, hearts can be stained with TTC for infarct size assessment or undergo perfusion fixation to allow morphometric studies in addition to histology and immunohistochemistry.

Surgical trauma induces an inflammatory response. Cytokines and endogenous ligands are known to modulate myocardial infarct size following ischemia and reperfusion. We present a modified closed-chest model of murine ischemia and reperfusion using hanging weights to minimize effects of thoracotomy.

דגם Murine סגור החזה של איסכמיה של שריר הלב reperfusion

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

A Research Method For Detecting Transient Myocardial Ischemia In Patients With Suspected Acute Coronary Syndrome Using Continuous ST-segment Analysis

Each year, an estimated 785,000 Americans will have a new coronary attack, or acute coronary syndrome (ACS). The pathophysiology of ACS involves rupture of an atherosclerotic plaque; hence, treatment is aimed at plaque stabilization in order to prevent cellular death. However, there is considerable debate among clinicians, about which treatment pathway is best: early invasive using percutaneous coronary intervention (PCI/stent) when indicated or a conservative approach (i.e., medication only with PCI/stent if recurrent symptoms occur).
There are three types of ACS: ST elevation myocardial infarction (STEMI), non-ST elevation MI (NSTEMI), and unstable angina (UA). Among the three types, NSTEMI/UA is nearly four times as common as STEMI. Treatment decisions for NSTEMI/UA are based largely on symptoms and resting or exercise electrocardiograms (ECG). However, because of the dynamic and unpredictable nature of the atherosclerotic plaque, these methods often under detect myocardial ischemia because symptoms are unreliable, and/or continuous ECG monitoring was not utilized.
Continuous 12-lead ECG monitoring, which is both inexpensive and non-invasive, can identify transient episodes of myocardial ischemia, a precursor to MI, even when asymptomatic. However, continuous 12-lead ECG monitoring is not usual hospital practice; rather, only two leads are typically monitored. Information obtained with 12-lead ECG monitoring might provide useful information for deciding the best ACS treatment.
Purpose. Therefore, using 12-lead ECG monitoring, the COMPARE Study (electroCardiographic evaluatiOn of ischeMia comParing invAsive to phaRmacological trEatment) was designed to assess the frequency and clinical consequences of transient myocardial ischemia, in patients with NSTEMI/UA treated with either early invasive PCI/stent or those managed conservatively (medications or PCI/stent following recurrent symptoms). The purpose of this manuscript is to describe the methodology used in the COMPARE Study.
Method. Permission to proceed with this study was obtained from the Institutional Review Board of the hospital and the university. Research nurses identify hospitalized patients from the emergency department and telemetry unit with suspected ACS. Once consented, a 12-lead ECG Holter monitor is applied, and remains in place during the patient's entire hospital stay. Patients are also maintained on the routine bedside ECG monitoring system per hospital protocol. Off-line ECG analysis is done using sophisticated software and careful human oversight.

Continuous 12-lead electrocardiographic (ECG) monitoring can identify transient myocardial ischemia, even when asymptomatic, among patients with suspected acute coronary syndrome (ACS). In this article we describe our method for initiating patient monitoring using a Holter device, downloading the ECG data for off-line analysis, and how to utilize the ECG software to identify transient ischemia.

שיטת מחקר לאיתור איסכמיה מיוקרדיאלית חלוף בחולים עם תסמונת כלילית חריפה חשד לשימוש בניתוח רציף ST-קטע

Each year, an estimated 785,000 Americans will have a new coronary attack, or acute coronary syndrome (ACS). The pathophysiology of ACS involves rupture ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often unreported mortality rates that may confound analyses. Bilateral renal pedicle clamping is commonly used to induce IR-AKI, but differences between effective clamp pressures and/or renal responses to ischemia between kidneys often lead to more variable results. In addition, shorter clamp times are known to induce more variable tubular injury, and while mice undergoing bilateral injury with longer clamp times develop more consistent tubular injury, they often die within the first 3 days after injury due to severe renal insufficiency. To improve post-injury survival and obtain more consistent and predictable results, we have developed two models of unilateral ischemia-reperfusion injury followed by contralateral nephrectomy. Both surgeries are performed using a dorsal approach, reducing surgical stress resulting from ventral laparotomy, commonly used for mouse IR-AKI surgeries. For induction of moderate injury BALB/c mice undergo unilateral clamping of the renal pedicle for 26 min and also undergo simultaneous contralateral nephrectomy. Using this approach, 50-60% of mice develop moderate AKI 24 hr after injury but 90-100% of mice survive. To induce more severe AKI, BALB/c mice undergo renal pedicle clamping for 30 min followed by contralateral nephrectomy 8 days after injury. This allows functional assessment of renal recovery after injury with 90-100% survival. Early post-injury tubular damage as well as post injury fibrosis are highly consistent using this model.

We describe models of moderate and severe ischemia-reperfusion-induced kidney injury in which the mice undergo unilateral renal pedicle clamping followed by simultaneous or delayed contralateral nephrectomy, respectively. These models consistently give rise to renal dysfunction and post-injury fibrosis, but injury severity and survival are dependent on mouse background, age and surgical equipment.

דגם איסכמיה reperfusion של פגיעה חריפה בכליות ופגיעים ההודעה פיברוזיס בעכברים

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are still occurring, particularly in reconstructive flap surgery. Multiple experimental flap models have been developed to analyze underlying causes and mechanisms and to investigate treatment strategies to prevent ischemic complications. The limiting factor of most models is the lacking possibility to directly and repetitively visualize microvascular architecture and hemodynamics. The goal of the protocol was to present a well-established mouse model affiliating these before mentioned lacking elements. Harder et al. have developed a model of a musculocutaneous flap with a random perfusion pattern that undergoes acute persistent ischemia and results in ~50% necrosis after 10 days if kept untreated. With the aid of intravital epi-fluorescence microscopy, this chamber model allows repetitive visualization of morphology and hemodynamics in different regions of interest over time. Associated processes such as apoptosis, inflammation, microvascular leakage and angiogenesis can be investigated and correlated to immunohistochemical and molecular protein assays. To date, the model has proven feasibility and reproducibility in several published experimental studies investigating the effect of pre-, peri- and postconditioning of ischemically challenged tissue.

The window of the murine dorsal skinfold chamber presented visualizes a zone of acute persistent ischemia of a musculocutaneous flap. Intravital epi-fluorescence microscopy permits for direct and repetitive assessment of the microvasculature and quantification of hemodynamics. Morphologic and hemodynamic results can further be correlated with histological and molecular analyses.

פגיעה ברקמות איסכמי בהגבו skinfold לשכת העכבר: דגם דש עור לחקור איסכמיה מתמיד חריפה

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Open Tracheostomy Gastric Acid Aspiration Murine Model of Acute Lung Injury Results in Maximal Acute Nonlethal Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute respiratory distress syndrome (ARDS), characterized by neutrophilic alveolitis, and injury to both alveolar epithelium and vascular endothelium. Clinically, ARDS is defined by acute onset of hypoxemia, bilateral patchy pulmonary infiltrates and non-cardiogenic pulmonary edema. Human studies have provided us with valuable information about the physiological and inflammatory changes in the lung caused by ARDS, which has led to various hypotheses about the underling mechanisms. Unfortunately, difficulties determining the etiology of ARDS, as well as a wide range of pathophysiology have resulted in a lack of critical information that could be useful in developing therapeutic strategies.
Translational animal models are valuable when their pathogenesis and pathophysiology accurately reproduce a concept proven in both in vitro and clinical settings. Although large animal models (e.g., sheep) share characteristics of the anatomy of human trachea-bronchial tree, murine models provide a host of other advantages including: low cost; short reproductive cycle lending itself to greater data acquisition; a well understood immunologic system; and a well characterized genome leading to the availability of a variety of gene deletion and transgenic strains. A robust model of low pH induced ARDS requires a murine ALI that targets mainly the alveolar epithelium, secondarily the vascular endothelium, as well as the small airways leading to the alveoli. Furthermore, a reproducible injury with wide differences between different injurious and non-injurious insults is important.
The murine gastric acid aspiration model presented here using hydrochloric acid employs an open tracheostomy and recreates a pathogenic scenario that reproduces the low pH pneumonitis injury in humans. Additionally, this model can be used to examine interaction of a low pH insult with other pulmonary injurious entities (e.g., food particles, pathogenic bacteria).

This protocol induces acute lung injury in a mouse that has close fidelity to the pathogenesis of acid pneumonitis observed in humans. We generate a maximal acute nonlethal low pH lung injury and account for differences in rodent-human anatomic respiratory structure using an open tracheostomy coupled with circumferential pressure release.

להרחיב הנשמת קיבת חומצה שאיפת Murine הדגם של פגיעה החריפה ריאות תוצאות ב מקסימלי חריפה קטלנית פגיעת ריאות

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute ...

Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate postprandial delivery of nutrients and hormones to insulin-sensitive tissues. We here describe a technique for combining intravital microscopy (IVM) and contrast-enhanced ultrasonography (CEUS) of the adductor compartment of the mouse hindlimb to simultaneously visualize muscle resistance arteries and perfusion of the microcirculation in vivo. Simultaneously assessing insulin's effect at multiple levels of the vascular tree is important to study relationships between insulin's multiple vasoactive effects and muscle perfusion. Experiments in this study were performed in mice. First, the tail vein cannula is inserted for the infusion of anesthesia, vasoactive compounds and ultrasound contrast agent (lipid-encapsulated microbubbles). Second, a small incision is made in the groin area to expose the arterial tree of the adductor muscle compartment. The ultrasound probe is then positioned at the contralateral upper hindlimb to view the muscles in cross-section. To assess baseline parameters, the arterial diameter is assessed and microbubbles are subsequently infused at a constant rate to estimate muscle blood flow and microvascular blood volume (MBV). When applied before and during a hyperinsulinemic-euglycemic clamp, combined IVM and CEUS allow assessment of insulin-induced changes of arterial diameter, microvascular muscle perfusion and whole-body insulin sensitivity. Moreover, the temporal relationship between responses of the microcirculation and the resistance arteries to insulin can be quantified. It is also possible to follow-up the mice longitudinally in time, making it a valuable tool to study changes in vascular and whole-body insulin sensitivity.

Insulin-induced vasodilation regulates muscle perfusion and increases the microvascular surface area (microvascular recruitment) available for solute exchange between blood and tissue interstitium. Combined intravital microscopy and contrast-enhanced ultrasonography is presented to simultaneously assess insulin&#39;s action at the larger vessels and the microcirculation in vivo.

משולב מיקרוסקופ Intravital משופרת לעומת זאת בדיקת אולטרה סאונד של Hindlimb העכבר ללמוד Vasodilation הנוצרות על-ידי אינסולין זלוף שריר

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard therapy, a considerable number of CLI patients are not suited for either surgical or endovascular revascularization. Angiogenic therapies are emerging as an option for these patients but are currently still under investigation. Before application in humans, those therapies must be tested in animal models and its mechanisms must be clearly understood. An animal model of hindlimb ischemia (HLI) has been developed by the ligation and excision of the distal external iliac and femoral arteries and veins in mice. A comprehensive panel of tests was assembled to assess the effects of ischemia and putative angiogenic therapies at functional, histologic and molecular levels. Laser Doppler was used for the flow measurement and functional assessment of perfusion. Tissue response was evaluated by the analysis of capillary density after staining with the anti-CD31 antibody on histological sections of gastrocnemius muscle and by measurement of collateral vessel density after diaphonization. Expression of angiogenic genes was quantified by RT-PCR targeting selected angiogenic factors exclusively in endothelial cells (ECs) after laser capture microdissection from mice gastrocnemius muscles. These methods were sensitive in identifying differences between ischemic and non-ischemic limbs and between treated and non-treated limbs. This protocol provides a reproducible model of CLI and a framework for testing angiogenic therapies.

Here, a critical hindlimb ischemia experimental model is presented followed by a battery of functional, histologic and molecular tests&#160;to assess the effectiveness of angiogenic therapies.&#8203;

הערכת אנגיוגנזה תרפויטי במודל של מורטין של איסכמיה החוצה

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, cardiac stem cell therapy is studied by delivering SCs concurrently with the induction of myocardial injury. However, this approach presents two significant limitations: the early hostile pro-inflammatory ischemic environment may affect the survival of transplanted SCs, and it does not represent the subacute infarction scenario where SCs will likely be used. Here we describe a two-part series of surgical procedures for the induction of ischemia-reperfusion injury and delivery of mesenchymal stem cells (MSCs). This method of stem cell administration may allow for the longer viability and retention around damaged tissue by circumventing the initial immune response. A model of ischemia reperfusion injury was induced in mice accompanied by the delivery of mesenchymal stem cells (3.0 x 105), stably expressing the reporter gene firefly luciferase under the constitutively expressed CMV promoter, intramyocardially 7 days later. The animals were imaged via ultrasound and bioluminescent imaging for confirmation of injury and injection of cells, respectively. Importantly, there was no added complication rate when performing this two-procedure approach for SC delivery. This method of stem cell administration, collectively with the utilization of state-of-the-art reporter genes, may allow for the in vivo study of viability and retention of transplanted SCs in a situation of chronic ischemia commonly seen clinically, while also circumventing the initial pro-inflammatory response. In summary, we established a protocol for the delayed delivery of stem cells into the myocardium, which can be used as a potential new approach in promoting regeneration of the damaged tissue.

Stems cells are continuously investigated as potential treatments for individuals with myocardial damage, however, their decreased viability and retention within injured tissue can impact their long-term efficacy. In this manuscript we describe an alternative method for stem cell delivery in a murine model of ischemia reperfusion injury.

אספקה תוך-תוך-קרדיאלית מושהית של תאי גזע לאחר פציעת איסכמיה רפרציה במודל מורין

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...