נתמך בחלקו על ידי מענק NIH (R43/44CA122444) ומענק DOD BRCP (W81XWH-06-1-0682) לי.ל..

1. לדוגמא, ציוד, ומגיבים הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים דגימת רקמה לגושים של 3-4 מ&quot;מ בעובי, לתקן ב10% פורמלין שנאגרו ניטראלי הטרי ל16-32 שעות בטמפרטורת חדר (25 ° C) ולהטביע בפרפין. חותכים FFPE למקטעים בעובי מיקרומטר 5 ± 1 מלוקי FFPE, הר סעיפים בשקופיות ואוויר יבש. הערה: ניתן לאחסן את השקופיות בטמפרטורת חדר מתחת להתייבשות לתקופה של עד 3 חודשים. שקופיות הרקמה הרכובים צריכים להיות אפויות ביבשה מעל ב60 מעלות צלזיוס במשך שעה 1 לפני assay RNAscope. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להביא הכלאה תנור ל40 ° C. מניחים נייר humidifying בבקרת לחות מגש. הוסף 50 dH מיליליטר 2 O לנייר humidifying להרטיב אותו לחלוטין. הכנס את מגש המכוסה לתנור לprewarm לפחות 30 דקות לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך 700 מיליליטר 1x Pretreat 2 פתרון (10 NL, חיץ ציטרט pH 6) על ידי דילול 10x Pretreatment פתרון בDH 2 O. מחממים את פתרון 1x Pretreat 2 לרתיחה ומייntain הטמפרטורה בין C ° 100-104 תוך מניעת יתר הרתיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות 3 L 1x הצפת לשטוף (SSC 0.1x) על ידי דילול prewarmed 50x הצפת לשטוף ב DH 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכין 2 x 200 מיליליטר של קסילן ו2 x 200 מיליליטר של EtOH 100% לdeparaffinization מתחת למכסת מנוע קטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 50% פתרון מכתים Hematoxylin ומגיב bluing (0.01% מים אמוניה) להודעה הכתמה מתחת למכסה המנוע קטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 200 מיליליטר של קסילן, 200% מיליליטר של 70, ו -2 x 200 מיליליטר של EtOH 100% להתייבשות מתחת למכסת מנוע קטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדיקות Prewarm יעד ב40 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות ולהביא RTU איתור מגיב ערכה לטמפרטורת חדר, כוללים RTU Amp1, Amp2, AMP3, Amp4, Amp 5, בראון, וAmp6-בראון, למעט DAB אב הצבע בראון ובראון-B . </li></ol> 2. RNAscope Assay Deparaffinization והתייבשות לאחר אפייה, deparaffinize סעיפי רקמות בקסילן במשך דקות 2 x 5 עם תסיסה מתמדת, ומייבשבEtOH 100% עבור 2 x 3 דקות עם תסיסה תכופה. אוויר יבש למשך 5 דקות ולצייר מחסום הידרופובי סביב קטע הרקמה עם הידרופובי מכשול פן. Pretreatments <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה סעיפי רקמות עם 1 Pretreat 10 דקות ב RT למרווית פעילות peroxidase אנדוגני, לשטוף ב DH 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה סעיפי רקמות עם Pretreat 2 לשמור על טמפרטורת רתיחה במשך 15 דקות לאחזור RNA, לשטוף פעמיים ב DH 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה סעיפי רקמות עם Pretreat 3 ל30 דקות ב40 ° C לעיכול חלבון בתנור HybEZ, לשטוף פעמיים ב DH 2 O. </li></ol> יעד Probe הכלאה בדיקות יעד בריכת 7 HPV-HR כוללות: HPV16, 18, 31 ב, 33, 35, 52, ו58. הוספת בדיקות HPV, יוביקוויטין C (UBC) ובדיקות dapB גן חיידקים בנפרד על שלושה סעיפי רקמות adjacently. להכליא ב40 מעלות צלזיוס בתנור במשך 2שעה, ואז לשטוף במאגר 1x לשטוף עבור 2 x 2 דקות ב RT. אות הגברה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה סעיפי רקמות עם Amp1 (מגבר) ל30 דקות ב40 ° C, Amp2 (מפחית רקע) ל15 דקות ב 40 ° C, AMP3 (מגבר) ל30 דקות ב40 מעלות צלזיוס, וAmp4 (בדיקה תווית) ל15 דקות ב40 מעלות צלזיוס בתנור HybEZ. לאחר כל שלב הכלאה, יש לשטוף במאגר 1x לשטוף עבור 2 x 2 דקות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה סעיפי רקמות עם Amp5 ל30 דקות וAmp6 15 דקות ב RT. לאחר כל שלב דגירה, לשטוף במאגר 1x לשטוף עבור 2 x 2 דקות ב RT. </li></ol> זיהוי אות דגירה סעיפי רקמות עם 1:01 תערובת DAB על ידי ערבוב נפח שווה של בראון, ובראון-B עבור 10 דקות ב RT, לשטוף פעמיים ב DH 2 O. Counterstaining <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt; חלקי רקמת כתם עם 50% פתרון Hematoxylin למשך 2 דקות ב RT, לשטוף עם DH 2 O עד שקופיות ברורות ואילו רקמות יישארו סגולות. טובלים מחליק לתוך אמוניה 0.01% ב DH 2 O ל5x ואחריו עם 5 מטבלים ב DH 2 O. השמה Slide מייבש את חלקי רקמות ב70%, 100%, וEtOH 100% עבור 2 דקות כל אחד, קסילן במשך 5 דקות, לעלות עם תקשורת הרכבה מבוססת קסילן.

<ol>
	<li>Parkin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+health+burden+of+infection-associated+cancers+in+the+year+2002.">The global health burden of infection-associated cancers in the year 2002.</a> Int. J. Cancer. 118 (12), 3030-3044 (2006).</li><li>Chaturvedi, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+papillomavirus+and+rising+oropharyngeal+cancer+incidence+in+the+United+States.">Human papillomavirus and rising oropharyngeal cancer incidence in the United States.</a> J. Clin. Oncol. 29 (32), 4294-4301 (2011).</li><li>Ang, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+papillomavirus+and+survival+of+patients+with+oropharyngeal+cancer.">Human papillomavirus and survival of patients with oropharyngeal cancer.</a> N. Engl. J. Med. 363 (1), 24-35 (2010).</li><li>Smeets, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+algorithm+for+reliable+detection+of+human+papillomavirus+in+paraffin+embedded+head+and+neck+cancer+specimen.">A novel algorithm for reliable detection of human papillomavirus in paraffin embedded head and neck cancer specimen.</a> Int. J. Cancer. 121 (11), 2465-2472 (2007).</li><li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAscope:+a+novel+in+situ+RNA+analysis+platform+for+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissues.">RNAscope: a novel in situ RNA analysis platform for formalin-fixed, paraffin-embedded tissues.</a> J. Mol. Diagn. 14 (1), 22-29 (2012).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+regulation+of+NRG1+isoform+expression+by+neuronal+activity.">Specific regulation of NRG1 isoform expression by neuronal activity.</a> J. Neurosci. 31 (23), 8491-8501 (2011).</li><li>Yan, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intestinal+stem+cell+markers+Bmi1+and+Lgr5+identify+two+functionally+distinct+populations.">The intestinal stem cell markers Bmi1 and Lgr5 identify two functionally distinct populations.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109 (2), 466-471 (2012).</li><li>Payne, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viable+circulating+tumour+cell+detection+using+multiplex+RNA+in+situ+hybridisation+predicts+progression-free+survival+in+metastatic+breast+cancer+patients.">Viable circulating tumour cell detection using multiplex RNA in situ hybridisation predicts progression-free survival in metastatic breast cancer patients.</a> Br. J. Cancer. 106 (11), 1790-1797 (2012).</li><li>Bordeaux, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+in+situ+measurement+of+estrogen+receptor+mRNA+predicts+response+to+tamoxifen.">Quantitative in situ measurement of estrogen receptor mRNA predicts response to tamoxifen.</a> PLoS One. 7 (5), (2012).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+quantitative+RNA+in+situ+hybridization+for+resolution+of+equivocal+and+heterogeneous+ERBB2+(HER2)+status+in+invasive+breast+carcinoma.">Automated quantitative RNA in situ hybridization for resolution of equivocal and heterogeneous ERBB2 (HER2) status in invasive breast carcinoma.</a> J. Mol. Diagn. 15 (2), 210-219 (2013).</li><li>Tubbs, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasensitive+RNA+in+situ+Hybridization+for+Detection+of+Restricted+Clonal+Expression+of+Low+Abundance+Immunoglobulin+Light+Chain+mRNA+in+B-Cell+Lymphoproliferative+Disorders.">Ultrasensitive RNA in situ Hybridization for Detection of Restricted Clonal Expression of Low Abundance Immunoglobulin Light Chain mRNA in B-Cell Lymphoproliferative Disorders.</a> Am. J. Surg. Pathol. In press, (2013).</li><li>Ukpo, O. C., Flanagan, J. J., Ma, X. J., Luo, Y., Thorstad, W. L., Lewis, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-risk+human+papillomavirus+E6/E7+mRNA+detection+by+a+novel+in+situ+hybridization+assay+strongly+correlates+with+p16+expression+and+patient+outcomes+in+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma.">High-risk human papillomavirus E6/E7 mRNA detection by a novel in situ hybridization assay strongly correlates with p16 expression and patient outcomes in oropharyngeal squamous cell carcinoma.</a> Am. J. Surg. Pathol. 35 (9), 1343-1350 (2011).</li><li>Lewis, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptionally-active+high-risk+human+papillomavirus+is+rare+in+oral+cavity+and+laryngeal/hypopharyngeal+squamous+cell+carcinomas--a+tissue+microarray+study+utilizing+E6/E7+mRNA+in+situ+hybridization.">Transcriptionally-active high-risk human papillomavirus is rare in oral cavity and laryngeal/hypopharyngeal squamous cell carcinomas--a tissue microarray study utilizing E6/E7 mRNA in situ hybridization.</a> Histopathology. 60 (6), 982-991 (2012).</li><li>Lewis, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+p16+staining+in+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma:+extent+and+pattern+correlate+with+human+papillomavirus+RNA+status.">Partial p16 staining in oropharyngeal squamous cell carcinoma: extent and pattern correlate with human papillomavirus RNA status.</a> Mod. Pathol. 25 (9), 1212-1220 (2012).</li><li>Bishop, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+transcriptionally+active+high-risk+HPV+in+patients+with+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+as+visualized+by+a+novel+E6/E7+mRNA+in+situ+hybridization+method.">Detection of transcriptionally active high-risk HPV in patients with head and neck squamous cell carcinoma as visualized by a novel E6/E7 mRNA in situ hybridization method.</a> Am. J. Surg. Pathol. 36 (12), 1874-1882 (2012).</li><li>Schache AG, ., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+novel+diagnostic+standard+in+HPV-positive+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma.">Validation of a novel diagnostic standard in HPV-positive oropharyngeal squamous cell carcinoma.</a> Br. J. Cancer. 108 (6), 1332-1339 (2013).</li><li>Mehrad, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Papillary+Squamous+Cell+Carcinoma+of+the+Head+and+Neck:+Clinicopathologic+and+Molecular+Features+With+Special+Reference+to+Human+Papillomavirus.">Papillary Squamous Cell Carcinoma of the Head and Neck: Clinicopathologic and Molecular Features With Special Reference to Human Papillomavirus.</a> Am. J. Surg. Pathol. Jun. , (2013).</li><li>Jordan, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+methods+for+oropharyngeal+cancer+HPV+status+determination+in+US+cooperative+group+trials.">Validation of methods for oropharyngeal cancer HPV status determination in US cooperative group trials.</a> Am. J. Surg. Pathol. 36, 945-954 (2012).</li><li>Hammond, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Society+of+Clinical+Oncology/College+of+American+Pathologists+guideline+recommendations+for+immunohistochemical+testing+of+estrogen+and+progesterone+receptors+in+breast+cancer+(unabridged+version).">American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists guideline recommendations for immunohistochemical testing of estrogen and progesterone receptors in breast cancer (unabridged version).</a> Arch. Pathol. Lab. Med. 134 (7), 48-72 (2010).</li></ol>

כל המחברים הם מועסקים על ידי ושל המניה באבחון מתקדם Cell, Inc

Assay RNAscope HPV אפשר להדמיה ישירה של E6/E7 mRNA באתרו בראש הקשורים לנגיף וקרצינומה של תאי קשקש בצוואר. Assay RNAscope תואם באופן מלא עם רקמת גידול קבוע באופן שיגרתי ומשמר את מורפולוגיה רקמות למתאמי histopathological (איור 2). יתרון מפתח של assay RNAscope על פני שיטות קונבנציונליות CISH הוא שזה דווקא מגביר את אותות ההכלאה (2B דמויות ו2E) ללא הגברת רעשי הרקע (2C דמויות ו2F). בפועל, הליך assay RNAscope HPV יכול להסתיים בתוך 8 שעות או בנוחות חילק במשך יומיים. Assay RNAscope HPV כבר בשימוש כדי לקבוע את מצב HPV בראש וקרצינומה של תאי קשקש צוואר 12-16, הוכחת רגישות 97% וסגוליות 93% באמצעות qRT-PCR כשיטת התייחסות 16. Chr הקונבנציונליISH omogenic לHR-HPV DNA הוא מאוד ספציפי, אבל יש לו רגישות של ~ 80% 12. מכתים immunohistochemical (IHC) לp16 הסמן הפונדקאי הסלולרי מדגים רגישות מעולה, אך עשוי להפיק תוצאות חיוביות כוזבות 15,18, במיוחד בסרטן הראש וצוואר nonoropharyngeal 15. השיטה הנוכחית &quot;תקן זהב&quot; של qRT-PCR לHPV E6/E7 mRNA זיהוי דורשת רקמות קפואים לתוצאות אופטימליות, והוא מורכב מבחינה טכנית, אשר מגבילה את השימוש בו למעבדת המחקר בלבד. בנוסף, הוא דורש מיצוי RNA שהופך אותו בלתי אפשרי, כדי לקשר בין ביטוי HR-HPV E6/E7 mRNA עם histopathology. ישנם מספר גורמים קריטיים להצלחה של assay RNAscope. ראשית, לקבלת התוצאות הטובות ביותר, צריכה להיות קבועות ברקמות 10% פורמלין שנאגרו ניטראלי הטרי בטמפרטורת חדר למשך שעה 16-32 פי הנחיות ASCO / CAP 19. שנית, תנור HybEZ מומלץ מאוד שכן הוא מאפשרזה שליטה אופטימלית של טמפרטורה ולחות להכלאת בדיקה וצעדי הגברה אות. שלישית, חשוב להסיר את מאגרי שיורי עודפים לפני כל צעד, אבל עדיין לשמור על קטע הרקמה מההתייבשות במהלך כל אחד מהשלבים הבאים. הליך RNAscope הידני שתואר כאן כבר אוטומטי לחלוטין על מערכת אוטומטית מכתים מסחרית שקופיות 10. זה אמור להקל מאוד סטנדרטיזציה של תנאי assay ועבודת כפות יקרות חיסכון במעבדות פתולוגיה קליניות. בנוסף, תוכנת ניתוח תמונה ייעודית פותחה 10 לזהות באופן אוטומטי את התאים ואותות מכתים בשקופית דיגיטלית, שאמורה לעזור לחסל את הסובייקטיביות ולשפר את שחזור בשערו. לסיכום, assay RNAscope HPV מזהה הנוכחות של תעתיקי HR-HPV E6/E7 mRNA באתרו ברקמות FFPE. יש לו עבודה כי הוא מכיר את labora פתולוגיה הקליניטורים על ידי התרת ההדמיה ישירות אלה בסעיפי רקמות. היא מציעה פלטפורמה אידיאלית לבחינה (FFPE) דגימות רקמה, ויכולה להיות מאומצת בקלות על ידי מעבדות פתולוגיה אבחון.

חשבונות זיהום וירוס הפפילומה אנושי בסיכון גבוהה (HR-HPV) לכ 5% מכל מקרי הסרטן בעולם 1. השכיחות של סרטן הלוע התחתון הקשורים לנגיף גדלה בעשורים האחרונים, במיוחד בקרב גברים. קרצינומה חיובית ל-HPV הלוע התחתון של תאים קשקשיים (OPSCC) צפויה להוות רוב של כל סוגי סרטן הראש והצוואר בארצות הברית בשנים הבאות 20 2. קרצינומה של תאי קשקש הלוע התחתון הנגרמת על ידי HPV קשורה להישרדות נוחה, ומעמד HPV הגידול הוא גורם מנבא חזק ועצמאי להישרדות 3. ראיות להפעלת תעתיק של אונקוגנים נגיפיים E6 ו E7 נחשבת את תקן הזהב לנוכחות של HPV הרלוונטי קליני 4. עם זאת, זיהוי של E6/E7 mRNA מרקמת גידול טרי על ידי טכניקת RT-PCR הוא לא מעשי בפרקטיקה קלינית שגרתית והיה מוגבל למעבדות המחקר. לאחרונה, אנו havהדואר פיתח טכנולוגיה חדשה ISH RNA נקראת RNAscope, המאפשרת זיהוי זמנית בתאי אדם עם רגישות מולקולת RNA בודדת בדגימות פרפין הקבוע פורמלין מוטבעים רקמות (FFPE) 5-10. אנחנו סיפקנו שלושה קווים של ראיות לזיהוי מולקולה בודדת 5. ראשית, מערכת ההגברה ועיצוב אות הבדיקה RNAscope אפשרה זיהוי של עותק יחיד מטרות הדנ&quot;א הגנומי HER2 בהלה וSK-BR-3 שורות תאים. שנית, בהשוואה לאותות הדנ&quot;א הגנומי HER2, חלוקת עוצמות הניאון של נקודות אות HER2-mRNA בתאי הלה הייתה בקנה אחד עם מולקולה אחת לכל נקודה. שלישית, מספר נקודות אות HER2-mRNA לכל תא מתאים מקרוב את עותק מספר HER2-mRNA שהוערך על ידי assay כימות מבוסס פתרון, התומך בזיהוי מולקולה בודד נוסף. יתר על כן, counterstaining של גרעינים עם DAPI במיקרוסקופ פלואורסצנטי או עם hematoxylin במיקרוסקופ שדה בהיר מאפשר הדמיה של גרעינים בודדים, WHich בתורו מאפשר איתור וכימות של מטרות RNA על בסיס תא בודד 10. היכולת לנתח ביטוי גנים באתר בדגימות קליניות שגרתיות הופכת RNAscope פלטפורמה מבטיחה לפתולוגיה אבחון, במיוחד אלה מבוססי מבחני קטע רקמת FFPE 10,11. פיתחנו assay HPV מבוסס RNAscope לזהות E6/E7 mRNA של שבעה גנוטיפים בסיכון גבוה של HPV (HPV16, 18, 31 ב, 33, 35, 52, ו58) באמצעות בריכה של בדיקות גנוטיפ ספציפי. המחקרים האחרונים שלנו בOPSCC הראו כי assay RNAscope HPV הוא רגיש מאוד וספציפי בקביעת מעמד HPV על רקמות FFPE 12-17, וגם מודיע הפרוגנוזה בOPSCC 12,16. העיקרון של טכנולוגית RNAscope כבר תואר בעבר 5. כאן אנו מתארים פרוטוקול assay RNAscope המלא ולהדגים את השימוש בו בזיהוי של HR-HPV בסעיפי רקמת גידול FFPE.

&#160;
<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="580">
	<colgroup>
		<col span="4" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="39">
			<td height="60" rowspan="2" style="height:60px;width:145px;">SuperFrost Plus slides</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Fisher Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">12-550-15</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:145px;">HybEZ Oven, Tray, and Rack</td>
			<td style="width:145px;">Advanced Cell Diagnostics</td>
			<td style="width:145px;">310011, 310012, 310014</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:145px;">RNAscope 2.0 FFPE Reagent Kit - Brown</td>
			<td style="width:145px;">Advanced Cell Diagnostics</td>
			<td style="width:145px;">310035</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:145px;">RNAscope HPV-HR7 Probe for HPV 16,18,31,33,35,52 and 58, E6/E7 mRNA</td>
			<td style="width:145px;">Advanced Cell Diagnostics</td>
			<td style="width:145px;">312351</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:145px;">ImmEdge Hydrophobic Barrier Pen</td>
			<td style="width:145px;">Vector Laboratory</td>
			<td style="width:145px;">H-4000</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:145px;">100% EtOH</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">American Master Tech Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">ALREAGAL</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="41" rowspan="2" style="height:41px;width:145px;">Xylene&#160;</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Fisher Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">X3P-1GAL</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:145px;">Gill&#8217;s Hematoxylin I</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">American Master Tech Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">HXGHE1LT</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:145px;">Ammonia hydroxide</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">320145-500mL</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:145px;">Cover Glass 24x50 mm</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Fisher Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">12-545-F</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="41" rowspan="2" style="height:41px;width:145px;">Hot Plate</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Fisher Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">11-300-49SHP</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="99">
			<td height="120" rowspan="2" style="height:120px;width:145px;">Drying Oven</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Capable of holding temperature at 60 &#177; 1&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="99">
			<td height="120" rowspan="2" style="height:120px;width:145px;">Water Bath</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Capable of holding temperature at 40 &#177; 1&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
	</tbody>
</table>

rnascope for in situ detection of transcriptionally active human papillomavirus in head and neck squamous cell carcinoma

&quot;תקן הזהב&quot; לגילוי HPV בשעור הוא ההפגנה של HPV בסיכון גבוה תעתיק הפעיל ברקמת גידול. עם זאת, זיהוי של E6/E7 mRNA על ידי תגובה כמותית הפוכה שעתוק פולימראז שרשרת (qRT-PCR) דורש מיצוי RNA שהורס את הקשר רקמת הגידול קריטי עבור מתאם מורפולוגיים וכבר קשה להיות מאומצים בפרקטיקה קלינית שגרתית. RNA שפותח לאחרונה שלנו בטכנולוגית הכלאה באתר, RNAscope, מאפשר הדמיה ישירה של RNA ב, רקמות קבועות פורמלין פרפין, מוטבע (FFPE) עם רגישות מולקולה בודדת ורזולוציה תא בודדת, המאפשרת רגיש מאוד וספציפי בניתוח באתרו של כל סמן ביולוגי RNA בדגימות קליניות שגרתיות. Assay RNAscope HPV נועד לזהות את ה-mRNA E6/E7 של שבעה גנוטיפים HPV בסיכון גבוה (HPV16, 18, 31 ב, 33, 35, 52, ו58) באמצעות בריכה של בדיקות גנוטיפ ספציפי. זה הוכיח רגישות מעולהוספציפיות נגד השיטה הנוכחית &quot;תקן זהב&quot; של גילוי E6/E7 mRNA ידי qRT-PCR. מצב HPV נקבע על ידי RNAscope הוא מאוד פרוגנוסטיים של תוצאה קלינית בחולי סרטן הלוע התחתון.

זרימת העבודה assay RNAscope HPV יש assay RNAscope זרימת עבודה יעילה מאוד, כי הוא דומה לIHC (איור 1). היא מורכבת מארבעה שלבים עיקריים: pretreatments, הכלאה, amplifications אות, וזיהוי. היא מעסיקה אסטרטגיית עיצוב חללית ייחודית המבטיחה הגברה אות באיכות גבוהה 5. ב assay RNAscope HPV, שבעה סטי הבדיקה HR-HPV הם אספו, כל מוכרים על ידי אותה מערכת ההגברה האות קשורה לחזרה peroxidase (HRP). אותות הכלאה ספציפיים מזוהים כמו משקעים חומים שהוקמו על ידי HRP זרז תגובת chromogenic באמצעות DAB כמצע, אשר ניתן דמיינו בקלות על ידי מיקרוסקופ שדה בהיר הסטנדרטי. מכתים נציג לאיתור HPV איור 2 מראה תמונות דוגמא מסעיפי FFPE מוכתמים של ראש וצוואר קרצינומה של תאי קשקש. במקרה חיובי ל-HPV (איור2A יור), בדיקות HR-HPV זוהו אותות punctate חזקים במיוחד בתאים הסרטניים. הבדיקה UBC זוהתה אותות cytoplasmic punctate רבים בשני תאים סרטניים ותאים סטרומה (איור 2). הבדיקה dapB גן החיידקים הפגינה רקע נקי (איור 2 ג). במקרה של HPV שלילי, שניהם הבדיקה HR-HPV ובדיקת dapB זוהו שום אותות (2D דמויות ו2F), ואילו אותות חזקים התגלו באמצעות הבדיקה UBC (2E איור). ב assay זה, UBC משמש בקרה חיובית כלהעריך איכות RNA רקמות וdapB כביקורת שלילית לאותות מרקע. הניקוד לקביעת מעמד HPV כרוך לבחון את כל שלוש שקופיות לכל מקרה ומקרה. רמת הצביעה בשקופית הביקורת השלילית שקופיות (dapB) משמשת כרף קבלה: חיוביות HPV מוגדרת על ידי הנוכחות של cytoplasmic punctate ו / או כתמים גרעיניים שהיו מעל לאות בשקופית dabpB. <pclass = &quot;jove_content&quot; עבור: לשמור-together.within-page = &quot;תמיד&quot;&gt; <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51426/51426fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51426/51426fig1.jpg" /> איור 1. תרשים זרימה של assay RNAscope. איור של זרימת העבודה assay RNAscope. Assay RNAscope מכיל 4 שלבים עיקריים, pretreatments, הכלאת בדיקה היעד, הגברה אות וזיהוי אותות. הליך assay כולו יכול להסתיים ב8 שעות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51426/51426fig1highres.jpg" target="_blank">לחץ כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.</a> <img alt="איור 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51426/51426fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51426/51426fig2.jpg" /> איור 2. תמונות דוגמא של שקופיות צבעוניות RNAscope. (בקרה שלילית) סעיפי FFPE מוכתמים עם בדיקות לHR-HPV, UBC (בקרה חיובית) וdapBמשני מקרי HNSCC. AC. מקרה חיובי ל-HPV. , ביטוי HR-HPV E6/E7 mRNA בתאי גידול. הבלעה, הגדלה 40X להראות אותות punctate. B ו-C) סעיפי רקמות סמוכים מראים מכתים חיובי UBC (B) ושלילי לdapB (C), בהתאמה. מקרה HPV שלילי) DF. ד) לא מכתים עבור HPV E6/E7 mRNA בדומה לביקורת השלילית dapB (F). E) UBC מכתים חיובי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51426/51426fig2highres.jpg" target="_blank">לחץ כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.</a>

Watch this Scientific Journal Video about RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma at JoVE.com

RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

הנוכחות של HPV בסיכון גבוה ברקמת גידול ראש והצוואר קשורה בתוצאות טובות. RNA שפותח לאחרונה בטכניקת הכלאה באתר שנקרא RNAscope מאפשר הדמיה ישירה של HPV E6/E7 mRNA בסעיפי רקמות FFPE.

RNAscope עבור<em&gt; באתרו</em&gt; איתור של נגיף הפפילומה אנושי תעתיק פעיל בראש וצוואר קשקש קרצינומה של תאים

The &#39;gold standard&#39; for oncogenic HPV detection is the demonstration of transcriptionally active high-risk HPV in tumor tissue. However, detection ...

rnascope-for-situ-detection-transcriptionally-active-human

Research

JoVE Journal

Medicine

RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

27.0K Views.  Advanced Cell Diagnostics, Inc..  הנוכחות של HPV בסיכון גבוה ברקמת גידול ראש והצוואר קשורה בתוצאות טובות. RNA שפותח לאחרונה בטכניקת הכלאה באתר שנקרא RNAscope מאפשר הדמיה ישירה של HPV E6/E7 mRNA בסעיפי רקמות FFPE. 

Video: RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

Multi-פוטון הדמיה של הפלישה תאים סרטניים במודל עכבר orthotopic של קרצינומה של תאים קשקשיים אוראלי

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Primary Culture of Human Vestibular Schwannomas

Vestibular schwannomas (VSs) represent Schwann cell (SC) tumors of the vestibular nerve, compromising 10% of all intracranial neoplasms. VSs occur in either sporadic or familial (neurofibromatosis type 2, NF2) forms, both associated with inactivating defects in the NF2 tumor suppressor gene. Treatment for VSs is generally surgical resection or radiosurgery, however the morbidity of such procedures has driven investigations into less invasive treatments. Historically, lack of access to fresh tissue specimens and the fact that schwannoma cells are not immortalized have significantly hampered the use of primary cultures for investigation of schwannoma tumorigenesis. To overcome the limited supply of primary cultures, the immortalized HEI193 VS cell line was generated by transduction with HPV E6 and E7 oncogenes. This oncogenic transduction introduced significant molecular and phenotypic alterations to the cells, which limit their use as a model for human schwannoma tumors. We therefore illustrate a simplified, reproducible protocol for culture of primary human VS cells. This easily mastered technique allows for molecular and cellular investigations that more accurately recapitulate the complexity of VS disease.

Vestibular Schwannomas (VSs) are non-malignant tumors of Schwann cell (SC) origin, associated with mutations in the NF2 tumor suppressor gene. We report a reproducible, efficient protocol for primary human VS cell culture that allows for molecular and cellular experimental manipulation and analysis and recapitulates the heterogeneous nature of human disease.

העיקרית של תרבות האנושית שיווי המשקל schwannomas

Vestibular schwannomas (VSs) represent Schwann cell (SC) tumors of the vestibular nerve, compromising 10% of all intracranial neoplasms. VSs occur in ...

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and highly vascularized, making it an ideal system for tumor implantation. Furthermore, the CAM contains extracellular matrix proteins such as fibronectin, laminin, collagen, integrin alpha(v)beta3, and MMP-2, making it an attractive model to study tumor invasion and metastasis. Scientists have long taken advantage of the physiology of the CAM by using it as a model of angiogenesis. More recently, the CAM assay has been modified to work as an in vivo xenograft model system for various cancers that bridges the gap between basic in vitro work and more complex animal cancer models. The CAM assay allows for the study of tumor growth, anti-tumor therapies, and pro-tumor molecular pathways in a biologically relevant system that is both cost- and time-effective. Here, we describe the development of CAM xenograft model of hepatocellular carcinoma (HCC) with embryonic survival rates of up to 93% and reliable tumor take leading to growth of three-dimensional, vascularized tumors.

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane CAM Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) is immunodeficient and highly vascularized, making it a natural in vivo model of tumor growth and angiogenesis. In this protocol, we describe a reliable method of growing three-dimensional, vascularized hepatocellular carcinoma (HCC) tumors using the CAM assay.

<em&gt; באוב</emAssay&gt; אפרוח chorioallantoic ממברנה (CAM) כמודל xenograft יעיל של Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and ...

Isolation and Characterization of a Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Subpopulation Having Stem Cell Characteristics

Despite advances in the understanding of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC) progression, the five-year survival rate remains low due to local recurrence and distant metastasis. One hypothesis to explain this recurrence is the presence of cancer stem-like cells (CSCs) that present inherent chemo- and radio-resistance. In order to develop new therapeutic strategies, it is necessary to have experimental models that validate the effectiveness of targeted treatments and therefore to have reliable methods for the identification and isolation of CSCs. To this end, we present a protocol for the isolation of CSCs from human HNSCC cell lines that relies on the combination of two successive cell sortings performed by fluorescence activated cell sorting (FACS). The first one is based on the property of CSCs to overexpress ATP-Binding Cassette (ABC) transporter proteins and thus exclude, among others, vital DNA dyes such as Hoechst 33342. The cells sorted with this method are identified as a &#34;side population&#34; (SP). As the SP cells represent a low percentage (&#60;5%) of parental cells, a growing phase is necessary in order to increase their number before the second cell sorting. The next step allows for the selection of cells that possess two other HNSCC stem cell characteristics i.e. high expression level of the cell surface marker CD44 (CD44high) and the over-expression of aldehyde dehydrogenase (ALDHhigh). Since the use of a single marker has numerous limitations and pitfalls for the isolation of CSCs, the combination of SP, CD44 and ALDH markers will provide a useful tool to isolate CSCs for further analytical and functional assays requiring viable cells. The stem-like characteristics of CSCs was finally validated in vitro by the formation of tumorispheres and the expression of &#946;-catenin.

Understanding the role of cancer stem-like cells in tumor recurrence and resistance to therapies has become a topic of great interest in the last decade. This article describes the isolation and characterization of the sub-population of cancer stem-like cells from head and neck squamous carcinoma cell lines (HNSCC).

בידוד ואפיון של ראש וצוואר קשקש Cell Carcinoma-אוכלוסיית מאפייני תאי גזע לאחר

Despite advances in the understanding of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC) progression, the five-year survival rate remains low due to local ...

Posterior Semicircular Canal Approach for Inner Ear Gene Delivery in Neonatal Mouse

Inner ear gene therapy offers great promise as a potential treatment for hearing loss and dizziness. One of the critical determinants of the success of inner ear gene therapy is to find a delivery method which results in consistent transduction efficiency of targeted cell types while minimizing hearing loss. In this study, we describe the posterior semicircular canal approach as a viable method for inner ear gene delivery in neonatal mice. We show that gene delivery through the posterior semicircular canal is able to perfuse the entire inner ear. The easy anatomic identification of the posterior semicircular canal, as well as minimal manipulation of the temporal bone required, make this surgical approach an attractive option for inner ear gene delivery.

In this study, we describe the posterior semicircular canal approach as a reliable method for inner ear gene delivery in neonatal mice. We show that gene delivery through the posterior semicircular canal is able to perfuse the entire inner ear.

גישה תעלת Semicircular אחורי האוזן הפנימית המסירה הגן עכבר Neonatal

Inner ear gene therapy offers great promise as a potential treatment for hearing loss and dizziness. One of the critical determinants of the success of ...

In Vivo Morphometric Analysis of Human Cranial Nerves Using Magnetic Resonance Imaging in Meni&#232;re's Disease Ears and Normal Hearing Ears

Analysis of neural structures in Meni&#232;re's Disease (MD) is of importance, since a loss of such structures has previously been proposed for this patient group but has yet to be confirmed. This protocol describes a method of in vivo evaluation of neural changes especially well suitable for cranial nerve analysis using magnetic resonance imaging (MRI). MD-patients and normal hearing persons were examined in a 3-T MR-scanner using a scan protocol including strongly T2-weighted 3D gradient-echo-sequence (3D-CISS). In the patient group, MD was additionally confirmed using MRI-based assessment of endolymphatic hydrops. Morphometric analysis was performed using a freeware DICOM viewer. Evaluation of cranial nerves included measurements of cross-sectional areas (CSAs) of the nerves at different levels as well as orthogonal diametric measurements.

&lt;em&gt;In Vivo&lt;/em&gt; Morphometric Analysis of Human Cranial Nerves Using Magnetic Resonance Imaging in Meni&amp;#232;re&#039;s Disease Ears and Normal Hearing Ears

To evaluate morphological changes of cranial nerves such as loss of neural structures or swelling of cranial nerves in Meni&#232;re&#39;s Disease (MD) or in healthy persons in vivo, a protocol of evaluation has been developed using magnetic resonance imaging (MRI). Additional MRI-based confirmation of MD was performed.

אין ויוו ניתוח Morphometric של עצבי האנושי באמצעות תהודה מגנטית של Menière מחלת האוזניים ואת האוזניים שמיעה רגילה

Analysis of neural structures in Meni&#232;re's Disease (MD) is of importance, since a loss of such structures has previously been proposed for this ...

Porcine As a Training Module for Head and Neck Microvascular Reconstruction

Live models that resemble surgical conditions of humans are needed for training free-flap harvesting and anastomosis. Animal models for training purposes have been available for years in many surgical fields. We used the female (because they are easy to handle for the procedure) Yorkshire pigs for the head and neck reconstruction by harvesting the deep inferior epigastric artery perforator or the superior epigastric artery perforator flap. The anastomosis site (neck skin defect or tracheal wall defect) was prepared via the dissection of the common carotid artery and the internal jugular vein, in which 3.5&#215; loupe magnification was used for anastomosis as we use on human cases in real life. This procedure demonstrates a new training method using a reliable learning model and provides a detailed anatomy in a live scenario. We focused on the ischemia time, harvesting, vessel anastomosis, and designing the flap to fit the defect site. This model improves tissue handling and with the use of proper instruments can be repeated many times so that the surgeon is fully confident before starting the surgery on humans.

Here we present a protocol for the use of the pig superior epigastric artery perforator flap as a learning module for head and neck microvascular reconstruction.

חזירי כמו מודול אימון עבור שחזור Microvascular הראש והצוואר

Live models that resemble surgical conditions of humans are needed for training free-flap harvesting and anastomosis. Animal models for training purposes ...

The Chick Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Assess Perineural Invasion in Head and Neck Cancer

Perineural invasion is a phenotype in which cancer surrounds or invades the nerves. It is associated with poor clinical outcome for head and neck squamous cell carcinoma and other cancers. Mechanistic studies have shown that the molecular crosstalk between nerves and tumor cells occurs prior to physical interaction. There are only a few in vivo models to study perineural invasion, especially to investigate early progression, before physical nerve-tumor interactions occur. The chick chorioallantoic membrane model has been used to study cancer invasion, because the basement membrane of the chorionic epithelium mimics that of human epithelial tissue. Here we repurposed the chick chorioallantoic membrane model to investigate perineural invasion, grafting rat dorsal root ganglia and human head and neck squamous cell carcinoma cells onto the chorionic epithelium. We have demonstrated how this model can be useful to evaluate the ability of cancer cells to invade neural tissue in vivo.&#160;

The Chick Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Assess Perineural Invasion in Head and Neck Cancer

Perineural invasion is an aggressive phenotype for head and neck squamous cell carcinomas and other tumors. The chick chorioallantoic membrane model has been used for studying angiogenesis, cancer invasion, and metastasis. Here we demonstrate how this model can be utilized to assess perineural invasion in vivo.

ממברנה של צ'יק כוראלאנטוניק במודל Vivo להערכת הפלישה לתוך הראש ולסרטן הצוואר

Perineural invasion is a phenotype in which cancer surrounds or invades the nerves. It is associated with poor clinical outcome for head and neck squamous ...

Learning Modern Laryngeal Surgery in a Dissection Laboratory

Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is almost completely reserved to a few referral centers that deal with a large proportion of this pathology. Practice on human specimens is not always possible for ethical, economic, or availability reasons. The aim of this study is to provide a reproducible method for the organization of a laryngeal laboratory on ex vivo animal models where it is possible to approach, learn, and refine laryngeal techniques. Porcine and ovine larynges are ideal, affordable, models to simulate laryngeal surgery given their similarity to the human larynx in their anatomical layout and tissue composition. Herein, the surgical steps of transoral laser surgery, open partial horizontal laryngectomy, and total laryngectomy are reported. The merging of endoscopic and exoscopic views guarantees an inside-out perspective, which is vital for the comprehension of the complex laryngeal anatomy. The method was successfully adopted during three sessions of a dissection course &#34;Lary-Gym&#34;. Further perspectives on robotic surgical training are described.

The purpose of this paper is to illustrate how to organize a reproducible laboratory for laryngeal surgery on affordable and closely similar animal laryngeal models in order to improve anatomical and surgical knowledge and skills.

למידה ניתוח מודרני הגרון במעבדה לחיתוך

Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is ...

Preparation of Decellularized Kidney Scaffolds in Rats

Tissue engineering is a cutting-edge discipline in biomedicine. Cell culture techniques can be applied for regeneration of functional tissues and organs to replace diseased or damaged organs. Scaffolds are needed to facilitate the generation of three-dimensional organs or tissues using differentiated stem cells in vivo. In this report, we describe a novel method for developing vascularized scaffolds using decellularized rat kidneys. Eight-week-old Sprague-Dawley rats were used in this study, and heparin was injected into the heart to facilitate flow into the renal vessels, allowing heparin to perfuse into the renal vessels. The abdominal cavity was opened, and the left kidney was collected. The collected kidneys were perfused for 9 h using detergents, such as Triton X-100 and sodium dodecyl sulfate, to decellularize the tissue. Decellularized kidney scaffolds were then gently washed with 1% penicillin/streptomycin and heparin to remove cellular debris and chemical residues. Transplantation of stem cells with the decellularized vascular scaffolds is expected to facilitate the generation of new organs. Thus, the vascularized scaffolds may provide a foundation for tissue engineering of organ grafts in the future.

This protocol introduces a method to develop a scaffold using decellularized rat kidneys. The protocol includes decellularization and recellularization processes to confirm bioavailability. Decellularization is performed using Triton X-100 and sodium dodecyl sulfate.

הכנת פיגומים בכליות Decellularized בחולדות

Tissue engineering is a cutting-edge discipline in biomedicine. Cell culture techniques can be applied for regeneration of functional tissues and organs ...