This work was supported by the American Heart Association Scientist Development Grant and the Foundation for Anesthesia Education and Research (MLJ). We would like to thank Talaignair N. Venkatraman PhD for his assistance with magnetic resonance imaging.

הצהרת אתיקה: פרוטוקול זה אושר על ידי הוועדה של אוניברסיטת דיוק בבעלי חיים מוסדי הטיפול והשימוש ועוקב כל ההנחיות לשימוש האתיים בבעלי חיים. 1. הכנת הציוד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיטוי הכלים כירורגיים לפני הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את מנגנון stereotactic עם 70% אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל אמבט מים ולשמור על טמפרטורת מים ב42 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים collagenase קלוסטרידיאל IV-S סוג במלח רגיל בריכוז של 0.075 U ל0.4 μl. </li></ol> 2. דגם הזרקת Collagenase <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר בתא אינדוקציה עם isoflurane 5% ב30% O 2/70% N 2. הרדמה נאותה הוא אותת לאחר כ 2 דקות כאשר נשימות עכבר יש האטה עד 1 לשנייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנרר קנה הנשימה עם קטטר תוך ורידי G 30 מ&quot;מ 20. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את הקטטר להנשמה מכרסמים ומכאניים לאוורר את הריאות עם isoflurane 1.6% ב30% O 2/70% N 2 בשיעור של 105 נשימות לדקה עם נפח גאות נמסר מ0.75 מיליליטר .. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את הקרקפת עם מכונת גילוח חשמלי. ברגע שהעכבר הוא מורדם ומונשם, להעביר אותו לתחנת עבודה שונה לגילוח ולאחר מכן חזרתי לספסל כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאבטח את הראש במסגרת stereotactic, ואת רמת הראש עם תפר שתי העטרה ועל sagittal כנקודות התייחסות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחת עיניים לעיניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס בדיקה טמפרטורה רקטלית. לשמור על טמפרטורה רקטלית ב37.0 ± 0.2 מעלות צלזיוס באמצעות underbody במחזור מיטת מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב את אזור הניתוח עם בטאדין אחריו עם 70% אתנול ולחזור 3 פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך בקרקפת קו האמצע 1 סנטימטר ולנגב periosteum רוחבי עם המוליך כותנה שקצה סטרילי לחשוף גבחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקדוח חור בקוטר 1 מ&quot;מ בר 2.2 מ&quot;מ עזב latאראל לגבחת עם מקדחת מקורר מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סובב בקבוקון collagenase 5 פעמים, ולאחר מכן לשטוף מזרק 0.5 μl עם מחט 25 G (המצורף למסגרת stereotactic) עם 0.5 פתרון collagenase μl 5 פעמים (השאר 0.5 μl של פתרון collagenase במזרק לאחר השטיפה האחרונה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יישר קצה מחט עם חור בר לאחר מכן לגרש 0.1 μl מהמזרק ולנגב פוע מחט עם סכין גילוח כדי לבטל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות micromanipulator, לקדם מ&quot;מ העמוק לקליפת מחט 3 ולהשאיר תנועה במשך 30 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 0.4 μl מעל 90 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ירידת isoflurane עד 1% ולהשאיר את התנועה מחט למשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסגת מחט באיטיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל 1 - 2 טיפות של 0.25% מתחת לעור bupivacaine ולתפור את העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את מכשיר האדים isoflurane ולהסיר עכבר מהמסגרת stereotactic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר עכבר כדי להתאושש אוורור ספונטני עם האקסטובציה לקנה הנשימה שלאחר מכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור עכבר לכלוב נקי ולאפשר גישה חופשית אלמזון ומים. </li></ol> 3. דגם הזרקת דם עצמי ב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את השלבים 2.1-2.11 עבור דגם הזרקת collagenase. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צייר 50 μl של מלח רגיל סטרילי לתוך מזרק μl 30 G 50. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את מזרק microliter עם צינור PE10 70 סנטימטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרש את כל מלח הרגיל ממזרק microliter לתוך צינור PE10 לחלוטין לצינורות דה אוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך את הבוכנה מזרק microliter מתוך 1 מ&quot;מ לעשות בועת אוויר בפתיחה הדיסטלי של מנגנון מזרק צינור microliter PE10 כדי למנוע תערובת של מי מלח ודם במהלך הליכים מאוחר יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב את אזור עורק הזנב המרכזי הדיסטלי של העכבר עם 70% אתנול, וחתך את העורק בסכין גילוח ב.5-1 סנטימטר ועד לקצה הזנב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף 40 μl דם מהזנב החתוך למנגנון מזרק צינור microliter PE10. הערה: שלא נעשה שימוש בהפרין במחט, צינורות, או העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את מזרק microliter על injeמשאבת ction. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את חלק צינורית המתכת של מחט 27 G לסוף צינור PE10, ולאבטח את המחט לmicromanipulator על מסגרת stereotactic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרש 2 μl דם מתוך 27 מחט G ולנגב פוע מחט עם סכין גילוח כדי לבטל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יישר קצה מחט עם חור בר ולהכניס את המחט 3 מ&quot;מ עמוק לקליפת המוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 35 μl דם עצמי בשיעור של 2 μl לדקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ירידת isoflurane עד 1% ולהשאיר את התנועה מחט ל10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסגת מחט מעל 30 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל 1 - 2 טיפות של 0.25% מתחת לעור bupivacaine ולתפור את העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את מכשיר האדים isoflurane ולהסיר עכבר מהמסגרת stereotactic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר עכבר כדי להתאושש אוורור ספונטני עם האקסטובציה שלאחר מכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור עכבר לכלוב נקי ולאפשר גישה חופשית למזון ומים. </li></ol> 4. שאם מבצע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את אותו נהלים למכוירים יציקת collagenaseמודל n, למעט ללא הזרקה לאחר החדרת מחט. </li></ol> 5. טיפול שלאחר ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 0.5 מיליליטר של תת עורי מלח הרגיל בערבו של ההליך הכירורגי בחלק האחורי של צווארו של בעל החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק מזון מרוכך במים ומזון ג&#39;ל בכוסות פלסטיק קטנים שהונחו על הרצפה של הכלוב. החלף את המזון ביום למשך 7 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגעה לירידה במשקל, ריפוי פצעים, וסימנים של אי נוחות ביום למשך 7 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם מרווחי התאוששות של יותר מ 7 ימים נדרשים, הסרת תפר עשויה להיות מבוצעת בהרדמה בשאיפה אור (isoflurane כ 1% ב30% O 2/70% N 2), במידת צורך. </li></ol>

<ol>
	<li>Asch, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence,+case+fatality,+and+functional+outcome+of+intracerebral+haemorrhage+over+time,+according+to+age,+sex,+and+ethnic+origin:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Incidence, case fatality, and functional outcome of intracerebral haemorrhage over time, according to age, sex, and ethnic origin: a systematic review and meta-analysis.</a> Lancet Neurology. 9, 167-176 (2010).</li><li>Qureshi, A. I., Mendelow, A. D., Hanley, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracerebral+haemorrhage.">Intracerebral haemorrhage.</a> Lancet. 373, 1632-1644 (2009).</li><li>Participants, N. I. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Priorities+for+clinical+research+in+intracerebral+hemorrhage:+report+from+a+National+Institute+of+Neurological+Disorders+and+Stroke+workshop.">Priorities for clinical research in intracerebral hemorrhage: report from a National Institute of Neurological Disorders and Stroke workshop.</a> Stroke. 36, (2005).</li><li>Morgenstern, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+management+of+spontaneous+intracerebral+hemorrhage:+a+guideline+for+healthcare+professionals+from+the+American+Heart+Association/American+Stroke+Association.">Guidelines for the management of spontaneous intracerebral hemorrhage: a guideline for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association.</a> Stroke. 41, 2108-2129 (2010).</li><li>James, M. L., Warner, D. S., Laskowitz, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+models+of+intracerebral+hemorrhage:+a+translational+perspective.">Preclinical models of intracerebral hemorrhage: a translational perspective.</a> Neurocrit Care. 9, 139-152 (2008).</li><li>Winkler, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+hemorrhagic+stroke+in+a+mouse+model+of+cerebral+amyloid+angiopathy.">Spontaneous hemorrhagic stroke in a mouse model of cerebral amyloid angiopathy.</a> J Neurosci. 21, 1619-1627 (2001).</li><li>Sinar, E. J., Mendelow, A. D., Graham, D. I., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+intracerebral+hemorrhage:+effects+of+a+temporary+mass+lesion.">Experimental intracerebral hemorrhage: effects of a temporary mass lesion.</a> J Neurosurg. 66, 568-576 (1987).</li><li>Mendelow, A. D., Bullock, R., Teasdale, G. M., Graham, D. I., McCulloch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+haemorrhage+induced+at+arterial+pressure+in+the+rat.+Part+2:+Short+term+changes+in+local+cerebral+blood+flow+measured+by+autoradiography.">Intracranial haemorrhage induced at arterial pressure in the rat. Part 2: Short term changes in local cerebral blood flow measured by autoradiography.</a> Neurol Res. 6, 189-193 (1984).</li><li>Bullock, R., Mendelow, A. D., Teasdale, G. M., Graham, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+haemorrhage+induced+at+arterial+pressure+in+the+rat.+Part+1:+Description+of+technique,+ICP+changes+and+neuropathological+findings.">Intracranial haemorrhage induced at arterial pressure in the rat. Part 1: Description of technique, ICP changes and neuropathological findings.</a> Neurol Res. 6, 184-188 (1984).</li><li>Sang, Y. H., Su, H. X., Wu, W. T., So, K. F., Cheung, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+blood+pressure+aggravates+intracerebral+hemorrhage-induced+brain+injury.">Elevated blood pressure aggravates intracerebral hemorrhage-induced brain injury.</a> J Neurotrauma. 28, 2523-2534 (2011).</li><li>Krafft, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+intracerebral+hemorrhage+in+mice:+injection+of+autologous+blood+or+bacterial+collagenase.">Modeling intracerebral hemorrhage in mice: injection of autologous blood or bacterial collagenase.</a> J Vis Exp. , (2012).</li><li>Sansing, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+blood+injection+to+model+spontaneous+intracerebral+hemorrhage+in+mice.">Autologous blood injection to model spontaneous intracerebral hemorrhage in mice.</a> J Vis Exp. , (2011).</li><li>Rosenberg, G. A., Mun-Bryce, S., Wesley, M., Kornfeld, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagenase-induced+intracerebral+hemorrhage+in+rats.">Collagenase-induced intracerebral hemorrhage in rats.</a> Stroke. 21, 801-807 (1990).</li><li>Nath, F. P., Jenkins, A., Mendelow, A. D., Graham, D. I., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+hemodynamic+changes+in+experimental+intracerebral+hemorrhage.">Early hemodynamic changes in experimental intracerebral hemorrhage.</a> J Neurosurg. 65, 697-703 (1986).</li><li>Anderson, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+blood-pressure+lowering+in+patients+with+acute+intracerebral+hemorrhage.">Rapid blood-pressure lowering in patients with acute intracerebral hemorrhage.</a> N Engl J Med. 368, 2355-2365 (2013).</li><li>Clark, W., Gunion-Rinker, L., Lessov, N., Hazel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citicoline+treatment+for+experimental+intracerebral+hemorrhage+in+mice.">Citicoline treatment for experimental intracerebral hemorrhage in mice.</a> Stroke. 29, 2136-2140 (1998).</li><li>Mayer, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+and+safety+of+recombinant+activated+factor+VII+for+acute+intracerebral+hemorrhage.">Efficacy and safety of recombinant activated factor VII for acute intracerebral hemorrhage.</a> N Engl J Med. 358, 2127-2137 (2008).</li><li>Mendelow, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+surgery+versus+initial+conservative+treatment+in+patients+with+spontaneous+supratentorial+lobar+intracerebral+haematomas+(STICH+II):+a+randomised+trial.">Early surgery versus initial conservative treatment in patients with spontaneous supratentorial lobar intracerebral haematomas (STICH II): a randomised trial.</a> Lancet. , (2013).</li><li>James, M. L., Blessing, R., Bennett, E., Laskowitz, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apolipoprotein+E+modifies+neurological+outcome+by+affecting+cerebral+edema+but+not+hematoma+size+after+intracerebral+hemorrhage+in+humans.">Apolipoprotein E modifies neurological outcome by affecting cerebral edema but not hematoma size after intracerebral hemorrhage in humans.</a> J Stroke Cerebrovasc Dis. 18, 144-149 (2009).</li><li>James, M. L., Blessing, R., Phillips-Bute, B. G., Bennett, E., Laskowitz, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=S100B+and+brain+natriuretic+peptide+predict+functional+neurological+outcome+after+intracerebral+haemorrhage.">S100B and brain natriuretic peptide predict functional neurological outcome after intracerebral haemorrhage.</a> Biomarkers. 14, 388-394 (2009).</li><li>James, M. L., Sullivan, P. M., Lascola, C. D., Vitek, M. P., Laskowitz, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacogenomic+effects+of+apolipoprotein+e+on+intracerebral+hemorrhage.">Pharmacogenomic effects of apolipoprotein e on intracerebral hemorrhage.</a> Stroke. 40, 632-639 (2009).</li><li>James, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+natriuretic+peptide+improves+long-term+functional+recovery+after+acute+CNS+injury+in+mice.">Brain natriuretic peptide improves long-term functional recovery after acute CNS injury in mice.</a> J Neurotrauma. 27, 217-228 (2010).</li><li>Indraswari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statins+improve+outcome+in+murine+models+of+intracranial+hemorrhage+and+traumatic+brain+injury:+a+translational+approach.">Statins improve outcome in murine models of intracranial hemorrhage and traumatic brain injury: a translational approach.</a> J Neurotrauma. 29, 1388-1400 (2012).</li><li>Laskowitz, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+apoE-mimetic+peptide,+COG1410,+improves+functional+recovery+in+a+murine+model+of+intracerebral+hemorrhage.">The apoE-mimetic peptide, COG1410, improves functional recovery in a murine model of intracerebral hemorrhage.</a> Neurocrit Care. 16, 316-326 (2012).</li><li>Lei, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+sex+and+apolipoprotein+E+genetic+background+in+a+murine+model+of+intracerebral+hemorrhage.">Interaction between sex and apolipoprotein E genetic background in a murine model of intracerebral hemorrhage.</a> Translational Stroke Research. 3, (2012).</li><li>Lekic, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+hematoma+consequences,+neurobehavioral+profiles,+and+histopathology+in+a+rat+model+of+pontine+hemorrhage.">Evaluation of the hematoma consequences, neurobehavioral profiles, and histopathology in a rat model of pontine hemorrhage.</a> J Neurosurg. 118, 465-477 (2013).</li><li>Nakamura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracerebral+hemorrhage+in+mice:+model+characterization+and+application+for+genetically+modified+mice.">Intracerebral hemorrhage in mice: model characterization and application for genetically modified mice.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 24, 487-494 (2004).</li><li>Yang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statins+Protect+the+Blood+Brain+Barrier+Acutely+after+Experimental+Intracerebral+Hemorrhage.">Statins Protect the Blood Brain Barrier Acutely after Experimental Intracerebral Hemorrhage.</a> J Behav Brain Sci. 3, 100-106 (2013).</li><li>Rynkowski, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+intracerebral+hemorrhage+using+autologous+blood+infusion.">A mouse model of intracerebral hemorrhage using autologous blood infusion.</a> Nature Protocols. 3, 122-128 (2008).</li><li>Wang, J., Fields, J., Dore, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+an+improved+preclinical+mouse+model+of+intracerebral+hemorrhage+using+double+infusion+of+autologous+whole+blood.">The development of an improved preclinical mouse model of intracerebral hemorrhage using double infusion of autologous whole blood.</a> Brain Research. 1222, 214-221 (2008).</li><li>MacLellan, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracerebral+hemorrhage+models+in+rat:+comparing+collagenase+to+blood+infusion.">Intracerebral hemorrhage models in rat: comparing collagenase to blood infusion.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 28, 516-525 (2008).</li></ol>

Lei, Sheng, Wang, Lascola, Warner, and Laskowitz have no conflicts of interest to declare. James received grant funding by American Heart Association, National Institutes of Health, and Cephalogics.

למרות מתעורר מחקר קליני וניסויים קליניים גדולים שנוצר למבטיח הרפוי 15-18, אין התערבויות תרופתי הפגינו כדי לשפר את התוצאה בICH, וטיפול נשאר במידה רבה תומך. רשימות של טיפולים אפשריים עשויות להיות שנוצרו על ידי טכנולוגיות תפוקה גבוהה, כגון עבודת transcriptomic וproteomic. בעוד ט...

דימום תוך מוחי (ICH) הוא צורה נפוצה יחסית של מחלת כלי דם במוח בכ 40-50% מהחולים נגועים למות בתוך 30 ימים 1. למרבה הצער, שיפור מועט נעשה בשיעור התמותה מעל 20 השנים האחרונות 2. דיווחים מהמכון הלאומי לבריאות 3 והנחיות מהלב האמריקאי 4 האיגוד הדגישו את החשיבות של פיתוח מודלים רלוונטיים קליני של ICH להאריך את ההבנה של הפתופיזיולוגיה ולפתח מטרות לגישות טיפוליות חדשות. מספר דגמים קיימים לחקות ICH אדם 5. ככל שהבנה של מתבגרת הפתופיזיולוגיה ICH, זה הפך להיות ברור כי מגוון רחב של דגמים ניתן להשתמש כדי לבחון את ההיבטים שונים של המחלה. מודלים ששמשו בעבר כוללים angiopathy העכברי עמילואיד 6, כניסה microballoon intraparenchymal ואינפלציה 7, ודם עורקים ישירהחדירה 8,9. דימום אונים מangiopathy עמילואיד כבר דגם עם השימוש בעכברים הטרנסגניים ומייצג תת סוג ICH מובחן. מודלים Microballoon לחקות אפקט מסה חריף מהיווצרות שטף דם אבל לא מצליחים ללכוד תגובה התאית של המוח לנוכחות של דם. לבסוף, חדירת דם עורקים ישירה מכפיפה את המוח לחצים עורקים מעורק הירך. לפיכך, לחצים זה מחקה מודל העורק ואת הנוכחות של דם, אך לא תחשוף את המוח לפגיעה כלי הדם מקרע של כלי דם קטן. יתר על כן, מודל זה יש גבוה מיסודו השתנות. מעניין לציין, כי חולדות עם יתר לחץ דם באופן ספונטני 10 לפתח ICH ספונטני כשהם מזדקנים. מחקר של בעלי חיים אלה לאחר פיתוח ICH יכול לחקות את המחלה בנוכחותו של אחד מהתחלואות הגדולות predisposing בני אדם לICH. בעוד מודלים אחרים אלה קיימים, הזרקת intrastriatal של collagenase קלוסטרידיאל 11 או הזרקת instrastiatal שלדם כל utologous 12 הם, כיום, שני המודלים הנפוצים ביותר בשימוש במחקר קליני ICH. בחירה במודל ICH צריכה להתבצע על בסיס האובייקטיבי של שאלת הניסוי, כוללים בחירת זנים ושיטה של ​​גרימת היווצרות שטף דם. לדוגמא, חזירים הם בעלי חיים גדולים עם נפח מוח חומר הלבן גדול יחסית בהשוואה לעכברים. לפיכך, מודלים חזיריים מתאימים ללמוד הפתופיזיולוגיה חומר לבנה לאחר ICH. בניגוד לכך, המוח של מכרסמים הם במידה רבה עניין אפור, אבל מערכות מהונדסים לעשות מכרסמים שימושיים כדי להעריך את המנגנונים מולקולריים של פגיעה והתאוששות לאחר ICH. לכל דגם עוצמות הטבועות בו וחולשות (טבלה 1), אשר יש לשקול בזהירות לפני ניסויים. הפרוטוקולים הבאים להדגים את המודלים דם והזרקת collagenase עצמיים בעכברים. מודלים אלה כל תורגמו ממודלים שפותחו במקור בחולדות13,14 ולאפשר את השימוש בטכנולוגיה מהונדס זמינה באופן נרחב כדי לחקור מנגנונים מולקולריים הקשורים למוות של תאים לאחר ICH. שניהם מייצגים מנגנוני פציעה שונים במובהק מICH האנושי, ושניהם יש תוצאה צפויה שונה במובהק במונחים של מדדים התנהגותיים והיסטולוגית. לפיכך, השערות מסוימות עשויות להשאיל את עצמם למודל אחד על פנים השני, אך רעיונות רבים עשויים לדרוש אימות בשני המודלים. טבלת 1. השוואה של מאפיינים של collagenase ודגמי דימום עצמיים הזרקת דם תוך מוחיים. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td style="width:197px;"></td><td style="width:80px;"> הזרקת Collagenase </td><td style="width:66px;"> הזרקת דם </td></tr><tr><td style="width:197px;"> קלות השימוש </td><td style="width:80px;"> + + + </td><td style="width:66px;"> + + </td></tr><tr&gt; <td style="width:197px;"> שחזור </td><td style="width:80px;"> + + </td><td style="width:66px;"> + + </td></tr><tr><td style="width:197px;"> שליטה על גודל שטף דם </td><td style="width:80px;"> + + </td><td style="width:66px;"> + + + </td></tr><tr><td style="width:197px;"> Reflux דם </td><td style="width:80px;"> + </td><td style="width:66px;"> + + </td></tr><tr><td style="width:197px;"> מדמה מחלה אנושית </td><td style="width:80px;"> + </td><td style="width:66px;"> - </td></tr><tr><td style="width:197px;"> פשטות </td><td style="width:80px;"> + + </td><td style="width:66px;"> + + </td></tr><tr><td style="width:197px;"> השתמש במינים רבים </td><td style="width:80px;"> + + </td><td style="width:66px;"> + + </td></tr></tbody></table>

<table><tbody><tr><td>Stereotactic frame</td><td>Stoelting Co.</td><td>51603</td><td></td></tr><tr><td>Probe holder with corner clamp</td><td>Stoelting Co.</td><td>51631</td><td></td></tr><tr><td>Mini grinder</td><td>Power Glide</td><td>Model 60100002</td><td></td></tr><tr><td>0.5 &amp;mu;l syringe</td><td>Microliter</td><td>86259</td><td>25 G needle</td></tr><tr><td>5 &amp;mu;l syringe</td><td>Microliter</td><td>7637-01</td><td></td></tr><tr><td>30 G microliter syringe</td><td>Microliter</td><td>7762-03</td><td></td></tr><tr><td>Syringe pump</td><td>KD Scientific</td><td>Model 100</td><td></td></tr><tr><td>Heat therapy water pump</td><td>Gaymar Industries, Inc.</td><td>Model# TP650</td><td></td></tr><tr><td>Circulating waterbed</td><td>CMS Tool &amp;amp; Die, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rodent ventilator</td><td>Harvard Apparatus</td><td>Model 683</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane vaporizer</td><td>Drager</td><td>Vapor 19.1</td><td></td></tr><tr><td>Air flowmeter</td><td>Cole Parmer</td><td>Model PMR1-010295</td><td></td></tr><tr><td>Induction chamber</td><td></td><td></td><td>Self made</td></tr><tr><td>Otoscope</td><td>Welch Allyn</td><td>22820</td><td></td></tr><tr><td>Intravenous catheter</td><td>Becton-Dickinson</td><td>381534</td><td>20 G, 1.16 inch Insyte-W</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter Healthcare Corporation</td><td>NDC10019-360-69</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase Type IV-S</td><td>Sigma</td><td>C1889</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylene tubing PE10</td><td>Becton-Dickinson</td><td>427401</td><td></td></tr><tr><td>27 G 1 1/4 inch needle</td><td>Becton-Dickinson</td><td>305136</td><td></td></tr><tr><td>Surgical scissors</td><td>Miltex</td><td>21-539</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>Miltex</td><td>17-307</td><td></td></tr><tr><td>Needle holder</td><td>Boboz</td><td>RS-7840</td><td></td></tr><tr><td>Monofilament suture</td><td>Ethicon</td><td>8698</td><td>Size 5-0</td></tr><tr><td>Indicating controller</td><td>YSI</td><td>73ATD</td><td></td></tr></tbody></table>

intrastriatal injection of autologous blood or clostridial collagenase as murine models of intracerebral hemorrhage

דימום תוך מוחי (ICH) הוא צורה נפוצה של מחלת כלי דם במוח והיא קשורה עם תחלואה ותמותה משמעותיות. חוסר טיפול ואי יעילים של ניסויים קליניים הגדולים שמטרתו עצירת דימום והסרת קריש להדגים את הצורך בחקירה מונחה מנגנון נוספת של ICH. מחקר זה עשוי להתבצע דרך המסגרת הניתנת על ידי מודלים פרה. שני מודלים עכבריים בשימוש פופולרי כוללים הזרקת intrastriatal (גרעיני בסיס) של או דם כולו עצמי או collagenase קלוסטרידיאל. מאז, כל דגם מייצג תכונות pathophysiological שונות במובהק קשורים לICH, שימוש בדגם מסוים ניתן לבחור על סמך מה היבט של המחלה היא כדי להיחקר. לדוגמא, הזרקת דם עצמית באופן מדויק ביותר מייצגת תגובה של המוח לנוכחות של דם intraparenchymal, ועשויה לשכפל דימום אונים באופן הדוק ביותר. הזרקת collagenase קלוסטרידיאל מייצגת באופן מדויק ביותר שלקרע כלי קניון ואופייני התפתחות שטף דם של שטפי דם עמוקים. לפיכך, כל תוצאות מודל במבנה שונה שטף דם, תגובת neuroinflammatory, פיתוח בצקת מוחי, ותוצאות neurobehavioral. חוסנה של התערבות טיפולית כביכול ניתן להעריך הטוב ביותר באמצעות שני המודלים. בפרוטוקול זה, אינדוקציה של ICH שימוש בשתי המודלים, הפגנה שלאחר ניתוח מיידית של פציעה, וטכניקות טיפול שלאחר ניתוח הראשונה הם הפגינו. שני הדגמים לגרום לפציעות לשחזור, כרכי שטף דם, וגירעונות neurobehavioral. בגלל חוסר האחידות של ICH אדם, יש צורך במודלים פרה מרובים כדי לחקור ביסודיות מנגנוני pathophysiologic ולבדוק אסטרטגיות טיפוליות פוטנציאליות.

בשל הבדלים בהיווצרות המטומה (איור 1), מפנה ipsilateral מוצג מייד לאחר השכמה לעכברים שהוזרקו דם עצמי ובתוך 2 - 4 שעות לאחר הזרקת collagenase, כהרחבת שטף דם מתרחשת (איור 2). העדרו של מפנה ipsilateral צריך להעלות חשש להיעדרות של פציעה משמעותית. ביום שלאחר הפציעה הראשון, עכב?...

Watch this Scientific Journal Video about Intrastriatal Injection of Autologous Blood or Clostridial Collagenase as Murine Models of Intracerebral Hemorrhage at JoVE.com

Intrastriatal Injection of Autologous Blood or Clostridial Collagenase as Murine Models of Intracerebral Hemorrhage

Preclinical models of intracerebral hemorrhage are utilized to mimic certain aspects of clinical disease. Thus, mechanisms of injury and potential therapeutic strategies may be explored. In this protocol, two models of intracerebral hemorrhage are described, intrastriatal (basal ganglia) injections of autologous blood or collagenase.

הזרקת Intrastriatal של עצמי בדם או קלוסטרידיאל Collagenase כמודלים Murine של Intracerebral שטף דם

Intracerebral hemorrhage (ICH) is a common form of cerebrovascular disease and is associated with significant morbidity and mortality. Lack of effective ...

intrastriatal-injection-autologous-blood-or-clostridial-collagenase

Research

JoVE Journal

Medicine

14.7K Views.  Duke University. Preclinical models of intracerebral hemorrhage are utilized to mimic certain aspects of clinical disease. Thus, mechanisms of injury and potential therapeutic strategies may be explored. In this protocol, two models of intracerebral hemorrhage are described, intrastriatal (basal ganglia) injections of autologous blood or collagenase. 

Video: Intrastriatal Injection of Autologous Blood or Clostridial Collagenase as Murine Models of Intracerebral Hemorrhage

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model. While ICH
accounts for 10-15% of all strokes, there remains no specific
effective therapy. The autologous blood injection model in mice
involves the stereotaxic injection of arterial blood into the basal
ganglia mimicking a spontaneous hypertensive hemorrhage in man. The
response to hemorrhage can then be studied in vivo and the
neurobehavioral deficits quantified, allowing for description of the
ensuing pathology and the testing of potential therapeutic agents. The
procedure described in this protocol uses the double injection
technique to minimize risk of blood reflux up the needle track, no
anticoagulants in the pumping system, and eliminates all dead space
and expandable tubing in the system.

The autologous blood injection model of intracerebral hemorrhage in mice described in this protocol uses the double injection technique to minimize risk of blood reflux up the needle track, no anticoagulants in the pumping system, and eliminates all dead space and expandable tubing in the system.

הזרקת דם עצמיים על דגם דימום intracerebral ספונטנית עכברים

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Neuroscience

Modeling Intracerebral Hemorrhage in Mice: Injection of Autologous Blood or Bacterial Collagenase

Spontaneous intracerebral hemorrhage (ICH) defines a potentially life-threatening neurological malady that accounts for 10-15% of all stroke-related hospitalizations and for which no effective treatments are available to date1,2. Because of the heterogeneity of ICH in humans, various preclinical models are needed to thoroughly explore prospective therapeutic strategies3. Experimental ICH is commonly induced in rodents by intraparenchymal injection of either autologous blood or bacterial collagenase4. The appropriate model is selected based on the pathophysiology of hemorrhage induction and injury progression. The blood injection model mimics a rapidly progressing hemorrhage. Alternatively, bacterial collagenase enzymatically disrupts the basal lamina of brain capillaries, causing an active bleed that generally evolves over several hours5. Resultant perihematomal edema and neurofunctional deficits can be quantified from both models. In this study, we described and evaluated a modified double injection model of autologous whole blood6 as well as an ICH injection model of bacterial collagenase7, both of which target the basal ganglia (corpus striatum) of male CD-1 mice. We assessed neurofunctional deficits and brain edema at 24 and 72 hr after ICH induction. Intrastriatal injection of autologous blood (30 &mu;l) or bacterial collagenase (0.075U) caused reproducible neurofunctional deficits in mice and significantly increased brain edema at 24 and 72 hr after surgery (p&lt;0.05). In conclusion, both models yield consistent hemorrhagic infarcts and represent basic methods for preclinical ICH research.

Clinically relevant animal models of intracerebral hemorrhage (ICH) are needed to extend our knowledge of hemorrhagic stroke and to examine novel therapeutic strategies. In this study, we describe and evaluate two ICH models that implement unilateral injections of either autologous whole blood or bacterial collagenase into the basal ganglia (corpus striatum) of mice.

דימום דוגמנות intracerebral בעכברים: הזרקה של דם או השתלת collagenase קטריאלי

Spontaneous intracerebral hemorrhage (ICH) defines a potentially life-threatening neurological malady that accounts for 10-15% of all stroke-related ...

A Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of Willis perforation (CWp) and proven by intracranial pressure (ICP) monitoring. Thereby a homogenous blood distribution in subarachnoid spaces surrounding the arterial circulation and cerebellar fissures is achieved. Animal physiology is maintained by intubation, mechanical ventilation, and continuous on-line monitoring of various physiological and cardiovascular parameters: body temperature, systemic blood pressure, heart rate, and hemoglobin saturation. Thereby the cerebral perfusion pressure can be tightly monitored resulting in a less variable volume of extravasated blood. This allows a better standardization of endovascular filament perforation in mice and makes the whole model highly reproducible. Thus it is readily available for pharmacological and pathophysiological studies in wild type and genetically altered mice.

A standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage by intraluminal Circle of Willis perforation is described. Vessel perforation and subarachnoid bleeding are monitored by intracranial pressure monitoring. In addition various vital parameters are recorded and controlled to maintain physiologic conditions.

מודל Murine של תת עכבישי דימום

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid  hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of  Willis ...

A Versatile Murine Model of Subcortical White Matter Stroke for the Study of Axonal Degeneration and White Matter Neurobiology

Stroke affecting white matter accounts for up to 25% of clinical stroke presentations, occurs silently at rates that may be 5-10 fold greater, and contributes significantly to the development of vascular dementia. Few models of focal white matter stroke exist and this lack of appropriate models has hampered understanding of the neurobiologic mechanisms involved in injury response and repair after this type of stroke. The main limitation of other subcortical stroke models is that they do not focally restrict the infarct to the white matter or have primarily been validated in non-murine species. This limits the ability to apply the wide variety of murine research tools to study the neurobiology of white matter stroke. Here we present a methodology for the reliable production of a focal stroke in murine white matter using a local injection of an irreversible eNOS inhibitor. We also present several variations on the general protocol including two unique stereotactic variations, retrograde neuronal tracing, as well as fresh tissue labeling and dissection that greatly expand the potential applications of this technique. These variations allow for multiple approaches to analyze the neurobiologic effects of this common and understudied form of stroke.

Here we present methodology for the production of a focal stroke in murine white matter by local injection of an irreversible endothelial nitric oxide synthase (eNOS) inhibitor (L-Nio). Presented are two stereotactic variations, retrograde neuronal tracing, and fresh tissue labeling and dissection that expand the potential applications of this technique.

שבץ בחומר הלבן צדדי דגם Murine של קורטיקליים לחקר ניוון אקסונלית ולבן Matter לנוירוביולוגיה

Stroke affecting white matter accounts for up to 25% of clinical stroke presentations, occurs silently at rates that may be 5-10 fold greater, and ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to intracranial delivery, intra-arterial administration of NSCs is less invasive and produces a more diffuse distribution of NSCs within the brain parenchyma. Further, intra-arterial delivery allows the first-pass effect in the brain circulation, lessening the potential for trapping of cells in peripheral organs, such as liver and spleen, a complication associated with peripheral injections. Here, we detail the methodology, in both mice and rats, for delivery of NSCs through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) to the ipsilateral hemisphere after an ischemic stroke. Using GFP-labeled NSCs, we illustrate the widespread distribution achieved throughout the rodent ipsilateral hemisphere at 1 d, 1 week and 4 weeks after postischemic delivery, with a higher density in or near the ischemic injury site. In addition to long-term survival, we show evidence of differentiation of GFP-labeled cells at 4 weeks. The intra-arterial delivery approach described here for NSCs can also be used for administration of therapeutic compounds, and thus has broad applicability to varied CNS injury and disease models across multiple species.

A method for delivering neural stem cells, adaptable for injecting solutions or suspensions, through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) after ischemic stroke is reported. Injected cells are distributed broadly throughout the brain parenchyma and can be detected up to 30 d after delivery.

משלוח פנים-עורקי של תאי גזע עצביים למוח עכברוש ועכבר: יישום איסכמיה מוחין

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% of the total stroke-related mortality with an important morbidity in terms of neurological outcome. A delayed cerebral vasospasm (CVS) may occur most often in association with a delayed cerebral ischemia. Different animal models of SAH are now being used including endovascular perforation and direct injection of blood into the cisterna magna or even the prechiasmatic cistern, each exhibiting distinct advantages and disadvantages. In this article, a standardized mouse model of SAH by double direct injection of determined volumes of autologous whole blood into the cisterna magna is presented. Briefly, mice were weighed and then anesthetized by isoflurane inhalation. Then, the animal was placed in a reclining position on a heated blanket maintaining a rectal temperature of 37 &#176;C and positioned in a stereotactic frame with a cervical bend of about 30&#176;. Once in place, the tip of an elongated glass micropipette filled with the homologous arterial blood taken from carotid artery of another mouse of the same age and gender (C57Bl/6J) was positioned at a right angle in contact with the atlanto-occipital membrane by means of a micromanipulator. Then 60 &#181;L of blood was injected in the cisterna magna followed by a 30&#176; downward tilt of the animal for 2 minutes. The second infusion of 30 &#181;L of blood into the cisterna magna was performed 24 h after the first one. The individual follow-up of each animal is carried out daily (careful evaluation of weight and well-being). This procedure allows a predictable and highly reproducible distribution of blood, likely accompanied by intracranial pressure elevation that can be mimicked by an equivalent injection of an artificial cerebral spinal fluid (CSF), and represents an acute to mild-model of SAH inducing low mortality.

We described in this protocol a standardized subarachnoid hemorrhage (SAH) mouse model by a double injection of autologous whole-blood into the cisterna magna. The high degree of standardization of the double-injection procedure represents a middle-to-acute model of SAH with relative safety regarding mortality.

הזרקת דם ישירה כפולה לתוך מגנה צ'יסטרנה כודל של דימום Subarachnoid

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...

Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood

We provide a protocol to establish a massive pontine hemorrhage model in a rat. Rats weighing about 250 grams were used in this study. One hundred microliters of autologous blood was taken from the tail vein and stereotaxically injected into the pons. The injection process was divided into 2 steps: First, 10 &#181;L of blood was injected into a specific location, anteroposterior position (AP) -9.0 mm; lateral (Lat) 0 mm; vertical (Vert) -9.2 mm, followed by a second injection of the residual blood located at AP -9.0 mm; Lat 0 mm; Vert -9.0 mm with a 20-minute interval. The balance beam test, limb placement test, and the modified Voestch neuroscore were used to evaluate neurological function. Magnetic Resonance Imaging (MRI) was used to assess the volume of hemorrhage in vivo. The symptoms of this model were in line with patients with massive pontine hemorrhage.

We present a protocol to establish a massive pontine hemorrhage model in a rat via dual injection of autologous blood.

דימום פונטין מסיבי על ידי הזרקה כפולה של דם אוטולוגי

We provide a protocol to establish a massive pontine hemorrhage model in a rat. Rats weighing about 250 grams were used in this study. One hundred ...

Pre-Chiasmatic, Single Injection of Autologous Blood to Induce Experimental Subarachnoid Hemorrhage in a Rat Model

Despite advances in treatment over the last decades, subarachnoid hemorrhage (SAH) continues to carry a high burden of morbidity and mortality, largely afflicting a fairly young population. Several animal models of SAH have been developed to investigate the pathophysiological mechanisms behind SAH and to test pharmacological interventions. The pre-chiasmatic, single injection model in the rat presented in this article is an experimental model of SAH with a predetermined blood volume. Briefly, the animal is anesthetized, intubated, and kept under mechanical ventilation. Temperature is regulated with a heating pad. A catheter is placed in the tail artery, enabling continuous blood pressure measurement as well as blood sampling. The atlantooccipital membrane is incised and a catheter for pressure recording is placed in the cisterna magna to enable intracerebral pressure measurement. This catheter can also be used for intrathecal therapeutic interventions. The rat is placed in a stereotaxic frame, a burr hole is drilled anteriorly to the bregma, and a catheter is inserted through the burr hole and placed just anterior to the optic chiasm. Autologous blood (0.3 mL) is withdrawn from the tail catheter and manually injected. This results in a rise of intracerebral pressure and a decrease of cerebral blood flow. The animal is kept sedated for 30 min and given subcutaneous saline and analgesics. The animal is extubated and returned to its cage. The pre-chiasmatic model has a high reproducibility rate and limited variation between animals due to the pre-determined blood volume. It mimics SAH in humans making it a relevant model for SAH research.

Subarachnoid hemorrhage continues to carry a high burden of mortality and morbidity in man. To facilitate further research into the condition and its pathophysiology, a pre-chiasmatic, single injection model is presented.

טרום כיאזמטי, הזרקה יחידה של דם אוטולוגי כדי לגרום לדימום ניסיוני subarachnoid במודל חולדה

Despite advances in treatment over the last decades, subarachnoid hemorrhage (SAH) continues to carry a high burden of morbidity and mortality, largely ...

Inducing Massive Pontine Hemorrhage in a Rat Model by Autologous Blood Injection

<a href='https://app.jove.com/v/62089/massive-pontine-hemorrhage-by-dual-injection-of-autologous-blood'>Source: Tang, X. et. al., Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood. J. Vis. Exp. (2021)</a>This protocol describes the controlled infusion of autologous blood into the pontine region of a rat's brain to model massive pontine hemorrhage. The purpose is to simulate a localized brain bleed by increasing localized pressure.

Source: Tang, X. et. al., Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood. J. Vis. Exp. (2021)This protocol describes the controlled ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuropathology

Cerebrovascular Diseases

Establishing a Subarachnoid Hemorrhage Rat Model Induced by Autologous Blood Injection

To place the laser Doppler probe, make a 15-millimeter incision caudally in the midline, starting just anterior to the eyes. After removing the connective tissue and the muscles with forceps, use the end of a sterile cotton swab as a regime to identify the bregma and the coronal sutures.
After placing the armed retractor, place a 25-gauge spinal needle in the stereotaxic frame exactly on the bregma and note the position. Next, remove the needle from the bregma. Move the frame anteriorly by 6.5 millimeters, then replace the needle in the midline to mark the side of drilling.
Drill until the dura mater is identified below the bone. Using straight forceps, gently remove the bone fragments, then fill the cavity with bone wax. Next, 3 to 4 millimeters lateral to the right of the bregma and just anterior to the coronal suture for the laser Doppler, drill another hole taking care not to penetrate the dura mater.
Look for the vessels where the laser Doppler can measure the blood flow. Place the laser Doppler and check the values. A minimum value of 100 flux units is required. If the values remain acceptable after removing the microscope, add 1 drop of glue to fix the probe. Recheck to confirm whether the value is above 80 flux units.
To induce subarachnoid hemorrhage, insert the needle gently through the skull in the midline between the hemispheres until resistance is felt due to the base of the skull. Retract the needle by 1 millimeter to ensure correct placement just anteriorly to the optic chiasm. To ensure the most homogeneous result when injecting the blood, turn the needle clockwise by 90 degrees such that the needle tip points to the right. Then, remove the stiletto.
After a 15-minute equilibration, adjust the level of anesthesia to obtain a mean arterial blood pressure in the range 80 to 100 millimeters of mercury. Then, perform a blood gas analysis to confirm that the pH, partial pressure of carbon dioxide and partial pressure of oxygen are within physiological parameters.
Next, using a 1-milliliter syringe with a blunt 23-gauge needle, withdraw 500 microliters of blood from the tail catheter. To avoid injection of air, fill the dead space of the spinal needle chamber with blood. After adjusting the volume of the blood in the syringe to 300 microliters, connect the syringe to the spinal needle. Then, grasping firmly around the syringe, inject the blood manually to surpass mean arterial pressure. Observe a steep rise in the intracerebral pressure and a concurrent steep fall in the cerebral blood flow.