המחברים מבקשים להודות ד&quot;ר פול ויטינג והגב &#39;ז&#39;נבייב פונג על סיועם בחילוץ mRNA וPCR, ומאט גארנט ורודני וויליאמס זיכרון הקרן לתמיכה.

הצהרת אתיקה: כל הנהלים המפורטים להלן אושרו על ידי האוניברסיטה של ​​ועדת האתיקה בעלי החיים סידני. 1. בעלי חיים הערה: 1 ו -8 - עכברי 9 חודשים ישנים (C57 / BL6) התקבלו ממרכז המשאבים לבעלי החיים (פרת &#39;, אוסטרליה). עכברים שוכנו במתקן Bosch מכרסם באוניברסיטת סידני. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברי בית בכלובי עכבר סטנדרטיים ב12/12 hr מחזור אור / חושך עם גישה כלרצונך מזון ומים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברי Divide בכל קבוצת גיל לאינפרא אדום קרוב (ניר) שטופלו, או טיפול דמה קבוצות (שליטה) להשוואה. </li></ol> 2. קרוב אינפרא אדום (ניר) הקרנה ושאם טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את הפרווה באזור הראש והצוואר של העכבר עם מכונת גילוח חשמלי, ככל האפשר, כדי למנוע צמיחה מחודשת של שיער מהירה לפני השלמתו של משטר הטיפול. על מנת לשמור על הסטטוס-הפתוגן ללא של העכברים, להשתמש אתנול 70%לנקות מכשירים בין בעלי חיים גילוח וחיטוי וטרינרי F10 בין בעלי חיים מכלובים נפרדים. האם 2 זה - 3 ימים לפני תחילת טיפול ולכן בעלי החיים הם לא-מטופלים מעל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרסן את העכבר על ידי הלחיצה על הקצה הפרוקסימלי של הזנב ולאפשר לו להירגע בכף העליונה מחד או ספסל כדי למזער את הלחץ שעלולה להוביל לתוצאות שווא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את ניר (670 ננומטר) LED (דיודה פולטת אור) מכשיר 1 - 2 סנטימטרים מהאזור החשוף (מגולח) והפעל את ההתקן למשך 90 שניות (איור 1 א). הערה: שינוי הטמפרטורה כתוצאה מחשיפת 90 שניות נמדדה כ&lt; 0.2 מעלות צלזיוס במי 100 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 2.2-2.3 לקבוצת טיפול דמה של בעלי חיים, אלא להשאיר את המכשיר כבוי (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 2.2-2.3 לקבוצת הטיפול החסומה-ניר של בעלי חיים, אלא לכסות את המכשיר בנייר אלומיניום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 2.2-2.5 יומיים בapproximatדואר 24 מרווחי שעות במשך 5 ימים רצופים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חלץ את האפיתל שיווי המשקל חושי (3 cristae והמקולה 1 utricular) משני האוזניים שבלאחר טיפול היום החמישי (ראה סעיף 3 להלן). </li></ol> 3. הפקת רקמות 20 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 300 מיליליטר של מבוסס גליצרול מלאכותי נוזל השדרתי (ACSF) בהיקף של (מ&quot;מ): 26 NaHCO 3, גלוקוז 11, 250 גליצרול, 2.5 KCl, 1.2 Nah 2 PO 4, 1.2 MgCl 2, ו -2.5 CaCl 2. לפני התוספת של CaCl 2, גז הפתרון עם carbogen (95% O 2, 5% CO 2) להקים pH של 7.4 ולהימנע ממשקעי סידן (עננות). צ&#39;יל הפתרון במקפיא C -80 ° במשך 45 דקות כדי שslurry קרח נוצר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את חיץ תמוגה בידוד RNA בmicrotubes בורג בראש שכותרתו (מפסיק הנפץ של עפעפיים כאשר לחץ צינור שינויים בין ההקפאה והפשרה בחנקן נוזלי) על פילהוראות היצרן או נהלי מעבדה רגילים. יש לי חנקן נוזלי מוכן בבקבוק דיואר אלומיניום. הערה: השתמש בבגדים וeyeware מגן בעת ​​טיפול בחנקן נוזלי. ודא שחנקן נוזלי משמש בחדר מאוורר היטב כנפח של צורת הגז שלה הוא כ -700 פעמים כי המצב הנוזלי שלה ויכול לגרום לחנק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עמוק לטשטש עכברים עם קטמין (400 מ&quot;ג / קילוגרם) באמצעות הזרקה תוך הצפק. לאפשר לרפלקס האחורי-האיבר להתפוגג לחלוטין כסימן לכך שעכברים בהרדמה מלאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לערוף עכברים עם מספריים נירוסטה חדים ולעשות חתך לאורך עור sagittal של הגולגולת באמצעות סכין גילוח (מעוגל # 22). בשלב זה ובכל רחבי הצעדים 3.5-3.9, לשמור על קמרון הגולגולת, מוח, ומכשירי שיווי המשקל הבסיסיים מגניב ככל האפשר על ידי יישום רגיל של ACSF קר כקרח על הרקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות הזרוע המחודדת של מספריים דפוס סטנדרטיים לעשות smalחתך l בגולגולת בLambda ולחתוך לאורך תפר sagittal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חלק בעדינות זרוע אחת של rongeurs רדוד מתחת לעצם הקודקודית שמירת הלהב הקרוב ככל האפשר אל פני השטח הנחות של העצם ללא גרירת המוח. בטוח ולהתרחק עצם הקודקודית רוחבי והעצם העורף בדיעבד, עד שהמוח חשוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במרית נירוסטה קטנה ולהרים את המוח מקדמי והפוסות גולגולת אמצע לחשוף את עצב השמיעה ושיווי המשקל (CN VIII). Transect העצב כדי למנוע מתחים מיותרים על האקסונים הביא העיקריים שמעצבבים ישירות את תאי שיער שיווי המשקל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המוח בטוטו לאחר חיתוך רוחב של CN VIII. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב המבוך הגרמי המכיל את השבלול ואיברי שיווי המשקל ההיקפיים בהפוסות גולגולת האמצע. לעשות שני חתכים קטנים ליד כל מבוך גרמי, ולהסיר את כל המבנה על ידי לחיצה על התעלה חצי עגולה הקדמית ומושך מאוחר יותרברית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד לטבול במבוכים נכרתו בצלחת לנתח מכילה פתרון ACSF קר כקרח (כמתואר בשלב 3.1) ואילו מרוסס ברציפות עם carbogen. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת סטראו, החזק את המבוך על ידי השבלול ולאבטח אותו לתחתית הצלחת עם מלקחיים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במלקחיים ישר קנס לגרד פתח קטן בעצמות מעל ampulla הקדמי תעלה חצי עגולה (SSC). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להגדיל פתיחה זו על ידי להגיע מייד מתחת לעצם ומצליף כלפי חוץ רחוק מampulla. נהג במשנה זהירות כאן לא לדחוף מלקחיים לתוך הפתח ולפגוע במבוך הקרומי השביר להלן. המשך בדרך זו עד utricle, הקדמי וampullae לרוחב כל חשופים. אם אפשר להסיר את ampulla האחורי גם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מלקחיים עדינים, בעדינות להרים את utricle וampullae מהמבוך הגרמי עד שהם מנותקים לחלוטין. במידת האפשר, להחזיק אותםעל ידי תעלות בצורת חצי עיגול הקשורים בם כדי למנוע נזק לאפיתל החושי. במקרים מסוימים, החלק הפרוקסימלי של הצינור בצורת חצי עיגול הקרומי ייתכן שיהיה הצורך לגזור במספריים איריס לשחרר ampullae מהעצם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן מאובטח לתפוס את איברי שיווי המשקל בין קצה המלקחיים והמקום למאגר תמוגה הכין קודם לכן בשלב 3.2. מערבולת בעדינות את המלקחיים סביב במאגר כדי להבטיח איברי שיווי המשקל שמנותקים מהמלקחיים. בדקו זה המקרה על ידי הבאת המלקחיים תחת stereomicroscope. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדפוק על מכסה microtubule ולהקפיא את המדגם בחנקן נוזלי באופן מיידי. </li></ol></li></ol> 4. הפקת RNA וRT-PCR <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עקוב שיטות סטנדרטי להפקת שליח RNA (mRNA) על פי הוראות יצרן או פרוטוקולי מעבדה מועדפים. הערה: ערכה מסחרית שנוצלה RNAs ספק לעזור לבודד תשואות קטנות של mRNA שימשה בזהפרוטוקול. כרכי elution תחתון ניתן להשתמש כדי להגדיל את הריכוזים סופיים של mRNA. הערה: בקרות שליליות &quot;אין אנזים&quot; (NECs) ובקרות &quot;אין תבנית ה- DNA&quot; (NTCs) גם יש להשלים כדי להבטיח תוקפו של השפעות שנצפו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליישם שיטות סטנדרטית של שעתוק לאחור של mRNA ל- DNA משלים (cDNA) והגברה של גני המטרה 21-23. </li></ol>

<ol>
	<li>Agrawal, Y., Carey, J. P., Della Santina, ., C, C., Schubert, M. C., Minor, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disorders+of+balance+and+vestibular+function+in+US+adults:+data+from+the+National+Health+and+Nutrition+Examination+Survey,+2001-2004.">Disorders of balance and vestibular function in US adults: data from the National Health and Nutrition Examination Survey, 2001-2004.</a> Archives of internal medicine. 169, 938-944 (2009).</li><li>Bessho, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+subthreshold+infrared+laser+treatment+for+drusen+regression+on+macular+autofluorescence+in+patients+with+age-related+macular+degeneration.">Effect of subthreshold infrared laser treatment for drusen regression on macular autofluorescence in patients with age-related macular degeneration.</a> Retina. 25, 981-988 (2005).</li><li>Olk, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+benefits+of+infrared+(810-nm)+diode+laser+macular+grid+photocoagulation+in+prophylactic+treatment+of+nonexudative+age-related+macular+degeneration:+two-year+results+of+a+randomized+pilot+study.">Therapeutic benefits of infrared (810-nm) diode laser macular grid photocoagulation in prophylactic treatment of nonexudative age-related macular degeneration: two-year results of a randomized pilot study.</a> Ophthalmology. 106, 2082-2090 (1999).</li><li>Rodanant, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictors+of+drusen+reduction+after+subthreshold+infrared+(810+nm)+diode+laser+macular+grid+photocoagulation+for+nonexudative+age-related+macular+degeneration.">Predictors of drusen reduction after subthreshold infrared (810 nm) diode laser macular grid photocoagulation for nonexudative age-related macular degeneration.</a> American journal of ophthalmology. 134, 577-585 (2002).</li><li>De Taboada, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcranial+laser+therapy+attenuates+amyloid-beta+peptide+neuropathology+in+amyloid-beta+protein+precursor+transgenic+mice.">Transcranial laser therapy attenuates amyloid-beta peptide neuropathology in amyloid-beta protein precursor transgenic mice.</a> Journal of Alzheimer's disease : JAD. 23, 521-535 (2011).</li><li>Grillo, S. L., Duggett, N. A., Ennaceur, A., Chazot, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+infra-red+therapy+(1072+nm)+reduces+beta-amyloid+protein+levels+in+the+brain+of+an+Alzheimer's+disease+mouse+model.">Non-invasive infra-red therapy (1072 nm) reduces beta-amyloid protein levels in the brain of an Alzheimer's disease mouse model.</a> TASTPM. Journal of photochemistry and photobiology. B, Biology. 123, 13-22 (2013).</li><li>Purushothuman, S., Johnstone, D. M., Nandasena, C., Mitrofanis, J., Stone, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photobiomodulation+with+near+infrared+light+mitigates+Alzheimer's+disease-related+pathology+in+cerebral+cortex+-+evidence+from+two+transgenic+mouse+models.">Photobiomodulation with near infrared light mitigates Alzheimer's disease-related pathology in cerebral cortex - evidence from two transgenic mouse models.</a> Alzheimer's researc., &amp; therapy. 6, 2 (2014).</li><li>Sommer, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=670+nm+laser+light+and+EGCG+complementarily+reduce+amyloid-beta+aggregates+in+human+neuroblastoma+cells:+basis+for+treatment+of+Alzheimer's+disease.">670 nm laser light and EGCG complementarily reduce amyloid-beta aggregates in human neuroblastoma cells: basis for treatment of Alzheimer's disease.</a> Photomedicine and laser surgery. 30, 54-60 (2012).</li><li>Moro, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photobiomodulation+preserves+behaviour+and+midbrain+dopaminergic+cells+from+MPTP+toxicity:+evidence+from+two+mouse+strains.">Photobiomodulation preserves behaviour and midbrain dopaminergic cells from MPTP toxicity: evidence from two mouse strains.</a> BMC neuroscience. 14, 40 (2013).</li><li>Peoples, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photobiomodulation+enhances+nigral+dopaminergic+cell+survival+in+a+chronic+MPTP+mouse+model+of+Parkinson's+disease.">Photobiomodulation enhances nigral dopaminergic cell survival in a chronic MPTP mouse model of Parkinson's disease.</a> Parkinsonis., &amp; related. 18, 469-476 (2012).</li><li>Shaw, V. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotection+of+midbrain+dopaminergic+cells+in+MPTP-treated+mice+after+near-infrared+light+treatment.">Neuroprotection of midbrain dopaminergic cells in MPTP-treated mice after near-infrared light treatment.</a> The Journal of comparative neurology. 518, 25-40 (2010).</li><li>Ying, R., Liang, H. L., Whelan, H. T., Eells, J. T., Wong-Riley, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pretreatment+with+near-infrared+light+via+light-emitting+diode+provides+added+benefit+against+rotenone-+and+MPP+-induced+neurotoxicity.">Pretreatment with near-infrared light via light-emitting diode provides added benefit against rotenone- and MPP+-induced neurotoxicity.</a> Brain research. 1243, 167-173 (2008).</li><li>Rajguru, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infrared+photostimulation+of+the+crista+ampullaris.">Infrared photostimulation of the crista ampullaris.</a> The Journal of physiology. 589, 1283-1294 (2011).</li><li>Chung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nuts+and+bolts+of+low-level+laser+(light)+therapy.">The nuts and bolts of low-level laser (light) therapy.</a> Annals of biomedical engineering. 40, 516-533 (2012).</li><li>Desmet, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+experimental+applications+of+NIR-LED+photobiomodulation.">Clinical and experimental applications of NIR-LED photobiomodulation.</a> Photomedicine and laser surgery. 24, 121-128 (2006).</li><li>Huang, Y. Y., Chen, A. C., Carroll, J. D., Hamblin, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biphasic+dose+response+in+low+level+light+therapy.">Biphasic dose response in low level light therapy.</a> Dose-response : a publication of International Hormesis Society. 7, 358-383 (2009).</li><li>Rojas, J. C., Gonzalez-Lima, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-level+light+therapy+of+the+eye+and+brain.">Low-level light therapy of the eye and brain.</a> Eye and brain. 3, 49-67 (2011).</li><li>Vranceanu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Striated+organelle,+a+cytoskeletal+structure+positioned+to+modulate+hair-cell+transduction.">Striated organelle, a cytoskeletal structure positioned to modulate hair-cell transduction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109, 4473-4478 (2012).</li><li>Johnson, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separate+and+combined+effects+of+Sod1+and+Cdh23+mutations+on+age-related+hearing+loss+and+cochlear+pathology+in+C57BL/6J+mice.">Separate and combined effects of Sod1 and Cdh23 mutations on age-related hearing loss and cochlear pathology in C57BL/6J mice.</a> Hearing research. 268, 85-92 (2010).</li><li>Tung, V. W., Di Marco, S., Lim, R., Brichta, A. M., Camp, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+isolated+semi-intact+preparation+of+the+mouse+vestibular+sensory+epithelium+for+electrophysiology+and+high-resolution+two-photon+microscopy.">An isolated semi-intact preparation of the mouse vestibular sensory epithelium for electrophysiology and high-resolution two-photon microscopy.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50471 (2013).</li><li>Kirby, J., Menzies, F. M., Cookson, M. R., Bushby, K., Shaw, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+gene+expression+in+a+cell+culture+model+of+SOD1-related+familial+motor+neurone+disease.">Differential gene expression in a cell culture model of SOD1-related familial motor neurone disease.</a> Human molecular genetics. 11, 2061-2075 (2002).</li><li>Parry, S. N., Ellis, N., Li, Z., Maitz, P., Witting, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myoglobin+induces+oxidative+stress+and+decreases+endocytosis+and+monolayer+permissiveness+in+cultured+kidney+epithelial+cells+without+affecting+viability.">Myoglobin induces oxidative stress and decreases endocytosis and monolayer permissiveness in cultured kidney epithelial cells without affecting viability.</a> Kidney and Blood Pressure Research. 31, 16-28 (2008).</li><li>Saee-Rad, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+superoxide+dismutase+1,+dual-specificity+phosphatase+1,+and+transforming+growth+factor,+beta+1+genes+expression+in+keratoconic+and+non-keratoconic+corneas.">Analysis of superoxide dismutase 1, dual-specificity phosphatase 1, and transforming growth factor, beta 1 genes expression in keratoconic and non-keratoconic corneas.</a> Molecular vision. 19, 2501-2507 (2013).</li><li>Albert, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPV4+channels+mediate+the+infrared+laser-evoked+response+in+sensory+neurons.">TRPV4 channels mediate the infrared laser-evoked response in sensory neurons.</a> Journal of neurophysiology. 107, 3227-3234 (2012).</li><li>Moro, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photobiomodulation+inside+the+brain:+a+novel+method+of+applying+near-infrared+light+intracranially+and+its+impact+on+dopaminergic+cell+survival+in+MPTP-treated+mice.">Photobiomodulation inside the brain: a novel method of applying near-infrared light intracranially and its impact on dopaminergic cell survival in MPTP-treated mice.</a> Journal of neuroscience. 120, 670-683 (2014).</li><li>Moreno, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infrared+neural+stimulation:+beam+path+in+the+guinea+pig+cochlea.">Infrared neural stimulation: beam path in the guinea pig cochlea.</a> Hearing research. 282, 289-302 (2011).</li><li>Curthoys, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+red+thread+as+a+guide+in+the+vestibular+labyrinth.">A red thread as a guide in the vestibular labyrinth.</a> The Journal of physiology. 589, 1241-1241 (2011).</li><li>Chakrabarti, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+Dysfunction+during+Brain+Aging:+Role+of+Oxidative+Stress+and+Modulation+by+Antioxidant+Supplementation.">Mitochondrial Dysfunction during Brain Aging: Role of Oxidative Stress and Modulation by Antioxidant Supplementation.</a> Aging and disease. 2, 242-256 (2011).</li><li>Petrosillo, G., De Benedictis, V., Ruggiero, F. M., Paradies, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decline+in+cytochrome+c+oxidase+activity+in+rat-brain+mitochondria+with+aging.+Role+of+peroxidized+cardiolipin+and+beneficial+effect+of+melatonin.">Decline in cytochrome c oxidase activity in rat-brain mitochondria with aging. Role of peroxidized cardiolipin and beneficial effect of melatonin.</a> Journal of bioenergetics and biomembranes. 45, 431-440 (2013).</li><li>Zhu, H., Sun, A., Zou, Y., Ge, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+metabolic+adaptation+promotes+mesenchymal+stem+cell+therapy+for+ischemia:+a+hypoxia-induced+and+glycogen-based+energy+prestorage+strategy.">Inducible metabolic adaptation promotes mesenchymal stem cell therapy for ischemia: a hypoxia-induced and glycogen-based energy prestorage strategy.</a> Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology. 34, 870-876 (2014).</li></ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

תוצאות הנציג המתוארות כאן מראות כי מסירה קצרה transcranial של אור ניר (90 שניות / יום למשך 5 ימים) מספיקה כדי להעלות את רמות ביטוי של נוגדי חמצון בעכברים מבוגרים בהשוואה לעכברים שטופל בדמה. בעוד חום הנפלט יכול לייצג מקור של המיטוכונדריה ו / או הפעלה עצבית, כפי שדווח לשיווי משקל...

ירידת ביצועי איזון ונפילות שלאחר מכן הם נפוצות, ותכונות למרבה הצער לעתים קרובות הגדרה של הזדקנות טבעית 1. ההשפעה של ירידה זו יכולה להיות גם פיזית וחברתית, ומפחית באופן משמעותי את איכות חיים של אנשים מבוגרים. בתגובה, טיפולים ושיקום פיזיים היו מוקד המחקר לנפילות, אך לא היו קשורים עם ירידה עקבית בשכיחות של נפילות חוזרות ונשנות. במקביל, עבודה חוקרת שינויים במערכת ההיקפית או מרכזית שיווי המשקל (המערכת אחראית ללשמור על איזון) היא נדיר, ואסטרטגיות טיפוליות פוטנציאל מיקוד מערכות אלה וסיבות הגורמות לחוסר איזון מוגבל. מחקר שנערך לאחרונה על הפרעות ניווניות גיל הקשורים כוללים התנוונות הקשורות לגיל מקולרי 2-4, המודלים למחלת אלצהיימר 5-8, ומחלת פרקינסון 9-12 הראה השפעות נוירו של simple יישום לא פולשנית של אינפרא אדום הקרוב אור (ניר). יתר על כן, במערכת שיווי המשקל, ניר נעשה שימוש כדי להגדיל את הפעילות של תאי עצב הביא עיקריים שיווי המשקל במבחנה 13. בעוד המנגנון של אור ניר אינו מובן היטב, רוב המחקרים משתמשים בניר הציעו שניר מגרה IV המיטוכונדריה המורכב (מונואמין ג ציטוכרום) 14-17 כדי להקל על חילוף חומרים תאיים. בהאפיתל החושית שיווי המשקל צלחת subcuticular של תאים לי שיער סוג היא צפופה במיטוכונדריה 18 ובתור שכזו עשויה לייצג אתר של פעולה לטיפול בניר טיפולי. כאן, משטר קצר, לא פולשנית טיפול בtranscranially מיושם ניר, שניתן להשתמש כדי למדוד את חילוף החומרים תאיים (ובמשתמע, פונקציה של המיטוכונדריה) בהאפיתל החושית שיווי המשקל העכבר מתואר. דן גם היא הכנה של האפיתל החושית שיווי המשקל והוא הראה כי ניר מגביר את הביטוי של ubiquitoשלנו נוגד חמצון (סופראוקסיד דיסמוטאז 1) בהאפיתל החושית - הראה בעבר להיות חשוב להישרדות תא שיער שבלול 19.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="603">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:101px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Quantum WARP 10</td>
			<td style="width:101px;">Quantum Devices</td>
			<td style="width:119px;">2070N030-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Screw top microtubules</td>
			<td style="width:101px;">Quality Scientific Plastics</td>
			<td style="width:119px;">520-GRD-Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Ketamine</td>
			<td style="width:101px;">Parnell, Alexandria Australia</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Standard Pattern Scissors</td>
			<td style="width:101px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">14001-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Carbon steel Surgical Blades #22</td>
			<td style="width:101px;">Livingstone</td>
			<td style="width:119px;">SBLDCL 22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Friedman-Pearson Rongeurs</td>
			<td style="width:101px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">16221-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Stereo microscope</td>
			<td style="width:101px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">A60S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dumont #5 SF Forceps</td>
			<td style="width:101px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">11252-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Isolate II RNA Micro Kit</td>
			<td style="width:101px;">Bioline</td>
			<td style="width:119px;">BIO-52075</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

near infrared (nir) light increases expression of a marker of mitochondrial function in the mouse vestibular sensory epithelium

אסטרטגיות להחלשת ירידה בתפקוד איזון עם עלייה בגיל הם לרוב מתמקדים על טיפולים פיזיים כוללים משימות איזון ופעילות גופנית. עם זאת, גישות אלה אינכם מתייחסים לגורמים הבסיסיים של ירידת איזון. באמצעות עכברים, את ההשפעה של אור אינפרא אדום קרוב (ניר) על חילוף החומרים של תאים באפיתל החושי שיווי המשקל הוערכה. הנתונים שנאספו מראה כי התערבות פשוטה ובטוחה זה עשויה להגן על תאים פגיעים אלה מההשפעות המזיקות של הזדקנות טבעית. mRNA היה שחולץ מן האפיתל המבודד ההיקפי שיווי המשקל החושי (ampullaris Crista והמקולה utricular) ועבד לאחר מכן לתוך ספריית cDNA. ספרייה זו ולאחר מכן נחקר לביטוי של נוגדי חמצון בכל מקום (SOD-1). ביטוי גנים נוגד חמצון היה אז בשימוש לכמת את חילוף החומרים תאיים. באמצעות משלוח transcranial של ניר בצעיר (4 שבועות) ומעלה (8-9 חודשים) עכברים, ומשטר טיפול קצר (90 שניות / יום במשך 5 דays), עבודה זו מצביעה על ניר לבד עשוי להיות מספיק כדי לשפר את התפקוד המיטוכונדריה בהאפיתל החושית שיווי המשקל. מאז אין כיום שיטות זמינות, זולות, לא פולשנית של טיפול כדי לשפר את תפקוד תא שיער שיווי המשקל, היישום של קרינת ניר חיצונית מספק אסטרטגית פוטנציאל כדי לנטרל את השפעת הזדקנות על חילוף חומרים בתאים אפיתל ביישום לוח החושי שיווי המשקל.

כדי להשוות את ההשפעה של טיפול בניר צעיר (4 שבועות) ומעלה (8-9 חודשים) עכברים מדדנו את הביטוי של סופראוקסיד דיסמוטאז נוגד חמצון 1 (SOD-1) בצעיר (n = 16) ומעלה (n = 20) עכברים שטופלו היו ניר, שטופל דמה, או חסום-ניר. איור 2 מראה גידול משמעותי בביטוי β-אקטין מנורמל SOD-1 של יותר מ פ?...

Watch this Scientific Journal Video about Near Infrared NIr Light Increases Expression of a Marker of Mitochondrial Function in the Mouse Vestibular Sensory Epithelium at JoVE.com

Near Infrared NIr Light Increases Expression of a Marker of Mitochondrial Function in the Mouse Vestibular Sensory Epithelium

תפקוד לקוי של המיטוכונדריה הוא סימן היכר של הזדקנות תאית. מאמר זה משתמש בטיפול לא פולשני קרוב אינפרא אדום (ניר) כדי לשפר את התפקוד המיטוכונדריה בהאפיתל החושית שיווי המשקל עכבר ההזדקנות.

קרוב אינפרא אדום (ניר) אור מגביר את הביטוי של דה מרקר של פונקצית מיטוכונדריאלי בעכבר שיווי המשקל החושי האפיתל

Strategies for attenuating decline in balance function with increasing age are predominantly focused on physical therapies including balance tasks and ...

near-infrared-nir-light-increases-expression-marker-mitochondrial

Research

JoVE Journal

Biology

Near Infrared (NIr) Light Increases Expression of a Marker of Mitochondrial Function in the Mouse Vestibular Sensory Epithelium

9.8K Views.  University of Sydney.  תפקוד לקוי של המיטוכונדריה הוא סימן היכר של הזדקנות תאית. מאמר זה משתמש בטיפול לא פולשני קרוב אינפרא אדום (ניר) כדי לשפר את התפקוד המיטוכונדריה בהאפיתל החושית שיווי המשקל עכבר ההזדקנות. 

Video: Near Infrared NIr Light Increases Expression of a Marker of Mitochondrial Function in the Mouse Vestibular Sensory Epithelium

Exploring Cognitive Functions in Babies, Children &amp; Adults with Near Infrared Spectroscopy

An explosion of functional Near Infrared Spectroscopy (fNIRS) studies investigating cortical activation in relation to higher cognitive processes, such as language1,2,3,4,5,6,7,8,9,10, memory11, and attention12 is underway worldwide involving adults, children and infants 3,4,13,14,15,16,17,18,19 with typical and atypical cognition20,21,22. The contemporary challenge of using fNIRS for cognitive neuroscience is to achieve systematic analyses of data such that they are universally interpretable23,24,25,26, and thus may advance important scientific questions about the functional organization and neural systems underlying human higher cognition.
Existing neuroimaging technologies have either less robust temporal or spatial resolution. Event Related Potentials and Magneto Encephalography (ERP and MEG) have excellent temporal resolution, whereas Positron Emission Tomography and functional Magnetic Resonance Imaging (PET and fMRI) have better spatial resolution. Using non-ionizing wavelengths of light in the near-infrared range (700-1000 nm), where oxy-hemoglobin is preferentially absorbed by 680 nm and deoxy-hemoglobin is preferentially absorbed by 830 nm (e.g., indeed, the very wavelengths hardwired into the fNIRS Hitachi ETG-400 system illustrated here), fNIRS is well suited for studies of higher cognition because it has both good temporal resolution (~5s) without the use of radiation and good spatial resolution (~4 cm depth), and does not require participants to be in an enclosed structure27,28. Participants cortical activity can be assessed while comfortably seated in an ordinary chair (adults, children) or even seated in mom s lap (infants). Notably, NIRS is uniquely portable (the size of a desktop computer), virtually silent, and can tolerate a participants subtle movement. This is particularly outstanding for the neural study of human language, which necessarily has as one of its key components the movement of the mouth in speech production or the hands in sign language. 
The way in which the hemodynamic response is localized is by an array of laser emitters and detectors. Emitters emit a known intensity of non-ionizing light while detectors detect the amount reflected back from the cortical surface. The closer together the optodes, the greater the spatial resolution, whereas the further apart the optodes, the greater depth of penetration. For the fNIRS Hitachi ETG-4000 system optimal penetration / resolution the optode array is set to 2cm. 
Our goal is to demonstrate our method of acquiring and analyzing fNIRS data to help standardize the field and enable different fNIRS labs worldwide to have a common background.

Here we describe a data collection and data analysis method for functional Near Infrared Spectroscopy (fNIRS), a novel non-invasive brain imaging system used in cognitive neuroscience, particularly in studying child brain development. This method provides a universal standard of data acquisition and analysis vital to data interpretation and scientific discovery.

היכרות עם תפקודים קוגניטיביים אצל תינוקות, ילדים &amp; מבוגרים עם ספקטרוסקופית אינפרא אדום הקרוב

An explosion of functional Near Infrared Spectroscopy (fNIRS) studies investigating cortical activation in relation to higher cognitive processes, such as ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser MXcell electroporation system and Gene Pulser electroporation buffer (Bio-Rad) were specifically developed to easily transfect nucleic acids into mammalian cells and difficult-to-transfect cells, such as primary and stem cells. We will demonstrate how to perform a simple experiment to quickly identify the best electroporation conditions. We will demonstrate how to run several samples through a range of electroporation conditions so that an experiment can be conducted at the same time as optimization is performed. We will also show how optimal conditions identified using 96-well electroporation plates can be used with standard electroporation cuvettes, facilitating the switch from electroporation plates to electroporation cuvettes while maintaining the same electroporation efficiency. In the video, we will also discuss some of the key factors that can lead to the success or failure of electroporation experiments.

This procedure shows how to use the Gene Pulser MXcell electroporation system to rapidly and easily identify the best electroporation conditions for mouse embryonic fibroblasts (MEFs) or other primary cells. Considerations for troubleshooting are also discussed in the associated video.

שימוש ג&#39;ין Pulser מערכת MXcell electroporation כדי Transfect תאים ראשוניים עם יעילות גבוהה

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Hi-C: A Method to Study the Three-dimensional Architecture of Genomes.

The three-dimensional folding of chromosomes compartmentalizes the genome and and can bring distant functional elements, such as promoters and enhancers, into close spatial proximity 2-6. Deciphering the relationship between chromosome organization and genome activity will aid in understanding genomic processes, like transcription and replication. However, little is known about how chromosomes fold. Microscopy is unable to distinguish large numbers of loci simultaneously or at high resolution. To date, the detection of chromosomal interactions using chromosome conformation capture (3C) and its subsequent adaptations required the choice of a set of target loci, making genome-wide studies impossible 7-10.
We developed Hi-C, an extension of 3C that is capable of identifying long range interactions in an unbiased, genome-wide fashion. In Hi-C, cells are fixed with formaldehyde, causing interacting loci to be bound to one another by means of covalent DNA-protein cross-links. When the DNA is subsequently fragmented with a restriction enzyme, these loci remain linked. A biotinylated residue is incorporated as the 5' overhangs are filled in. Next, blunt-end ligation is performed under dilute conditions that favor ligation events between cross-linked DNA fragments. This results in a genome-wide library of ligation products, corresponding to pairs of fragments that were originally in close proximity to each other in the nucleus. Each ligation product is marked with biotin at the site of the junction. The library is sheared, and the junctions are pulled-down with streptavidin beads. The purified junctions can subsequently be analyzed using a high-throughput sequencer, resulting in a catalog of interacting fragments.
Direct analysis of the resulting contact matrix reveals numerous features of genomic organization, such as the presence of chromosome territories and the preferential association of small gene-rich chromosomes. Correlation analysis can be applied to the contact matrix, demonstrating that the human genome is segregated into two compartments: a less densely packed compartment containing open, accessible, and active chromatin and a more dense compartment containing closed, inaccessible, and inactive chromatin regions. Finally, ensemble analysis of the contact matrix, coupled with theoretical derivations and computational simulations, revealed that at the megabase scale Hi-C reveals features consistent with a fractal globule conformation.

The Hi-C method allows unbiased, genome-wide identification of chromatin interactions (1). Hi-C couples proximity ligation and massively parallel sequencing. The resulting data can be used to study genomic architecture at multiple scales: initial results identified features such as chromosome territories, segregation of open and closed chromatin, and chromatin structure at the megabase scale.

Hi-C: שיטה לחקר ארכיטקטורה תלת ממדי של הגנום.

The three-dimensional folding of chromosomes compartmentalizes the genome and and can bring distant functional elements, such as promoters and enhancers, ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only to study the effects of downregulating single genes, but also to interrogate signaling pathways and other complex interaction networks.  These pathway analyses require both the use of relevant cellular models and methods that cause less perturbation to the cellular physiology.  Electroporation is increasingly being used as an effective way to introduce siRNA and other nucleic acids into difficult to transfect cell lines and primary cells without altering the signaling pathway under investigation. There are multiple critical steps to a successful siRNA experiment, and there are ways to simplify the work while improving the data quality at several experimental stages.  To help you get started with your siRNA mediated gene knockdown project, we will demonstrate how to perform a pathway study complete from collecting and counting the cells prior to electroporation through post transfection real-time PCR gene expression analysis.  The following study investigates the role of the transcriptional activator STAT6 in IL-4 dependent gene expression of CCL17 in a Burkitt lymphoma cell line (Namalwa).  The techniques demonstrated are useful for a wide range of siRNA-based experiments on both adherent and suspension cells.  We will also show how to streamline cell counting with the TC10 automated cell counter, how to electroporate multiple samples simultaneously using the MXcell electroporation system, and how to simultaneously assess RNA quality and quantity with the Experion automated electrophoresis system.

This procedure describes a quick and easy workflow to introduce siRNA into difficult to transfect cell lines and follow gene expression by real-time PCR. Use of an automated cell counter, multi-well electroporation plate, and automated electrophoresis station provide quick and reliable results without the need for expensive robotic handling.

שימוש מונה תא אוטומטי כדי לפשט את הביטוי מחקרים ג&#39;ין: siRNA מציאה הביטוי IL 4-Gene תלויים תאים Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more than a decade. Here, we present methods for the isolation of the recombinant Tribolium castaneum TERT (TcTERT) and the reconstitution of the active T. castaneum telomerase ribonucleoprotein (RNP) complex in vitro.
Telomerase is a specialized reverse transcriptase1 that adds short DNA repeats, called telomeres, to the 3' end of linear chromosomes2 that serve to protect them from end-to-end fusion and degradation. Following DNA replication, a short segment is lost at the end of the chromosome3 and without telomerase, cells continue dividing until eventually reaching their Hayflick Limit4. Additionally, telomerase is dormant in most somatic cells5 in adults, but is active in cancer cells6 where it promotes cell immortality7.
The minimal telomerase enzyme consists of two core components: the protein subunit (TERT), which comprises the catalytic subunit of the enzyme and an integral RNA component (TER), which contains the template TERT uses to synthesize telomeres8,9. Prior to 2008, only structures for individual telomerase domains had been solved10,11. A major breakthrough in this field came from the determination of the crystal structure of the active12, catalytic subunit of T. castaneum telomerase, TcTERT1.
Here, we present methods for producing large quantities of the active, soluble TcTERT for structural and biochemical studies, and the reconstitution of the telomerase RNP complex in vitro for telomerase activity assays. An overview of the experimental methods used is shown in Figure 1.

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more than a decade. Here, we present methods for the isolation of the recombinant Tribolium castaneum TERT (TcTERT) and the reconstitution of the active T. castaneum telomerase ribonucleoprotein (RNP) complex in vitro.

ב הכינון במבחנה של ט פעילים castaneum שהטלומרז

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Using High Resolution Computed Tomography to Visualize the Three Dimensional Structure and Function of Plant Vasculature

High resolution x-ray computed tomography (HRCT) is a non-destructive diagnostic imaging technique with sub-micron resolution capability that is now being used to evaluate the structure and function of plant xylem network in three dimensions (3D) (e.g. Brodersen et al. 2010; 2011; 2012a,b). HRCT imaging is based on the same principles as medical CT systems, but a high intensity synchrotron x-ray source results in higher spatial resolution and decreased image acquisition time. Here, we demonstrate in detail how synchrotron-based HRCT (performed at the Advanced Light Source-LBNL Berkeley, CA, USA) in combination with Avizo software (VSG Inc., Burlington, MA, USA) is being used to explore plant xylem in excised tissue and living plants. This new imaging tool allows users to move beyond traditional static, 2D light or electron micrographs and study samples using virtual serial sections in any plane. An infinite number of slices in any orientation can be made on the same sample, a feature that is physically impossible using traditional microscopy methods.
Results demonstrate that HRCT can be applied to both herbaceous and woody plant species, and a range of plant organs (i.e. leaves, petioles, stems, trunks, roots). Figures presented here help demonstrate both a range of representative plant vascular anatomy and the type of detail extracted from HRCT datasets, including scans for coast redwood (Sequoia sempervirens), walnut (Juglans spp.), oak (Quercus spp.), and maple (Acer spp.) tree saplings to sunflowers (Helianthus annuus), grapevines (Vitis spp.), and ferns (Pteridium aquilinum and Woodwardia fimbriata). Excised and dried samples from woody species are easiest to scan and typically yield the best images. However, recent improvements (i.e. more rapid scans and sample stabilization) have made it possible to use this visualization technique on green tissues (e.g. petioles) and in living plants. On occasion some shrinkage of hydrated green plant tissues will cause images to blur and methods to avoid these issues are described. These recent advances with HRCT provide promising new insights into plant vascular function.

High resolution x-ray computed tomography (HRCT) is a non-destructive diagnostic imaging technique that can be used to study the structure and function of plant vasculature in 3D. We demonstrate how HRCT facilitates exploration of xylem networks across a wide range of plant tissues and species.

שימוש ברזולוציה גבוהה טומוגרפיה ממוחשבת כדי להמחיש את המבנה התל ממדים ופונקציה של הצמח vasculature

High resolution x-ray computed tomography (HRCT) is a non-destructive diagnostic imaging technique with sub-micron resolution capability that is now being ...

MicroRNA Expression Profiles of Human iPS Cells, Retinal Pigment Epithelium Derived From iPS, and Fetal Retinal Pigment Epithelium

The objective of this report is to describe the protocols for comparing the microRNA (miRNA) profiles of human induced-pluripotent stem (iPS) cells, retinal pigment epithelium (RPE) derived from human iPS cells (iPS-RPE), and fetal RPE. The protocols include collection of RNA for analysis by microarray, and the analysis of microarray data to identify miRNAs that are differentially expressed among three cell types. The methods for culture of iPS cells and fetal RPE are explained. The protocol used for differentiation of RPE from human iPS is also described. The RNA extraction technique we describe was selected to allow maximal recovery of very small RNA for use in a miRNA microarray. Finally, cellular pathway and network analysis of microarray data is explained. These techniques will facilitate the comparison of the miRNA profiles of three different cell types.

The microRNA (miRNA) profiles of human induced-pluripotent stem (iPS) cells, retinal pigment epithelium (RPE) derived from human induced-pluripotent stem (iPS) cells (iPS-RPE), and fetal RPE, were compared.

פרופילי הביטוי microRNA של תאי iPS האנושי, רשתית פיגמנט האפיתל נגזר משב&quot;ס, ועוברי הרשתית פיגמנט האפיתל

The objective of this report is to describe the protocols for comparing the microRNA (miRNA) profiles of human induced-pluripotent stem (iPS) cells, ...

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of central nervous system injuries in vivo, possibly by reducing oxidative stress. However, effects of R/NIR-LT on oxidative stress have been shown to vary depending on wavelength or intensity of irradiation. Studies comparing treatment parameters are lacking, due to absence of commercially available devices that deliver multiple wavelengths or intensities, suitable for high through-put in vitro optimization studies. This protocol describes a technique for delivery of light at a range of wavelengths and intensities to optimize therapeutic doses required for a given injury model. We hypothesized that a method of delivering light, in which wavelength and intensity parameters could easily be altered, could facilitate determination of an optimal dose of R/NIR-LT for reducing reactive oxygen species (ROS) in vitro.
Non-coherent Xenon light was filtered through narrow-band interference filters to deliver varying wavelengths (center wavelengths of 440, 550, 670 and 810nm) and fluences (8.5 x 10-3 to 3.8 x 10-1 J/cm2) of light to cultured cells. Light output from the apparatus was calibrated to emit therapeutically relevant, equal quantal doses of light at each wavelength. Reactive species were detected in glutamate stressed cells treated with the light, using DCFH-DA and H2O2 sensitive fluorescent dyes.&#160;
We successfully delivered light at a range of physiologically and therapeutically relevant wavelengths and intensities, to cultured cells exposed to glutamate as a model of CNS injury. While the fluences of R/NIR-LT used in the current study did not exert an effect on ROS generated by the cultured cells, the method of light delivery is applicable to other systems including isolated mitochondria or more physiologically relevant organotypic slice culture models, and could be used to assess effects on a range of outcome measures of oxidative metabolism.

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Non-coherent Xenon light was passed through narrow-band interference and neutral density filters to deliver light of varying wavelength and intensity to cultured cells. This protocol was used to assess the effects of red/near-infrared light therapy on production of reactive species in vitro: no effects were observed using the tested parameters.

שיטה להערכת ההשפעות של טווח של אורכי גל ועוצמות של אדום / טיפול באור האינפרה-אדום קרוב בסטרס חמצוני<em&gt; במבחנה</em

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of ...

Studying Mitochondrial Structure and Function in Drosophila Ovaries

Analysis of the mitochondrial structure-function relationship is required for a thorough understanding of the regulatory mechanisms of mitochondrial functionality. Fluorescence microscopy is an indispensable tool for the direct assessment of mitochondrial structure and function in live cells and for studying the mitochondrial structure-function relationship, which is primarily modulated by the molecules governing fission and fusion events between mitochondria. This paper describes and demonstrates specific methods for studying mitochondrial structure and function in live as well as in fixed tissue in the model organism Drosophila melanogaster. The tissue of choice here is the Drosophila ovary, which can be isolated and made amenable for ex vivo live confocal microscopy. Furthermore, the paper describes how to genetically manipulate the mitochondrial fission protein, Drp1, in Drosophila ovaries to study the involvement of Drp1-driven mitochondrial fission in modulating the mitochondrial structure-function relationship. The broad use of such methods is demonstrated in already-published as well as in novel data. The described methods can be further extended towards understanding the direct impact of nutrients and/or growth factors on the mitochondrial properties ex vivo. Given that mitochondrial dysregulation underlies the etiology of various diseases, the described innovative methods developed in a genetically tractable model organism, Drosophila, are anticipated to contribute significantly to the understanding of the mechanistic details of the mitochondrial structure-function relationship and to the development of mitochondria-directed therapeutic strategies.

Studying Mitochondrial Structure and Function in Drosophila Ovaries

Analysis of the mitochondrial structure-function relationship is required for a thorough understanding of the regulatory mechanisms of mitochondrial functionality. Specific methods for studying mitochondrial structure and function in live and fixed Drosophila ovaries are described and demonstrated in this paper.

לימוד מבנה ותפקוד מיטוכונדריאלי<em&gt; תסיסנית</em&gt; שחלות

Analysis of the mitochondrial structure-function relationship is required for a thorough understanding of the regulatory mechanisms of mitochondrial ...

Primary Cell Cultures from the Mouse Retinal Pigment Epithelium

The retinal pigment epithelium (RPE) is a highly polarized multi-functional epithelium that is located between the neural retina and the choroid of the eye. It is a single sheet of pigmented cells that are hexagonally packed and connected by tight junctions. The main functions of the RPE include absorption of light, phagocytosis of the shed photoreceptor outer segments, spatial buffering of ions, transport of nutrients, ions and water as well as active involvement in the visual cycle. With such important and diverse functions, it is critically important to study the biology of RPE cells. A number of RPE cell lines have been established; however, passaged and immortalized cells are known to quickly lose some of the morphological and physiological characteristics of natural RPE cells. Thus, primary cells are more suitable for studying different aspects of RPE cell biology and function. Mouse primary RPE cell culture is very useful to researchers since mouse models are widely used in biological studies, however collecting RPE cells from mouse is also very challenging due to their small size. Here, we present a protocol for establishing primary mouse RPE cell cultures which includes enucleation and dissection of the eyes and isolation of the RPE sheets to yield the cells for culturing. This method enables efficient cell recovery. The RPE cells obtained from two mice&#160;can reach confluency on one 12 mm polyester membrane insert pre-loaded in culture plate after one week of culture and display some of the original properties of bona fide RPE cells such as hexagonal shape and pigmentation after two weeks of culture.

The retinal pigment epithelium (RPE) is a multi-functional epithelium of the eye. Here we present a protocol to establish primary cell cultures derived from the murine RPE.

התא העיקרי של אפיתל הפיגמנט ברשתית העכבר תרבויות

The retinal pigment epithelium (RPE) is a highly polarized multi-functional epithelium that is located between the neural retina and the choroid of the ...