ברצוננו להודות לאלכס Hitchen ומג בות &#39;לעזרתם עם ניסויי ההזדווגות. עבודה זו נתמכה על ידי NE מענק NERC / H015604 / 1 לTP.

1. הכנת Fly מזון עם צבעי מאכל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח בקבוקון תסיסנית סטנדרטי עם כ 20 מיליליטר של מזון בתחתית (איור 1). השתמש במתכון לתערובת מזון באמצעות 1 ליטר של מים רותחים הבא: 10 גרם של אגר, 85 גרם של דקסטרוז, 60 גרם קמח תירס, 40 גרם של שמרים, ומערבבים במשך 5 דקות של מבעבע. להוסיף 25 מיליליטר של nipagen 10% פעם אחת את התערובת מתקררת ל -75 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי האוכל התקרר והתמצק להוסיף שתי טיפות (כ 0.5-1 מיליליטר) של צבע מאכל הכחול לחלק העליון של המזון ומשתרע על פני השטח של הבקבוקון השלם (איור 1). השתמש בצבע בצבע שונה, אם העדיף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאר את המזון ליומיים במקרר, כך שהצבע נספג על ידי השכבה העליונה של מזון; זה ימנע לחות מוגזמת פוגעת בזבובים בתקופת ההתבגרות. להוסיף חתיכה קטנה של נייר טישו אם לחות מוגזמת היא עדיין בעיה למחוק את לחות נוספת ולאחר מכן בהמשךהסר זאת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת זבובים על המזון בנפרד או בקבוצות. הערה: זבובים ירוויחו צביעת מעיים בתוך היום 1 של שיוצב על המזון. לחלופין, יבשיל באופן מלא זבובים על המזון הצבוע לפני הניסוי (התמותה המוגברת בתקופת ההתבגרות לא נצפתה מחשיפה לצבע מאכל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק שהזבובים צבועים ניתן להבחין בקלות מהזבובים שאינם צבועים. אם הם לא יכולים להבחין, חזור על שלבים 1.1-1.4 או באמצעות ריכוז גבוה יותר של צבע, או צבע שונה. </li></ol> 2. שני ניסויים הזדווגות זכר שימוש מזון צביעה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייצור צאצאים, הקים בקבוקונים המכילים מספר רב של זוגות של זבובים נשיים וגבריים (קבוצות קטנות של זכרים ונקבות גם מתאימים, למרות לטפל כדי למנוע צפיפות של זחלים). לאפשר לנקבות להטיל ביצים ולהעביר את הזבובים לבקבוקונים חדשים בכל 5-7 ימים. בקבוקוני חנות בטמפרטורה מתאימה למינים של עניין (ו C 22 °או ד פסאודו וד &#39; subobscura ו -25 מעלות צלזיוס למשך ד melanogaster). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני זבובים ניסיוניים איסוף להסיר את כל הזבובים מבקבוקוני האיסוף בשעה קבועה לפני איסוף זכרים ונקבות כדי להבטיח שהם יהיו בתולות (ד melanogaster - 6 שעות של 25 מעלות צלזיוס, ד &#39;פסאודו - 18 שעות על 22 מעלות צלזיוס, ו subobscura ד - 24 שעות על 22 מעלות צלזיוס). הערה: אם זבובים אינם בתולת הטיה רצון זה ההתנהגות שלהם בניסויי הזדווגות 15. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות וגברים בוגרים בנפרד ב -75 x 20 בקבוקוני פלסטיק מ&quot;מ סטנדרטיים (המכיל ~ 20 מיליליטר של מזון). זה ימנע את ההשפעות השליליות על גברים התנהגות הזדווגות וכושר ראה במינים מסוימים, כאשר זכרים נשמרים בקבוצות 16. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף מחצית מהזכרים לטיפול הרצוי (CO 2 הרדמה במקרה זה). השתמש במזרן CO 2 או הקש כדי לחשוף את הזבובים לזמן הנדרש. מחצית חנות של males בכל טיפול במזון צבעוני עד ההזדווגות מתרחש. זה יגרום להם מבחינה ויזואלית להבחין במהלך ניסויי ההזדווגות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעברת זבובים להשתמש aspirator 17. לייבל כל בקבוקון לזהות שני טיפול ומצב הצבע של הזכר. כאן, להשתמש בארבעה טיפולים (הרדמה, שאינו בצבע = G-NC, הרדמה, = GC צבעוני, ללא הרדמה, ללא צבע, NG-NC, ולא הרדמה,, NG-C בצבע). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הנקבות יצאו זה עתה לתוך צלוחיות מזון טריות להתבגר כקבוצות של 10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר זבובים בוגרים לגיל ההזדווגות (ד melanogaster - 3 ימים, ד &#39;פסאודו - 5 ימים, subobscura ד - 7 ימים 18 חנות זבובים בטמפרטורה מתאימה למינים הנחקרים (למשל, 22 מעלות צלזיוס במשך D. . פסאודו וsubobscura ד ו -25 מעלות צלזיוס במשך ד melanogaster). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז נקבות לבקבוקונים בודדים (המשךaining ~ 20 מיליליטר של מזון) יום 1 לפני משפט ההזדווגות להתאקלמות לבקבוקון ההזדווגות. תווית בקבוקונים אלה, כך שיכולים להיות מובחנים בקבוקונים. להיות זהיר כדי לעוור את הניסוי באמצעות תיוג ניטראלי (כלומר, 1 - 150), כך שהוא לא ניתן לנחש את זהותו של זבובים בכל בקבוקון. הערה: האדם שמציב את הזבובים לכל בקבוקון יצטרך לדעת את זהותו של הזבובים להציב בכל בקבוקון כפי שהם לב שהטיפול היה מוכתם. עם זאת, צופה מתבונן ההזדווגות לא צריך לדעת את זהותם. כדי לעשות יהיו צורך בלפחות שני הנסיינים זה, אחד להתקנה ולאחת להתבונן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתחיל ניסויי ההזדווגות בין 10 - 12 בבוקר, או בכל פעם שעולה בקנה אחד עם האור שנכנס במחזור האור / חושך הזבובים נחשפים ל( &quot;שחר&quot; לזבובים). הוסף שני זבובים ממין זכר לכל בקבוקון הזדווגות (המכיל נקבת זבוב אחד) באמצעות aspirator. ודא ששני זכרים מטיפולים שונים (הרדמה אושליטה) וכי יש כתמי מעיים כדי לעשות את זה אפשרי כדי להבדיל אותם מאחד לשני, ושים לב שגברים מוכתם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הזדווגות מתרחשת, להקליט את מעמדם של הגברים שבני זוג (או בצבע או לא - בצבע). אם הניסויים האחרונים עבור שעה 2, להניח הנקבה לא תתחבר. הערה: 2 שעות מתאימה למינים אלה, אבל תסיסנית אחרת עשויה להזדקק ליותר או פחות זמן. </li></ol> 3. ניסויים הזדווגות רווק בן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לניסויים זכר אחד, לחזור על פרוטוקול 2 עם שני שינויים: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב 2.3 לא שומר זכרים על מזון צבעוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב 2.7, להוסיף רק זכר אחד לכל בקבוקון. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב 2.8, להקליט את הזמן לטוס מתווסף לבקבוקון, הזמן צריכים להיות מוקלט מתחילה ההזדווגות וזמן ההזדווגות סיימה. מהערכים אלה, לחשב הזדווגות הצלחה, חביון, ומשך. </li></ol> ניתוח נתונים 4. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בחבילת סטטיסטיקה מתאימה לanaתמוגה. אם הנתונים הם נורמלים ויש רק שני טיפולים, להשתמש במבחני t או לינארי דגם מקביל כללי (GLM). לשני ניסויים גבריים, להשתמש בבדיקות הבינומי או GLM הבינומי שזמינים בכל חבילת סטטיסטיקה בסיסית. הערה: נתוני הדוגמא, כל הניתוחים בוצעו בגרסת 3.0.3 R 19. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו את נתוני חביון ההזדווגות ומשך הזדווגות לנורמליות, על ידי התוויית היסטוגרמות תדירות ומשך השהיה עבור כל טיפול 20, ושימוש במבחן לנורמליות כמו שפירו-וילק. אם זה לא נורמלי, להפוך אותו, או להשתמש בנתונים סטטיסטיים שווה ערך שאינו פרמטרית 20. הערה: נתוני דוגמא מהניסויים זכר יחידים לכניסת שינוי עמד בדרישות של נורמליות וסטיות שווה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הנתונים יכולים להיות מנורמלים, מבחני t שימוש לבחון הבדלים בין חביון ההזדווגות ומשך בניסויי הזדווגות זכר היחיד בעת שימוש בשני טיפולים 21. אם טיפולים מרובים משמשים,לנסות ניתוח שונה (ANOVA) 20. אם לא ניתן מנורמלים נתונים, נסה בדיקות הלא פרמטרית שווה 21. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בדיקות הבינומי לבדיקת השפעה של שני צבעי מאכל או 2 הרדמה CO בהצלחת ההזדווגות של זכרים מתחרים 20. אם טיפולים מרובים משמשים, כמו במקרה עם נתוני הדוגמא, השתמש GLM עם מבנה שגיאה הבינומי 21. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשני ניסויים גבריים בנתונים הדוגמא, השתמש GLMs עם מבני שגיאה הבינומי. אחד GLM בחן צבע כמשתנה תגובה (בצבע = 0 ולא בצבע = 1) עם מינים, מעמד גז, וטיפול בגז מצויד כvariables.One GLM הסבר בחן CO 2 כמשתנה תגובה (גז = 0 ולא הומתו בגז- = 1) עם מינים, מעמד צבע, וטיפול בגז מצויד. בכל מקרה, לייצר המודל המקסימאלי, ולבצע פישוט מודל המבוסס על AIC 20. </li></ol>

<ol>
	<li>Parker, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+competition+and+its+consequences+in+insects.">Sperm competition and its consequences in insects.</a> Biological Reviews. 45, 525-567 (1970).</li><li>Hosken, D. J., Stockley, P., Tregenza, T., Wedell, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monogamy+and+the+battle+of+the+sexes.">Monogamy and the battle of the sexes.</a> Annual Review of Entomology. 54, 361-378 (2009).</li><li>Chapman, T., Liddle, L., John, K., Wolfner, M., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+cost+of+mating+caused+by+males+accessory+gland+fluids.">Female cost of mating caused by males accessory gland fluids.</a> Nature. 373, 241-244 (1995).</li><li>Avent, T. D., Price, T. A. R., Wedell, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-based+female+preference+in+the+fruit+fly+Drosophila+pseudoobscura.">Age-based female preference in the fruit fly Drosophila pseudoobscura.</a> Animal Behaviour. 75, 1413-1421 (2008).</li><li>Barron, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaesthetising+Drosophila.+for+behavioural+studies.">Anaesthetising Drosophila. for behavioural studies.</a> Journal of Insect Physiology. 46, 439-442 (2000).</li><li>Moeers, A. O., Rundle, H. D., Whitlock, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+selection+and+bottlenecks+on+male+mating+success+in+peripheral+isolates.">The effects of selection and bottlenecks on male mating success in peripheral isolates.</a> The American Naturalist. 153, 437-444 (1999).</li><li>Ashburner, M., Thompson, J. N., Ashburner, M., Wright, T. R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+laboratory+culture+of+Drosophila.">The laboratory culture of Drosophila.</a> The Genetics and Biology of Drosophila. 2a, 1-109 (1978).</li><li>Powell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Progress and Prospects in Evolutionary Biology: The Drosophila Model. , (1997).</li><li>Moore, A. J., Moore, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Balancing+sexual+selection+through+opposing+mate+choice+and+male+competition.">Balancing sexual selection through opposing mate choice and male competition.</a> Proceedings of the Royal Society of London, series B-Biological Sciences. 266, 711-716 (1999).</li><li>Hollocher, H., Ting, C., Pollack, F., Wu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incipient+speciation+by+sexual+isolation+in+Drosophila+melanogaster.:+Variation+in+Mating+preference+and+Correlation+between+sexes.">Incipient speciation by sexual isolation in Drosophila melanogaster.: Variation in Mating preference and Correlation between sexes.</a> Evolution. 51, 1175-1181 (1997).</li><li>Perron, J. M., Huot, L., Corrivault, G. W., Chawla, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+carbon+dioxide+anaesthesia+on+Drosophila+melanogaster.">Effects of carbon dioxide anaesthesia on Drosophila melanogaster.</a> Journal of Insect Physiology. 18, 1869-1874 (1972).</li><li>Wu, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+isolation+in+Drosophila+melanogaster+:+A+possible+case+of+incipient+speciation.">Sexual isolation in Drosophila melanogaster : A possible case of incipient speciation.</a> Proceedings of the National academy of sciences. 92, 2519-2523 (1995).</li><li>Melcher, C., Pankratz, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candidate+gustatory+interneurons+modulating+feeding+behaviour+in+the+Drosophila+brain.">Candidate gustatory interneurons modulating feeding behaviour in the Drosophila brain.</a> PLoS Biology. 3, e305 (2005).</li><li>Kalaw, V., Drapeau, M. D., Long, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+food+coloring+on+longevity+and+viability+of+Drosophila+melanogaster.">Effects of food coloring on longevity and viability of Drosophila melanogaster.</a> Dros. Inf. Serv. 85, 128-129 (2002).</li><li>Friberg, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+perception+of+female+mating+status:+its+effect+on+copulation+duration,+sperm+defence+and+female+fitness.">Male perception of female mating status: its effect on copulation duration, sperm defence and female fitness.</a> Animal Behaviour. 72, 1259-1268 (2006).</li><li>Liz&#233;, A., Price, T. A. R., Heys, C., Lewis, Z., Hurst, G. D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extreme+cost+of+rivalry+in+a+monandrous+species+male+&#8722;+male+interactions+result+in+failure+to+acquire+mates+and+reduced+longevity.">Extreme cost of rivalry in a monandrous species male &#8722; male interactions result in failure to acquire mates and reduced longevity.</a> Proceedings of the Royal Society of London, series B-Biological Sciences. 281, 20140631 (2014).</li><li>Yeh, S. -. D., Chan, C., Ranz, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+differences+in+sperm+competitive+ability+in+Drosophila.">Assessing differences in sperm competitive ability in Drosophila.</a> Journal of Visualized Experiments. (78), e50547 (2013).</li><li>Holman, L., Freckleton, R. P., Snook, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+use+is+an+infertile+sperm?+A+comparative+study+of+sperm-heteromorphic+Drosophila.">What use is an infertile sperm? A comparative study of sperm-heteromorphic Drosophila.</a> Evolution. 62, 374-385 (2008).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> R: A Language and Environment for Statistical Computing. , (2011).</li><li>Crawley, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Statistics: An introduction using R. , (2005).</li><li>Dytham, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Choosing and Using Statistics: A Biologist's Guide. , (2010).</li><li>Kaiser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+anaesthesia+by+carbon+dioxide+on+hatching+time+and+weight+at+eclosion+in+Drosophila+melanogaster.">Influence of anaesthesia by carbon dioxide on hatching time and weight at eclosion in Drosophila melanogaster.</a> Drosophila Information Service. 76, 92-93 (1995).</li><li>Rera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+longevity+and+tissue+homeostasis+by+the+Drosophila.+PGC-1+homolog.">Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila. PGC-1 homolog.</a> Cell Metabolism. 14, 623-634 (2011).</li><li>Crumpacker, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+micronized+fluorescent+dusts+to+mark+adult+Drosophila+pseudoobscura.">The use of micronized fluorescent dusts to mark adult Drosophila pseudoobscura.</a> American Midland Naturalist. 91, 118-129 (1974).</li><li>Jallon, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+few+chemical+words+exchanged+by+Drosophila+during+courtship+and+mating.">A few chemical words exchanged by Drosophila during courtship and mating.</a> Behaviour genetics. 14, 441-478 (1984).</li><li>Liimatainen, J. O., Jallon, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+cuticular+hydrocarbons+and+their+effect+on+courtship+in+Drosophila+virilis+and+D.+lummei.">Genetic analysis of cuticular hydrocarbons and their effect on courtship in Drosophila virilis and D. lummei.</a> Behaviour Genetics. 37, 713-725 (2007).</li></ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

הנתונים אלה מראה כי ההשפעה של ההרדמה CO 2 אינה עולה בקנה בין מינים, עם שניים משלושה מינים מראים השפעה מועטת. התוצאות שלנו מראות תיוג עם צבע מזון הייתה השפעה נמוכה יותר על הצלחת הזדווגות זכר מאשר CO 2 הרדמה לד melanogaster. ניסויים אלה מראים כי צבעים מאכל יכול בקלות ובזול לשמש לזבובי תווית עבור מבחני הזדווגות מעורבים זכרים מרובים. של מיני תסיסנית שלושה מודל נבחן, רק ד &#39; melanogaster הראה השפעה של CO 2 הרדמה על ביצועי הזדווגות במצב תחרותי. בניגוד לכך, אף אחד מהמינים הראה השפעה של אוסף על גז בניסויי הזדווגות אחת במונחים של זמן אחזור הזדווגות, בניגוד לתוצאות קודמות לד melanogaster 5. ההשפעה של תחרות ולכן יכולה להיות הדגשת השפעות עדינות יותר כושר של הרדמה CO 2, שהם רק לזיהויתחת מצבים שבם יש תחרות גברית-גברית. חשיפה באוסף מוקדם ויום אחד לפני המשפט יש לו השפעה שלילית על היכולת של גברים של ד &#39; melanogaster כדי לקבל הזדווגות. חשיפה יומיים לפני המשפט זאת לא הראתה כל השפעה. שני ד פסאודו וד &#39; subobscura לא הראה שום השפעה של חשיפה לגז בכל אחד מהניסויים. הסבר אחד הוא שד melanogaster היה פגיע לחשיפה המוקדמת לCO 2 כי זה חייב להיות שנאסף מוקדם יותר בחיים (0-6 שעות ישנות) מאשר המינים האחרים על מנת להבטיח זכרים בתולה. ד כאן גברי melanogaster בגיל זה עלול להיות רגיש יותר כמו הציפורן של הזבוב עדיין התקשות, בהשוואה למינים האחרים שיש לו יותר לציפורן שלהם להקשיח. באופן כללי, זה תומך ברעיון כי ההשפעות של CO 2 הרדמה הן מינים ספציפיים וחוקרים צריכים הולם לבחון את ההשפעה של מיני היעד שלהם. Currently, רוב העבודה על ההשפעה של CO 2 הרדמה בוצע על melanogaster תסיסנית 5,11,22 ולכן לא יכול להיות מתאים לפנות למינים קרובים אחרים. השיטה לא פולשנית החלופית שהוצגה כדי לבדל את הזבובים היא צבע מזון. תוצאות מצביעות על עבר את הטיפול הזה אין כל השפעה בכל המינים שנבדקו. עם זאת, בעוד שהשימוש בו היה מוצלח במתן סמן זול וגלוי בקלות להבחנה בין יחידים יש לציין שהצבע היה קל יותר להבחין בד פסאודו וד &#39; subobscura מאשר בד המחברים melanogaster. קודמים השתמשו בכמה צבעים (אדום, ירוק וכחול) 4,6. מצאנו צביעה כחולה להיות הקל ביותר להבחין בכל המינים, במיוחד ד פסאודו וד &#39; subobscura. שימוש במספר צבעים שעלולים היה לאפשר ניסויים מורכבים יותר עם לנשור רבים מסומן בנפרדs. עם זאת, בדיקות ראשוניות של צבעים שונים הן חיוניות, כמו כמה צבעים מאכל לא מצליחים לצבוע את הזבובים, אולי מתעכלים כאשר הוא נצרך. צבעים אחרים יכולים להיות השפעה רעילה ולהפחית הישרדות של הזבובים, ויש להימנע 14). שיטות צביעת מזון חלופיות באמצעות כתמים יקרים יותר יש גם שימשו לבחינת שלמות מעיים לד melanogaster 23. אלה עשויים לספק חלופה, אם כי יקרים יותר, שיטת צביעת 23. שיטת הצבע היא מהירה כמו CO 2 גזיר אגף כפי שניתן לאחסן זבובים על מזון צבוע מאוסף. הספיגה של המזון הייתה מהירה (~ 3 שעות), כך O האחסון / N על מזון צבעוני יהיה גם מספיק כדי לסמן זבובים, המשמש במחקרים אחרים 6. עם זאת, משך הזמן של הצביעה הוא קצר יחסית (~ 4 - 5 שעות) בהשוואה לחיתוך כנף (קבוע) או אבק ניאון לציון (10 - 12 ימים) 24. כמיני דרוזופילהלהשתנות במראה, צבעים שונים יהיו פחות או יותר יעיל למינים שונים, וכפי שכמה זנים (למשל, מוטציות נוק-אאוט) יכולות להיות חשופות לשינויים בדיאטה, כל שימוש בצבע דורש בדיקה ראשונית של האפקטיביות שלה במיוחד אם כבר חשיפה ארוכת לצבעים יכולה להיות רעילה 14. בניגוד למחקר של Kalaw et al. 14, לא מצאנו תמותה משמעותית לאחר האחסון במשך ימים רבים על מזונות צבעוניים לד melanogaster (3 ימים), ד &#39; פסאודו (5 ימים), או ד &#39; subobscura (7 ימים), ככל הנראה בשל ההבדל בצבע משמש. השלב הקריטי לשימוש מוצלח של טכניקת הצבע הוא צעד 1.5, אימות שהצבע שנבחר עובד היטב עם המינים ומתח בשימוש. טכניקה חלופית כרוכה החלת אבק בצבע לצד החיצוני של הזבוב לפני השימוש בניסויי שדה 24. שיטה זו נעשתה שימוש למעקב אחר אנשים בt בשל השדהo משך סימון והקלות המונית לציון טס 24. למרות שיש לנו באופן מפורש שנבדקו בשיטה זו בניסויי הזדווגות, זה יהיה חשוב לבחון תופעות שיכול להיות לי אבק על החושים החשובים בהזדווגות, במיוחד ב -25 דרוזופילה, 26. במינים, לעומת זאת, שבו צביעת מעיים אינה אפשרית, שיטות אלה יכולים להיות מתאימות. לסיכום מצאנו כי בשתיים משלושת המינים שנבדקו (ד &#39;פסאודו-וsubobscura ד) לא הייתה השפעה של כל אחד מצאה CO 2 הרדמה או צבעי מאכל על יכולת הזדווגות של זכרים. לד melanogaster השפעה שלילית של CO 2 הרדמה זוהתה, אך צבעי מאכל לא השפיעו על הזדווגות הצלחה במין זה. בסך הכל, בשיטת הצבע מספקת שיטה לא פולשנית פשוטה וזולה לזיהוי תסיסנית פרט שהוא שווה ערך או טוב יותר מאשר שיטות שדורשות CO 2 הרדמה. זהסביר להניח בשיטה זו תעבוד על פני מגוון של מינים.

בעשרות השנים האחרונות יש כבר עניין גובר באופן מיני בחירה ותחרות בין הזכרים השפעה על האבולוציה 1,2. ניסויים בהתנהגות חיזור שיחקו תפקיד חשוב בפיתוח ובדיקת תאוריות של ברירה מינית 3,4. במינים של סוג מסוימים דרוזופילה, מחקר באמצעות, תרם רב להבנה של בחירה והתנהגות מיניות. עם זאת, חשוב לבדוק האם טכניקות נפוצות עשויות באופן מלאכותי להטות את התוצאות של ניסויי הזדווגות סטנדרטיים 5,6. אלחוש משמש לעתים קרובות לטיפול וזיהוי בניסויים 7. לדוגמא, זבובים נאספים בדרך כלל לפני ההזדווגות, או מיון לגנוטיפים או טיפולים ניסיוניים באמצעות פחמן דו חמצני הרדמה (CO 2). בניסויים שבם שני אנשים או יותר צריכים להיות מכובדים, הוא מנהג נפוץ לְאַלחֵשׁ flies וחלק קליפ של האגף מעל לזהות כל קבוצה בודדת או טיפול 5,8. זה חיוני, עם זאת, כדי להבין כיצד CO 2 ישפיע טיפול על התנהגות. ההשפעה של CO 2 הרדמה נבדקה בדרוזופילה melanogaster שבן גברים נחשף ל- CO 2 לקחו באופן משמעותי יותר להזדווג וכולל הייתה הצלחת הזדווגות נמוכה מזכרים או זכרים-מורדם אינם מורדמים באמצעות חשיפה ל5 קרים. השפעה זו נצפתה גם כאשר ההרדמה יושמה ביום של הניסוי וכאשר זבובים קיבלו יום אחד להתאושש. עם זאת, מחקר זה היה מוגבל בניסויי בחינה היחידה שבו זכר יחיד שהוצג לכל נקבה 5. תרחיש מציאותי יותר הוא לנקבה להיתקל זכרים מרובים 9,10, המאפשרת תחרות בין זכרים, שעשוי לאפשר זיהוי של הפסדים עדינים יותר של כושר גברי עקב הרדמה. השימוש בהרדמת CO 2 גם להיותen נמצא להפחית פוריות ואריכות ימיו של ד &#39;למבוגרים melanogaster כאשר הם נחשפים זמן קצר לאחר eclosion, כמקובל בעת איסוף בתולה טס 11. חלופה ל- CO 2 הרדמה היא לסמן זבובים על ידי האכלה להם אוכל בצבע עם צבע 4,6,10,12,13. צבע זה נכנס למעיים של הזבוב וגלוי דרך הבטן, המאפשר זבובים צבעוניים כדי להבחין בין זבובים צבועים, או מזבובים שכותרתו עם צבע שונה. שיטות שונות בכיצד ניתן ליישם את זה: להתווסף ישירות למזון 12, באמצעות שמרים משלימים להדביק צבוע 6, או באמצעות חשיפה לרומן צבוע מצע מזון 13. טכניקות לציון אלה מופיעים להראות שום השפעה על ביצועי 4,6 הזדווגות. עם זאת, נייר ישירות בוחן את ההשלכות של אותו צבע מאכל על מבוגר ד melanogaster מצא הפחתה משמעותית בתוחלת חיים 14. העבודה קודמת התמקדה גם ALMost כולו על ד &#39; melanogaster, הן בנוגע להשפעות של CO 2 הרדמה 5,11 וצבע מאכל 14 שיטות. נכון לעכשיו, יש מעט מידע על איך CO 2 הרדמה או השימוש בצביעת מעיים משפיעה על התנהגות החיזור של דרוזופילה אחרת. המחקר הבא מעריך את ההשפעה של CO 2 הרדמה על התנהגות החיזור של שלושה מינים של דרוזופילה (melanogaster ד, ד &#39;פסאודו, וsubobscura ד). ההשפעה של איסוף זבובים על CO 2 נבדקה בשני שני ניסויי הזדווגות זכר אחד ו. ההשפעה של CO 2 נמצאה גם לגוון בד melanogaster 5 ותקופות זמן אחזור כל כך שונות בין החשיפה ל- CO 2 והזדווגות נבדקו. אלטרנטיבה לציון שיטה לגזיר הרדמה ואגף: השימוש בצבעי מזון להכתים את הזבובים גם העריכו.

<table><tbody><tr><td>Plastic tubing</td><td>Fisher Scientific</td><td>TWT-200-061G</td><td>Other tubing may be suitable however it must fit within a 1ml pipette tip.</td></tr><tr><td>Fine mesh</td><td>Any haberdashery</td><td>-</td><td>Fine curtain mesh is suitable</td></tr><tr><td>1 ml pipette tips</td><td>VWR</td><td>83007-376</td><td>Various brands of pipette tips would be suitable</td></tr><tr><td>Plastic Vials</td><td>Sarstedt</td><td>58.49</td><td>Larger vials or bottles could also be used.</td></tr><tr><td>Cotton Balls</td><td>Lewis Medical Solutions</td><td>28170</td><td>The size of cotton will vary depending on the size of vials used</td></tr><tr><td>Blue Food colouring</td><td>Thesugarcraftcompany</td><td>-</td><td>Other dye colours and brands can have variable results.</td></tr><tr><td>CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; Tank</td><td>BOC</td><td>BOC 40VK</td><td></td></tr><tr><td>Sharpie Markers</td><td>Steadtler</td><td>Lumocolor 313 S</td><td>Various colours can be used, but Lumocolor S give an excellent combination of durability and fineness</td></tr><tr><td>Stopwatch</td><td>Salter</td><td>SL3920</td><td>Any stopwatch with a good digital display would be fine</td></tr></tbody></table>

dyeing insects for behavioral assays: the mating behavior of anesthetized drosophila

ניסויי הזדווגות באמצעות תסיסנית תרמו רב להבנה של בחירה והתנהגות מיניות. ניסויים לעתים קרובות דורשים שיטות פשוטות, קלה וזולה להבחין בין פרטים במשפט. טכניקה סטנדרטית לכך היא CO 2 הרדמה ולאחר מכן תיוג או אגף גזיר כל זבוב. עם זאת, זה פולשני והוכח משפיע על התנהגות. טכניקות אחרות השתמשו בצבע לזהות זבובים. מאמר זה מציג שיטה פשוטה ולא פולשנית לתיוג תסיסנית המאפשרת להם להיות מזוהים בנפרד בתוך ניסויים, באמצעות צבע מאכל. שיטה זו משמשת בניסויים שבו שני גברים להתחרות להזדווג עם נקבה. צביעה אפשרה זיהוי מהיר וקל. היה, עם זאת, כמה הבדל בכוחו של הצבע על פני שלושת המינים שנבדקו. הנתונים מוצגים מראים את הצבע יש השפעה נמוכה יותר על התנהגות חיזור מאשר CO 2 בmelano דרוזופילהגסטר. ההשפעה של ההרדמה CO 2 מוצגת לסמוך על המינים של דרוזופילה, עם ד &#39; פסאודו וד &#39; subobscura מראה שום השפעה, ואילו ד הזכרים melanogaster הפחיתו הצלחת הזדווגות. שיטת הצבע המוצגת הינה ישימה למגוון רחב של עיצובים ניסיוניים.

שני ניסויי הזדווגות זכר - ההשפעה של CO 2 הרדמה על התנהגות חיזור המודל הטוב ביותר מצא להסביר את השונות בהשפעה של CO 2 הרדמה הכיל מינים כגורם (עם ד &#39;פסאודו-וsubobscura ד התמזגו כפי שהם לא הראו הבדלים בין אחד לשנייה). בד פסאודו וד &#39; subobscura לא הייתה השפעה משמעותית של CO 2 הרדמה על הצלחה בשני ניסויי הזדווגות זכר (Z = 1,589 0.087, P = .931). לד melanogaster, גברים נחשפו ל- CO 2 הרדמה היו הצלחה נמוכה באופן משמעותי הזדווגות (Z1,589 = 2.467, P = 0.014). הייתה שם גם אינטראקציה מובהקת בין מינים וטיפול (χ 2 1,589 = 6.83, P = 0.009) עם השפעה גדולה יותר שיראו כאשר ד melanogaster נחשף לגז באוסף או יום 1 לפני ניסויים (טבלת 1). Howevאה, ד &#39; זכרים melanogaster נחשפו ל- CO 2 יומיים לפני המשפט הניסיוני לא הראה השפעה של CO 2. שני ניסויי הזדווגות זכר - האפקט של צביעה במעיים על התנהגות חיזור פישוט מודל לא הראה כל השפעה משמעותית של צבע מאכל שנמצאה עבור כל אחד משלושת המינים (P&gt; 0.1). כאשר טיפול או מעמד גז נכלל בניתוח אלה גם לא היו משמעותיים (P&gt; 0.1). הפרופורציות של הזדווגויות מוצלחות לזבובים בצבע על פני טיפולים מוצגות בטבלה 2. ההבדל בצבע בין הזבובים המשיך צבעוני ומזון צבוע שניתן לראות באיור 1. העצמה של צבע מאכל המעיים הייתה גדולה יותר בד פסאודו וד &#39; subobscura מאשר בד melanogaster. ניסויי הזדווגות בודדים - ההשפעה של שימוש CO 2 הרדמה על מ &#39;ating התנהגות לא היה הבדל בהשהית הזדווגות לכל אחד משלושת המינים כאשר CO 2 הרדמה שימשה לאיסוף לאחרונה יצא מבוגרים. נמצאה השפעה של משך הזדווגות בד subobscura כאשר הוא נחשף ל- CO 2 יומיים לפני ניסויי הזדווגות (איורים 2 ו -3; טבלה 2). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig1.jpg" /> צילום איור 1. מראה בקבוקים של צבע וללא צבעוני Fly מזון () והכוח של מעיים סוג צבע בזכר ד Subobscura (B). <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig2.jpg" /> רווח סמך איור 2. Mean ו -95% להזדווגות Latency למיני שלושת נחקרו בניסויי גבר רווק, כאשר הזכרים היו לטשטשד (ברים אור) או (ברים אפלים) לא מורדמים כאשר נאסף כבתולות לפני בגרות מינית. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig3.jpg" /> איור 3. Mean ורווח סמך של 95% עבור משך הזדווגות למיני שלושת נחקרו בניסויי גבר רווק, כאשר הזכרים היו מורדמים (ברים אור) או לא מורדם (ברים אפלים) כאשר נאספו כבתולות לפני בגרות מינית. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> טיפול </td><td> מינים </td><td> ניסויי מס &#39; </td><td> זבובי מס &#39;צבעוניים שהזדווגו </td><td> p-value </td><td> זבובי מס &#39;הגז שהזדווגו </td><td> p-value </td></tr><tr><td rowspan="3"> אוסף בCO 2 </td><td> ד מל </td><td> 73 </td><td> 36 </td><td> 1 </td><td> 27 </td><td> .0344 </td></tr><tr><td> PSE ד </td><td>79 </td><td> 41 </td><td> .8221 </td><td> 44 </td><td> .3682 </td></tr><tr><td> תת ד </td><td> 71 </td><td> 40 </td><td> .3425 </td><td> 33 </td><td> .6353 </td></tr><tr><td rowspan="3"> נחשף ל- CO 2 18 שעות לפני </td><td> ד מל </td><td> 57 </td><td> 28 </td><td> 1 </td><td> 19 </td><td> .0163 </td></tr><tr><td> PSE ד </td><td> 65 </td><td> 32 </td><td> 1 </td><td> 31 </td><td> .8043 </td></tr><tr><td> תת ד </td><td> 68 </td><td> 38 </td><td> .3961 </td><td> 35 </td><td> .9036 </td></tr><tr><td rowspan="3"> נחשף ל- CO 2 2days. </td><td> ד מל </td><td> 56 </td><td> 19 </td><td> .0222 </td><td> 32 </td><td> .3497 </td></tr><tr><td> PSE ד </td><td> 70 </td><td> 32 </td><td> .5504 </td><td> 33 </td><td> .7202 </td></tr><tr><td> תת ד </td><td> 56 </td><td> 29 </td><td> .8939 </td><td> 26 </td><td> .6889 &lt;/ Td&gt; </tr></tbody></table> טבלה 1. תוצאות משני ניסויי זכר בחירה בכל המינים הטיפולים ונבדקו. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מינים </td><td> תכונה </td><td> df </td><td> t-ערך </td><td> p-value </td></tr><tr><td rowspan="2"> ד melanogaster </td><td> חביון </td><td> 58 </td><td> 1.379 </td><td> 0.174 </td></tr><tr><td> משך </td><td> 58 </td><td> 1.243 </td><td> 0.221 </td></tr><tr><td rowspan="2"> ד &#39;פסאודו- </td><td> חביון </td><td> 109 </td><td> .419 </td><td> .676 </td></tr><tr><td> משך </td><td> 109 </td><td> .436 </td><td> .664 </td></tr><tr><td rowspan="2"> subobscura ד </td><td> חביון </td><td> 83 </td><td> 0.098 </td><td> .922 </td></tr><tr><td> משך </td><td> 83 </td><td> 1.767 </td><td> 0.081 </td></tr></tbody></table> טבלת 2. תוצאות מניסויים יחיד הזדווגות בוחנים את ההשפעה של האוסף בCO 2 אלחוש על Latency ההזדווגות ומשך. בדיקות בוצעו על שלושה מינים של דרוזופילה (melanogaster ד, ד &#39;פסאודו-וsubobscura ד).

Watch this Scientific Journal Video about Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila at JoVE.com

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

צביעת חרקים למבחני התנהגות: התנהגות חיזור של הרדים<em&gt; דרוזופילה</em

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

dyeing-insects-for-behavioral-assays-mating-behavior-anesthetized

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

9.8K Views.  University of Liverpool. This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

Video: Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors remains poorly understood. In Drosophila melanogaster, environmental cues, such as food availability, affect mating activity offering a tractable system to investigate the mechanisms modulating sexual behavior. In D. melanogaster, environmental cues are often sensed via the chemosensory gustatory and olfactory systems. Here, we present a method to test the effect of environmental chemical cues on mating behavior. The assay consists of a small mating arena containing food medium and a mating couple. The mating frequency for each couple is continuously monitored for 24 h. Here we present the applicability of this assay to test environmental compounds from an external source through a pressurized air system as well as manipulation of the environmental components directly in the mating arena. The use of a pressurized air system is especially useful to test the effect of very volatile compounds, while manipulating components directly in the mating arena can be of value to ascertain a compound's presence. This assay can be adapted to answer questions about the influence of genetic and environmental cues on mating behavior and fecundity as well as other male and female reproductive behaviors.

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

We demonstrate an assay to analyze the environmental and genetic cues that influence mating behavior in the fruit fly Drosophila melanogaster.

שיטה לבחינת ההשפעה של רמזים סביבתיים על התנהגות ההזדווגות ב<em&gt; תסיסנית מלנוגאסטר</em

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors ...

Behavior

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

שיטות Assay תסיסנית התנהגות

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster. In a light-tight box illuminated by red light that is invisible to fruit flies, a camera linked to custom data acquisition software monitors the position of six flies simultaneously. Each fly is confined to walk in individual arenas containing a food odor at the center. The testing arenas rest on a porous floor that functions to prevent odor accumulation. Latency to locate the odor source, a metric that reflects olfactory sensitivity under different physiological states, is determined by software analysis. Here, we discuss the critical mechanics of running this behavioral paradigm and cover specific issues regarding fly loading, odor contamination, assay temperature, data quality, and statistical analysis.

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster.

יחיד לטוס Assay עבור התנהגות שיחור מזון ב<em&gt; דרוזופילה</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

An Adjustable High-Definition Imaging System for Behavioral Studies of Drosophila Adults

Drosophila melanogaster is a very powerful model in biological research, but a bad model for photography or videography. This paper describes a simple but effective method to observe and document the behavior or morphology of flies. Flies were placed in a translucent observation chamber c.a. &#216;15 x 5mm (no food inside) or &#216;15 x 12 mm (with an 8 mm-high piece of food inside). After covering with an ultraviolet (UV)/clear filter with high light transmittance, the chamber was placed under a 5-50x zoom stereo microscope, and mini light-emitting diode (LED) video lights were placed on both sides of the microscope to illuminate the chamber to obtain uniform, soft, bright, and nearly shadow-free light. Then, a compact digital camera with 3-5x optical zoom, which can record 1080 P high-definition or higher resolution video (at a frame rate of &#8805;30 fps), was connected to the eyepiece of microscope through a bracket, and photographs or videos were taken through the eyepiece. By adjusting the zoom knob of the zoom stereo microscope, it was very easy to track the flies and take panoramic or detailed close-up images as needed, while the camera recorded everything under the microscope. Because the flies can stay at any position in the chamber, they can be observed and recorded from all directions. The photographs or videos taken are of good image quality. This method can be used both for scientific research and teaching.

An Adjustable High-Definition Imaging System for Behavioral Studies of Drosophila Adults

This protocol describes how to make a simple adult Drosophila behavior observation chamber, and how to take high-definition photographs/videos of the morphology or behavior of different types of fruit flies in the observation chamber through relatively simple and affordable methods.

מערכת הדמיה מתכווננת בחדות גבוהה למחקרים התנהגותיים של מבוגרים Drosophila

Drosophila melanogaster is a very powerful model in biological research, but a bad model for photography or videography. This paper describes a simple but ...

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by stressed conspecifics due to an odorant released during stress known as the Drosophila stress odorant (dSO). Through the use of the T-maze apparatus, one can quantify the avoidance of the dSO by responder flies in a very affordable and robust assay. Conditions necessary to obtain a strong performance are presented here. A stressful experience is necessary for the flies to emit dSO, as well as enough emitter flies to cause a robust avoidance response to the presence of dSO. Genetic background, but not their group size, strongly altered the avoidance of the dSO by the responder flies. Canton-S and Elwood display a higher performance in avoiding the dSO than Oregon and Samarkand strains. This behavioral assay will allow identification of mechanisms underlying this social behavior, and the assessment of the influence of genes and environmental conditions on both emission and avoidance of the dSO. Such an assay can be included in batteries of simple diagnostic tests used to identify social deficiencies of mutants or environmental conditions of interest.

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.

Assay הפשוט לכימות חברתיות הימנעות ב<em&gt; Melanogaster דרוזופילה</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

התנהגות Assay עבור Mechanosensation של MARCM מבוסס משובט ב<em&gt; תסיסנית melanogaster</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Quantification of Drosophila Grooming Behavior

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a grooming assay protocol and novel chamber design that is cost-efficient and scalable for either small or large-scale studies of Drosophila grooming. Flies are dusted all over their body with Brilliant Yellow dye and given time to remove the dye from their bodies within the chamber. Flies are then deposited in a set volume of ethanol to solubilize the dye. The relative spectral absorbance of dye-ethanol samples for groomed versus ungroomed animals are measured and recorded. The protocol yields quantitative data of dye accumulation for individual flies, which can be easily averaged and compared across samples. This allows experimental designs to easily evaluate grooming ability for mutant animal studies or circuit manipulations. This efficient procedure is both versatile and scalable. We show work-flow of the protocol and comparative data between WT animals and mutant animals for the Drosophila type I Dopamine Receptor (DopR).

This protocol describes a scalable individual grooming assay technique in Drosophila that yields robust, quantitative data to measure grooming behavior. The method is based on comparing the difference in dye accumulation on the bodies of un-groomed versus groomed animals over a set period of time.

כימות של תסיסנית התנהגות Grooming

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a ...

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, reductionist, and scalable system for in-depth investigation of motivation using the mating drive of male Drosophila&#160;melanogaster (Drosophila), the methods for which we detail here. The behavioral paradigm centers on the finding that male mating drive decreases alongside fertility over the course of repeated copulations and recovers over ~3 d. In this system, the powerful neurogenetic tools available in the fly converge with the genetic accessibility and putative wiring diagram available for sexual behavior. This convergence allows rapid isolation and interrogation of small neuronal populations with specific motivational functions. Here we detail the design and execution of the satiety assay that is used to measure and alter courtship motivation in the male fly. Using this assay, we also demonstrate that low male mating drive can be overcome by stimulating dopaminergic neurons. The satiety assay is simple, affordable, and robust to influences of genetic background. We expect the satiety assay to generate many new insights into the neurobiology of motivational states.

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

This article describes a behavioral assay that uses male mating drive in Drosophila melanogaster to study motivation. Using this method, researchers can utilize advanced fly neurogenetic techniques to uncover the genetic, molecular, and cellular mechanisms that underlie this motivation.

מדידת כונן מזווג סירוס ועיקור במאלה<em&gt; תסיסנית</em

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, ...

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a considerable amount of information has been generated regarding ORN responses to odorants, the role of specific ORNs in driving behavioral responses remains poorly understood. Complications in behavior analyses arise due to different volatilities of odorants that activate individual ORNs, multiple ORNs activated by single odorants, and the difficulty in replicating naturally observed temporal variations in olfactory stimuli using conventional odor-delivery methods in the laboratory. Here, we describe a protocol that analyzes Drosophila larval behavior in response to simultaneous optogenetic stimulation of its ORNs. The optogenetic technology used here allows for specificity of ORN activation and precise control of temporal patterns of ORN activation. Corresponding larval movement is tracked, digitally recorded, and analyzed using custom written software. By replacing odor stimuli with light stimuli, this method allows for a more precise control of individual ORN activation in order to study its impact on larval behavior. Our method could be further extended to study the impact of second-order projection neurons (PNs) as well as local neurons (LNs) on larval behavior. This method will thus enable a comprehensive dissection of olfactory circuit function and complement studies on how olfactory neuron activities translate in to behavior responses.

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

This protocol analyzes navigational behavior of Drosophila larva in response to simultaneous optogenetic stimulation of its olfactory neurons. Light of 630 nm wavelength is used to activate individual olfactory neurons expressing a red-shifted channel rhodopsin. Larval movement is simultaneously tracked, digitally recorded, and analyzed using custom-written software.

מעקב אחר התנהגות זחל דרוזופילה בתגובה Optogenetic גירוי של חוש הריח נוירונים

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a ...

Behavioral Assays for Optogenetic Manipulation of Neural Circuits in Drosophila melanogaster

Optogenetics has become a fundamental technique in neuroscience, enabling precise control of neuronal activity through light stimulation. This study introduces easy-to-implement setups for applying optogenetic methods in Drosophila melanogaster. Two optogenetic tools, CsChrimson, a red-light-activated cation channel, and GtACR2, a blue-light-activated anion channel, were employed in four experimental approaches. Three of these approaches involve single-fly experiments: (1) a blue-light optogenetic thermotactic positional preference assay targeting temperature-sensitive heating cells, (2) a red-light optogenetic positional preference assay activating bitter sensing neurons, and (3) a proboscis extension response assay activating the sweet-sensing neurons. The fourth approach (4) is a fly maze setup to assess avoidance behaviors using multiple flies. The ability to manipulate neural activity temporally and spatially offers powerful insights into sensory processing and decision-making, underscoring the potential of optogenetics to advance our knowledge of neural function. These methods provide an accessible and robust framework for future research in neuroscience to enhance the understanding of specific neural pathways and their behavioral outcomes.

This paper presents methods for optogenetic manipulation in Drosophila melanogaster, utilizing CsChrimson and GtACR2 to activate and silence specific neurons. Four experiments are described to utilize optogenetics to explore thermotactic and gustatory behaviors, providing insights into the underlying neural mechanisms governing these processes.

מבחנים התנהגותיים למניפולציה אופטוגנטית של מעגלים עצביים בדרוזופילה מלנוגסטר

Optogenetics has become a fundamental technique in neuroscience, enabling precise control of neuronal activity through light stimulation. This study ...

צביעת חרקים למבחני התנהגות: התנהגות חיזור של הרדים

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

שיטה לבחינת ההשפעה של רמזים סביבתיים על התנהגות ההזדווגות ב

שיטות Assay תסיסנית התנהגות

יחיד לטוס Assay עבור התנהגות שיחור מזון ב

מערכת הדמיה מתכווננת בחדות גבוהה למחקרים התנהגותיים של מבוגרים Drosophila

Assay הפשוט לכימות חברתיות הימנעות ב

התנהגות Assay עבור Mechanosensation של MARCM מבוסס משובט ב

כימות של תסיסנית התנהגות Grooming

מדידת כונן מזווג סירוס ועיקור במאלה

מעקב אחר התנהגות זחל דרוזופילה בתגובה Optogenetic גירוי של חוש הריח נוירונים

מבחנים התנהגותיים למניפולציה אופטוגנטית של מעגלים עצביים בדרוזופילה מלנוגסטר