Biz çiftleşme denemeleri ile yardım için Alex Hitchen ve Meg Booth teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma TP H015604 / 1 / Merkezi tarafından hibe KD tarafından desteklenmiştir.

Gıda Boyama ile Fly Gıda 1. Hazırlık <ol><li> Alt gıda yaklaşık 20 ml (Şekil 1) ile standart bir Drosophila şişeyi al. Kaynar su 1 L kullanan gıda karışımı aşağıdaki tarifi kullanın: agar, 10 g dekstroz, 85 g mısır unu 60 g, maya, 40 g ve kaynayan 5 dakika boyunca karıştırın. Karışım, 75 ° C&#39;ye soğuduktan sonra% 10 nipagen 25 ml ilave edilir. </li><li> Gıda soğutuldu ve iki damla katılaşmasından sonra, - yiyecek en mavi gıda boyası (yaklaşık 0.5 ila 1 mi) ve şişenin bütün yüzeyi üzerine yayılmış olan (Şekil 1). Tercih eğer farklı bir renk boya kullanın. </li><li> Boya gıda üst tabakası tarafından emilir, böylece buzdolabında iki gün süre ile gıda boş; Bu olgunlaşma döneminde sinekler zarar aşırı nemi önler. Aşırı nem hala o sonradan ekstra nem ve yukarı örtecek bir sorun olup olmadığını kağıt mendil küçük bir parça ekleonu kaldır. </li><li> Transferi tek tek veya gruplar halinde gıda üzerine uçar. Not: Sinekler gıda konuyor 1 gün içinde bağırsak boyama kazanacaktır. Alternatif olarak, tamamen önceden deney (gıda boyasına maruz kalma gözlenmemiştir olgunlaşma döneminde artmış mortalite) ile boyanmış gıda sinekler olgun. </li><li> Boyalı sinekler olmayan boyalı sinekler kolayca ayırt edilebilir olmadığını kontrol edin. Boyanın yüksek bir konsantrasyonda ya da farklı boya kullanılarak 1.4 - bunlar ayırt edilemez ise, tekrar 1.1 yineleyin. </li></ol> Gıda Boyama kullanma 2. İki Erkek Çiftleşme Denemeler <ol><li> Döl üreten için, kadın ve erkek sineklerin çiftleri içeren çoklu şişeleri (erkek ve kadın küçük gruplar larva kalabalığı önlemek için özen rağmen, aynı zamanda uygundur) kurdu. 7 gün - kadın yumurtalarını ve her 5 yeni şişelere sinekler taşımak için izin verin. Sahip türler için uygun bir sıcaklıkta muhafaza edin şişeler (22 ° C, fveya D pseudoobscura ve D subobscura ve D 25 ° C melanogaster). </li><li> Pseudoobscura 25 ° C, D 6 saat - - toplama deneysel sinekler erkek ve kadın toplamak önce belirli bir süre toplama şişeleri tüm sinekler çıkarmadan önce onlar bakireler (D. melanogaster olacak sağlamak için 18 saat 22 ° C&#39;de ve D. subobscura - 22 ° C &#39;de 24 saat). Not: Sinekler bakire değilse bu irade önyargı çiftleşme çalışmalarda 15 davranışları. <ol><li> Mağaza ve bireysel standart 75 x 20 mm plastik şişelerde olgun erkek (gıda ~ 20 ml içeren). Erkek gruplarında 16 tutulur Bu erkek çiftleşme davranışı ve bazı türlerde görülen fitness olumsuz etkileri önler. </li><li> İstediğiniz tedaviye erkeklerin yarısı Açığa (CO Bu durumda 2 anestezi). CO 2 mat kullanın veya gerekli süre sinekler ortaya çıkarmak için dokunun. Mal Mağaza yarısıes çiftleşme kadar renkli gıda her bir işlem yer alır. Bu çiftleşme denemeleri sırasında onları görsel olarak ayırt yapacaktır. </li><li> Transfer için sinekler bir aspiratör 17 kullanın. Tedavi ve erkek renk durumunu hem tanımlamak için her şişeyi etiketleyin. Burada, dört tedaviler kullanmak (anestezi, olmayan renkli = G-NC, anestezi, renkli = GC, hiçbir anestezi, renkli olmayan, NG-NC, ve hiçbir anestezi, renkli, NG-C). </li></ol></li><li> 10 grupları olarak olgun taze gıda şişeleri içine yeni ortaya kadın aktarın. </li><li> 3 gün, D. pseudoobscura - - 5 gün, D subobscura -. D (örneğin, 22 ° C üzerinde çalışılan 18 mağazası türler için uygun bir sıcaklıkta uçan 7 gün sinekler eş yaşı (Drosophila melanogaster olgun izin ver . pseudoobscura ve D subobscura ve 25 ° C Drosophila melanogaster için). </li><li> Devamı (tek tek vialler için kadın taşıGıda ~ 20 ml) çiftleşme flakon alışmaları için çiftleşme deneme 1 gün önce, geri kalan. Şişeler ayırt edilebilir, böylece, bu şişeleri etiketleyin. Nötr etiketleme kullanarak deney kör dikkatli olun (yani, 1-150) bu yüzden herhangi bir şişe içinde sinekler kimliğini tahmin etmek mümkün değildir. Not: Her şişenin içine sinekler yerleştirir kişi, lekeli hangi tedavinin not gibi her şişeye yerleştirilir sinekler kimliğini bilmeniz gerekir. Ancak, çiftleşme saatler gözlemci kimliklerini bilmek gerekir. Bu en az iki deneyci gerekli olacak kurmak ve biri gözlemlemek için yapmak. </li><li> 10 arasında çiftleşme denemeleri başlayın - 12:00, ya da hafif sinekler (sinekler için &quot;şafak&quot;) maruz kalan ışık / karanlık döngüsünde geliyor çakışan bir anda. Bir aspiratör kullanarak (bir tek kadın sinek içeren) her çiftleşme şişesine iki erkek sinekler ekleyin. İki erkek (farklı tedaviler anestezi olduğundan emin olun veyakontrol) ve bu bir mümkün birbirinden ayırt bunları yapmak, ve lekeli hangi erkek not bağırsak boyama vardır. </li><li> (- Renkli renkli veya non) çiftleşme oluşursa, arkadaşları erkek durumunu kaydedin. 2 saat boyunca son çalışmalar, kabul edersek kadın arkadaşı olmaz. 2 saat bu türler için uygun olmakla birlikte, diğer Drosophila fazla ya da daha az süre gerekebilir: edin. </li></ol> 3. Tek Erkek Çiftleşme Denemeler <ol><li> Tek erkek denemeler için, iki değişikliklerle Protokolü 2 tekrarlayın: <ol><li> Adım 2.3 renkli gıda erkek tutmayın. </li><li> Aşama 2.7, her şişe için, yalnızca tek bir erkek ekleyin. </li></ol></li><li> Adım 2.8, sinek flakon, çiftleşme bitmiş çiftleşme başlar ve zaman kayıt altına alınmalıdır zaman eklenir zamanı kaydetmek. Bu değerlerden, başarı, gecikme ve süresini çiftleşme hesaplamak. </li></ol> 4. Veri Analizi <ol><li> Ana için uygun istatistik paket kullanınlisis. Veri normal ve sadece iki tedaviler t-testleri veya eşdeğer Genelleştirilmiş Lineer Model (GLM) kullanın. İki erkek deneyler için, binom testler veya herhangi bir temel istatistik paketinde mevcut bir binom GLM kullanın. Not: Örnek verileri için tüm analizler, R, sürüm 3.0.3 19 içinde gerçekleştirilmiştir. </li><li> Her tedavi 20 gecikme ve süresi frekans histogramlar komplo, ve Shapiro-Wilk normallik gibi bir testi kullanılarak, normallik için çiftleşme gecikme ve çiftleşme süresi verilerini kontrol edin. Normal değilse, onu dönüştürmek, ya da parametrik olmayan eşdeğer istatistiklerini 20 kullanın. Not: Tek erkek deneyler örnek verileri log için dönüşüm normallik ve eşit sapmaların gereksinimlerini bir araya geldi. </li><li> Veri normalize olabilir Eğer iki tedaviler 21 kullanırken, kullanım t-testi, tek erkek çiftleşme çalışmalarda çiftleşme gecikmesi ve süresi arasındaki farklılıkları incelemek için. Birden tedaviler kullanılırsa,Varyans Analizi Bir ​​(ANOVA) 20 deneyin. Veri normalize mümkün değilse, eşdeğer parametrik olmayan testler 21 deneyin. </li><li> Rekabet erkeklerde 20 birleşme başarı gıda boyası veya CO2 anestezi ya da bir etkisini test etmek için binom testleri kullanın. Örnek veriler ile olduğu gibi çoklu tedaviler, kullanıldığı takdirde, binom hata yapısı 21 olan bir GLM kullanın. </li><li> Örnek verileri iki erkek denemeler için, binom hata yapıları ile GLMS kullanın. Bir GLM bir yanıt değişkeni (0 = gazlı ve-gassed değil CO 2 incelendiğinde açıklayıcı variables.One GLM olarak takılmış bir yanıt değişkeni (renkli = 0 ve renkli olmayan = 1) türler ile, gaz durumu, ve gaz tedavisi gibi renk muayene = 1) monte türler, renkli durum ve gaz tedavisi ile. Her durumda, maksimal modeli üretmek ve AIC 20 dayalı bir model basitleştirilmesi gerçekleştirin. </li></ol>

<ol>
	<li>Parker, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+competition+and+its+consequences+in+insects.">Sperm competition and its consequences in insects.</a> Biological Reviews. 45, 525-567 (1970).</li><li>Hosken, D. J., Stockley, P., Tregenza, T., Wedell, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monogamy+and+the+battle+of+the+sexes.">Monogamy and the battle of the sexes.</a> Annual Review of Entomology. 54, 361-378 (2009).</li><li>Chapman, T., Liddle, L., John, K., Wolfner, M., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+cost+of+mating+caused+by+males+accessory+gland+fluids.">Female cost of mating caused by males accessory gland fluids.</a> Nature. 373, 241-244 (1995).</li><li>Avent, T. D., Price, T. A. R., Wedell, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-based+female+preference+in+the+fruit+fly+Drosophila+pseudoobscura.">Age-based female preference in the fruit fly Drosophila pseudoobscura.</a> Animal Behaviour. 75, 1413-1421 (2008).</li><li>Barron, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaesthetising+Drosophila.+for+behavioural+studies.">Anaesthetising Drosophila. for behavioural studies.</a> Journal of Insect Physiology. 46, 439-442 (2000).</li><li>Moeers, A. O., Rundle, H. D., Whitlock, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+selection+and+bottlenecks+on+male+mating+success+in+peripheral+isolates.">The effects of selection and bottlenecks on male mating success in peripheral isolates.</a> The American Naturalist. 153, 437-444 (1999).</li><li>Ashburner, M., Thompson, J. N., Ashburner, M., Wright, T. R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+laboratory+culture+of+Drosophila.">The laboratory culture of Drosophila.</a> The Genetics and Biology of Drosophila. 2a, 1-109 (1978).</li><li>Powell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Progress and Prospects in Evolutionary Biology: The Drosophila Model. , (1997).</li><li>Moore, A. J., Moore, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Balancing+sexual+selection+through+opposing+mate+choice+and+male+competition.">Balancing sexual selection through opposing mate choice and male competition.</a> Proceedings of the Royal Society of London, series B-Biological Sciences. 266, 711-716 (1999).</li><li>Hollocher, H., Ting, C., Pollack, F., Wu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incipient+speciation+by+sexual+isolation+in+Drosophila+melanogaster.:+Variation+in+Mating+preference+and+Correlation+between+sexes.">Incipient speciation by sexual isolation in Drosophila melanogaster.: Variation in Mating preference and Correlation between sexes.</a> Evolution. 51, 1175-1181 (1997).</li><li>Perron, J. M., Huot, L., Corrivault, G. W., Chawla, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+carbon+dioxide+anaesthesia+on+Drosophila+melanogaster.">Effects of carbon dioxide anaesthesia on Drosophila melanogaster.</a> Journal of Insect Physiology. 18, 1869-1874 (1972).</li><li>Wu, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+isolation+in+Drosophila+melanogaster+:+A+possible+case+of+incipient+speciation.">Sexual isolation in Drosophila melanogaster : A possible case of incipient speciation.</a> Proceedings of the National academy of sciences. 92, 2519-2523 (1995).</li><li>Melcher, C., Pankratz, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candidate+gustatory+interneurons+modulating+feeding+behaviour+in+the+Drosophila+brain.">Candidate gustatory interneurons modulating feeding behaviour in the Drosophila brain.</a> PLoS Biology. 3, e305 (2005).</li><li>Kalaw, V., Drapeau, M. D., Long, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+food+coloring+on+longevity+and+viability+of+Drosophila+melanogaster.">Effects of food coloring on longevity and viability of Drosophila melanogaster.</a> Dros. Inf. Serv. 85, 128-129 (2002).</li><li>Friberg, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+perception+of+female+mating+status:+its+effect+on+copulation+duration,+sperm+defence+and+female+fitness.">Male perception of female mating status: its effect on copulation duration, sperm defence and female fitness.</a> Animal Behaviour. 72, 1259-1268 (2006).</li><li>Liz&#233;, A., Price, T. A. R., Heys, C., Lewis, Z., Hurst, G. D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extreme+cost+of+rivalry+in+a+monandrous+species+male+&#8722;+male+interactions+result+in+failure+to+acquire+mates+and+reduced+longevity.">Extreme cost of rivalry in a monandrous species male &#8722; male interactions result in failure to acquire mates and reduced longevity.</a> Proceedings of the Royal Society of London, series B-Biological Sciences. 281, 20140631 (2014).</li><li>Yeh, S. -. D., Chan, C., Ranz, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+differences+in+sperm+competitive+ability+in+Drosophila.">Assessing differences in sperm competitive ability in Drosophila.</a> Journal of Visualized Experiments. (78), e50547 (2013).</li><li>Holman, L., Freckleton, R. P., Snook, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+use+is+an+infertile+sperm?+A+comparative+study+of+sperm-heteromorphic+Drosophila.">What use is an infertile sperm? A comparative study of sperm-heteromorphic Drosophila.</a> Evolution. 62, 374-385 (2008).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> R: A Language and Environment for Statistical Computing. , (2011).</li><li>Crawley, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Statistics: An introduction using R. , (2005).</li><li>Dytham, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Choosing and Using Statistics: A Biologist's Guide. , (2010).</li><li>Kaiser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+anaesthesia+by+carbon+dioxide+on+hatching+time+and+weight+at+eclosion+in+Drosophila+melanogaster.">Influence of anaesthesia by carbon dioxide on hatching time and weight at eclosion in Drosophila melanogaster.</a> Drosophila Information Service. 76, 92-93 (1995).</li><li>Rera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+longevity+and+tissue+homeostasis+by+the+Drosophila.+PGC-1+homolog.">Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila. PGC-1 homolog.</a> Cell Metabolism. 14, 623-634 (2011).</li><li>Crumpacker, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+micronized+fluorescent+dusts+to+mark+adult+Drosophila+pseudoobscura.">The use of micronized fluorescent dusts to mark adult Drosophila pseudoobscura.</a> American Midland Naturalist. 91, 118-129 (1974).</li><li>Jallon, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+few+chemical+words+exchanged+by+Drosophila+during+courtship+and+mating.">A few chemical words exchanged by Drosophila during courtship and mating.</a> Behaviour genetics. 14, 441-478 (1984).</li><li>Liimatainen, J. O., Jallon, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+cuticular+hydrocarbons+and+their+effect+on+courtship+in+Drosophila+virilis+and+D.+lummei.">Genetic analysis of cuticular hydrocarbons and their effect on courtship in Drosophila virilis and D. lummei.</a> Behaviour Genetics. 37, 713-725 (2007).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını olduğunu beyan ederim.

Bu veriler, CO2 anestezi etkisinin az etkisini gösteren iki ya da üç türe, türler arasında tutarlı olduğunu göstermektedir. Bizim sonuçlar gıda boyası ile etiketleme 2 anestezi D için CO daha erkek çiftleşme başarısı daha düşük etkiye sahip önermek melanogaster. Bu deneyler, gıda boyaları, kolayca ve ucuz bir şekilde birden çok erkek içeren birleşme deneyleri için etiket sinekleri için kullanılabileceğini göstermektedir. Üç modeli Drosophila türlerinin yalnızca D., incelenen melanogaster, rekabetçi bir durumda birleşme performansına CO2 anestezi etkisi göstermiştir. Bunun aksine, türlerin yok D için önceki sonuçlara aksine birleşme gecikme bakımından tek birleşme deneylerinde gaz toplama bir etki gösterdi melanogaster 5. rekabetin etkisi bu nedenle sadece saptanabilir CO 2 anestezi daha ince spor etkileri, vurgulama olabilirdurumlar altında erkek-erkek rekabet olduğu yerde. Erken toplama ve bir gün Pozlama deneme öncesinde D. erkeklerin yeteneği üzerinde olumsuz bir etkisi var Bir çiftleşme kazanmak için melanogasterin. İki gün önce deneme maruz kalma, ancak herhangi bir etkisi görülmemiştir. D. Hem pseudoobscura ve D subobscura çalışmaların hiçbirinde gazına maruz herhangi bir etki göstermemiştir. Bir açıklama olduğunu D. erkek bakire olmasını sağlamak için diğer türlere göre daha - (6 saat eski 0) daha önce hayatında toplanan gerekir, çünkü melanogaster CO 2 erken maruz savunmasız oldu. Dolayısıyla erkek D. sineğin manikür hala sertleşmesine kendi manikür için uzun oldu, diğer türlere oranla, sertleşme gibi bu çağın melanogaster daha duyarlı olabilir. Genel olarak, bu CO 2 anestezi etkileri belirli türleri ve uygun hedef türlerin etkisini test etmelidir araştırmacılar olduğu fikrini desteklemektedir. Currently CO2 anestezinin etkisi üzerinde çalışma çoğunluğu diğer ilgili türlerin uygulamak için uygun olmayabilir, bu nedenle Drosophila melanogaster 5,11,22 ile yapılmıştır edilmiştir. sinekler ayırt etmek için sunulan alternatif non-invaziv bir yöntem gıda boyası olduğunu. Sonuçlar Bu tedavi tüm türler incelendiğinde genelinde hiçbir etkisi yoktu öneririz. Kullanımı bireyler arasında ayrım yapmak için, ucuz ve kolay bir şekilde görünür bir marker sağlaması başarılı oldu Bununla birlikte, bu boya D. ayırt kolay olduğu unutulmamalıdır pseudoobscura ve D D. daha subobscura melanogaster. Önceki yazarlar 4,6 (yeşil ve mavi kırmızı) birkaç renk kullandık. Biz, D. bütün türlerde ayırt etmek kolay, özellikle olmaya mavi boyama bulundu pseudoobscura ve D subobscura. Potansiyel birçok bireysel işaretlenmiş Flie ile daha karmaşık deneyler sağlayacak birkaç renk kullanmas. Bazı gıda boyaları tüketildiği zaman muhtemelen sindirilmiş olan, sinekler renk başarısız Ancak, farklı boyaların ön testler, esastır. Diğer boyalar) toksik etkilere sahip ve sineklerin yaşam azaltmak ve 14 kaçınılmalıdır olabilir. Daha pahalı boyalar kullanılarak alternatif gıda boyası yöntemleri de D. bağırsak bütünlüğünü incelenmesi için kullanılmıştır 23 melanogaster. Bunlar bir alternatif sağlayabilir, her ne kadar daha pahalı, boyama yöntemi 23. sinekler koleksiyonundan boyalı gıda saklanabilir gibi boya yöntemi CO 2 kanat kırpma gibi hızlı. Gıda alımı, (~ 3 saat), hızlı, yani diğer çalışmalar 6 da kullanılan renkli gıda depolama O / N da sinekler işaretlemek için yeterli olacaktır. (- 12 gün 10) 24 işaretleme kanat (daimi) kırpma veya floresan tozu ile karşılaştırıldığında - (5 saat ~ 4) Bununla beraber, boyama süresi oldukça kısadır. Drosophila türlerinin olarakgörünümü değişir, farklı boyalar daha az ya da farklı türler için geçerli olacaktır, ve bazı suşlar olarak (örneğin, knock-out mutantlar) diyet değişikliklerine savunmasız olabilir, boyanın herhangi bir şekilde kullanılması etkinliğinin bir ön test, özellikle uzun eğer gerektirir boyalara süreli maruz kalma 14 toksik olabilir. Kalaw ve diğ., 14 çalışmasının tersine olarak, D, renkli gıdalar birden fazla gün depolandıktan sonra belirgin bir ölüm oranı olduğunu bulmuştur melanogaster (3 gün), D. pseudoobscura (5 gün) veya D subobscura (7 gün), muhtemelen boyada farkı için kullanılır. boya tekniği başarılı kullanımı için kritik adım seçilen boya türleri ve gerilme kullanılan iyi çalıştığını doğrulayarak, adım 1.5 olduğunu. Alternatif bir teknik alan deneyleri 24 kullanımdan önce sinek dışında renkli toz uygulanmasını kapsar. Bu yöntem alan nedeniyle t bireyleri izlemek için kullanılır olmuşturo işaretleme süresi ve işaretleme kitle kolaylığı 24 uçar. Biz açıkça çiftleşme çalışmalarda bu yöntemi test olmasına rağmen, bu toz, özellikle Drosophila 25, 26, çiftleşme önemli duyulara sahip olabilir, herhangi etkilerini incelemek için önemli olacaktır. Türler ise, bağırsak boyama mümkün olmadığı durumlarda, Bu yöntemler, uygun olabilir. Sonuç olarak test edilen üç türün (D. pseudoobscura ve D. subobscura) iki CO 2 anestezi veya erkeklerin çiftleşme yeteneği gıda boyası ya bulunamadı etkisi olduğunu öğrendim. D. için tespit edildi CO 2 anestezi olumsuz bir etkisi melanogaster, ancak gıda boyası, bu türün başarılı çiftleşme etkilemedi. Genel olarak, boya yöntemi eşdeğer veya CO 2 anestezi gerektiren yöntemlere göre daha iyi olduğunu tek tek Drosophila belirlenmesi için basit ve ucuz bir non-invaziv bir yöntem sağlar. Obüyük olasılıkla bu yöntem türlerinin aralığında çalışacak olan.

Son birkaç yıldır orada evrim 1,2 tarihinde nasıl cinsel seçimi ve rekabet erkekler arasındaki etkisi ilgi artmaktadır. Çiftleşme davranışı üzerinde deneyler geliştirilmesi ve cinsel seçimi 3,4 teorileri test önemli bir rol oynamıştır. Cinsi Drosophila özellikle, araştırma kullanarak türlerde, cinsel seçimi ve davranış anlaşılmasına büyük katkıda bulunmuştur. Ancak, yaygın olarak kullanılan teknikler standart çiftleşme deneyler 5,6 sonuçlarını yapay önyargı olup olmadığını araştırmak önemlidir. Anestezi genellikle deneylerde 7 kullanım ve tanımlanması için kullanılır. Örneğin, sinekler genellikle çiftleşme öncesi toplanır, ya da (CO 2) anestezik karbondioksit kullanarak genotipleri veya deneysel tedaviler halinde sıralanır. Çoğunlukla, ayırt edilmesi gereken deneylerde, fl anastetize yaygın bir uygulamadırler ve kanat off klip parçası, her birey ya da tedavi grubunu 5,8 tanımlamak için. Ancak, CO 2 tedavi davranışını nasıl etkilediğini anlamak için, hayati önem taşımaktadır. CO 2 anestezi etkisi Drosophila melanogaster incelenmiştir edildiği 2 çiftleşmek için uzun anlamlı aldı ve genel olmayan anestezi erkek veya erkeklerden daha düşük çiftleşme başarı vardı, soğuk 5 maruz kullanılarak anestezi CO maruz erkek çocukların. Bu etki gözlenmiştir uygun anestezi deney gününde uygulanır ve zaman sinekler kurtarmak için bir gün verildiğinde. Ancak, bu çalışma bir tek erkek, her kadın 5 sunuldu yalnızca inceleyen çalışmalarda sınırlı kalmıştır. Bir kadın yüzünden anestezi erkek uygunluk daha ince kayıpların tespitine olanak olabilecek erkekler arasındaki rekabeti sağlayan, birden fazla erkek 9,10 karşılaşmaya için daha gerçekçi bir senaryo. CO 2 anestezi kullanımı da olacak ettitr yetişkin D. doğurganlığını ve uzun ömürlü azaltmak bulundu Onlar eclosion kısa bir süre sonra maruz kaldığında bakire toplama 11 uçar zaman yaygın olarak, melanogasterin. 2 anestezi CO bir alternatif onları boya 4,6,10,12,13 ile renkli gıda beslenerek sinekler işaretlemek için. Bu boya renkli sinekler renksiz sinekler, ya da farklı bir renk ile etiketlenmiş sinekler ayırt edilmesi için izin, sineğin bağırsak girer ve karın içinden görünür. Boyalı ek maya hamur 6 üzerinden, ya da yeni bir boyalı gıda alt tabakaya 13 maruziyeti üzerinden, gıda 12 doğrudan eklenen: Yöntem nasıl bu uygulanabilir farklıdır. Bu işaretleme teknikleri çiftleşme performansı 4,6 üzerinde hiçbir etkisi göstermeye görünür. Ancak, kağıt doğrudan yetişkin D aynı gıda boyası etkilerini inceleyen melanogaster ömrü 14 güçlü azalma bulundu. Önceki çalışmalar da alm odaklanmıştırost tamamen D. üzerinde melanogaster, hem CO 2 anestezi 5,11 ve gıda boyası 14 yöntemleri etkileri ile ilgili. Şu anda, CO 2 anestezi veya bağırsak boyama kullanımı diğer Drosophila çiftleşme davranışı nasıl etkilediğini çok az bilgi vardır. Aşağıdaki inceleme, Drosophila üç türün (D. melanogaster, D. pseudoobscura ve D subobscura) çiftleşme davranışı üzerinde CO2 anestezi etkisi değerlendirilmektedir. CO 2 sinekler toplama etkisi tek ve iki erkek çiftleşme denemeleri hem de incelenmiştir. CO2 etkisi de D. değişir bulunmuştur melanogaster 5 ve CO 2 maruz kalma ve çiftleşme arasındaki çok farklı gecikme süreleri test edildi. Anestezi ve kanat kırpma yöntemi işaretleme alternatif: sinekler leke gıda boyaların kullanımı da değerlendirilir.

<table><tbody><tr><td>Plastic tubing</td><td>Fisher Scientific</td><td>TWT-200-061G</td><td>Other tubing may be suitable however it must fit within a 1ml pipette tip.</td></tr><tr><td>Fine mesh</td><td>Any haberdashery</td><td>-</td><td>Fine curtain mesh is suitable</td></tr><tr><td>1 ml pipette tips</td><td>VWR</td><td>83007-376</td><td>Various brands of pipette tips would be suitable</td></tr><tr><td>Plastic Vials</td><td>Sarstedt</td><td>58.49</td><td>Larger vials or bottles could also be used.</td></tr><tr><td>Cotton Balls</td><td>Lewis Medical Solutions</td><td>28170</td><td>The size of cotton will vary depending on the size of vials used</td></tr><tr><td>Blue Food colouring</td><td>Thesugarcraftcompany</td><td>-</td><td>Other dye colours and brands can have variable results.</td></tr><tr><td>CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; Tank</td><td>BOC</td><td>BOC 40VK</td><td></td></tr><tr><td>Sharpie Markers</td><td>Steadtler</td><td>Lumocolor 313 S</td><td>Various colours can be used, but Lumocolor S give an excellent combination of durability and fineness</td></tr><tr><td>Stopwatch</td><td>Salter</td><td>SL3920</td><td>Any stopwatch with a good digital display would be fine</td></tr></tbody></table>

dyeing insects for behavioral assays: the mating behavior of anesthetized drosophila

Drosophila kullanarak Çiftleşme deneyleri cinsel seçimi ve davranış anlaşılmasına büyük katkıda bulunmuştur. Deneyler genellikle deneme bireyler arasında ayrım basit, kolay ve ucuz yöntemler gerektirir. Bunun için standart bir yöntem, her sinek kırpma CO 2 anestezi ve ardından etiketleyerek veya kanat. Bununla birlikte, bu invaziv ve davranışını etkilemek için gösterilmiştir. Diğer teknikler sinekleri tanımlamak için renklenme kullandık. Bu makalede, gıda boyası kullanarak, onları ayrı ayrı deneylerde içinde tespit edilmesini sağlar etiketleme Drosophila için basit ve non-invaziv bir yöntem sunar. Bu yöntem, iki erkek bir kadın çiftleşmek için rekabet çalışmalarda kullanılmaktadır. Boyama hızlı ve kolay tanımlanmasını sağladı. Test edilen üç tür arasında renk mukavemetinde bir fark ise, oldu. Veri boya gösteren sunulmuştur Drosophila Melano CO 2 den çiftleşme davranışı üzerinde bir alt etkiye sahiptirgaster. CO2 anestezi etkisi D ile, Drosophila türleri bağlıdır gösterilmiştir pseudoobscura ve D subobscura, D. ise hiçbir etkisi gösteren melanogaster erkek çiftleşme başarısını düşürmüştü. sunulan boya yöntemi deney tasarımları geniş bir aralığına uygulanabilirdir.

İki erkek çiftleşme denemeleri - 2 anestezi çiftleşme davranışı CO etkisi CO 2 anestezi etkisi varyasyonu açıklamak için bulunan en iyi modeli bir faktör olarak (D. pseudoobscura ve D. subobscura birbirlerine arasında hiçbir farklılık gösterdi kaynaşmış olan) türlerin içeriyordu. D. pseudoobscura ve D subobscura iki erkek çalışmalarda (Z 1.589 = 0.087, p = 0,931) çiftleşme başarısı CO 2 anestezi anlamlı etkisi yoktu. D. için melanogaster, 2 anestezi CO maruz erkek önemli ölçüde daha düşük birleşme başarı (Z1,589 = 2.467, p = 0.014) vardı. Daha büyük bir etkiye sahip türler ve tedavi (χ 2 = 1.589 6.83 = 0.009 P) arasında anlamlı bir etkileşim D. zaman görülüyor oldu melanogaster koleksiyonu gaza maruz veya 1 günlük deneme (Tablo 1) önce bulundu. Ancak buradaner, D. melanogaster erkek CO 2 bir etkisi görülmemiştir 2 iki gün deneysel duruşmadan önce CO maruz. İki erkek çiftleşme denemeleri - çiftleşme davranışı üzerinde bağırsak boyama etkisi Model basitleştirme gıda boyası anlamlı etkisi üç türün (&gt; 0.1 P) herhangi bulundu varlık gösterdi. Tedavi veya gaz durum analizine dahil edildiğinde bu (P&gt; 0.1) da anlamlı değildi. tedavilerde renkli sinekler başarılı eşleştirmesi oranlan Tablo 2&#39;de gösterilmiştir. sinekler arasında renk farkı renkli ve renksiz gıda Şekil 1 &#39;de görülebilir. bağırsak gıda boyası yoğunluğu D daha fazla idi tutulur pseudoobscura ve D D. daha subobscura melanogaster. Tek çiftleşme denemeleri - CO m 2 anestezi etkisiating davranış CO 2 anestezi son zamanlarda toplamak yetişkin ortaya için kullanıldığında, üç türün herhangi çiftleşme gecikme fark yoktu. Bir etki D. geçme süresi için bulunmuştur subobscura 2 iki gün çiftleşme denemeleri (; Tablo 2 Şekil 2 ve 3) öncesinde CO maruz zaman. <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52645/52645fig1.jpg" /> Şekil 1. RENKLİ ve Non Renkli Fly Gıda (A) küçük şişeler gösteren Fotoğraf ve Erkek D. Bağırsak boyamada Gücü Subobscura (B). <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52645/52645fig2.jpg" /> Erkeklerde Anesteziyoloji olsaydı, Tek Erkek Denemeler İncelenen üç Türlerinin için Çiftleşme Gecikme için Şekil 2. ortalama ve% 95 güven aralıklarıd (ışık çubukları) ya da değil Anestezi (koyu çubuklar) olduğunda Cinsel Olgunluk önce Bakireler olarak Toplanan. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52645/52645fig3.jpg" /> Cinsel Olgunluk önce Bakireler olarak Toplanan zaman Erkekler (koyu çubuklar) Anestezi (ışık çubukları) Anestezi ya da değil edildi Şekil 3. ortalama ve Tek Erkek Denemeler İncelenen üç Türlerinin için Çiftleşme Süresi% 95 Güven Aralıkları. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Tedavi </td><td> Tür </td><td> Hayır denemeleri </td><td> Hayır sinekler renkli evlendirilen ki </td><td> p değeri </td><td> Hayır sinekler gassed evlendirilen ki </td><td> p değeri </td></tr><tr><td rowspan="3"> CO 2 üzerinde Koleksiyonu </td><td> D. Mel </td><td> 73 </td><td> 36 </td><td> 1 </td><td> 27 </td><td> 0,0344 </td></tr><tr><td> D. pse </td><td>79 </td><td> 41 </td><td> 0,8221 </td><td> 44 </td><td> 0,3682 </td></tr><tr><td> D. alt </td><td> 71 </td><td> 40 </td><td> 0,3425 </td><td> 33 </td><td> 0,6353 </td></tr><tr><td rowspan="3"> 2 18 saat CO Exposed önce </td><td> D. Mel </td><td> 57 </td><td> 28 </td><td> 1 </td><td> 19 </td><td> 0,0163 </td></tr><tr><td> D. pse </td><td> 65 </td><td> 32 </td><td> 1 </td><td> 31 </td><td> 0,8043 </td></tr><tr><td> D. alt </td><td> 68 </td><td> 38 </td><td> 0,3961 </td><td> 35 </td><td> 0,9036 </td></tr><tr><td rowspan="3"> 2 2days CO Exposed. </td><td> D. Mel </td><td> 56 </td><td> 19 </td><td> 0,0222 </td><td> 32 </td><td> 0,3497 </td></tr><tr><td> D. pse </td><td> 70 </td><td> 32 </td><td> 0,5504 </td><td> 33 </td><td> 0,7202 </td></tr><tr><td> D. alt </td><td> 56 </td><td> 29 </td><td> 0,8939 </td><td> 26 </td><td> 0,6889 &lt;/ Td&gt; </tr></tbody></table> Tablo İncelendiğinde Tüm Türlerin ve Tedaviler karşısında iki erkek Choice Experiments 1. Sonuçları. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Tür </td><td> Özellik </td><td> df </td><td> t değeri </td><td> p değeri </td></tr><tr><td rowspan="2"> D. melanogaster </td><td> Gecikme </td><td> 58 </td><td> 1,379 </td><td> 0.174 </td></tr><tr><td> Süre </td><td> 58 </td><td> 1.243 </td><td> 0.221 </td></tr><tr><td rowspan="2"> D. pseudoobscura </td><td> Gecikme </td><td> 109 </td><td> 0.419 </td><td> 0.676 </td></tr><tr><td> Süre </td><td> 109 </td><td> 0.436 </td><td> 0.664 </td></tr><tr><td rowspan="2"> D. subobscura </td><td> Gecikme </td><td> 83 </td><td> 0.098 </td><td> 0.922 </td></tr><tr><td> Süre </td><td> 83 </td><td> 1,767 </td><td> 0.081 </td></tr></tbody></table> Tek Çiftleşme Çiftleşme Gecikme CO 2 Anestezi Toplanması Etkisini incelenmesi Deney ve Süre gelen Tablo 2. Bulgular. Testler Drosophila üç türün (D. melanogaster, D. pseudoobscura ve D. subobscura) üzerinde gerçekleştirilmiştir.

Watch this Scientific Journal Video about Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila at JoVE.com

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

Davranış Tahliller için Boyama Böcekler: anestezi ve Çiftleşme Davranışı<em&gt; Drosophila</em

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

dyeing-insects-for-behavioral-assays-mating-behavior-anesthetized

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

9.8K Görüntüleme.  University of Liverpool. This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

Video: Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors remains poorly understood. In Drosophila melanogaster, environmental cues, such as food availability, affect mating activity offering a tractable system to investigate the mechanisms modulating sexual behavior. In D. melanogaster, environmental cues are often sensed via the chemosensory gustatory and olfactory systems. Here, we present a method to test the effect of environmental chemical cues on mating behavior. The assay consists of a small mating arena containing food medium and a mating couple. The mating frequency for each couple is continuously monitored for 24 h. Here we present the applicability of this assay to test environmental compounds from an external source through a pressurized air system as well as manipulation of the environmental components directly in the mating arena. The use of a pressurized air system is especially useful to test the effect of very volatile compounds, while manipulating components directly in the mating arena can be of value to ascertain a compound's presence. This assay can be adapted to answer questions about the influence of genetic and environmental cues on mating behavior and fecundity as well as other male and female reproductive behaviors.

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

We demonstrate an assay to analyze the environmental and genetic cues that influence mating behavior in the fruit fly Drosophila melanogaster.

Çevresel İpuçlarının Eklem Davranışı Üzerine Etkisini Test Etmek İçin Bir Yöntem<em&gt; Drosophila melanogaster</em

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors ...

Davranış

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

Nörobilim

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster. In a light-tight box illuminated by red light that is invisible to fruit flies, a camera linked to custom data acquisition software monitors the position of six flies simultaneously. Each fly is confined to walk in individual arenas containing a food odor at the center. The testing arenas rest on a porous floor that functions to prevent odor accumulation. Latency to locate the odor source, a metric that reflects olfactory sensitivity under different physiological states, is determined by software analysis. Here, we discuss the critical mechanics of running this behavioral paradigm and cover specific issues regarding fly loading, odor contamination, assay temperature, data quality, and statistical analysis.

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster.

Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi<em&gt; Drosophila</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

An Adjustable High-Definition Imaging System for Behavioral Studies of Drosophila Adults

Drosophila melanogaster is a very powerful model in biological research, but a bad model for photography or videography. This paper describes a simple but effective method to observe and document the behavior or morphology of flies. Flies were placed in a translucent observation chamber c.a. &#216;15 x 5mm (no food inside) or &#216;15 x 12 mm (with an 8 mm-high piece of food inside). After covering with an ultraviolet (UV)/clear filter with high light transmittance, the chamber was placed under a 5-50x zoom stereo microscope, and mini light-emitting diode (LED) video lights were placed on both sides of the microscope to illuminate the chamber to obtain uniform, soft, bright, and nearly shadow-free light. Then, a compact digital camera with 3-5x optical zoom, which can record 1080 P high-definition or higher resolution video (at a frame rate of &#8805;30 fps), was connected to the eyepiece of microscope through a bracket, and photographs or videos were taken through the eyepiece. By adjusting the zoom knob of the zoom stereo microscope, it was very easy to track the flies and take panoramic or detailed close-up images as needed, while the camera recorded everything under the microscope. Because the flies can stay at any position in the chamber, they can be observed and recorded from all directions. The photographs or videos taken are of good image quality. This method can be used both for scientific research and teaching.

An Adjustable High-Definition Imaging System for Behavioral Studies of Drosophila Adults

This protocol describes how to make a simple adult Drosophila behavior observation chamber, and how to take high-definition photographs/videos of the morphology or behavior of different types of fruit flies in the observation chamber through relatively simple and affordable methods.

Drosophila Yetişkinlerinin Davranışsal Çalışmaları için Ayarlanabilir Yüksek Çözünürlüklü Görüntüleme Sistemi

Drosophila melanogaster is a very powerful model in biological research, but a bad model for photography or videography. This paper describes a simple but ...

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by stressed conspecifics due to an odorant released during stress known as the Drosophila stress odorant (dSO). Through the use of the T-maze apparatus, one can quantify the avoidance of the dSO by responder flies in a very affordable and robust assay. Conditions necessary to obtain a strong performance are presented here. A stressful experience is necessary for the flies to emit dSO, as well as enough emitter flies to cause a robust avoidance response to the presence of dSO. Genetic background, but not their group size, strongly altered the avoidance of the dSO by the responder flies. Canton-S and Elwood display a higher performance in avoiding the dSO than Oregon and Samarkand strains. This behavioral assay will allow identification of mechanisms underlying this social behavior, and the assessment of the influence of genes and environmental conditions on both emission and avoidance of the dSO. Such an assay can be included in batteries of simple diagnostic tests used to identify social deficiencies of mutants or environmental conditions of interest.

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.

Sosyal Kaçınma Niceleme için Basit Testi<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

Arasında Mechanosensation için bir davranış tahlilinde klonlarda MARCM tabanlı<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Quantification of Drosophila Grooming Behavior

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a grooming assay protocol and novel chamber design that is cost-efficient and scalable for either small or large-scale studies of Drosophila grooming. Flies are dusted all over their body with Brilliant Yellow dye and given time to remove the dye from their bodies within the chamber. Flies are then deposited in a set volume of ethanol to solubilize the dye. The relative spectral absorbance of dye-ethanol samples for groomed versus ungroomed animals are measured and recorded. The protocol yields quantitative data of dye accumulation for individual flies, which can be easily averaged and compared across samples. This allows experimental designs to easily evaluate grooming ability for mutant animal studies or circuit manipulations. This efficient procedure is both versatile and scalable. We show work-flow of the protocol and comparative data between WT animals and mutant animals for the Drosophila type I Dopamine Receptor (DopR).

This protocol describes a scalable individual grooming assay technique in Drosophila that yields robust, quantitative data to measure grooming behavior. The method is based on comparing the difference in dye accumulation on the bodies of un-groomed versus groomed animals over a set period of time.

Drosophila Bakım Davranışının Nicelleştirilmesi

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a ...

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, reductionist, and scalable system for in-depth investigation of motivation using the mating drive of male Drosophila&#160;melanogaster (Drosophila), the methods for which we detail here. The behavioral paradigm centers on the finding that male mating drive decreases alongside fertility over the course of repeated copulations and recovers over ~3 d. In this system, the powerful neurogenetic tools available in the fly converge with the genetic accessibility and putative wiring diagram available for sexual behavior. This convergence allows rapid isolation and interrogation of small neuronal populations with specific motivational functions. Here we detail the design and execution of the satiety assay that is used to measure and alter courtship motivation in the male fly. Using this assay, we also demonstrate that low male mating drive can be overcome by stimulating dopaminergic neurons. The satiety assay is simple, affordable, and robust to influences of genetic background. We expect the satiety assay to generate many new insights into the neurobiology of motivational states.

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

This article describes a behavioral assay that uses male mating drive in Drosophila melanogaster to study motivation. Using this method, researchers can utilize advanced fly neurogenetic techniques to uncover the genetic, molecular, and cellular mechanisms that underlie this motivation.

Ölçme ve Male Değiştirme Çiftleşme Sürücü<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, ...

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a considerable amount of information has been generated regarding ORN responses to odorants, the role of specific ORNs in driving behavioral responses remains poorly understood. Complications in behavior analyses arise due to different volatilities of odorants that activate individual ORNs, multiple ORNs activated by single odorants, and the difficulty in replicating naturally observed temporal variations in olfactory stimuli using conventional odor-delivery methods in the laboratory. Here, we describe a protocol that analyzes Drosophila larval behavior in response to simultaneous optogenetic stimulation of its ORNs. The optogenetic technology used here allows for specificity of ORN activation and precise control of temporal patterns of ORN activation. Corresponding larval movement is tracked, digitally recorded, and analyzed using custom written software. By replacing odor stimuli with light stimuli, this method allows for a more precise control of individual ORN activation in order to study its impact on larval behavior. Our method could be further extended to study the impact of second-order projection neurons (PNs) as well as local neurons (LNs) on larval behavior. This method will thus enable a comprehensive dissection of olfactory circuit function and complement studies on how olfactory neuron activities translate in to behavior responses.

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

This protocol analyzes navigational behavior of Drosophila larva in response to simultaneous optogenetic stimulation of its olfactory neurons. Light of 630 nm wavelength is used to activate individual olfactory neurons expressing a red-shifted channel rhodopsin. Larval movement is simultaneously tracked, digitally recorded, and analyzed using custom-written software.

Yanıt koku nöronlar Optogenetic uyarılması olarak Drosophila larva davranışını izlemek

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a ...

Behavioral Assays for Optogenetic Manipulation of Neural Circuits in Drosophila melanogaster

Optogenetics has become a fundamental technique in neuroscience, enabling precise control of neuronal activity through light stimulation. This study introduces easy-to-implement setups for applying optogenetic methods in Drosophila melanogaster. Two optogenetic tools, CsChrimson, a red-light-activated cation channel, and GtACR2, a blue-light-activated anion channel, were employed in four experimental approaches. Three of these approaches involve single-fly experiments: (1) a blue-light optogenetic thermotactic positional preference assay targeting temperature-sensitive heating cells, (2) a red-light optogenetic positional preference assay activating bitter sensing neurons, and (3) a proboscis extension response assay activating the sweet-sensing neurons. The fourth approach (4) is a fly maze setup to assess avoidance behaviors using multiple flies. The ability to manipulate neural activity temporally and spatially offers powerful insights into sensory processing and decision-making, underscoring the potential of optogenetics to advance our knowledge of neural function. These methods provide an accessible and robust framework for future research in neuroscience to enhance the understanding of specific neural pathways and their behavioral outcomes.

This paper presents methods for optogenetic manipulation in Drosophila melanogaster, utilizing CsChrimson and GtACR2 to activate and silence specific neurons. Four experiments are described to utilize optogenetics to explore thermotactic and gustatory behaviors, providing insights into the underlying neural mechanisms governing these processes.

Drosophila melanogaster'de Nöral Devrelerin Optogenetik Manipülasyonu için Davranışsal Testler

Optogenetics has become a fundamental technique in neuroscience, enabling precise control of neuronal activity through light stimulation. This study ...

Davranış Tahliller için Boyama Böcekler: anestezi ve Çiftleşme Davranışı

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Çevresel İpuçlarının Eklem Davranışı Üzerine Etkisini Test Etmek İçin Bir Yöntem

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi

Drosophila Yetişkinlerinin Davranışsal Çalışmaları için Ayarlanabilir Yüksek Çözünürlüklü Görüntüleme Sistemi

Sosyal Kaçınma Niceleme için Basit Testi

Arasında Mechanosensation için bir davranış tahlilinde klonlarda MARCM tabanlı

Drosophila Bakım Davranışının Nicelleştirilmesi

Ölçme ve Male Değiştirme Çiftleşme Sürücü

Yanıt koku nöronlar Optogenetic uyarılması olarak Drosophila larva davranışını izlemek

Drosophila melanogaster'de Nöral Devrelerin Optogenetik Manipülasyonu için Davranışsal Testler