The authors acknowledge the following funding sources, Whittier Foundation, Harrington Foundation, National Institutes of Health and Research to Prevent Blindness.

התקבלו כל עיני enucleated מבית שחיטה וכל הניסויים בוצעו בהתאם לחוקי בטיחות ביולוגית מוסדיים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Secure עין enucleated מטה על משטח. לעשות זאת על ידי הצבת סיכות רקמה דרך הרקמה העודפת סביב העין ואבטחה אותו לתוך לוח קלקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח ולנתק לחמית perilimbal מהעין. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במלקחי קנס (0.3 מלקחיים) וmicroscissors (מספריים Westcott) ללחתוך לחמית בימבוס ובוטות לנתח אותו בלובן העין. חותך את לחמית לאורך ימבוס כנתיחה הבוטה ממשיכה לאפשר נתיחה נוספת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר לחמית כל הדרך סביב העין (360 מעלות) לחשוף כמה שלובן עין ככל האפשר. הערה: זה מועיל להשאיר כמות קטנה של לחמית כדי להקל להתקבע עין עם הסיכות כירורגי או מלקחיים בהמשך ההליך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צור דש scleral עובי מלא לאורך אחדצד של העין (להב סכין מנתחים 69). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך מקביל חתך scleral ~ 5 מ&quot;מ לימבוס והאחורי 3 מ&quot;מ לימבוס בעדינות על ידי חיתוך ללובן העין עם אזמל (להב סכין מנתחים 11) עד דמית העין כהה פיגמנט גלוי. היזהר שלא לחתוך את דמית העין עצמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות לנתח לאורך המטוס בין לובן העין ודמה העין, או במספריים (באמצעות נתיחה בוטה) או עם האזמל, עד שאפשר להגדיל את המרחב הפוטנציאלי בין רקמות אלה על ידי לחיצה על דמית העין בעדינות פנימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות עוד חתך scleral בניצב לחתך scleral הראשון עם microscissors החד, יצירת חתך בצורת אות T. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן להמשיך לנתח בצורה בוטה בצורה היקפית להסרת רקמת scleral מדמה העין הבסיסית ודחף בעדינות את דמית העין מהלובן העין כאמור לעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדלת דש scleral לפי צורך. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות בוטה לנתח דמית העין מלובן העיןלאורך כל התהליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדלת הדש עד החתך שנעשה בניצב לימבוס מגיע עצב הראייה והחתך שנעשה במקביל לימבוס הוא לפחות שליש מהיקף העין (45 מעלות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בדש scleral כמקור למינוף למניפולציה של העין במהלך נתיחה בוטה. נגד כוח המשיכה על הדש עושה את זה יותר קל לנתיחה בוטה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על השלב הקודם על דש scleral האחר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את דשי scleral לחשוף שטח גדול של דמית העין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך החתך שנעשה בשלב 3 סביב ההיקף של העין (360 מעלות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להסיר את הרקמה דמית העין-רשתית שנותרה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באזור החשוף, להשתמש כותנה-טיפ לצחצח בעדינות את הרקמה דמית העין-רשתית שנותרה. לחלופין, בעדינות לתפוס את הרקמה עם מלקחיים ולקלף אותו מהגוף הזגוגי הבסיסי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם יש צורך לבצע חתך לתוך דמית העין רחarting מעצב הראייה. אז לקלף בעדינות דמית העין לחשוף את הרשתית וזגוגית קליפה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך בוטה לנתח דמית העין מלובן העין ולאחר מכן לקלף את דמית העין כדי לקבל את כל הזגוגית, ללא פגע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בשפת scleral המצורפת לקרנית למצב את כל הזגוגית במיקום רצוי. בשלב זה, הזגוגית מחוברת ללובן העין והעדשה הקדמי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בוטה לנתח הזגוגית מהחלק הפנימי של לובן העין, סביב העדשה, הסרת כל לובן העין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בכלי קהה כדי לגרוף את העדשה מהזגוגית אם יהיה בכך צורך. השתמש במדגם לניסויי vitreodynamic שונים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח מדגם בכוס זכוכית עם פני שטח ידוע החשוף לאוויר. הנח בדיקה רגישה חמצן בקצה של המדגם. השתמש מיקרו-מניפולטור כדי להזיז את החללית למרחק ידוע (r) למדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש חוק הדיפוזיה של הפיק לקבל את משוואת דיפוזיה התיאורטית. עם דהת&quot;א נאספה בשלב 10.1, להשיג הטווח מקדם דיפוזיה הניסיונית / תגובה וכו &#39; </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Siggers, J. H., Ethier, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+Mechanics+of+the+Eye.">Fluid Mechanics of the Eye.</a> Annual Review of Fluid Mechanics. 44 (1), 347-372 (2012).</li><li>Sebag, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+changes+in+human+vitreous+structure.">Age-related changes in human vitreous structure.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 225 (2), 89-93 (1987).</li><li>Grignolo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrous+components+of+the+vitreous+body.">Fibrous components of the vitreous body.</a> AMA Arch Ophthalmol. 47 (6), 760-774 (1952).</li><li>Gisladottir, S., Loftsson, T., Stefansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffusion+characteristics+of+vitreous+humour+and+saline+solution+follow+the+Stokes+Einstein+equation.">Diffusion characteristics of vitreous humour and saline solution follow the Stokes Einstein equation.</a> G Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 247 (12), 1677-1684 (2009).</li><li>Xu, J., Heys, J. J., Barocas, V. H., Randolph, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permeability+and+diffusion+in+vitreous+humor:+implications+for+drug+delivery.">Permeability and diffusion in vitreous humor: implications for drug delivery.</a> Pharm Res. 17 (6), 664-669 (2000).</li><li>Watts, F., Tan, L. E., Wilson, C. G., Girkin, J. M., Tassieri, M., Wright, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+the+micro-rheology+of+the+vitreous+humor+using+an+optically+trapped+local+probe.">Investigating the micro-rheology of the vitreous humor using an optically trapped local probe.</a> Journal of Optics. 16 (1), 015301 (2014).</li><li>Skeie, J. M., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+human+vitreous+body+elements+for+proteomic+analysis.">Dissection of human vitreous body elements for proteomic analysis.</a> J Vis Exp. (47), e2455 (2011).</li><li>Abdallah, W., Ameri, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitreal+oxygenation+in+retinal+ischemia+reperfusion.">Vitreal oxygenation in retinal ischemia reperfusion.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (2), 1035-1042 (2011).</li><li>Goldenberg, D., Trese, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologic+vitreodynamics:+what+is+it?+Why+is+it+important.">Pharmacologic vitreodynamics: what is it? Why is it important.</a> Expert Review of Ophthalmology. 3 (3), 273-277 (2008).</li><li>Choonara, Y. E., Pillay, V., Danckwerts, M. P., Carmichael, T. R., du Toit, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+implantable+intravitreal+drug+delivery+technologies+for+the+treatment+of+posterior+segment+eye+diseases.">A review of implantable intravitreal drug delivery technologies for the treatment of posterior segment eye diseases.</a> J Pharm Sci. 99 (5), 2219-2239 (2010).</li><li>Balachandran, R. K., Barocas, V. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computer+modeling+of+drug+delivery+to+the+posterior+eye:+effect+of+active+transport+and+loss+to+choroidal+blood+flow.">Computer modeling of drug delivery to the posterior eye: effect of active transport and loss to choroidal blood flow.</a> Pharm Res. 25 (11), 2685-2696 (2008).</li><li>Smith, C. a., Newson, T. a., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+framework+for+modeling+ocular+drug+transport+and+flow+through+the+eye+using+micro-CT.">A framework for modeling ocular drug transport and flow through the eye using micro-CT.</a> Phys Med Biol. 57 (19), 6295-6307 (2012).</li><li>Quiram, P. A., Leverenz, V. R., Baker, R. M., Dang, L., Giblin, F. J., Trese, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microplasmin-induced+posterior+vitreous+detachment+affects+vitreous+oxygen+levels.">Microplasmin-induced posterior vitreous detachment affects vitreous oxygen levels.</a> Retina. 27 (8), 1090-1096 (2007).</li><li>Shui, Y., Holekamp, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gel+state+of+the+vitreous+and+ascorbate-dependent+oxygen+consumption:+relationship+to+the+etiology+of+nuclear+cataracts.">The gel state of the vitreous and ascorbate-dependent oxygen consumption: relationship to the etiology of nuclear cataracts.</a> Arch Ophthalmol. 127 (4), 475-482 (2009).</li><li>Burk, S. E., Da Mata, A. P., Snyder, M. E., Schneider, S., Osher, R. H., Cionni, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+vitreous+using+kenalog+suspension.">Visualizing vitreous using kenalog suspension.</a> J Cataract Refract Surg. 29 (4), 645-651 (2003).</li><li>Spaide, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+the+Posterior+Vitreous+with+Dynamic+Focusing+and+Windowed+Averaging+Swept+Source+Optical+Coherence+Tomography.">Visualization of the Posterior Vitreous with Dynamic Focusing and Windowed Averaging Swept Source Optical Coherence Tomography.</a> Am J Ophthalmol. S0002-9394 (14), 00537-00536 (2014).</li><li>Domalpally, A., Gangaputra, S., Danis, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Diseases of the Vitreo-Macular Interface. 21, 21-27 (2014).</li><li>Stocchino, R., Repetto, A., Cafferata, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+investigation+of+vitreous+humour+motion+within+a+human+eye+model.">Experimental investigation of vitreous humour motion within a human eye model.</a> Phys Med Biol. 50 (19), 4729-4743 (2005).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

ישנם שני שלבים קריטיים שחייבות להתבצע בזהירות במהלך נתיחת זגוגית. שלב 3, יצירת דש scleral עובי מלא, הוא חיוני לכל הניתוח. יש להקפיד לא לחתוך לתוך דמית העין בעת ​​יצירת דש scleral בעובי מלא. השלב הקריטי האחר לנתח משם בלובן העין מדמה העין. צעד זה חייב להיעשות בזהירות כדי למנוע י...

מטרתה של שיטה זו היא פירוט טכניקה לבודד את הגוף כולו, בשלמותה זגוגי, עם הליבה והקליפה שלמה זגוגי, מעין גופה, למטרות ניתוח vitreodynamic. כמו בתחום הפיסיולוגיה זגוגית גדל, חוקרים רב-תחומיים, כגון חוקרי מכניקת נוזלים, חוקרים את התכונות הפיזיות וביו-מכאניות של 1 הזגוגית. לשם כך, חיוני לפרטים טכניקה לבודד את כולה, בשלמות גוף הזגוגי כדי לסייע לחוקרים רב-תחומיים. סבג ואח &#39;. 2 ואחרים 3 ביצעו ניתוחי זגוגית כל אלגנטיים בעיני גופת אדם והראו איורים של התוצאות. עם זאת, הטכניקה המשמשת לא תיארה בפירוט ולא מומחים לא יהיה מסוגל לשכפל את השיטה באופן עצמאי. מחקרים אחרים שנקטפו מזגוגית עיני גופה באמצעות שיטות פשוטות כגון שאיפה או נתיחה חלקית,שניהם לא לגרום לגוף כולו, בשלמות זגוגית. Gisladottis et al. 4 ושו et al. 5 לחקור חדירות בהומור זגוגית שנקטפו מעיני גווייה. עם זאת, מאחר שלא שיטה של ​​מיצוי זגוגית תוארה, הונח כי הם להישאף הומור הזגוגית עם מזרק. ווטס et al. 6 הלך צעד אחד קדימה על ידי תיאור שיטה של בידוד הומור זגוגית ארנב עם טכניקה ניתוחית. עם זאת, שיטה זו גורמת לבידוד של רק ליבת הזגוגית ולא קליפת זגוגי. Skeie et al. 7 מאוחר יותר מאורגנים הזגוגית ל 4 אזורים ייחודיים ואלגנטיות תיארו שיטה לנתח את כל חלק לניתוח. טכניקה זו עם זאת, לא לגרום לזגוגית שלמה בכללותו. הטכניקה הנוכחית פותחה כדי להקל על ניסויים ביו-פיסיקליים שכיום מבוצעים רק בעיני גווייה. שיטות קודמות, כפי שתוארובוב, מוגבל בגלל) אף אחד 1 לבודד את כל הגוף הזגוגי לחלוטין, ליבת זגוגית 2) שנקטפו וקליפה הן הומוגני, 3) המבנה האנטומי זגוגית לא נשמר, או 4) טכניקות לנתיחה אינן מפורטות במידה מספקת לשכפול על ידי חוקרים בתחומים אחרים . בנוסף, בשל האטימות של לובן העין ודמיתי עין, הדמיה של הגוף הזגוגי מוגבל בגלגל העין בשלמותה. זה מגביל את הדיוק והיתכנות של מדידות שניתן לעשות בתוך כל עין. בנוסף, המבנים אנטומיים המקיפים את הזגוגית יכולים לבלבל את המחקר של מאפיינים ביוכימיים ופיסיים של הזגוגית. בשנים האחרונות, את גופתו של מדע הזגוגית גדלה מאוד ויש סיבה להאמין שיש לו את כל הגוף הזגוגי מאפיינים שונים מהחלקים הבודדים שלה. יש התעניינות גוברת בחוקרים את התכונות פיזיות, ביו-מכאניות, וכימיות של הזגוגית לresearc vitreodynamicsh, שבה יש יישומים ברפואה קלינית כגון משלוח סמים, חמצון זגוגית 8 וvitrectomy. vitreodynamics התרופתי, אשר עושה שימוש בסוכנים תרופתיים כדי לתפעל את הזגוגית, יכול לשמש כדי לשפר את תוצאות vitrectomy 9. מאפיינים ביו-מכאניים המשמשים למודל זרימת נוזל זגוגית, אשר יכול לשמש כדי לשפר את טכנולוגיות משלוח סמים זגוגית 10-12. תכונות פיסיקליות של מגזרים שונים של הזגוגית הן קריטיות להבנת תחבורת חמצן vitreo-רשתית 13. טכניקה לנתיחה זגוגית המוצעת יכולה לשמש כדי לחקור את המאפיינים שונים של הומור הזגוגית שלם. זה מאפשר ניסויי ספסל העליון להיעשות על גוף כולו, בשלמות זגוגית עם הדמיה טובה יותר. לסיכום, שיטות הנוכחיות למחקר של הזגוגית הם או לא תיארו כראוי, או לגרום לבידוד שלם הליבה וקליפת זגוגי. לכן, יש צורך לבצע דוארxperiments במודל העין שקוף תוך שמירה על האנטומיה של הזגוגית שקיים בעין הגופה.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.3 forceps</td>
			<td>Storz Opthalmics</td>
			<td>E1793</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Westcott Tenotomy Scissors Curved Right</td>
			<td>Storz Opthalmics</td>
			<td>E3320 R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle No. 3</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25607-947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade, #11, for #3 Handle</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470174-844</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

whole vitreous humor dissection for vitreodynamic analysis

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous studies have shown the results of such dissections, the detailed steps have not been described, precluding researchers outside the field from replicating their methods. Other studies harvest vitreous either through aspiration, which does not maintain the vitreous structure anatomy, or through partial dissection, which only isolates the vitreous core. The proposed method isolates the whole vitreous body, with the vitreous core and cortex intact, while maintaining vitreous anatomy and structural integrity. In this method, a full thickness scleral flap in an enucleated porcine eye is first created and through this, the choroid tissue can be separated from the sclera. The scleral flap is then expanded and the choroid is completely separated from the sclera. Finally the choroid-retina tissue is peeled off the vitreous to leave an isolated intact vitreous body. The proposed vitreous dissection technique can be used to study physical properties of the vitreous humor. In particular, this method has significance for experimental studies involving drug delivery, vitreo-retinal oxygen transport, and intraocular convection.

בעקבות הפרוטוקול יוביל לנתיחת זגוגית מוצלחת עם הליבה וקליפת המוח (איור 3) בשלמותה. הדבר ניכר מן חתיכות השייר של רשתית דבקו בקליפת זגוגי. הומור זגוגית כל פגע ניתן להשתמש במספר דרכים לניסויי vitreodynamic ספציפיים. במקרה שלנו, שיעור דיפוזיה של חמצן בהומור זגוגית שלם ?...

Watch this Scientific Journal Video about Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis at JoVE.com

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

The goal of this protocol is to show an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes.

כל הזגוגיות ההומור Dissection לניתוח Vitreodynamic

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

whole-vitreous-humor-dissection-for-vitreodynamic-analysis

Research

JoVE Journal

Medicine

11.3K Views.  University of Southern California. The goal of this protocol is to show an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes.

Video: Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

Protocol for Long Duration Whole Body Hyperthermia in Mice

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body temperature that is observed during fever. The use of hyperthermia as an adjuvant has emerged as a promising procedure for tumor regression in the field of cancer biology. For this purpose, the most important requirement is to have reliable and uniform heating protocols. We have developed a protocol for hyperthermia (whole body) in mice. In this protocol, animals are exposed to cycles of hyperthermia for 90 min followed by a rest period of 15 min. During this period mice have easy access to food and water. High body temperature spikes in the mice during first few hyperthermia exposure cycles are prevented by immobilizing the animal. Additionally, normal saline is administered in first few cycles to minimize the effects of dehydration. This protocol can simulate fever like conditions in mice up to 12-24 hr. We have used 8-12 weeks old BALB/Cj female mice to demonstrate the protocol.

This paper describes a protocol for whole body hyperthermia in mice that can stimulate fever like conditions up to 12-24 hr.

פרוטוקול ליפרתרמיה הארוכה משך כל גוף בעכברים

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body ...

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has been used as a surrogate for discoveries in human prostate development and disease. Prostate micro-dissection allows consistent study of lobe-specific prostate anatomy, histology, and cellular characteristics in the absence of contamination of other tissues. Testosterone affects prostate development and disease. Androgen deprivation therapy is a common treatment for prostate cancer patients, but many prostate tumors become castration-resistant. Surgical castration of mouse models allows for the study of castration resistance and other facets of hormonal biology on the prostate. This procedure can be coupled with testosterone reintroduction, or hormonal regeneration of the prostate, a powerful method to study stem cell lineages in the prostate. Together, prostate micro-dissection and surgical castration opens up a multitude of opportunities for robust and consistent research of prostate development and disease. This manuscript describes the protocols for prostate micro-dissection and surgical castration in the laboratory mouse.

This manuscript describes the protocols for prostate micro-dissection and surgical castration in the laboratory mouse. We also depict representative results produced by these protocols. Finally, we discuss the advantages and utilization of these protocols.

Murine הערמונית מיקרו לנתיחה סירוס כירורגי

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

3D Whole-heart Myocardial Tissue Analysis

Cardiac regenerative therapies aim to protect and repair the injured heart in patients with ischemic heart disease. By injecting stem cells or other biologicals that enhance angio- or vasculogenesis into the infarct border zone (IBZ), tissue perfusion is improved, and the myocardium can be protected from further damage. For maximum therapeutic effect, it is hypothesized that the regenerative substance is best delivered to the IBZ. This requires accurate injections and has led to the development of new injection techniques. To validate these new techniques, we have designed a validation protocol based on myocardial tissue analysis. This protocol includes whole-heart myocardial tissue processing that enables detailed two-dimensional (2D) and three-dimensional (3D) analysis of the cardiac anatomy and intramyocardial injections. In a pig, myocardial infarction was created by a 90-min occlusion of the left anterior descending coronary artery. Four weeks later, a mixture of a hydrogel with superparamagnetic iron oxide particles (SPIOs) and fluorescent beads was injected in the IBZ using a minimally-invasive endocardial approach. 1 h after the injection procedure, the pig was euthanized, and the heart was excised and embedded in agarose (agar). After the solidification of the agar, magnetic resonance imaging (MRI), slicing of the heart, and fluorescence imaging were performed. After image post-processing, 3D analysis was performed to assess the IBZ targeting accuracy. This protocol provides a structured and reproducible method for the assessment of the targeting accuracy of intramyocardial injections into the IBZ. The protocol can be easily used when the processing of scar tissue and/or validation of the injection accuracy of the whole heart is desired.

This protocol describes a novel method for the 3D comparison of whole-heart myocardial tissue with MRI. This is designed for the accurate assessment of intramyocardial injections in the infarct border zone of a chronic porcine model of myocardial infarction.

כל 3D-לב בדיקת רקמות שריר הלב

Cardiac regenerative therapies aim to protect and repair the injured heart in patients with ischemic heart disease. By injecting stem cells or other ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at the 12 codon (Ptf1acre/+;LSL-KrasG12D/+) mouse strain as a model of human pancreatic cancer. The goal of our current studies is to identify novel metabolic biomarkers of pancreatic cancer progression. We have performed metabolic profiling of urine, feces, blood, and pancreas tissue extracts, as well as histological analyses of the pancreas to stage the cancer progression. The mouse pancreas is not a well-defined solid organ like in humans, but rather is a diffusely distributed soft tissue that is not easily identified by individuals unfamiliar with mouse internal anatomy or by individuals that have little or no experience performing mouse organ dissections. The purpose of this article is to provide a detailed step-wise visual demonstration to guide novices in the removal of the mouse pancreas by dissection. This article should be especially valuable to students and investigators new to research that requires harvesting of the mouse pancreas by dissection for metabolic profiling or histological analyses.

This video article provides a detailed demonstration of the procedures required to successfully remove the pancreas from a mouse by dissection for histological analysis and metabolic profiling.

דיסקציה של הלבלב העכבר עבור ניתוח היסטולוגית והגדרת פרופיל מטבולי

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Discovering Middle Ear Anatomy by Transcanal Endoscopic Ear Surgery: A Dissection Manual

The middle ear is located in the center of the temporal bone and bears a highly complex anatomy. The recently introduced exclusively endoscopic transcanal approach to the middle ear is a minimally invasive technique sparing the bone and mucosa of the mastoid bone, since the middle ear is accessed through the external auditory canal. This emerging method has several advantages over the traditional (microscopic) approaches to the middle ear such as the panoramic wide-angle views of the anatomy, the possibility to approach and magnify tiny structures, and the possibility of looking around the corner using angled endoscopes.
The cadaveric dissection method presented here consists of an overview on the technical requirements and a precise description of a step-by-step protocol to discover the anatomy of the middle ear. Each step and anatomical structure is carefully described in order to provide a comprehensive guide to endoscopic ear anatomy. In our opinion, this is particularly important to any novice in endoscopic ear surgery as it provides thorough anatomical knowledge and may improve surgical skills.

The aim of this article is to describe the methodology of exclusively endoscopic cadaveric middle ear dissection. Moreover, we aim to provide a comprehensive guide to endoscopic middle ear anatomy.

גילוי באוזן התיכונה אנטומיה על ידי ניתוח אנדוסקופי האוזן Transcanal: מדריך לנתיחה

The middle ear is located in the center of the temporal bone and bears a highly complex anatomy. The recently introduced exclusively endoscopic transcanal ...

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental insults that disturb placenta development or function can cause early pregnancy loss in mice and humans. Nevertheless, simple in vitro assays to screen for potential effects on placenta formation are lacking. Here, we focus on modeling the first and critical step in placenta formation, which consists of the attachment of the allantois to the chorion. We describe a method to rapidly assess the attachment of allantoic explants on immobilized &#945;4&#946;1 integrin, which serves as a chorio-mimetic substrate.This in vitro approach enables a qualitative evaluation of the attachment and spreading behavior of multiple allantois explants at different consecutive time points. The protocol may be used to investigate the effect of targeted mouse mutations, drugs, or various environmental factors that have been linked to pregnancy complications or fetal loss on allantois attachment ex vivo.

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

We describe an in vitro assay to model chorioallantoic attachment, the first step in placenta formation. The protocol demonstrates the dissection and explant culture of murine allantoides on immobilized &#945;4&#946;1 integrin. Allantois attachment is evaluated microscopically at pre-determined time points.

דיסקציה והתרבות Explant של Allantois מאתר לניתוח במבחנה של קובץ מצורף Allantoic

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRI&#8212;Application in Premanifest Huntington's Disease

Recent advances in MRI offer a variety of useful markers to identify neurodegenerative diseases. In Huntington&#39;s disease (HD), regional brain atrophy begins many years prior to the motor onset (during the &#34;premanifest&#34; period), but the spatiotemporal pattern of regional atrophy across the brain has not been fully characterized. Here we demonstrate an online cloud-computing platform, &#34;MRICloud&#34;, which provides atlas-based whole-brain segmentation of T1-weighted images at multiple granularity levels, and thereby, enables us to access the regional features of brain anatomy. We then describe a regression model that detects statistically significant inflection points, at which regional brain atrophy starts to be noticeable, i.e. the &#34;change-point&#34;, with respect to a disease progression index. We used the CAG-age product (CAP) score to index the disease progression in HD patients. Change-point analysis of the volumetric measurements from the segmentation pipeline, therefore, provides important information of the order and pattern of structural atrophy across the brain. The paper illustrates the use of these techniques on T1-weighted MRI data of premanifest HD subjects from a large multicenter PREDICT-HD study. This design potentially has wide applications in a range of neurodegenerative diseases to investigate the dynamic changes of brain anatomy.

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRI&amp;#8212;Application in Premanifest Huntington&#039;s Disease

This paper describes a statistical model for volumetric MRI data analysis, which identifies the &#34;change-point&#34; when brain atrophy begins in premanifest Huntington&#39;s disease. Whole-brain mapping of the change-points is achieved based on brain volumes obtained using an atlas-based segmentation pipeline of T1-weighted images.

מוח-כל פילוח וניתוח נקודת השינוי האנטומי במוח MRI – היישום ב- Premanifest של מחלת הנטינגטון

Recent advances in MRI offer a variety of useful markers to identify neurodegenerative diseases. In Huntington&#39;s disease (HD), regional brain atrophy ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of aortic disease exist, in vivo imaging of the vasculature has been limited. In recent years, micro-computerized tomography (micro-CT) has emerged as a preferred modality for imaging both large and small vessels both in vivo and ex vivo. In conjunction with a method of vascular casting, we have successfully used micro-CT to characterize the frequency and distribution of aortic pathology in &#946;-aminopropionitrile-treated C57/Bl6 mice. Technical limitations of this method include variations in the quality of the perfusion introduced by poor animal preparation, the application of proper methodologies for vessel size quantification, and the non-survivability of this procedure. This article details a methodology for the intravascular perfusion of a lead-based radiopaque silicone rubber for the quantitative characterization of aortopathy in a mouse model of aneurysm and dissection. In addition to visualizing aortic pathology, this method may be used for examining other vascular beds in vivo or vascular beds removed post-mortem.

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &amp;#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

This article describes a detailed methodology of using a radiopaque lead-based silicone rubber to perfuse the murine vasculature for aortic diameter quantification in a mouse model of aortic aneurysm and dissection.

ניתוח כמותי מיקרו-CT Aortopathy במודל של עכברים של β-aminopropionitrile-induced מפרצת אבי העורקים, דיסקציה

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

Imaging and Analysis of Oil Red O-Stained Whole Aorta Lesions in an Aneurysm Hyperlipidemia Mouse Model

Apolipoprotein E (Apoe)- or low density lipoprotein receptor (Ldlr)-deficient hyperlipidemic mice are the two most commonly used models for atherosclerosis research. They are used to study the impact of a various genetic factors and different cell types on atherosclerotic lesion formation and as well as test the development of new therapies. Isolation, excision of the whole aorta, and quantification of Oil Red O-stained atherosclerotic lesions are basic morphometric methods used to evaluate atherosclerotic burden. The goal of this protocol is to describe an optimized, step-by-step surgical method to dissect, perfuse-fix, isolate, stain, image and analyze atherosclerotic lesions in mouse aortas with Oil Red O. Because atherosclerotic lesions can form anywhere in the entire aortic tree, this whole aorta Oil Red O staining method has the advantage of evaluating lipid-laden plaques in the entire aorta and all branches in a single mouse. In addition to Oil Red O staining, fresh isolated whole aortas can be used for variety of in vitro and in vivo experiments and cell isolations.

This protocol provides a step-by-step procedure to analyze atherosclerotic burden in mice. Investigators can use this protocol to compare the abundance, location, and size of atherosclerotic lesions in different animals.

הדמיה וניתוח של שמן אדום O מוכתם כולו אבי העורקים נגעים במודל עכבר היפרליפידמיה מפרצת

Apolipoprotein E (Apoe)- or low density lipoprotein receptor (Ldlr)-deficient hyperlipidemic mice are the two most commonly used models for ...

Location, Dissection, and Analysis of the Murine Stellate Ganglion

The autonomic nervous system is a substantial driver of cardiac electrophysiology. Especially&#160;the role of its sympathetic branch is an ongoing matter of investigation in the pathophysiology of ventricular arrhythmias (VA). Neurons in the stellate ganglia (SG)&#160;&#8211;&#160;bilateral star-shaped structures of the sympathetic chain &#8211;&#160;are an important component of the sympathetic infrastructure. The SG are a recognized target for&#160;treatment via cardiac sympathetic denervation in patients with therapy-refractory VA. While neuronal remodeling and glial activation in the SG have been described in patients with VA, the underlying cellular and molecular processes that potentially precede the onset of arrhythmia are only insufficiently understood and should be elucidated to improve autonomic modulation. Mouse models allow us to study sympathetic neuronal remodeling, but identification of the murine SG is challenging for the inexperienced investigator. Thus, in-depth cellular and molecular biological studies of the murine SG are lacking for many common cardiac diseases. Here, we describe a basic repertoire for dissecting and studying the SG in adult mice for analyses at RNA level (RNA isolation for gene expression analyses, in situ hybridization), protein level (immunofluorescent whole mount staining), and cellular level (basic morphology, cell size measurement). We present potential solutions to overcome challenges in the preparation technique, and how to improve staining via quenching of autofluorescence. This allows for the visualization of neurons as well as glial cells via established markers in order to determine cell composition and remodeling processes. The methods presented here allow characterizing the SG to gain further information on autonomic dysfunction in mice prone to VA and can be complemented by additional techniques investigating neuronal and glial components of the autonomic nervous system in the heart.

Pathophysiological changes in the cardiac autonomic nervous system, especially in its sympathetic branch, contribute to the onset and maintenance of ventricular arrhythmias. In the present protocol, we show how to characterize murine stellate ganglia to improve the understanding of the underlying molecular and cellular processes.

מיקום, ניתוח וניתוח של גנגליון מורין סטלה

The autonomic nervous system is a substantial driver of cardiac electrophysiology. Especially&#160;the role of its sympathetic branch is an ongoing matter ...