המימון ניתן על ידי להילחם עבור Sight. רקמות התקבלו מבנק העין איווה האריות.

1. מגזר Anterior Dissection. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקרנית היא להסיר תחילה ביצוע חתך בבית לימבוס לתא הקדמי באמצעות להב 15 ° (איור 1). ואז אחד הלהב של הקרנית-scleral מספריים מעוקל מוכנס לתוך החדר הקדמי. חתכים היקפיים מתקבלות הקרנית, הקדמי רק גובלת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.12 קוליברי מלקחיים ומספריים ווסטקוט משמשים לחתוך את איריס הקדמי circumferentially לגוף ריסי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גרעין העדשה מוסר עם מלקחיים קוליברי 0.12 או 15 ° להב (supersharp) לבין קליפת המוח ואת הקפסולה עם מלקחיים. </li></ol> 2. Core הזגוגיות שאיפה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחט מד 23 על מזרק 5 סמ&quot;ק מוכנס לתוך אמצע זגוגי (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כ 1 מ&quot;ל או יותר של הליבה הזגוגית היא aspirated בעדינות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדגם ממוקם אז צינור microfuge ולאחר מכן לתוך חנקן נוזלי. </li></ol> 3. Dissection Anterior Hyaloid. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Hyaloid הקדמי נחשב טבעת שקופה למחצה על ידי התאמת האור מן האירוע אור צוואר אווז מיקרוסקופ. השאיפה הקודם של הליבה זגוגי המפריד בין hyaloid הקדמי של מבנים אחרים לצורך זיהוי קל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גיליון של רקמה אלסטית הוא שלף בזהירות מהגוף ריסי עם קוליברי או מלקחיים ההלבשה לגזור במספריים Vannas. תמרון זה חוזר על עצמו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדגם ממוקם אז צינור microfuge ולאחר מכן לתוך חנקן נוזלי. </li></ol> 4. מאגר הזגוגיות Dissection. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים 0.12 לייצב את כוס העין, מספריים ווסטקוט משמשים &quot;פרח&quot; את העין על ידי ובסך הכל ארבעה ברווחים שווים מתח להקלה על קיצוצים מהגוף ריסי לקראת ראש עצב הראייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Plicata Pars גוף ריסי (איור 2) יוסר כל אחד הרביעים באמצעות מספריים ווסטקוט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבסיס זגוגי נתפסת אז משני צדי serrata אורה עם מלקחיים על פלאנה Pars לבין הרשתית (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המתיחה רציף על בסיס זגוגי מוחל עם מלקחיים. חיתוך סדרתית עם ווסטקוט מספריים תמציות רקמה שקופה למחצה עם מראה &quot;מחרוזת פנינים&quot;, כפי שהוא נכרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדגם ממוקם אז צינור microfuge ולאחר מכן לתוך חנקן נוזלי. </li></ol> 5. Cortex הזגוגיות הסרת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלאנה Pars הוא נכרת מכל אחד הרביעים במספריים ווסטקוט ידי חיתוך את העלון כ 3 מ&quot;מ אחורית של serrata אורה (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בין עלונים רקמות, קליפת זגוגי הוא מדמיין כסרט שקוף למחצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרט אלסטי נתפסת גם עם 0.12 מלקחיים או המוחזקים על ידי דבקות ספוג Weck-cel כירורגי. קליפת המוח היא זגוגי אז התרחקה מן הרשתית נכרת עם ווסטקוט מספריים (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדגם ממוקם צינור microfuge ולאחר מכן לתוך חנקן נוזלי. כל הדגימות נשמרות ב -80 ° C עד מנוצלים לניסויים. </li></ol> 6. נציג תוצאות דגימות רקמה יכול להיות מעובד על ידי מגוון של שיטות ניסויים ספציפיים. במקרה שלנו, דגימות נשלחו לניתוח חלבונים על ידי SDS-PAGE (איור 3). <img src="/files/ftp_upload/2455/2455fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. חתך מבט של העין האנושית המתארות substructures שונים של הגוף הזגוגי. הזגוגית הקדמית ביותר היא שכבה collagenous דק הנקרא hyaloid הקדמי. ליבת זגוגי כוללת את כל האזור המרכזי של הגוף הזגוגי. חלק זה של הזגוגית היא מימית יותר בניגוד לבסיס זגוגי, שהוא צמיג מספיק כדי להיתפס על ידי מלקחיים, והוא מחובר היטב לגוף הרשתית ריסי הבסיס. הקפת הליבה הזגוגית היא מעטפת collagenous דק מאוד הנקרא קליפת זגוגי. <img src="/files/ftp_upload/2455/2455fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2. האנטומיה בסיס הזגוגיות. בסיס מסד הזגוגית היא שקופה למחצה של הגוף הזגוגי ממוקם לאורך serrata אורה (חצים לבנים), המהווה את קו הגבול המפריד בין הגוף לבין הרשתית ריסי. הגבול הקדמי של הבסיס זגוגי משתרע על פני פלאנה Pars (קו לבן) של גוף ריסי. הגבול האחורי של הבסיס זגוגי מרחיב 2-3 מ&quot;מ האחורי של serrata אורה (מקף לבן). כדי לבסס את הבלו זגוגי, מלקחיים המשמשים לתפוס את רקמות למשוך אותו מהגוף הרשתית ריסי הבסיס. מוגבה פעם, מספריים ווסטקוט משמשים לחתוך לאורך בסיס. <img src="/files/ftp_upload/2455/2455fig3.jpg" alt="איור 3" /> איור 3. אחת ממדי SDS-PAGE של אלמנטים גוף הזגוגיות. ריכוזי חלבון סך hyaloid הקדמי, בסיס זגוגי, ויטהליבה reous, ואת קליפת זגוגי היו 11.24, 20.1, 16.61, 14.24 מ&quot;ג / מ&quot;ל, בהתאמה. ג&#39;ל אלקטרופורזה בוצע ב kV 200 במשך 45 דקות, מוכתם פלמינגו (Bio-Rad), ו דמיינו באמצעות הדמיה VersaDoc המערכת (Bio-Rad). פרופילים של רקמות שונות להראות כמה להקות דומות, המציין או משומר או לחצות מזהם חלבונים, כמו גם להקות ייחודי (כוכבית), המעיד על חלבונים מקומי דיפרנציאלי.

<ol>
	<li>Bishop, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+macromolecules+and+supramolecular+organisation+of+the+vitreous+gel.">Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel.</a> Prog Retin Eye Res. 19, 323-344 (2000).</li><li>Sebag, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+biology+of+pharmacologic+vitreolysis.">Molecular biology of pharmacologic vitreolysis.</a> Trans Am Ophthalmol Soc. 103, 473-494 (2005).</li><li>Yoshimura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+analysis+of+inflammatory+immune+mediators+in+vitreoretinal+diseases.">Comprehensive analysis of inflammatory immune mediators in vitreoretinal diseases.</a> PLoS One. 4, e8158-e8158 (2009).</li><li>Gao, B. B., Chen, X., Timothy, N., Aiello, L. P., Feener, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+vitreous+proteome+in+diabetes+without+diabetic+retinopathy+and+diabetes+with+proliferative+diabetic+retinopathy.">Characterization of the vitreous proteome in diabetes without diabetic retinopathy and diabetes with proliferative diabetic retinopathy.</a> J Proteome Res. 7, 2516-2525 (2008).</li><li>Izuta, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+SOD+and+VEGF+are+increased+in+vitreous+bodies+from+proliferative+diabetic+retinopathy+patients.">Extracellular SOD and VEGF are increased in vitreous bodies from proliferative diabetic retinopathy patients.</a> Mol Vis. 15, 2663-2672 (2009).</li><li>Azimzadeh, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formalin-fixed+paraffin-embedded+(FFPE)+proteome+analysis+using+gel-free+and+gel-based+proteomics.">Formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) proteome analysis using gel-free and gel-based proteomics.</a> J Proteome Res. 9, 4710-4720 (2010).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

הגוף הזגוגי הוא ג&#39;ל שקוף למחצה, אשר ההרכב המולקולרי הוא הבין היטב, במיוחד ברמה של substructures שלה: הבסיס זגוגי, הליבה, קליפה, ו hyaloid הקדמי. ליבת זגוגי מכיל collagens השנייה, החמישי, התשיעי, XI, יחד עם כונדרואיטין סולפט proteoglycans, proteoglycans heparan סולפט ו hyaluronan. 1,2 סמנים חלבון הליבה זגוגי נקשרו מחלות כגון רטינופתיה סוכרתית. 3-5 איך חלבונים אלה באים לידי ביטוי באופן דיפרנציאלי בכל substructures, ובמקרים רבים את זהותם חלבון מסוים, אינם ידועים. פרטים אלה עשויים לתת תובנה למקורו של חלבונים הקשורים למחלות vitreoretinal ספציפיים לעזור בעתיד טיפולים היעד. למרות שלאחר אופטימלית מורטם מרווח לנתיחה רקמות טרם נקבע, פירוק חלבונים עלול להשפיע הניסויים במורד הזרם. לדוגמה, אימונוהיסטוכימיה מושפע ב 12 שעות שלאחר המוות בעיניים וכמה פעילות אנזים מסוים עשוי לרדת תוך מספר שעות (תצפית לא פורסם). כל הרקמות במחקר זה נאספו בין 2 ל 8 שעות של מוות ללא שינויים משמעותיים ביטוי חלבון או התאמה analsyis proteomics. חנקן נוזלי מקפיא שיטת שימור נבחר על קיבעון על מנת למנוע שינויים קטנים במבנה החלבון נגרם על ידי מקבע לחצות קישור, אשר הודגמה ברקמות אחרות באמצעות LC-MS/MS. 6 מחקרים proteomic יהיה תלוי ביכולת במדויק לנתח את תאים שונים של הזגוגית, כפי שמודגם בניסוי הווידאו הזאת. יש לנו תוקף את טכניקת הניתוח באמצעות 1-ממדי SDS-PAGE. כאשר התוצאות שלנו מראים, יש ביטוי דיפרנציאלי חלבונים substructures הגוף השונים זגוגי. זיהוי החלבונים האלה יספקו הבנה מפורטת יותר של מידור זגוגי.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> 0.12 מלקחיים </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1502 </td></tr><tr><td> 5-cc מזרק </td><td> בקטון דיקינסון, </td><td> 309603 </td></tr><tr><td> מלקחיים ההלבשה ישר עם Serrations </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1400 </td></tr><tr><td> 23 מחט מד </td><td> בקטון דיקינסון, </td><td> 305145 </td></tr><tr><td> קוליברי מלקחיים </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> 2 / 132 </td></tr><tr><td> Castroviejo מספריים הקרנית בזווית </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E3223 </td></tr><tr><td> Vannas מעוקל Capsulotomy מספריים </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E3387 </td></tr><tr><td> Weck-cel כירורגית חניתות </td><td> מדטרוניק </td><td> 0008680 </td></tr><tr><td> ווסטקוט מספריים Tenotomy מעוקל </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E3320 </td></tr></tbody></table>

dissection of human vitreous body elements for proteomic analysis

זגוגי הוא ברור אופטית, תאי מטריקס collagenous הממלא את פנים העין overlies הרשתית. 1,2 אינטראקציות בין חריגה substructures הזגוגית לבין הרשתית ביסוד vitreoretinal מחלות שונות, כולל דמעה התנתקות הרשתית, כווץ מקולרי, חור מקולרי, גיל ניוון מקולרי הקשור, המתיחה vitreomacular, vitreoretinopathy שגשוג, רטינופתיה סוכרתית שגשוג, ו vitreoretinopathies בירושה. 1,2 ההרכב המולקולרי של substructures זגוגי אינו ידוע. מאז הגוף הזגוגי הוא שקוף עם גישה כירורגית מוגבל, זה כבר קשה ללמוד substructures שלה ברמה המולקולרית. פיתחנו שיטה להפריד ולשמר את הרקמות הללו לניתוח proteomic וביוכימיים. הטכניקה לנתיחה בסרטון זה ניסיוני מראה כיצד לבודד בסיס זגוגי, hyaloid הקדמי, הליבה זגוגי, ואת קליפת זגוגי מהעיניים שלאחר המוות האנושי. אחת ממדי SDS-PAGE מנתח של כל רכיב זגוגי הראו כי טכניקת לנתיחה שלנו הביא ארבעה פרופילים חלבון ייחודי המתאים מסד כל הגוף הזגוגי האדם. זיהוי של חלבונים מידור דיפרנציאלי יגלה מולקולות המועמד שבבסיס מחלות vitreoretinal שונים.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis at JoVE.com

Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis

וידאו זה מראה טכניקה יעילה עבור מבדל ו בניתוח שונות שקוף למחצה מבנים בגוף האדם זגוגי בעיניים פוסט מורטם.

Dissection של גוף האדם אלמנטים הזגוגיות לניתוח proteomic

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions ...

dissection-of-human-vitreous-body-elements-for-proteomic-analysis

Research

JoVE Journal

Medicine

31.8K Views.  University of Iowa. וידאו זה מראה טכניקה יעילה עבור מבדל ו בניתוח שונות שקוף למחצה מבנים בגוף האדם זגוגי בעיניים פוסט מורטם.

Video: Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis

Dissection of Human Retina and RPE-Choroid for Proteomic Analysis

The human retina is composed of the sensory neuroretina and the underlying retinal pigmented epithelium (RPE), which is firmly complexed to the vascular choroid layer. Different regions of the retina are anatomically and molecularly distinct, facilitating unique functions and demonstrating differential susceptibility to disease. Proteomic analysis of each of these regions and layers can provide vital insights into the molecular process of many diseases, including Age-Related Macular Degeneration (AMD), diabetes mellitus, and glaucoma. However, separation of retinal regions and layers is essential before quantitative proteomic analysis can be accomplished. Here, we describe a method for dissection and collection of the foveal, macular, and peripheral retinal regions and underlying RPE-choroid complex, involving regional punch biopsies and manual removal of tissue layers from a human eye.One-dimensional SDS-PAGE as well as downstream proteomic analysis, such as liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS), can be used to identify proteins in each dissected retinal layer, revealing molecular biomarkers for retinal disease.

The human retina is composed of functionally and molecularly distinct regions, including the fovea, macula, and peripheral retina. Here, we describe a method using punch biopsies and manual removal of tissue layers from a human eye to dissect and collect these distinct retinal regions for downstream proteomic analysis.

דיסקציה של הרשתית האנושית ואת RPE-Choroid לניתוח פרוטיאומיה מבנית

The human retina is composed of the sensory neuroretina and the underlying retinal pigmented epithelium (RPE), which is firmly complexed to the vascular ...

Biochemistry

The Gateway to the Brain: Dissecting the Primate Eye

The visual system in humans is considered the gateway to the world and plays a principal role in the plethora of sensory, perceptual and cognitive processes. It is therefore not surprising that quality of vision is tied to quality of life . Despite widespread clinical and basic research surrounding the causes of visual disorders, many forms of visual impairments, such as retinitis pigmentosa and macular degeneration, lack effective treatments. Non-human primates have the closest general features of eye development to that of humans. Not only do they have a similar vascular anatomy, but amongst other mammals, primates have the unique characteristic of having a region in the temporal retina specialized for high visual acuity, the fovea1. Here we describe a general technique for dissecting the primate retina to provide tissue for retinal histology, immunohistochemistry, laser capture microdissection, as well as light and electron microscopy. With the extended use of the non-human primate as a translational model, our hope is that improved understanding of the retina will provide insights into effective approaches towards attenuating or reversing the negative impact of visual disorders on the quality of life of affected individuals.

The non-human primate is an important translational species for our understanding of development and aging. The anatomical organization of the primate retina may provide important insights into normal and pathological conditions in humans.

השער המוח: בניתוח עיניים הפרימאטים

The visual system in humans is considered the  gateway  to the world and plays a principal role in the plethora of sensory, perceptual and cognitive ...

Biology

אבחון לימפומה זגוגית באמצעות DNA ללא תאים

Cell-Free DNA Extraction of Vitreous and Aqueous Humor Specimens for Diagnosis and Monitoring of Vitreoretinal Lymphoma

Vitreoretinal lymphoma (VRL) represents an aggressive lymphoma, often categorized as primary central nervous system diffuse large B-cell lymphoma. To diagnose VRL, specimens such as vitreous humor and, more recently, aqueous humor are collected. Diagnostic testing for VRL on these specimens includes cytology, flow cytometry, and molecular testing. However, both cytopathology and flow cytometry, along with molecular testing using cellular DNA, necessitate intact whole cells. The challenge lies in the fact that vitreous and aqueous humor typically have low cellularity, and many cells get destroyed during collection, storage, and processing. Moreover, these specimens pose additional difficulties for molecular testing due to the high viscosity of vitreous humor and the low volume of both vitreous and aqueous humor. This study proposes a method for extracting cell-free DNA from vitreous and aqueous specimens. This approach complements the extraction of cellular DNA or allows the cellular component of these specimens to be utilized for other diagnostic methods, including cytology and flow cytometry.

מחבר זרקור: קידום אבחון VRL באמצעות מיצוי DNA ללא תאים מהומור הזגוגית 

A procedure to extract cell-free DNA from vitreous and aqueous humor to perform molecular studies for diagnosing vitreoretinal lymphoma is established here. The method offers the ability to concurrently extract DNA from the cellular component of the sample or to reserve it for ancillary testing.

מיצוי DNA ללא תאים של דגימות הומור זגוגיות ומימיות לאבחון וניטור של לימפומה זגוגית

Vitreoretinal lymphoma (VRL) represents an aggressive lymphoma, often categorized as primary central nervous system diffuse large B-cell lymphoma. To ...

Cancer Research

Vibratome Sectioning Mouse Retina to Prepare Photoreceptor Cultures

The retina is a part of the central nervous system that has organized architecture, with neurons in layers from the photoreceptors, both rods and cones in contact with the retinal pigmented epithelium in the most distant part on the retina considering the direction of light, and the ganglion cells in the most proximal distance. This architecture allows the isolation of the photoreceptor layer by vibratome sectioning. The dissected neural retina of a mouse aged 8 days is flat-embedded in 4% gelatin on top of a slice of 20% gelatin photoreceptor layer facing down. Using a vibratome and a double edged razor blade, the 100 &#181;m thick inner retina is sectioned. This section contains the ganglion cells and the inner layer with notably the bipolar cells. An intermediary section of 15 &#181;m is discarded before 200 &#181;m of the outer retina containing the photoreceptors is recovered. The gelatin is removed by heating at 37 &#176;C. Pieces of outer layer are incubated in 500 &#181;l of Ringer&#39;s solution with 2 units of activated papain for 20 min at 37 &#176;C. The reaction is stopped by adding 500 &#181;l 10% fetal calf serum (FCS) in Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM), then 25 units of DNAse I is added before centrifugation at RT, washed several times to remove serum and the cells are resuspended in 500 &#181;l of DMEM and seeded at 1 x 105 cells/cm2. The cells are grown to 5 days in vitro and their viability scored using live/dead assay. The purity of the culture is first determined by microscopic observation during the experiment. The purity is then validated by seeding and fixing cells on a histological slide and analyzing using a rabbit polyclonal anti-SAG, a photoreceptor marker and mouse monoclonal anti-RHO, a rod photoreceptor specific marker. Alternatively, the photoreceptor layer (97% rods) can be used for gene or protein expression analysis and for transplantation.

Neural retina of a mouse aged 8 days is on top of a 4% gelatin block. After isolation of the photoreceptor layer (200 &#181;m) by vibratome, the photoreceptors are seeded after mechanical and enzymatic dissociation for culture. The photoreceptor layer can be used for molecular, biochemical analyses or transplantation.

Vibratome חתך רשתית העכבר להכין תרבויות קולטי אור

The retina is a part of the central nervous system that has organized architecture, with neurons in layers from the photoreceptors, both rods and cones in ...

Neuroscience

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous studies have shown the results of such dissections, the detailed steps have not been described, precluding researchers outside the field from replicating their methods. Other studies harvest vitreous either through aspiration, which does not maintain the vitreous structure anatomy, or through partial dissection, which only isolates the vitreous core. The proposed method isolates the whole vitreous body, with the vitreous core and cortex intact, while maintaining vitreous anatomy and structural integrity. In this method, a full thickness scleral flap in an enucleated porcine eye is first created and through this, the choroid tissue can be separated from the sclera. The scleral flap is then expanded and the choroid is completely separated from the sclera. Finally the choroid-retina tissue is peeled off the vitreous to leave an isolated intact vitreous body. The proposed vitreous dissection technique can be used to study physical properties of the vitreous humor. In particular, this method has significance for experimental studies involving drug delivery, vitreo-retinal oxygen transport, and intraocular convection.

The goal of this protocol is to show an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes.

כל הזגוגיות ההומור Dissection לניתוח Vitreodynamic

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses

While the mouse retina has emerged as an important genetic model for inherited retinal disease, the mouse vitreous remains to be explored. The vitreous is a highly aqueous extracellular matrix overlying the retina where intraocular as well as extraocular proteins accumulate during disease.1-3 Abnormal interactions between vitreous and retina underlie several diseases such as retinal detachment, proliferative diabetic retinopathy, uveitis, and proliferative vitreoretinopathy.1,4 The relative mouse vitreous volume is significantly smaller than the human vitreous (Figure 1), since the mouse lens occupies nearly 75% of its eye.5 This has made biochemical studies of mouse vitreous challenging. In this video article, we present a technique to dissect and isolate the mouse vitreous from the retina, which will allow use of transgenic mouse models to more clearly define the role of this extracellular matrix in the development of vitreoretinal diseases.

The dissection technique illustrates evisceration of the vitreous, retina, and lens from the mouse eye, separation by centrifugation, and characterization with protein assays.

הוצאת הקרביים של הזגוגיות עכבר רשתית עבור ניתוח proteomic

While the mouse retina has emerged as an important genetic model for inherited retinal disease, the mouse vitreous remains to be explored. The vitreous is ...

Microsurgical Dissection and Tissue Clearing for High Resolution Intact Whole Retina and Vitreous Imaging

Neuronal and vascular structures of the retina in physiologic and pathologic conditions can be better visualized and characterized by using intact whole retina imaging techniques compared to conventional retinal flat mount preparations and sections. However, immunofluorescent imaging of intact whole retina is hindered by the opaque coatings of the eyeball, i.e., sclera, choroid, and retinal pigment epithelium (RPE) and the light scattering properties of retinal layers that prevent full thickness high resolution optical imaging. Chemical bleaching of the pigmented layers and tissue clearing protocols have been described to address these obstacles; however, currently described methods are not suitable for imaging endogenous fluorescent molecules such as green fluorescent protein (GFP) in intact whole retina. Other approaches bypassed this limitation by surgical removal of pigmented layers and the anterior segment of the eyeball allowing intact eye imaging, though the peripheral retina and hyaloid structures were disrupted. Presented here is an intact whole retina and vitreous immunofluorescent imaging protocol that combines surgical dissection of the sclera/choroid/retina pigment epithelium (RPE) layers with a modified tissue clearing method and light sheet fluorescent microscopy (LSFM). The new approach offers an unprecedented view of&#160;unperturbed vascular and neuronal elements of the retina as well as the vitreous and hyaloid vascular system in pathologic conditions.

Presented here is a protocol for intact whole retina imaging in which the outer opaque/pigmented layers of the eyeball are surgically removed, and optical clearing is applied to render retina transparent enabling the visualization of the peripheral retina and hyaloid vasculature in intact retina using light sheet fluorescent microscopy.

Neuronal and vascular structures of the retina in physiologic and pathologic conditions can be better visualized and characterized by using intact whole ...

Biobanking of Human Aqueous and Vitreous Liquid Biopsies for Molecular Analyses

A critical challenge in translational research is establishing a viable and efficient interface between patient care in the operating room (OR) and the research laboratory. Here, we developed a protocol for acquiring high-quality liquid biopsies for molecular analyses from the aqueous humor and the vitreous from patients undergoing eye surgery. In this workflow, a Mobile Operating Room Lab Interface (MORLI) cart equipped with a computer, a barcode scanner, and lab instruments, including onboard cold storage, is used to obtain and archive human biological samples. A web-based data privacy-compliant database enables annotating each sample over its lifetime, and a cartesian coordinate system allows tracking each barcoded specimen in storage, enabling quick and accurate retrieval of samples for downstream analyses. Molecular characterization of human tissue samples not only serves as a diagnostic tool (e.g., to distinguish between infectious endophthalmitis and other non-infectious intraocular inflammation) but also represents an important component of translational research, allowing the identification of new drug targets, development of new diagnostic tools, and personalized therapeutics.

This protocol presents an integrated biorepository platform for the standardized collection, annotation, and biobanking of high-quality human aqueous humor and vitreous liquid biopsies for molecular downstream analyses, including proteomics, metabolomics, and glycomics.

ביובנק של ביופסיות נוזליות מימיות וזגוגיות אנושיות לאנליזות מולקולריות

A critical challenge in translational research is establishing a viable and efficient interface between patient care in the operating room (OR) and the ...

Dissection של גוף האדם אלמנטים הזגוגיות לניתוח proteomic

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

דיסקציה של הרשתית האנושית ואת RPE-Choroid לניתוח פרוטיאומיה מבנית

השער המוח: בניתוח עיניים הפרימאטים

מיצוי DNA ללא תאים של דגימות הומור זגוגיות ומימיות לאבחון וניטור של לימפומה זגוגית

מיצוי DNA ללא תאים של דגימות הומור זגוגיות ומימיות לאבחון וניטור של לימפומה זגוגית

מיצוי DNA ללא תאים של דגימות הומור זגוגיות ומימיות לאבחון וניטור של לימפומה זגוגית

Vibratome חתך רשתית העכבר להכין תרבויות קולטי אור

כל הזגוגיות ההומור Dissection לניתוח Vitreodynamic

הוצאת הקרביים של הזגוגיות עכבר רשתית עבור ניתוח proteomic

Microsurgical Dissection and Tissue Clearing for High Resolution Intact Whole Retina and Vitreous Imaging

ביובנק של ביופסיות נוזליות מימיות וזגוגיות אנושיות לאנליזות מולקולריות