תמיכה כספית DFG (פרויקטים SM 82 / 13-1) היא הודתה בהכרת תודה.

1. הכנת Amidated פקטין Stock פתרון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים 20 גרם פקטין amidated עם 980 מים גרם (2.0% WT). מידת amidation הוא 25% WT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Homogenize את הפתרון עם בוחש במהירות גבוהה (10,000 סל&quot;ד) במשך 2 דקות כדי להשיג פתרון צמיג הומוגנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד pH באמצעות רצועות pH או מטר pH. אם ה- pH נמוך מ 6.5, לכיל עם 0.5 M NaOH לנטרל הפתרון (ל- pH 7.0). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת סידן פחמתי על יחס של 0.1825 גרם לגרם של פקטין amidated יבש (q = 1). &quot;Q&quot; מציין את מידת crosslinking. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור 1 ק&quot;ג 2.0% WT פתרון פקטין amidated, להוסיף סידן פחמתי 3.65 g (q = 1) 7 לכל 20.0 גרם פקטין יבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור crosslinking יותר, להוסיף סידן פחמתי 0.3650 גרם לגרם של פקטין amidated יבש (q = 2). </li></ol> הפקת 2. הידרוג <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Homogenize התערובת קרבונט פקטין / סידן amidated באמצעות homogenizer במהירות גבוהה (10,000 סל&quot;ד) להשיגפיזור הומוגני לבן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעביר את ההשעיה לתוך תבניות פוליפרופילן פתוחות או זכוכית צלחות פטרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את התבניות ב החיטוי בלחץ גבוה. חותם את החיטוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחצים על החיטוי עם CO גזי 2 עד 5 מגפ&quot;ס ב RT. עיין ואח Gurikov. 7 לקבלת פרטים נוספים. לשמור על לחץ למשך 24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לְהַפִיג לַחַץ החיטוי 0.2 מגפ&quot;ס / min. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את החיטוי ולהסיר את התבניות. הסר את הידרוג מתבניות על ידי סיבוב מעליהם. במידת הצורך, להשתמש במרית. </li></ol> 3. נוהל המרת מרכך <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן 10 גרם של 10:90 (w / w) אתנול / מי תערובת לגרם של הידרוג&#39;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את הידרוג ב 10:90 (w / w) תערובת אתנול / מים במשך 12 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך בתהליך זה עם ריכוזי אתנול הגדלה, כלומר, מן 10:90 (w / w) תערובת אתנול / מי 30:70 (w / w) תערובת אתנול / מים. לאחר 12 שעות, להעביר עד 500:50 (w / w) תערובת אתנול / מים, ואז 70:30 (12 שעות), אז 90:10 (12 שעות) ולאחר מכן ל -100% פתרון אתנול (12 שעות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משרה את הג&#39;ל נוספת אתנול טהור, כך הריכוז הסופי בתוך הג&#39;ל הוא יותר מ -98% (w / w). למדוד את הריכוז באמצעות מד הצפיפות. Alcogel מוכן כעת ייבוש CO 2 סופר קריטי. </li></ol> הפקה 4. Aerogels ידי סופר קריטי CO 2 ייבוש <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את הדגימות אותו החיטוי בלחץ גבוה משמש להכנת הידרוג&#39;ל (ראה שלב 2.3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא את החיטוי עם אתנול נוסף (2-10% מנפח החיטוי) על מנת למנוע אידוי ממס מוקדמת מן הג&#39;לי. טבילה מלאה של הג&#39;ל הממס אינה נדרשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותם את החיטוי. הפעל את חימום החיטוי. הגדר את טמפרטורת עבודת חיטוי 323 ק לחצים על החיטוי עם פחמן דו חמצני עד 12 מגפ&quot;ס באמצעות מדחס או משאבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעת לעת להחליף את 2 COבתוך החיטוי 10,11 עם CO 2 טריים שמירה קבוע הלחץ. 6-7 כרכים מגורים נדרשים על פני תקופה של 6 שעות. עיין ואח Gurikov. 7 לקבלת פרטים נוספים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לְהַפִיג לַחַץ החיטוי 0.2 מגפ&quot;ס / min. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את החיטוי לאסוף את airgel. אחסן את airgel בתוך exicator או במיכל אטום. </li></ol>

<ol>
	<li>Kistler, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coherent+expanded-aerogels.">Coherent expanded-aerogels.</a> J. Phys. Chem. 36 (1), 52-64 (1932).</li><li>Aegerter, M. A., Leventis, N., Koebel, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Aerogels Handbook. , (2011).</li><li>Raman, S. P., Gurikov, P., Smirnova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hybrid+alginate+based+aerogels+by+carbon+dioxide+induced+gelation:+Novel+technique+for+multiple+applications.">Hybrid alginate based aerogels by carbon dioxide induced gelation: Novel technique for multiple applications.</a> J. Supercrit. Fluids. 106, 23-33 (2015).</li><li>Draget, K. I., Skj&#229;k-Br&#230;k, G., Smidsr&#248;d, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alginate+based+new+materials.">Alginate based new materials.</a> Int. J. Biol. Macromol. 21 (1), 47-55 (1997).</li><li>Garc&#237;a-Gonz&#225;lez, C. A., Alnaief, M., Smirnova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polysaccharide-based+aerogels-Promising+biodegradable+carriers+for+drug+delivery+systems.">Polysaccharide-based aerogels-Promising biodegradable carriers for drug delivery systems.</a> Carbohydr. Polym. 86 (4), 1425-1438 (2011).</li><li>Alnaief, M., Alzaitoun, M. A., Garc&#237;a-Gonz&#225;lez, C. A., Smirnova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+biodegradable+nanoporous+microspherical+aerogel+based+on+alginate.">Preparation of biodegradable nanoporous microspherical aerogel based on alginate.</a> Carbohydr. Polym. 84 (3), 1011-1018 (2011).</li><li>Gurikov, P., Raman, S. P., Weinrich, D., Fricke, M., Smirnova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+approach+to+alginate+aerogels:+carbon+dioxide+induced+gelation.">A novel approach to alginate aerogels: carbon dioxide induced gelation.</a> RSC Adv. 5, 7812-7818 (2015).</li><li>Meyssami, B., Balaban, M. O., Teixeira, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+pH+in+model+systems+pressurized+with+carbon+dioxide.">Prediction of pH in model systems pressurized with carbon dioxide.</a> Biotechnol. Prog. 8 (2), 149-154 (1992).</li><li>Subrahmanyam, R., Gurikov, P., Dieringer, P., Sun, M., Smirnova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+Road+to+Biopolymer+Aerogels-Dealing+with+the+Solvent.">On the Road to Biopolymer Aerogels-Dealing with the Solvent.</a> Gels. 1 (2), 291-313 (2015).</li><li>Garc&#237;a-Gonz&#225;lez, C. A., Camino-Rey, M. C., Alnaief, M., Zetzl, C., Smirnova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supercritical+drying+of+aerogels+using+CO2:+Effect+of+extraction+time+on+the+end+material+textural+properties.">Supercritical drying of aerogels using CO2: Effect of extraction time on the end material textural properties.</a> J. Supercrit. Fluids. 66, 297-306 (2012).</li><li>&#214;zbak&#305;r, Y., Erkey, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+and+theoretical+investigation+of+supercritical+drying+of+silica+alcogels.">Experimental and theoretical investigation of supercritical drying of silica alcogels.</a> J. Supercrit. Fluids. 98, 153-166 (2015).</li><li>Rudaz, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aeropectin:+Fully+Biomass-Based+Mechanically+Strong+and+Thermal+Superinsulating+Aerogel.">Aeropectin: Fully Biomass-Based Mechanically Strong and Thermal Superinsulating Aerogel.</a> Biomacromolecules. 15 (6), 2188-2195 (2014).</li><li>Quraishi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+non-cytotoxic+alginate-lignin+hybrid+aerogels+as+scaffolds+for+tissue+engineering.">Novel non-cytotoxic alginate-lignin hybrid aerogels as scaffolds for tissue engineering.</a> J. Supercrit. Fluids. 105, 1-8 (2015).</li><li>Martins, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+macroporous+alginate-based+aerogels+for+biomedical+applications.">Preparation of macroporous alginate-based aerogels for biomedical applications.</a> J. Supercrit. Fluids. 106, 152-159 (2015).</li><li>Davidovich-Pinhas, M., Bianco-Peled, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+analysis+of+alginate+swelling.">A quantitative analysis of alginate swelling.</a> Carbohydr. Polym. 79 (4), 1020-1027 (2010).</li><li>Mallepally, R. R., Bernard, I., Marin, M. A., Ward, K. R., McHugh, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superabsorbent+alginate+aerogels.">Superabsorbent alginate aerogels.</a> J. Supercrit. Fluids. 79, 202-208 (2013).</li><li>Porta, G. D., Del Gaudio, P., De Cicco, F., Aquino, R. P., Reverchon, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supercritical+Drying+of+Alginate+Beads+for+the+Development+of+Aerogel+Biomaterials:+Optimization+of+Process+Parameters+and+Exchange.">Supercritical Drying of Alginate Beads for the Development of Aerogel Biomaterials: Optimization of Process Parameters and Exchange.</a> Ind. Eng. Chem. Res. 52 (34), 12003-12009 (2013).</li><li>Brown, Z. K., Fryer, P. J., Norton, I. T., Bridson, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drying+of+agar+gels+using+supercritical+carbon+dioxide.">Drying of agar gels using supercritical carbon dioxide.</a> J. Supercrit. Fluids. 54 (1), 89-95 (2010).</li><li>Betz, M., Garc&#237;a-Gonz&#225;lez, C. A., Subrahmanyam, R. P., Smirnova, I., Kulozik, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+novel+whey+protein-based+aerogels+as+drug+carriers+for+life+science+applications.">Preparation of novel whey protein-based aerogels as drug carriers for life science applications.</a> J. Supercrit. Fluids. 72, 111-119 (2012).</li><li>Antonyuk, S., Heinrich, S., Gurikov, P., Raman, S., Smirnova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+coating+and+wetting+on+the+mechanical+behaviour+of+highly+porous+cylindrical+aerogel+particles.">Influence of coating and wetting on the mechanical behaviour of highly porous cylindrical aerogel particles.</a> Powder Technol. 285, 34-43 (2015).</li></ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

באמצעות טכניקת gelation מושרה 2 CO, אחד יכול לבטל את הצורך בתחליפים כימיים (חומצה אצטית למשל או glucono-lactone דלתא (GDL)) הנדרשים גרימת crosslinking של biopolymer. תחומי השטח של aerogels פקטין amidated הם בטווחים לערכים הנעלים בספרות 5, לעומת זאת הכרכים הנקבוביים הם גבוהים בהרבה מאלה שהוצגו בספרות 5. כרכים נקבוביים גבוהים נצפו גם עבור aerogels אלגינט שהכין gelation המושרה 2 CO 7. עם זאת, זה עדיין לא אומת אם סיבת כרכים הנקבוביים גבוה זו (טווח גודל נקבובי 4-150 ננומטר) בשל טכניקת gelation או תכונה מהותית של biopolymers בעבר לא התייחס בספרות. Aerogels פקטין דווחו בספרות להחזיק superinsulating נכסים 12 ו aerogels אלגינט שהכין הטכניקה הזו גם בעלי מוליכות תרמית בטווח superinsulating3,7. לכן, aerogels פקטין amidated המיוצר על ידי טכניקה זו עשויה להיות גם בחזונו כבעל תכונות superinsulating. שיעור הירידה לחץ בסעיף פרוטוקול 2 הוא צעד חשוב בהכנת הידרוג&#39;ל. ירידת לחץ מהיר יכול להוביל macroporosity המוגברת של ג&#39;ל. ניתן ליישם תופעה זו עבור יישומים הנדסת רקמות שבו macroporosity של החומר עם קישור גומלין הוא תכונה חשובה לצמיחה ושגשוג של תאים 13,14. בנוסף, מידת crosslinking בפרוטוקול סעיף 1 ממלא תפקיד חשוב syneresis ורכוש נפיחות של הידרוג פקטין amidated. זה דומה הידרוג אלגינט שהתנהגותו נפיחות מושפעת ריכוז crosslinker כמו גם 15. ובכך aerogels שנעשה על ידי פקטין amidated יכול גם להיות מכוון להחזיק ברכוש superabsorbent דומה לאלו שדווחו עבור aerogels אלגינט 16. &lt;p class = &quot;jove_content&quot;&gt; באמצעות gelation CO 2 מושרה בהתחשב פקטין amidated (או אלגינט) כמערכת העיקרית, גיוון נוסף ניתן לשלב לתוך aerogels ידי החדרת צלב שונה המקשר סוכנים ושילובי biopolymer. כמה קרבונטים מתכת (למשל, אבץ, ניקל, קובלט, נחושת, סטרונציום, בריום) יוכל לשמש עבור צלב מקשר 3, שם ניתן לשחרר קטיונים ידי pH הורידה בהמדים מהימיים עם CO 2 בלחץ (3-5 מגפ&quot;ס). עם זאת, מלחים מסיסים של חלק קטיונים אלה לא יכולים ליצור תפוצות יציבות לריכוזי biopolymer נמוכים והוא יכול להתיישב בחלק התחתון שמוביל ג&#39;לים הומוגניות. זוהי בעיה כללית עם שיטת gelation במסגרות הפנימית כולל gelation המושרה 2 CO 3 ובכך, את השימושיות של הטכניקה עבור יישום יש להעריך על מקרה לגופו. תערובות שונות שהוכנו באמצעות ביו מסיס במיםפולימרים כגון עמילן, carrageenan, מתיל תאי מתיל carboxy, מסטיק gellan, ליגנין, ג&#39;לטין ואחרים; פולימרים סינתטיים מים מסיסים כגון פוליאתילן גליקול (PEG), אלכוהול פוליוויניל (PVA), Pluronic P-123 ואחרים; ומבשרים אורגניים מסיסים במים כמו נתרן סיליקט ניתן לערבב גם עם פקטין amidated לייצר aerogels ההיברידית דומה אלגינט 2 עם תכונות מתכוננות. כמו ייבוש CO 2 סופר קריטי (scCO 2 ייבוש) היא צעד מובהק ב airgel הייצור, כל שילוב של צעדים מראש עיבוד כגון חילופי ממס וייבוש באמצעות CO 2 17,18 או gelation, חילופי ממס וייבוש באמצעות CO 2 7 יכול לספק יתרון עיבוד ברור. היתרון הוא שנחזה תהליך סיר משולב אחד: איפה תפוצות biopolymer ניתן להמיר aerogels biopolymer באמצעות CO 2 כמדיום העיבוד העיקרי חיטוי יחיד. ליישומי תרופות מסוימים, אפשר גם לדמיין מבצע צעד רביעי: gelation, חילופי ממס, ייבוש סופר קריטי בתהליך 5,19 טעינת רכיב פעיל חיטוי יחיד באמצעות CO 2 כמדיום העיבוד. טיפול פוסט כגון ציפוי מגן של aerogels טעון תרופה במקרים מסוימים יש צורך לשחרור תרופות ממוקד 20. לסיכום, בעבודה הנוכחית מדגימה את השימוש CO בלחץ 2 עבור gelation של מערכות פקטין מבוססת amidated. בנוסף, השימוש CO בלחץ 2 כמדיום משותף מבשר מרת מוצר עבור יישומי יעד בתוך חיטוי יחיד שחזה.

Aerogels הוא קבוצה של חומרים נקבוביים שיכול להיות מוכנה תוך שימוש במגוון של מבשרים החל אורגני (כגון סיליקה, טיטניה, zirconia ואחרים), סינטטיים (כגון פורמלדהיד resorcinol, פוליאוריטן ועוד) או biopolymers (סוכרים, חלבונים ועוד 2). מה שמבדיל אותם מן החומרים נקבוביים המקובלים הוא היכולת שלהם להחזיק בו זמנית את כל השלושה המאפיינים; כלומר שטח פנים גבוהים, צפיפות נמוכה במיוחד והפצת גודל הנקבובית mesoporous (כלומר, גודל נקבובי מן 2-50 ננומטר). עם מאפיינים כאמור, aerogels מיושמים באופן נרחב בתחומי בידוד, ביו-רפואה, קטליזה, יישומים ספיחה וספיגה, פרמצבטיקה neutraceuticals 2. אם ניקח בחשבון את האפשרויות לעיל, לייצור מערכות ג&#39;ל biopolymer וטרנספורמציה הבא שלהם aerogels פותח שפע של הזדמנויות כלפי ערך המוסף גבוה ביו מבוססחומרים. כזה מאמץ הוא נלקח במחקר זה באמצעות פקטין amidated כדוגמה. Aerogels בדרך כלל מיוצרת על ידי טכניקת הסול-ג&#39;ל. ג&#39;לי מערכות המורכבות של נוזל וממולכד מטריצה ​​וניתן שהכינו קוולנטי, יונית, pH מושרה, תרמית או קריו צלב מקשר 3. עבור מערכת ספציפית זו, אנו מנצלים crosslinking היוני; כלומר, קטיון הדו-ערכי (למשל, סידן) כדי crosslink שרשרות biopolymeric יחד. כדי לבצע crosslinking היוני לשליטה של biopolymers כגון פקטין amidated או אלגינט, אפשר לנצל את שיטת דיפוזיה או השיטה במסגרות הפנימית 4. בשיטת דיפוזיה, gelation מתרחשת בהתחלה בשכבה החיצונית ואחריו התפשטות דיפוזיה, כמו קטיונים מפוזרים מפתרון חיצוני לתוך פקטין amidated או אגל אלגינט או שכבת 4. בשיטה במסגרות הפנימית, בצורה בלתי המסיסה של crosslinker מתפזרת homogenously בתוך solutio biopolymern ו- קטיונים משתחררים על ידי ייזום 4,5,6 pH שינוי. עם זאת, שתי הטכניקות להתמודד בעיה לגבי ההומוגניות של ג&#39;ל הסופי כאשר מיוצר לוח או טופס מונוליטי. עבודה זו ממחישה את השימוש בלחץ גבוה CO 2 (5 MPA) לייצור הידרוג פקטין amidated בנייה נוספת על עבודות קודמות על ג&#39;לים אלגינט 3,7. בקיצור, הוא טכניקת gelation במסגרות פנימית אשר מנצלת CO 2 בלחץ להפחתת חומציות במקום חומצות חלשות לייצר ג&#39;לים הומוגנית. עם גידול הלחץ, מסיסות של הפחמן הדו-חמצני במים עולה מלווה הורדת ה- pH 3.0 8. זה גורם סידן פחמתי כדי solubilize, שחרור יוני סידן. יוני הסידן crosslink עם biopolymer פקטין amidated להניב הידרוג&#39;ל. ג&#39;לים הומוגנית יציב למטה לריכוזי biopolymer נמוכים מאוד (0.05% wt) יכול להיות מיוצר באמצעות טכניקה 7 זה. כפי gelatיון מתרחש בתווך מימי, חילופי ממס ממיס אורגני נדרש בשל פער miscibility במערכת 2 / מים CO. בדרך כלל כהלי משקל נמוכים מולקולריים (מתנול / אתנול / isopropanol) ו קטונים (אצטון) יכולים לשמש את תהליך החלפת הממס. עם זאת, השריה ישירה באמבט עם אתנול טהור או ממסים אורגניים אחרים מובילה הצטמקות בלתי הפיכה משמעותית. כדי למנוע קושי זה, חילופי ממס בשלבים מתבצע 5,9. כאשר הריכוז הממס בתוך הג&#39;ל מגיע&gt; 98%, הממס האורגני הוא מיובש עם הסופר הקריטי CO 2 (12 MPA) משאיר מאחוריו airgel.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Equipment&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ultraturrax homogenizer</td><td>IKA, Germany</td><td>T 25 Digital</td><td></td></tr><tr><td>Polypropylene molds</td><td>TH. Geyer, Germany</td><td>9,033,201</td><td></td></tr><tr><td>High pressure autoclave&amp;nbsp;</td><td>Ernst Haage, Germany</td><td>custom made</td><td>Setup constuction done in-house</td></tr><tr><td>Compressor</td><td>Andreas Hofer</td><td>MKZ 185-40</td><td>Setup constuction done in-house</td></tr><tr><td>Nitrogen adsorption</td><td>Quantachrome</td><td>Nova 4000e</td><td></td></tr><tr><td>Density meter</td><td>Anton Paar</td><td>DMA 4000</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Chemicals&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amidated pectin</td><td>Herbstreith and Fox, Germany</td><td>CU 025</td><td>CAS # 56645-02-4; provided by company for research purposes</td></tr><tr><td>Sodium Hydroxide</td><td>Sigma Aldrich, Germany</td><td>S8045</td><td>CAS # 1310-73-2; required only in case the pectin solution needs to be neutralized to pH 6.5-7.5</td></tr><tr><td>Calcium carbonate</td><td>Magnesia GmbH, Germany</td><td>4421 Calcium carbonat, leicht, pr&amp;auml;zipitiert, EP, E170</td><td>CAS # 471-34-1</td></tr><tr><td>Ethanol, 99.8%</td><td>Sigma Aldrich, Germany</td><td>32205</td><td>CAS # 64-17-5</td></tr><tr><td>Carbon dioxide, 99.9%</td><td>AGA Gas GmbH, Germany</td><td></td><td>CAS # 124-38-9; in-house tank available (3 ton)</td></tr><tr><td>Deionised Water</td><td></td><td></td><td>CAS # 7732-18-5;&amp;nbsp; available in-house (6.4-7.0 pH)</td></tr></tbody></table>

preparation of biopolymer aerogels using green solvents

Although the first reports on aerogels made by Kistler1 in the 1930s dealt with aerogels from both inorganic oxides (silica and others) and biopolymers (gelatin, agar, cellulose), only recently have biomasses been recognized as an abundant source of chemically diverse macromolecules for functional aerogel materials. Biopolymer aerogels (pectin, alginate, chitosan, cellulose, etc.) exhibit both specific inheritable functions of starting biopolymers and distinctive features of aerogels (80-99% porosity and specific surface up to 800 m2/g). This synergy of properties makes biopolymer aerogels promising candidates for a wide gamut of applications such as thermal insulation, tissue engineering and regenerative medicine, drug delivery systems, functional foods, catalysts, adsorbents and sensors. This work demonstrates the use of pressurized carbon dioxide (5 MPa) for the ionic cross linking of amidated pectin into hydrogels. Initially a biopolymer/salt dispersion is prepared in water. Under pressurized CO2 conditions, the pH of the biopolymer solution is lowered to 3 which releases the crosslinking cations from the salt to bind with the biopolymer yielding hydrogels. Solvent exchange to ethanol and further supercritical CO2 drying (10 - 12 MPa) yield aerogels. Obtained aerogels are ultra-porous with low density (as low as 0.02 g/cm3), high specific surface area (350 - 500 m2/g) and pore volume (3 - 7 cm3/g for pore sizes less than 150 nm).

הידרוג טיפוסי המתקבל לאחר שלב gelation עם תואר crosslinking גבוה (q = 2) (בהתאם להוראות הפרוטוקול בסעיף 2) מוצגים באיור 1. הדגימות משמאל (מדגם ו- B) הם 2 wt% ו -1% WT ג&#39;לי פקטין מתקבלים על ידי gelation מושרה CO 2. על ידי הפחתת הריכוז biopolymer (0.5% WT או נמוך), ג&#39;לים להיות שקוף (מדגם C). הפחתה נוספת בריכוז biopolymer (0.25% WT) גם תשואות הידרוג יציב (מדגם D) אבל ג &#39;ל אלו מאוד שבירים ויכול לשבור בעת הטיפול. הבועות נצפו בתוך הידרוג נוצרות במהלך הירידה לחץ כאשר פזרנו את CO 2 עוזבות את מערכת המים ג&#39;ל בשל הירידה ב- CO 2 מסיס. המאפיינים airgel פקטין amidated מוצגים בטבלה 1. Aerogels המתקבלים הם אולטרה-נקבובי עם den נמוך<html> צפיפות (נמוך כמו 0.013 גרם / ס&quot;מ 3) נמדד כיחס בין המסה של airgel ואת נפחו. שטח פן נמדד ספיחת החנקן. לקבלת aerogels פקטין, שהוא הניב שטח פנים ספציפי בין 350 - 500 m 2 / g. הנפח הנקבובי עבור גדלים נקבוביים בטווח 4-150 ננומטר נמדד על ידי המודל קלווין של מילוי נקבובי באמצעות חנקן (שיטת BJH). הנפח הנקבובי עבור aerogels פקטין amidated היה בין 3 - 7 סנטימטר 3 / g עבור גדלים נקבוביים בין 4 ל 150 ננומטר. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/54116/54116fig1.jpg" /> הידרוג פקטין באיור 1. Amidated עם תואר crosslinking גבוה (q = 2) למעלה משמאל: 2% WT (מדגם);. בפינה הימנית העליונה: 1% WT (B לדוגמא); בפינה שמאלית תחתונה: 0.5% WT (C לדוגמא); ימני תחתון: 0.25% WT (D לדוגמא). ג&#39;לים להיות שקוף עם הפחתת ריכוז biopolymer. הבועות מיוצרות במהלך ירידת לחץ 2 CO.https://www.jove.com/files/ftp_upload/54116/54116fig1large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> ריכוז פקטין [wt%] </td><td> תואר Cross-linking q </td><td> צפיפות גורפת [g / cm 3] </td><td> שטח פן ספציפי [g / m 2] </td><td> [סנטימטר 3 / g] נקבובי נפח ספציפי </td><td> גודל נקבובי הממוצע (קוטר) [nm] </td></tr><tr><td> 2.00 </td><td> 1 </td><td> 0.081 </td><td> 502 </td><td> 4.1 </td><td> 14 </td></tr><tr><td> 1.00 </td><td> 1 </td><td> 0.044 </td><td> 491 </td><td> 7.1 </td><td> 27 </td></tr><tr><td> 0.50 </td><td> 1 </td><td> 0.035 </td><td> 357 </td><td> 3.8 </td><td> 27 </td></tr><tr><td> 0.25 </td><td> 1 </tד&gt; <td> 0.013 </td><td> 335 </td><td> 4.9 </td><td> 41 </td></tr><tr><td> 2.00 </td><td> 2 </td><td> .069 </td><td> 447 </td><td> 3.1 </td><td> 13 </td></tr><tr><td> 1.00 </td><td> 2 </td><td> 0.048 </td><td> 441 </td><td> 3.6 </td><td> 26 </td></tr><tr><td> 0.50 </td><td> 2 </td><td> 0.030 </td><td> 429 </td><td> 5.8 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 0.25 </td><td> 2 </td><td> 0.017 </td><td> 347 </td><td> 5.0 </td><td> 24 </td></tr></tbody></table> טבלה 1. מאפייני aerogels פקטין amidated.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Biopolymer Aerogels Using Green Solvents at JoVE.com

Preparation of Biopolymer Aerogels Using Green Solvents

A new way for the production of biopolymer-based aerogels by carbon dioxide (CO2) induced gelation is shown. The technique utilizes pressurized carbon dioxide (5 MPa) for the production of biopolymer hydrogels and supercritical CO2 (12 MPa) to convert gels into aerogels. The only solvents needed besides CO2 are water and ethanol.

הכנת Aerogels biopolymer בעזרת ממיסים גרין

Although the first reports on aerogels made by Kistler1 in the 1930s dealt with aerogels from both inorganic oxides (silica and others) and biopolymers ...

preparation-of-biopolymer-aerogels-using-green-solvents

Research

JoVE Journal

Chemistry

17.6K Views.  Hamburg University of Technology. A new way for the production of biopolymer-based aerogels by carbon dioxide (CO2) induced gelation is shown. The technique utilizes pressurized carbon dioxide (5 MPa) for the production of biopolymer hydrogels and supercritical CO2 (12 MPa) to convert gels into aerogels. The only solvents needed besides CO2 are water and ethanol.

Video: Preparation of Biopolymer Aerogels Using Green Solvents

Preparing Silica Aerogel Monoliths via a Rapid Supercritical Extraction Method

A procedure for the fabrication of monolithic silica aerogels in eight hours or less via a rapid supercritical extraction process is described. The procedure requires 15-20 min of preparation time, during which a liquid precursor mixture is prepared and poured into wells of a metal mold that is placed between the platens of a hydraulic hot press, followed by several hours of processing within the hot press. The precursor solution consists of a 1.0:12.0:3.6:3.5 x 10-3 molar ratio of tetramethylorthosilicate (TMOS):methanol:water:ammonia. In each well of the mold, a porous silica sol-gel matrix forms. As the temperature of the mold and its contents is increased, the pressure within the mold rises. After the temperature/pressure conditions surpass the supercritical point for the solvent within the pores of the matrix (in this case, a methanol/water mixture), the supercritical fluid is released, and monolithic aerogel remains within the wells of the mold. With the mold used in this procedure, cylindrical monoliths of 2.2 cm diameter and 1.9 cm height are produced. Aerogels formed by this rapid method have comparable properties (low bulk and skeletal density, high surface area, mesoporous morphology) to those prepared by other methods that involve either additional reaction steps or solvent extractions (lengthier processes that generate more chemical waste).The rapid supercritical extraction method can also be applied to the fabrication of aerogels based on other precursor recipes.

This article describes a rapid supercritical extraction method for fabricating silica aerogels. By utilizing a confined mold and hydraulic hot press, monolithic aerogels can be made in eight hours or less.

הכנת מונוליתים Aerogel סיליקה באמצעות ראפיד סופר קריטי חילוץ שיטה

A procedure for the fabrication of monolithic silica aerogels in eight hours or less via a rapid supercritical extraction process is described. The ...

Synthesis and Functionalization of 3D Nano-graphene Materials: Graphene Aerogels and Graphene Macro Assemblies

Efforts to assemble graphene into three-dimensional monolithic structures have been hampered by the high cost and poor processability of graphene. Additionally, most reported graphene assemblies are held together through physical interactions (e.g., van der Waals forces) rather than chemical bonds, which limit their mechanical strength and conductivity. This video method details recently developed strategies to fabricate mass-producible, graphene-based bulk materials derived from either polymer foams or single layer graphene oxide. These materials consist primarily of individual graphene sheets connected through covalently bound carbon linkers. They maintain the favorable properties of graphene such as high surface area and high electrical and thermal conductivity, combined with tunable pore morphology and exceptional mechanical strength and elasticity. This flexible synthetic method can be extended to the fabrication of polymer/carbon nanotube (CNT) and polymer/graphene oxide (GO) composite materials. Furthermore, additional post-synthetic functionalization with anthraquinone is described, which enables a dramatic increase in charge storage performance in supercapacitor applications.

This video method describes the synthesis of high surface area, monolithic 3D graphene-based materials derived from polymer precursors as well as single layer graphene oxide.

סינתזה וFunctionalization של חומרים ננו-גרפן 3D: הרכבות מאקרו Aerogels גראפן וגראפן

Efforts to assemble graphene into three-dimensional monolithic structures have been hampered by the high cost and poor processability of graphene. ...

Engineering

Fabrication and Testing of Catalytic Aerogels Prepared Via Rapid Supercritical Extraction

Protocols for preparing and testing catalytic aerogels by incorporating metal species into silica and alumina aerogel platforms are presented. Three preparation methods are described: (a) the incorporation of metal salts into silica or alumina wet gels using an impregnation method; (b) the incorporation of metal salts into alumina wet gels using a co-precursor method; and (c) the addition of metal nanoparticles directly into a silica aerogel precursor mixture. The methods utilize a hydraulic hot press, which allows for rapid (&#60;6 h) supercritical extraction and results in aerogels of low density (0.10 g/mL) and high surface area (200-800 m2/g). While the work presented here focuses on the use of copper salts and copper nanoparticles, the approach can be implemented using other metal salts and nanoparticles. A protocol for testing the three-way catalytic ability of these aerogels for automotive pollution mitigation is also presented. This technique uses custom-built equipment, the Union Catalytic Testbed (UCAT), in which a simulated exhaust mixture is passed over an aerogel sample at a controlled temperature and flow rate. The system is capable of measuring the ability of the catalytic aerogels, under both oxidizing and reducing conditions, to convert CO, NO and unburned hydrocarbons (HCs) to less harmful species (CO2, H2O and N2). Example catalytic results are presented for the aerogels described.

Here we present protocols for preparing and testing catalytic aerogels by incorporating metal species into silica and alumina aerogel platforms. Methods for preparing materials using copper salts and copper-containing nanoparticles are featured. Catalytic testing protocols demonstrate the effectiveness of these aerogels for three-way catalysis applications.

ייצור ובדיקה של Aerogels קטליטי להכין אותה באמצעות מיצוי דודי סופר מהיר

Protocols for preparing and testing catalytic aerogels by incorporating metal species into silica and alumina aerogel platforms are presented. Three ...

A Rapid Synthesis Method for Au, Pd, and Pt Aerogels Via Direct Solution-Based Reduction

Here, a method to synthesize gold, palladium, and platinum aerogels via a rapid, direct solution-based reduction is presented. The combination of various precursor noble metal ions with reducing agents in a 1:1 (v/v) ratio results in the formation of metal gels within seconds to minutes compared to much longer synthesis times for other techniques such as sol-gel. Conducting the reduction step in a microcentrifuge tube or small volume conical tube facilitates a proposed nucleation, growth, densification, fusion, equilibration model for gel formation, with final gel geometry smaller than the initial reaction volume. This method takes advantage of the vigorous hydrogen gas evolution as a by-product of the reduction step, and as a consequence of reagent concentrations. The solvent accessible specific surface area is determined with both electrochemical impedance spectroscopy and cyclic voltammetry. After rinsing and freeze drying, the resulting aerogel structure is examined with scanning electron microscopy, X-ray diffractometry, and nitrogen gas adsorption. The synthesis method and characterization techniques result in a close correspondence of aerogel ligament sizes. This synthesis method for noble metal aerogels demonstrates that high specific surface area monoliths may be achieved with a rapid and direct reduction approach.

A rapid, direct solution-based reduction synthesis method to obtain Au, Pd, and Pt aerogels is presented.

שיטה מהירה סינתזה Au, Pd ו- Pt Aerogels באמצעות הפחתת המבוסס על פתרון ישיר

Here, a method to synthesize gold, palladium, and platinum aerogels via a rapid, direct solution-based reduction is presented. The combination of various ...

Synthesis Method for Cellulose Nanofiber Biotemplated Palladium Composite Aerogels

Here, a method to synthesize cellulose nanofiber biotemplated palladium composite aerogels is presented. Noble metal aerogel synthesis methods often result in fragile aerogels with poor shape control. The use of carboxymethylated cellulose nanofibers (CNFs) to form a covalently bonded hydrogel allows for the reduction of metal ions such as palladium on the CNFs with control over both nanostructure and macroscopic aerogel monolith shape after supercritical drying. Crosslinking the carboxymethylated cellulose nanofibers is achieved using 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC) in the presence of ethylenediamine. The CNF hydrogels maintain their shape throughout synthesis steps including covalent crosslinking, equilibration with precursor ions, metal reduction with high concentration reducing agent, rinsing in water, ethanol solvent exchange, and CO2 supercritical drying. Varying the precursor palladium ion concentration allows for control over the metal content in the final aerogel composite through a direct ion chemical reduction rather than relying on the relatively slow coalescence of pre-formed nanoparticles used in other sol-gel techniques. With diffusion as the basis to introduce and remove chemical species into and out of the hydrogel, this method is suitable for smaller bulk geometries and thin films. Characterization of the cellulose nanofiber-palladium composite aerogels with scanning electron microscopy, X-ray diffractometry, thermal gravimetric analysis, nitrogen gas adsorption, electrochemical impedance spectroscopy, and cyclic voltammetry indicates a high surface area, metallized palladium porous structure.

A synthesis method for cellulose nanofiber biotemplated palladium composite aerogels is presented.The resulting composite aerogel materials offer potential for catalysis, sensing, and hydrogen gas storage applications.

שיטת הסינתזה של הננו-סיבים תאית ביותבניות פלדיום מרוכבים

Here, a method to synthesize cellulose nanofiber biotemplated palladium composite aerogels is presented. Noble metal aerogel synthesis methods often ...

Encapsulating Cytochrome c in Silica Aerogel Nanoarchitectures without Metal Nanoparticles while Retaining Gas-phase Bioactivity

Applications such as sensors, batteries, and fuel cells have been improved through the use of highly porous aerogels when functional compounds are encapsulated within the aerogels. However, few reports on encapsulating proteins within sol&#8211;gels that are processed to form aerogels exist. A procedure for encapsulating cytochrome c (cyt. c) in silica (SiO2) sol-gels that are supercritically processed to form bioaerogels with gas-phase activity for nitric oxide (NO) is presented. Cyt. c is added to a mixed silica sol under controlled protein concentration and buffer strength conditions. The sol mixture is then gelled and the liquid filling the gel pores is replaced through a series of solvent exchanges with liquid carbon dioxide. The carbon dioxide is brought to its critical point and vented off to form dry aerogels with cyt. c encapsulated inside. These bioaerogels are characterized with UV-visible spectroscopy and circular dichroism spectroscopy and can be used to detect the presence of gas-phase nitric oxide. The success of this procedure depends on regulating the cyt. c concentration and the buffer concentration and does not require other components such as metal nanoparticles. It may be possible to encapsulate other proteins using a similar approach making this procedure important for potential future bioanalytical device development.

Encapsulating Cytochrome c in Silica Aerogel Nanoarchitectures without Metal Nanoparticles while Retaining Gas-phase Bioactivity

This procedure describes how to encapsulate cytochrome c (cyt. c) in silica (SiO2) sol-gels, process these gels to form bioaerogels, and use these bioaerogels to rapidly recognize nitric oxide (NO) through a gas-phase reaction. This type of protocol may aid in the future development of biosensors or other bioanalytical devices.

encapsulating ציטוכרום<em&gt; ג</em&gt; ב סיליקה אירוג&#39;ל Nanoarchitectures ללא מתכת חלקיקים תוך שמירת גז שלב פעילות ביולוגית

Applications such as sensors, batteries, and fuel cells have been improved through the use of highly porous aerogels when functional compounds are ...

Bioengineering

Forming Giant-sized Polymersomes Using Gel-assisted Rehydration

Polymer vesicles, or polymersomes, are being widely explored as synthetic analogs of lipid vesicles based on their stability, robustness, barrier properties, chemical versatility and tunable physical characteristics. Typical methods used to prepare giant-sized (&gt; 4 &#181;m) vesicles, however, are both time and labor intensive, yielding low numbers of intact polymersomes. Here, we present for the first time the use of gel-assisted rehydration for the rapid and high-yielding formation of giant (&gt;4 &#181;m) polymer vesicles (polymersomes). Using this method, polymersomes can be formed from a wide array of rehydration solutions including several different physiologically-compatible buffers and full cell culture media, making them readily useful for biomimicry studies. This technique is also capable of reliably producing polymersomes from different polymer compositions with far better yields and much less difficulty than traditional methods. Polymersome size is readily tunable by altering temperature during rehydration or adding membrane fluidizers to the polymer membrane, generating giant-sized polymersomes (&gt;100 &#181;m).

We present a protocol to rapidly form giant polymer vesicles (pGVs). Briefly, polymer solutions are dehydrated on dried agarose films adhered to coverslips. Rehydration of the polymer films results in rapid formation of pGVs. This method greatly advances the preparation of synthetic giant vesicles for direct applications in biomimetic studies.

פורמינג Polymersomes ענק בגודל שימוש Rehydration ג&#39;ל בסיוע

Polymer vesicles, or polymersomes, are being widely explored as synthetic analogs of lipid vesicles based on their stability, robustness, barrier ...

Aesthetically Enhanced Silica Aerogel Via Incorporation of Laser Etching and Dyes

A procedure for aesthetically enhancing silica aerogel monoliths by laser etching and incorporation of dyes is described in this manuscript. Using a rapid supercritical extraction method, large silica aerogel monolith (10 cm x 11 cm x 1.5 cm) can be fabricated in about 10 h. Dyes incorporated into the precursor mixture result in yellow-, pink- and orange-tinged aerogels. Text, patterns, and images can be etched onto the surface (or surfaces) of the aerogel monolith without damaging the bulk structure. The laser engraver can be used to cut shapes from the aerogel and form colorful mosaics.

This protocol describes a method for etching text, patterns, and images onto the surface of silica aerogel monoliths in native and dyed form and assembling the aerogels into mosaic designs.

סיליקה אירוג'ל משופרת מבחינה אסתטית באמצעות שילוב של תחריט לייזר וצבעים

A procedure for aesthetically enhancing silica aerogel monoliths by laser etching and incorporation of dyes is described in this manuscript. Using a rapid ...

Designed for Molecular Recycling: A Lignin-Derived Semi-aromatic Biobased Polymer

The development of chemically recyclable biopolymers offers opportunities within the pursuit of a circular economy. Chemically recyclable biopolymers make a positive effort to solve the issue of polymer materials in the disposal phase after the use phase. In this paper, the production of biobased semi-aromatic polyesters, which can be extracted entirely from biomass such as lignin, is described and visualized. The polymer poly-S described in this paper has thermal properties similar to certain commonly used plastics, such as PET. We developed a Green Knoevenagel reaction, which can efficiently produce monomers from aromatic aldehydes and malonic acid. This reaction has been proven to be scalable and has a remarkably low calculated E-factor. These polyesters with ligno-phytochemicals as a starting point show an efficient molecular recycling with minimal losses. The polyester poly(dihydrosinapinic acid) (poly-S) is presented as an example of these semi-aromatic polyesters, and the polymerization, depolymerization, and re-polymerization are described.

An example of a closed-loop approach towards a circular materials economy is described here. A whole sustainable cycle is presented where biobased semi-aromatic polyesters are designed by polymerization, depolymerization, and then re-polymerized with only slight changes in their yields or final properties.

מיועד למיחזור מולקולרי: פולימר ביו-ביבסי חצי ארומטי שמקורו ב-ליגנין

The development of chemically recyclable biopolymers offers opportunities within the pursuit of a circular economy. Chemically recyclable biopolymers make ...

Synthesis of Hydrogels with Antifouling Properties As Membranes for Water Purification

Hydrogels have been widely utilized to enhance the surface hydrophilicity of membranes for water purification, increasing the antifouling properties and thus achieving stable water permeability through membranes over time. Here, we report a facile method to prepare hydrogels based on zwitterions for membrane applications. Freestanding films can be prepared from sulfobetaine methacrylate (SBMA) with a crosslinker of poly(ethylene glycol) diacrylate (PEGDA) via photopolymerization. The hydrogels can also be prepared by impregnation into hydrophobic porous supports to enhance the mechanical strength. These films can be characterized by attenuated total reflection Fourier transform infrared spectroscopy (ATR-FTIR) to determine the degree of conversion of the (meth)acrylate groups, using goniometers for hydrophilicity and differential scanning calorimetry (DSC) for polymer chain dynamics. We also report protocols to determine the water permeability in dead-end filtration systems and the effect of foulants (bovine serum albumin, BSA) on membrane performance.

This paper reports practical methods to prepare hydrogels in freestanding films and impregnated membranes and to characterize their physical properties, including water transport properties.

סינתזה של הידרוג עם מאפייני Antifouling ופלטות לטיהור מים

Hydrogels have been widely utilized to enhance the surface hydrophilicity of membranes for water purification, increasing the antifouling properties and ...

הכנת Aerogels biopolymer בעזרת ממיסים גרין

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video