Funding was provided by the NIH K08 NS064094 and UCSF REAC grants. The authors would like to acknowledge Nikita Derguin, Zinalda Vexler, and Joel Faustino for their assistance in the development of this technique.

כל מחקר בבעלי חיים אושרה על ידי אוניברסיטת קליפורניה, סן פרנסיסקו הוועדה על מחקר בבעלי חיים בוצע בהתאם מדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה (ארה&quot;ב מחלקת הבריאות ושירותי האנוש, פרסום מס &#39;85-23, 1985 ). בעלי החיים היו תחת פיקוח הדוק על ידי וטרינרים של ועדת הטיפול בבעלי החיים המוסדית UCSF ושימוש (IACUC), מוכרת על ידי AAALAC. עכברוש Sprague-Dawley נקבה אחת עם המלטה 8 ימים בת (10 גורים בכל המלטה) הושג. אמא ואת הגורים שלה קבלו מזון כרצונך מים שוכנו במתקן טיפול בטמפרטורה והאור שבשליטת חיה עם העשרה יומית, לכל פרוטוקול IACUC, עד הגורים היו ישנים 10 ימים. כל מכשירי הניתוח המשמשים בהליך זה היו autoclaved כדי להבטיח סטריליות. עקרות של טיפי מכשיר נשמרות לאורך כל הניתוח. 1. העורקים התיכון ספיגה מוחין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את הכלבה ensurדואר שזה המשקל הראוי (19-21 גרם). להרדים את הגור ב isoflurane 3% ב 100% O 2 ולהבטיח כי אין בתגובת קמצוץ רגל. שמירה על טמפרטורת פני גוף בין 35.5 מעלות צלזיוס ו 37 מעלות צלזיוס עם שימוש כרית חימום מתחת לבמה כירורגי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Secure חיה בעמדת פרקדן עם קלטת ברחבי אזורי כתף. באמצעות צמר גפן סטרילי, ספוגי באזור צוואר הרחם הקדמי עם פתרון povidone יוד ואחריו ספוגית של אתנול 70% במים מזוקקי פעמים, לסירוגין בין כל פתרון עבור ארבע מטליות כוללות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקומית לחדור bupivacaine 0.25% אל אתר החתך המתוכנן. בעזרת סטריאוסקופ, לעשות קו אמצע 5 עד 7 מ&quot;מ חתך צוואר רחם קדמי כדי לחשוף את העורק הראשי המשותף (CCA). מניחים 2-4 כתיבה כדי לשמור על חלל פתוח העורק החשוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את עורק התרדמה הפנימי (רשפ&quot;ת), עורק עורפי (OA), ואת העורק ראשי חיצוני (ECA). יש להקפיד על עורקים כדי לקבל תצוגה ברורה. היית מכוניתeful לא להפריע העצב התועה. הערה: עבור גורי דמה מופעל, את inicision נותרת פתוחה העורקים נחשפים, שלאחריו החתך נתפר סגור. שעת ההרדמה הכוללת היא שווה ערך לזה של הניתוח הספיג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים 1.5 ס&quot;מ של חוט תפר 6-0 משי קלוע. Unbraid התפר, תלישת גדילים בודדים. ודא כי הגדילים הבודדים הם מסודרים ולא בלוי. הערה: אם יש צורך, smoothe בקצוות הפרומים ידי טבילת הגדיל הבודד במי סטריליים טיפוח הגדיל עם טיפי מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוך כדי לחיצה על גדיל התפר עם מלקחי 45 מעלות, להעביר את המלקחיים בתנועת קשת גורפת ללכת תחת ICA כך טיפי המלקחיים לצוץ בין הרשפ&quot;ת ובין OA. הערה: אם לנתיחה נעשתה היטב, שלב זה יהיה יחסית קל. אם הרשפ&quot;ת OA נוגעים, להיזהר שלא לקרוע את העורקים בעת שימוש במלקחיים כדי לבודד את ICA. אם הדימום מתרחש, להפעיל לחץ על העורק עם המלקחיים עדהדימום מפסיק. ספוג בדם עם ספוגית סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפוס את הקצה של גדיל התפר כי היא מוחזקת ע&quot;י המלקחיים ומושך אותו כך בסוף הוא קל לגשת. שחרר את קווצת מן מלקחיים ולגבות מלקחיים מתחת הרשפ&quot;ת, היפוך תנועה בשלב 1.5 (איור 1 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקשור ליגטורה זמנית סביב ICA בבסיס, הקרוב ביותר למקום שבו הוא מפריד מן CCA. הערה: חשוב לקשור את הקשר, כך בסופו של גדיל כי ימשך כדי להסיר את הקשר הוא ארוך מספיק (יותר מ 1 מ&quot;מ, פחות מ 3 מ&quot;מ) כדי לתפוס בקלות עם מלקחיים, תוך הקפדה כי קיימת כמות מתאימה של גדיל תפר בצד השני של הקשר לצורך ביטול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות לחזור בו ICA רוחבית ולהשתמש קליפ לאבטח את קווצת לעור עודף ליד האזור השחי בצד השני של החתך. ודאו גדיל חוזר זו מתוח מספיק כדי לעצור את זרימת דם לפני שתמשיך לשלב הבא, כדילמזער את הסיכון של דימום בלתי נשלט. שימו לב כי העורק שטוח חיוור. הערה: לא יותר מדי לחזור, כפי שהוא יכול לגרום דמעה חלקית או מלאה של ICA. את ההכחשה יכול להיות מותאם בדיוק לפני ביצוע arteriotomy על ידי משיכת חוט עם ההפך בצד את הקליפ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמשו 45 ° מלקחיים כדי לתפוס עוד קווצת תפר התירה ו לולאה זה מתחת ומסביב ICA, כמו בשלב 1.5. תפקיד גדיל זה לרוחב גדיל ביטול (איור 1B). הערה: שלב זה יכול להיעשות גם לפני הנסיגה. אם אינך בטוח לגבי האיכות של הכחשה, הקשר הזה יכול להיות קשור מאוד רופף לפני הצעד הבא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך באמצע דרך arteriotomy 0.2 מ&quot;מ בין ליגטורה הקשורה והיתרתי, טועה קרוב ליגטורה הקשורה. הערה: הדם שנותר העורק הקשור פעמי עלול לרוקן דרך arteriotomy אך לא יעלה על 5 μL. אם הדימום ממשיך להציק, בזהירות למשוך את קווצת הביטול להגדיל הכחשה, בזהירות אלחלל פגיעה בעורק ממתח יתר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת סרגל מדידה מטרי, למדוד את תפר הגורם לחסימה ו לחתוך את התפר עם תוספת מיוחדת של 2-3 מ&quot;מ עבור הסרת occluder במהלך רה-פרפוזיה. החזק את occluder עם מלקחי 45 מעלות להשתמש במלקחיים ישר ליצור עיקול על האורך המתאים להגיע MCA, סימון נקודת עצירה עבור קידום. הערה: אורך חסימה 10 מ&quot;מ מהקצה סיליקון טיפ העיקול משמש P10 ספראג Dawley או לונג אוונס גורי חולדה בטווח המשקל הזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות 45 ° מלקחיים, להאכיל את תפר ספיגת ניילון מצופה סיליקון לתוך arteriotomy ולקדם את התפר אל העיקול המציין את המרחק שנקבע מראש אל MCA (איור 1C). ודא כי קידום מרגיש חלקה; לעצור התקדמות מייד אם התנגדות מורגשת. במהלך קידום, לכוון את התפר בכיוון זה מקביל CC / ECA, לכיוון הראש. הערה: אם התפר הוא dorsally המתקדם, לקראתעמוד השדרה של החיה, היא עשויה להיתקל עורק pterygopalatine (PTA). אם התנגדות מורגשת אחרי 3-5 מ&quot;מ של קידום, התפר פגע לצומת PTA. בחזרה את occluder מתוך העורק עד ראש סיליקון הוא סמוך arteriotomy לפני ההתאמה כיוון ההתקדמות. אין צורך להסיר את occluder לחלוטין מן arteriotomy. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבטח את occluder ידי קשירה ליגטורה זמנית, באמצעות גדיל משלב 1.10 (האיור 1D). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הקליפ מפשק. חתוך את הקווצות הן של ליגטורה הזמנית כך הקווצה את הקשר כי הוא משך להסיר את הקשר היא קלה להבנה עם מלקחיים ישרים ארוכה יותר הגדיל כי הוא משך להדק את הקשר. הערה: הגדילים חייבים להיות קצרים מספיק כדי שהם לא להסתבך החלל לאחר סגירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את retractors ולסגור את החלל באמצעות 6-0 משי קלוע צור בין שלושה לארבעה תפרים נקטעו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הגורהרדמה ולמקם אותו על כרית חימום האוויר בחדר. נטר את הגור עד שהוא שב להכרתו מספיק כדי לשמור על שכיבה sternal ולוודא שהיא התאוששה לחלוטין לפני שחזר אותו הסכר. ודא כי הגור שומר על טמפרטורת פני גוף בין 35.5 מעלות צלזיוס ו 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך חסימה, תהודה המגנטית משוקלל דיפוזיה (DW-MRI) בהרדמת isoflurane יכול לשמש כדי לאמת את האינדוקציה של פציעה המתאימה. איור 2 מדגים פגיעים איסכמית מתמשכת זוהה על ידי DW-MRI במהלך tMCAO 9. הערה: הדמית מישוריים הד ספין משוקללת דיפוזיה מבוצעת 10-15 דקות לפני reperfusion. המוח מצולם עם קטעי עטרת 2 מ&quot;מ בעובי סדרו באמצעות הגדרות רצף הדופק הבאות: TR / TE = 5000/60 מילישניות, 4 ממוצעים, שדה ראייה = 35 מ&quot;מ, מטריקס נתונים = 128x128, משך שיפוע דיפוזיה = 20 ms, הפרדה = 29.7 ms, משרעת = 70mT / m, ו-גורם B = 1045 s / mm 2.בעלי חיים מפגינים חוסר מעורבות קליפת מוח או פגיעת איסכמית טיפוסית, כגון בגזע המוח, אינם נכללים. </li></ol> Reperfusion 2. הערה: הספיגה מבוצעת עבור 3 שעות כדי לגרום מתונה עד חמורת כמות הפציעה המעורבת הסטריאטום ואת הקליפה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסביבות 2 h ו 50 דקות החסימה הבאה של MCA, להרדים את הגור ב isoflurane 3% ב 100% O 2. יש לשמור על טמפרטורת פני גוף בין 35.5 מעלות צלזיוס ו 37 מעלות צלזיוס עם שימוש כרית חימום מתחת לבמה כירורגי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את תפרי קטע מן הצעד 1.16 ולאתר לצומת, אשר מסומנת על ידי שתי קשירות סוף הזנב של תפר הגורם לחסימה. הערה: חיות דמה מופעל מושרות ולהישאר תחת הרדמה למשך פרק זמן שווה החיות המלוכדות. החתך שוב נפתח ונתפר סגור. עבור חיות דמה מופעל, המשך לשלב 2.11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות השיעבודאת הקשר לרוחב ביותר קשור בעבר בשלב 1.14 על ידי משיכת חוט ארוך יותר. הערה: אם יש התנגדות ב שהתיר את הקשר, לעצור כדי להבטיח כי הגדיל הנכון של הקשר הוא שנגרר. אם ההתנגדות נמשכת, להגדיל הגדלה כדי לראות טוב יותר. היה זהיר כאשר מתירים, כפי שאפשר לפגוע בעורק במהלך שלב זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את קווצת תפר המחלל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדיוק בשעה 3 h הבאים חסימה MCA, לאט לגבות תפר occluding מתוך העורק. לא יהיה שום התנגדות. הערה: ברוב המקרים, לא יהיה דימום. אם כמות קטנה של דימום, יפעיל לחץ על העורק באתר arteriotomy. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במלקחיים כדי להפעיל לחץ על arteriotomy, כשלב הבא משחזר את זרימת הדם ICA עבור reperfusion. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות להתרת הסבך המדיאלי באותה שיטה כמו בשלב 2.3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את קווצת תפר מהגוף ולהחיל סוכן עוצר דמום אל arteriotomy כדי לעצור את הדימום. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא כי הדימום פסק. הערה: שובו של הצורה המקורית והצבע האדום של העורק מאשרת כי זרימת הדם ICA שוחזרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את retractors ולסגור את החלל עם שלושה עד ארבעה תפרים שהופסקו של 6-0 משי קלוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הגור מן ההרדמה ולמקם אותו על כרית חימום האוויר בחדר. נטר אותו עד שב להכרתו מספיק כדי לשמור על שכיבה sternal ולהבטיח להחלמה מלאה לפני שחזר אותו הסכר. ודא כי הגור שומר על טמפרטורת פני גוף בין 35.5 מעלות צלזיוס ו 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את הגורים יומיים עבור 5 ימים. Recprd המשקולות שלהם ולבדוק באתרי החתך מקרוב לריפוי מתאים. הסר את התפרים לאחר 7-14 ימים. פגיעה פוסט-tMCAO ניתן הדמיה עם MRI, אם 9 רצויות. הערה: בעלי חיים עלולים לאבד עד 1 גרם של משקל ביום הראשון אבל בדרך כלל יהיה להחזיר את המשקל ללא התערבות ולהיות בתוך דומה לשקולמגוון t לבקרות ידי ימים 4-5. לעיתים נדיר, גור עלול לאבד משקל עודף או בעלי האכלת קושי, מחייב gavage פי זנות במשך 2-3 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב p21, פציעה ניתן להעריך בצורה מהימנה עם בדיקות התנהגותיות הסנסורית, כגון rotarod או גידול צילינדר. בדיקות קוגניטיבי יכולות להתבצע מוקדם ככל בגיל 4-6 שבועות באמצעות הערכות כגון זיהוי אובייקט רומן או מבוך המים של מוריס 13. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את חולדות בזריקה intraperitoneal של Euthasol (50 מ&quot;ג / ק&quot;ג) לקציר המוח 11, 12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח היסטולוגית להעריך נפח פציעה או בתגובה התערבויות יכול להתבצע עם סגול cresyl או H &amp; E מכתים (איור 3) 10. </li></ol>

<ol>
	<li>Grunt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+outcomes+of+symptomatic+neonatal+arterial+ischemic+stroke.">Incidence and outcomes of symptomatic neonatal arterial ischemic stroke.</a> Pediatrics. 135 (5), 1220-1228 (2015).</li><li>Rice, J. E., Vannucci 3rd, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat.">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Ann Neurol. 9 (2), 131-141 (1981).</li><li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema.+I:+a+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area.">Experimental studies of ischemic brain edema. I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn J Stroke. 8 (8), (1986).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li><li>Labat-gest, V., Tomasi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photothrombotic+ischemia:+a+minimally+invasive+and+reproducible+photochemical+cortical+lesion+model+for+mouse+stroke+studies.">Photothrombotic ischemia: a minimally invasive and reproducible photochemical cortical lesion model for mouse stroke studies.</a> J Vis Exp. (76), (2013).</li><li>Renolleau, S., Aggoun-Zouaoui, D., Ben-Ari, Y., Charriaut-Marlangue, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+transient+unilateral+focal+ischemia+with+reperfusion+in+the+P7+neonatal+rat:+morphological+changes+indicative+of+apoptosis.">A model of transient unilateral focal ischemia with reperfusion in the P7 neonatal rat: morphological changes indicative of apoptosis.</a> Stroke. 29 (7), 1454-1460 (1998).</li><li>Perlman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intervention+strategies+for+neonatal+hypoxic-ischemic+cerebral+injury.">Intervention strategies for neonatal hypoxic-ischemic cerebral injury.</a> Clin Ther. 28 (9), 1353-1365 (2006).</li><li>Derugin, N., Ferriero, D. M., Vexler, Z. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+reversible+focal+cerebral+ischemia:+a+new+model.">Neonatal reversible focal cerebral ischemia: a new model.</a> Neurosci Res. 32 (4), 349-353 (1998).</li><li>Gonzalez, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+increases+neurogenesis+and+oligodendrogliosis+of+subventricular+zone+precursor+cells+after+neonatal+stroke.">Erythropoietin increases neurogenesis and oligodendrogliosis of subventricular zone precursor cells after neonatal stroke.</a> Stroke. 44 (3), 753-758 (2013).</li><li>Larpthaveesarp, A., Georgevits, M., Ferriero, D. M., Gonzalez, F. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+erythropoietin+therapy+improves+histological+and+behavioral+outcomes+after+transient+neonatal+stroke.">Delayed erythropoietin therapy improves histological and behavioral outcomes after transient neonatal stroke.</a> Neurobiol Dis. , (2016).</li><li>Rutherford, M. A., Ramenghi, L. A., Cowan, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+stroke.">Neonatal stroke.</a> Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 97 (5), 377-384 (2012).</li><li>van der Aa, N. E., Benders, M. J., Groenendaal, F., de Vries, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+stroke:+a+review+of+the+current+evidence+on+epidemiology,+pathogenesis,+diagnostics+and+therapeutic+options.">Neonatal stroke: a review of the current evidence on epidemiology, pathogenesis, diagnostics and therapeutic options.</a> Acta Paediatr. 103 (4), 356-364 (2014).</li><li>Gonzalez, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+sustains+cognitive+function+and+brain+volume+after+neonatal+stroke.">Erythropoietin sustains cognitive function and brain volume after neonatal stroke.</a> Dev Neurosci. 31 (5), 403-411 (2009).</li><li>Dudink, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+unilateral+perinatal+arterial+ischemic+stroke+on+conventional+and+diffusion-weighted+MR+imaging.">Evolution of unilateral perinatal arterial ischemic stroke on conventional and diffusion-weighted MR imaging.</a> AJNR Am J Neuroradiol. 30 (5), 998-1004 (2009).</li><li>Derugin, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+resonance+imaging+as+a+surrogate+measure+for+histological+sub-chronic+endpoint+in+a+neonatal+rat+stroke+model.">Magnetic resonance imaging as a surrogate measure for histological sub-chronic endpoint in a neonatal rat stroke model.</a> Brain Res. 1066 (1-2), 46-56 (2005).</li><li>Dzietko, M., Wendland, M., Derugin, N., Ferriero, D. M., Vexler, Z. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+resonance+imaging+(MRI)+as+a+translational+tool+for+the+study+of+neonatal+stroke.">Magnetic resonance imaging (MRI) as a translational tool for the study of neonatal stroke.</a> J Child Neurol. 26 (9), 1145-1153 (2011).</li><li>Mancuso, A., Derugin, N., Hara, K., Sharp, F. R., Weinstein, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mild+hypothermia+decreases+the+incidence+of+transient+ADC+reduction+detected+with+diffusion+MRI+and+expression+of+c-fos+and+hsp70+mRNA+during+acute+focal+ischemia+in+rats.">Mild hypothermia decreases the incidence of transient ADC reduction detected with diffusion MRI and expression of c-fos and hsp70 mRNA during acute focal ischemia in rats.</a> Brain Res. 887 (1), 34-45 (2000).</li><li>Kasdorf, E., Hyperthermia Perlman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation,+and+Perinatal+Brain+Injury.">Inflammation, and Perinatal Brain Injury.</a> Pediatric Neurology. 49 (1), 8-14 (2013).</li><li>Bouley, J., Fisher, M., Henninger, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+between+coated+vs.+uncoated+suture+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+rat+as+assessed+by+perfusion/diffusion+weighted+imaging.">Comparison between coated vs. uncoated suture middle cerebral artery occlusion in the rat as assessed by perfusion/diffusion weighted imaging.</a> Neurosci Lett. 412 (3), 185-190 (2007).</li><li>Shimamura, N., Matchett, G., Tsubokawa, T., Ohkuma, H., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+silicon-coated+nylon+suture+to+plain+nylon+suture+in+the+rat+middle+cerebral+artery+occlusion+model.">Comparison of silicon-coated nylon suture to plain nylon suture in the rat middle cerebral artery occlusion model.</a> J Neurosci Methods. 156 (1-2), 161-165 (2006).</li><li>Kirton, A., deVeber, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paediatric+stroke:+pressing+issues+and+promising+directions.">Paediatric stroke: pressing issues and promising directions.</a> Lancet Neurol. 14 (1), 92-102 (2015).</li><li>Nelson, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perinatal+ischemic+stroke.">Perinatal ischemic stroke.</a> Stroke. 38, 742-745 (2007).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

צעדים קריטיים בתוך הפרוטוקול ראשית, חשוב לשמור על טמפרטורה נורמלית מן חניכה של הרדמה עד להחלמה מלאה, כפי שיש ידועים ההשפעות של שני היפותרמיה 17 ו היפרתרמיה 18 על התקדמות של פגיעה מוחית הן חיות בשלה ובוגרת. שנית, תוך הבטחת החיה שמבטלת את החתך, מיצוב אופטימלית לניטור נשימה ועל מנת להבטיח כי קנה הנשימה היא ללא דחיסה חיוני. שלישית, למנוע סחיטה או מתיחת העצב התועה, מכיוון שהדבר עלול לגרום לשינויים בקצב לב עם גירוי מחנק. רביעית, משום הכחשה של ICA יש צורך לשלוט דימום במהלך arteriotomy, יש לשים לב למידת המתח במהלך הכחשה כדי למנוע פגיעה בעורק. אם עורק אין לקרוע מן ההכחשה, או אם יש חתך arteriotomy עני, החיה צריכה להיות מחוץ ניתוח בשל הסיכוןשל דימום ו reperfusion העני. שינויים ופתרון בעיות באמצעות MRI כמדריך, אורך התפר עשוי להיות מותאם על מנת להבטיח כי קצה סיליקון כמו שצריך לחסום כאן את MCA כדי ליצור את איסכמיה המוקד. אם MRI אינו זמין, גורים עלולים להיות מורדמים לפני reperfusion לנתיחה כדי להמחיש את המיקום של התפר. התאם את אורך התפר לפי צורך. משקל גור וקושר מאוד עם דרישות אורך תפר גורם לחסימה. שעת החסימה יכולה להיות שונה כדי להתאים את מידת חומרת פציעה. בנוסף, צורת תפר ואורך הם קריטיות. עבור P10 ספראג-Dawley וחולדות לונג אוונס במשקל 19-21 גרם, 10 מ&quot;מ הוא אורך אופטימלי של החדרת מניסיוננו. החדרת יתר של תפר occluding עלולה לגרום ניקוב של MCA. יתר על כן, העקביות בצורת הנימה הגורם לחסימה בכל ניתוח תגרום עקביות מוגברת של פגיעת pattern 19, 20. מסיבה זו, המלצנו באמצעות תפרים מתוצרת מקצועית למטרה ספציפית זו. כמו כן, חשוב לציין כי דפוס הפציעה עשוי להיות שונה בין מתרגל עקב הבדלים דקים לכאורה טכניקה. מגבלות הטכניקה ביצוע הטכניקה הזו מכרסם קטן, פיתוח דורש ניסיון משמעותי. אם מבוצע כהלכה, המנתח הוא מסוגל לגרום דפוס פציעה מאוד עקבי על פני בעלי חיים בגדלים שונים ולהשיג שיעור הישרדות יותר מ 95%. יתר על כן, כלי כירורגיים מתאימים קריטיים. חייבים להיות מטופח מכשירים כירורגי כדי להבטיח כי כל טיפי המכשיר משוערים כראוי. משמעות של טכניקה זו ביחס לשיטות קיימות או חלופה בעוד-איסכמיה היפוקסיה, או המודל רייס-מוואנוצ&#39;י 2 </sup&gt;, הוא נפוץ ביותר ללמוד פגיעה איסכמית-היפוקסי במוח המתפתח, חשוב לציין כי מודל זה של tMCAO הוא נבדל HI בכך שיש איסכמיה מוקד החולפת בלי היפוקסיה עולמי, ואחריו שלב reperfusion כאשר חסימת מוסר זרימת דם משוחזרת. זה גורם לפגיעה יותר עקבית לשחזור והוא יותר קליני translational ידי גרימת דפוס פציעה דומה לזו שנצפתה ב שבץ בילוד מלא טווח. זה מאפשר הלימוד של דפוסי פגיעת מוקד ותגובות מפצות ברקמה וללא כל פגע. יישומים עתידיים לאחר מאסטרינג טכניקה זו מודל זה דומה הגורם השכיח ביותר של שבץ בילודים אנושיים, פקיק occlusive חולף המתרחש במהלך התקופה הסבה-לידתית 11, 21. האטיולוגיה אינה ברורה לחלוטין תלויה בכמה גורמים ככל הנראה, אך ההנחה היא שברוב המקרים לאo לנבוע תסחיפים עוברים מן השליה 11. בנוסף, תינוקות רבים עם שבץ סביב לידה משוערת קרובה בהווה עם פעילות התקפים מאוחר או בדיקות נוירולוגיות מוקד עדינות מומי 22. זה הופך את השימוש במודל פציעה עקבי, translational לזהות מנגנונים של התקדמות פגיעה ואסטרטגיות טיפוליות אפשריות מכריעות.

שבץ בתקופת הילוד הנו גורם משמעותי של מוות ונכות, המתרחשים רבים ככל 1 ב 2300 לידות חיות 1. זה מוביל להתפתחות מערכת העצבים המרכזית שינו מוגברת לתחלואה ארוכת טווח, כולל שכיחות מוגברת של אפילפסיה,, פיגור שכלי שיתוק מוחין, וסוגים אחרים של המנוע או תפקוד קוגניטיבי. ההשפעות לכל החיים של שבץ מוקדם לעשות במודלים של בעלי חיים translational חיוני לבחינת מנגנונים של פגיעה ותיקון באוכלוסיה זו, כולל אסטרטגיות כדי להגן על המוח נפגע או לשפר תיקון. מודלים איסכמיה שונים שימשו ללמוד פגיעה מוחית אצל בעלי חיים בוגרים, ובעוד רייס-מוואנוצ&#39;י (Modified לוין) 2 הליך נפוץ ללמוד פגיעה איסכמית-היפוקסי במוח המתפתח, מוקד איסכמיה-רה-פרפוזיה הוא מנגנון מובהק של פגיעה גרימת חבלה המוקד, עם הליבה penu פצועmbra ורקמות מרחוק וללא כל פגע. קואיזומי 3 ו Longa 4 הדגמים שפותחו חולדות מבוגרות להשיג חסימה של עורק המוח אמצעי חולפת דרך עורק התרדמה המשותפת (CCA) ו עורק תרדמה חיצונית (ECA), בהתאמה. בשני המודלים, קשירת צריבה קבועה של ענפי עורק חשובים כדי למזער דימום וכדי לייעל את ההליך הכירורגי, אשר גורם גם השפעות שליליות על יכולת הבהמה להאכיל לעלות במשקל בעקבות פציעה. יתר על כן, ישנם מנגנונים פגיעים ברורים במוח בשלה ודפוסים ספציפיים של פגיעה לראות תוצאה. לאחרונה, שבץ photothrombotic (שיטת רוז-בנגל) 5 ו 6 MCA קשירת קבע שימשו ללמוד שבץ ילודים הבוגרת. שניהם שבץ photothrombotic קשירת MCA ליצור שינויים של קבע זרימת דם במוח שגורמים לחוסר reperfusיוֹן. Reperfusion הוא מרכיב קריטי של ההתפתחות וההתקדמות של פציעת מוקד, עם יתר רעיל מוגבר, היווצרות רדיקלים חופשית, וייצור Nitric Oxide המוביל למות תא מושהה המערבת איתות מפלי נבדלות השלב איסכמי 7. היפוקסיה-איסכמיה כרוך קשירת ראש חד-צדדי קבועה ואחריו היפוקסיה העולמי, אשר גם נבדל סיבת פציעת איסכמי-היפוקסי בבני אדם ואינו גורם דפוס פציעת מוקד עקבי, מה שהופך לימוד הליבה פנומברה הפצועה יותר מאתגר. תיארנו בעבר מודל שבץ המורגי הלא-איסכמיה-רה-פרפוזיה בחולדה בשלה באמצעות חסימת עורק המוח האמצעי חולף (MCAO) 8, 9, 10. זוהי שיטה פולשנית פחות ניגשת ו חוסמת את MCA דרך עורק התרדמה הפנימי בלי ligati קבעאו צריבה. זה מספק מודל של פציעה דומה הגורם השכיח ביותר של שבץ בתקופה הסב-לידתית 11, 12. מודל איסכמיה-רה-פרפוזיה זה של תוצאות פציעה נזק בסטריאטום ipsilateral ואת קליפת הזמני-parieto. גם מודל זה של tMCAO מאפשר שליטה על חומרת הפציעה על ידי שינוי משך ספיגה. בחינת מסלולי איתות ושינויים היסטולוגית בליבת פנומברה הפגועה ברקמת ipsilateral ו נגדית וללא כל הפגע יכולה יותר להבהיר את המנגנונים של פגיעה ותיקון במוח בשלה. מחקר זה ידגים מודל פציעה חשוב זה עבור המוח המתפתח.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Isoflourane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>50033</td>
			<td>anesthetic, at 3%&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trinocular Surgioscope</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>PSMT5N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>000731-500-000</td>
			<td>low to medium setting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IR Thermometer</td>
			<td>Extech Instruments</td>
			<td>72-5270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retraction kit for small animals&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18200-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CermaCut Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14958-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5SF Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>112522-00</td>
			<td>2x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5/45 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-35</td>
			<td>2x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-2 Micro Clamp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00398-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcepts for Clamp Application</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00072-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Vannas Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-03</td>
			<td>2mm cutting edge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Occlusion Sutures</td>
			<td>Doccol</td>
			<td>602123PK10</td>
			<td>701712PK5Re</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ruler</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic Agent&#160;</td>
			<td>Avitene</td>
			<td>DVL1010590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Perma-Hand Silk Reverse CuttingSuture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>769G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Euthasol</td>
			<td>Virbac</td>
			<td>710101</td>
			<td>0.22 ml/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tipped Applicators</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>100-9249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laboratory Tape</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89097-990</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transient middle cerebral artery occlusion model of neonatal stroke in p10 rats

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature and mature brain. Stroke occurs commonly in the perinatal period in humans, and transient ischemia-reperfusion is the most common form of stroke in neonates. The reperfusion phase is a critical component of injury progression, which occurs over a period of days to weeks, and of the endogenous response to injury. This postnatal day 10 (p10) rat model of transient middle cerebral artery occlusion (tMCAO) creates a unilateral, non-hemorrhagic focal ischemia-reperfusion injury that can be utilized to study the mechanisms of focal injury and repair in the full-term-equivalent brain. The injury pattern that is produced by tMCAO is consistent and highly reproducible and can be confirmed with MRI or histological analyses. The severity of injury can be manipulated through changes in occlusion time and other methods that will be discussed.

חומרת הנזק הנגרם מהפגיעה tMCAO תלות גבוהה הן זמן חסימה ואת הניסיון של המנתח. חסימה 90-min קרובות מייצרת קל עד בינוני דפוס פציעה, בעוד 3 h מייצר פציעה בינונית עד חמורה. חומרת הפציעה ניתן להעריך באמצעות מגוון רחב של שיטות, כולל MRI, היסטולוגיה, או ניתוחים התנהגותי ארוך טווח קצר או. איור 2 מדגים דוגמה DW-MRI שבוצעה 75 דקות לתוך חסימה 90-min, המאשר פגיעה איסכמית מעורבים בחצי הכדור ipsilateral. הדמית דיפוזיה משוקללת מדגים גדלה דיפוזיה בסטריאטום ipsilateral ואת רוב קליפת ipsilateral, ללא שינויים נגדיים, במהלך שלב איסכמי החריף. הינו תוצאה בינונית של פגיעה ארוכת טווח ומצדו של קליפת המוח לבין חומר אפור עמוק. חסימה של תוצאות MCA ב<html> התא למוות שמתחיל בסטריאטום עבור פציעה חמורה פחות ומפתחת החמרה פגיעה בקליפת המוח ואת היפוקמפוס פעמים כבר חסימה ו פציעה חמורה יותר. במהלך אופטימיזציה של הטכניקה הכירורגית, כגון קביעת אורך החדרת התפר, MRI מומלץ מאוד, שכן היא מאפשרת את אישור השמת תפר נכון להדמיה של בצקת והתקדמות פציעה במהלך החסימה 14, 15, 16. אם MRI אינו זמין, H &amp; E או מכתים סגול cresyl שיטות היסטולוגית פשוטה ואמינה כדי לקבוע מורפולוגיה פציעה והוא יכול לשמש הן בנקודות זמן מוקדמים ומאוחרים לאחר tMCAO. איור 3 מדגים דפוס פציעה בינונית עד חמורה על בדיקה histopathological בעקבות חסימת 3 h, הוכחת ציסטה היווצרות ונפח בסטריאטום ואת קליפת ipsilateral. &gt; כימות stereological משוחד סעיפים מוכתמים cresyl סגול, ניתן לחשב את היחס של ipsilateral נפח חצאים מוח נגדי מאשר פציעת ipsilateral איסכמי-רה-פרפוזיה. באופן ספציפי, לאחר הרדמת החיה עם Euthasol, המוח היה לקצור ידי זלוף transcardiac ב 0.1 M PBS עם 4% paraformaldehyde. בעקבות postfixation ו איזון לילה סוכרוז 30%, המוח כולו מחולק על 50 מיקרומטר במרווחים, וכל סעיף י&quot;ב נבחר, רכוב, מוכתם סגול cresyl 10. אפילו עם פציעה קלה, שינויים רצוניים, כגון מכתרת hemiparesis, מצוינים בתקופת החסימה. עם פציעה חמורה יותר, שינויים אלה יימשכו לאחר רה-פרפוזיה. בדיקות התנהגותיות נוספות יכול לשמש כדי להעריך את חומרת הפציעה, כולל בדיקות גידול rotarod או צילינדר עבור פונקציה הסנסורית ו מבוך המים של מוריס עבור13 פונקציה קוגניטיבית. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/54830/54830fig1.jpg" /> איור 1: תמונות כירורגים חיות של נוהל tMCAO. (א) גדיל התפר הראשון מסובב סביב הרשפ&quot;ת, כמפורט צעד 1.6. (ב) ליגטורה הזמנית הראשונה קשורה ואת ICA הוא חזר בו. גדיל התפר השני מסובב סביב הרשפ&quot;ת, לרוחב לגדיל התפר הראשון, כמפורט צעד 1.9. (ג) תפר ספיגה מצופה סיליקון מוזן לתוך האתר arteriotomy, כמפורט צעד 1.12. (ד) ליגטורה הזמנית השנייה קשורה לאבטחת occluder במקום, כמפורט צעד 1.14. בר סולם = 1 מ&quot;מ. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/54830/54830fig2.jpg" /> איור 2: MRI במהלך Occlusion מדגים הפגיעה החד-צדדית המתאימה. קדמי אל אחורי, פרוסות תמונת עטרה של DW-MRI, שבוצעו במהלך חסימת 90 דקות, להפגין דיפוזיה מוגברת מעורבות בחצי כדור ipsilateral (החיצים), אשר עולה בקנה אחד עם פגיעת איסכמית מתמשכת בשלב החריף. הודפס מחדש באישור משבץ 11. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54830/54830fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/54830/54830fig3.jpg" /> איור 3: פגיעה חד צדדית עירוב בסטריאטום ו- Cortex ב 4 השבועות שלאחר tMCAO. אחורי אל קדמי, סעיפי מוח עטרת cresyl-מוכתם סגול (כל 50 מיקרומטר) שנבצרו P38 חיות להפגין פציעה חמורה למדי (החצים מראים היווצרות ציסטה ipsilateral והקטינו הקורטיקליתנפח של הסטריאטום) בעקבות tMCAO 3 שעות ב P10. החור העגול בצד שמאל מייצג מזהה בחצי כדור נגדי. סרגל קנה מידה = 5 מ&quot;מ. הודפס מחדש באישור לנוירוביולוגיה של 12 מחלות. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54830/54830fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Neonatal Stroke in P10 Rats at JoVE.com

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Neonatal Stroke in P10 Rats

Neonatal stroke is a significant cause of early brain injury requiring a translational model with consistent focal injury patterns and high reproducibility in order to enable study. This study describes the detailed surgical procedure for creating a non-hemorrhagic, unilateral focal ischemia-reperfusion injury in full-term-equivalent rodents.

עורקי חלוף דגם ספיג תיכון שיתוק של שבץ ילודים אצל חולדות P10

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature ...

transient-middle-cerebral-artery-occlusion-model-neonatal-stroke-p10

Research

JoVE Journal

Medicine

10.5K Views.  University of California, San Francisco. Neonatal stroke is a significant cause of early brain injury requiring a translational model with consistent focal injury patterns and high reproducibility in order to enable study. This study describes the detailed surgical procedure for creating a non-hemorrhagic, unilateral focal ischemia-reperfusion injury in full-term-equivalent rodents.

Video: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Neonatal Stroke in P10 Rats

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

דוגמנות שבץ בעכברים - העורקים התיכון ספיגה מוחין עם דגם נימה

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

Intraluminal העורקים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) מודל שבץ איסכמי עם הדרכה דופלר Flowmetry לייזר עכברים

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

ספיגה דו צדדי משותף עורק תרדמה כגירוי נפשית מראש מספיק כדי לגרום סובלנות איסכמי מוקדמת לאיסכמיה מוחית מיקוד

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

אנדותלין-1 דגם מושרה מזרח מוחות עורקים ספיגים לשבץ איסכמי עם הדרכת Flowmetry ליזר דופלר בעכברוש

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

ניצול חלון גולגולת לדמיין עורק המוח האמצעי במהלך ספיג אנדותלין-1 מושרה מזרח מוחות עורקים

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

מערכת אופטימלית לניטור זלוף מוחות במודל שבץ העכברוש של חסימת עורק מוח האמצעית intraluminal

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

דוגמנות שבץ בעכברים: קרישה קבועה של עורקי דיסטלי התיכון מוחין

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

עורקי תסחיפים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) לשבץ איסכמי עם קרישי דם הומולוגיים בחולדות

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week protocol for repetitive hypoxic preconditioning (RHP) induces long-term protection against central nervous system (CNS) injury in a mouse model of focal ischemic stroke. RHP consists of 9 stochastic exposures to hypoxia that vary in both duration (2 or 4 hr) and intensity (8% and 11% O2). RHP reduces infarct volumes, blood-brain barrier (BBB) disruption, and the post-stroke inflammatory response for weeks following the last exposure to hypoxia, suggesting a long-term induction of an endogenous CNS-protective phenotype. The methodology for the dual quantification of infarct volume and BBB disruption is effective in assessing neurovascular protection in mice with RHP or other putative neuroprotectants. Adult male Swiss Webster mice were preconditioned by RHP or duration-equivalent exposures to 21% O2 (i.e. room air). A 60 min transient middle cerebral artery occlusion (tMCAo) was induced 2 weeks following the last hypoxic exposure. Both the occlusion and reperfusion were confirmed by transcranial laser Doppler flowmetry. Twenty-two hr after reperfusion, Evans Blue (EB) was intravenously administered through a tail vein injection. 2 hr later, animals were sacrificed by isoflurane overdose and brain sections were stained with 2,3,5- triphenyltetrazolium chloride (TTC). Infarcts volumes were then quantified. Next, EB was extracted from the tissue over 48 hr to determine BBB disruption after tMCAo. In summary, RHP is a simple protocol that can be replicated, with minimal cost, to induce long-term endogenous neurovascular protection from stroke injury in mice, with the translational potential for other CNS-based and systemic pro-inflammatory disease states.

This protocol describes repetitive hypoxic preconditioning, or brief exposures to systemic hypoxia that reduce infarct volumes and blood-brain barrier disruption following transient middle cerebral artery occlusion in mice. It also details dual quantification of infarct volume and blood-brain barrier disruption after stroke to assess the efficacy of neurovascular protection.

כימות של הגנת עצבים וכלי דם בעקבות חסימת עורק חוזר חוסר חמצן אכשור קד וחלוף התיכון מוחין של עכברים

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...