Funding was provided by the NIH K08 NS064094 and UCSF REAC grants. The authors would like to acknowledge Nikita Derguin, Zinalda Vexler, and Joel Faustino for their assistance in the development of this technique.

Tüm hayvan araştırmaları, Hayvan Araştırmaları University of California, San Francisco Komitesi tarafından onaylandı ve Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım (Sağlık ve İnsan Hizmetleri, Yayın No: 85-23, 1985 US Department of Kılavuzu esaslarına göre yapıldı ). Hayvanlar yakından AAALAC tarafından akredite UCSF Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) ait veterinerler tarafından takip edildi. 8 günlük bir çöp bir dişi Sprague-Dawley sıçan (çöp başına 10 yavrular) ürün elde edildi. Yavrular 10 günlükken olana kadar anne ve yavruların, yiyecek ve su ad libitum verilmiştir ve IACUC protokolü başına günlük zenginleşme ile ısıya ve ışık kontrollü hayvan bakım tesisi, yerleştirildiler. Bu prosedürde kullanılan tüm cerrahi aletler sterilizasyonu sağlamak için otoklavlanmış bulundu. enstrüman ipuçları Sterilite ameliyat boyunca korunur. 1. Orta Serebral Arter Tıkanıklığı <ol><li> yavru ve ensur tartınE o uygun ağırlık (19-21 g) &#39;dir. % 100 O2 içerisinde% 3 izofluran yavru anestezisi ve bir ayak tutam yanıt olduğundan emin olun. Cerrahi aşamada altında bir ısıtma pedi kullanımı ile 35.5 ° C ve 37 ° C arasında vücut yüzey sıcaklığı muhafaza edin. </li><li> omuz bölgelerinde boyunca bant ile bir sırt üstü pozisyonda hayvan elde edin. steril pamuk ile, toplam dört çubuklar her çözeltisi arasında değişen, iki kez damıtılmış su içerisinde% 70 etanol çubukla ardından povidon-iyodin çözeltisi ile anterior servikal alan bez. </li><li> Lokal planlanan kesi sitesine 0.25% bupivakain sızmak. Bir stereoskop kullanarak, ortak karotid arteri (CCA) açığa çıkarmak için bir orta hat 5 ila 7 mm&#39;lik anterior servikal kesi yapmak. Açık ve açıkta arter boşluğunu tutmak için 2-4 Ekartörleri yerleştirin. </li><li> internal karotis arter (ICA), oksipital arter (OA) ve dış karotid arter (ECA) bulun. net bir görünüm elde etmek için arterleri damat. araba oluneful vagus siniri bozmamaya. NOT: yapay olarak ameliyat Yavruların için inicision açık bırakılır ve arterler kesi kapalı dikilir bundan sonra maruz kalmaktadır. genel anestezi süresi oklüzyon cerrahi edilene eşdeğerdir. </li><li> 6-0 ipek örgülü dikiş ipliğinin 1.5 cm kesilir. tek kollu çekerek, dikiş Unbraid. tek kablolu düzgün değil yıpranmış olduğundan emin olun. Not: Gerekirse, steril su içinde tek bir diziyi daldırma ve forsepsle uçları ile iplikçik tımar ile aşınmış uçları düz Im. </li><li> 45 derecelik forseps ile sütür sarmalını tutarken, forcep ipuçları IKA ve OA arasındaki ortaya böylece ICA altında gitmek için süpürme ark hareket forseps taşıyın. NOT: diseksiyon iyi yapılırsa, bu adım nispeten kolay olacaktır. ICA ve OA dokunmadan ise, ICA izole etmek forseps kullanıldığında arterleri parçalamak için dikkat edin. Kanama oluşursa, forseps kadar olan damarına basınç uygulamakKanama durur. steril bir pamuk ile kan emerler. </li><li> forseps tarafından düzenlenen dikiş ipliğinin ucundan tut ve bitiş erişimi kolay olacak şekilde çekin. Forseps iplikçik bırakın ve aşama 1.5 (Şekil 1A) hareketi tersine, ICA altından forseps geri. </li><li> baz, bu CCA ayıran yere en yakın en ICA etrafında geçici ligatürün bağlayın. NOT: olduğu sağlarken düğüm uzaklaştırmak için çekilmiş olacak sarmalının ucu kolayca forseps ile kavramak için (1 mm&#39;den daha büyüktür, en az 3 mm) yeterince uzun olup, böylece düğüm önemlidir Geri çekme düğüm diğer tarafında dikiş ipliğinin uygun miktarı. </li><li> Dikkatle yanal ICA geri ve kesi karşı tarafında koltuk altı bölgesine yakın fazla deriye ipliğini sağlamak için bir klip kullanın. Bu geri çekme ipliğine, sonraki adıma geçmeden önce kan akışını durduracak kadar gergin olmasını sağlayınkontrolsüz kanama riskini en aza indirmek. arter düz ve açık olduğu dikkate alınmalıdır. NOT: değil aşırı geri çekme, bu ICA kısmi veya tam aşınmaya sebep olabilir gibi yapın. Geri çekme klibi sadece ters yönünde sarmal üzerinde çekerek arteriyotomi yapmadan önce ayarlanabilir. </li><li> 1.5 adım olarak, altında ve ICA çevresinde başka örgüsüz dikiş ipliği ve ilmek kavramak 45 ° forseps kullanın. Pozisyon, bu şerit geri çekme telin (Şekil 1B) yanal. NOT: Bu adım da geri çekme öncesinde yapılabilir. Geri çekme kalitesi hakkında emin değilseniz, bu düğüm çok gevşek bir sonraki adımdan önce bağlı olabilir. </li><li> bağlı Ligatüre yakın erring, bağlı ve çözülmüş bitişik harfler arasında 0.2 mm&#39;lik bir arteriyotomi yarıda kesilir. NOT: Kan arteriotomi yoluyla boşaltababildiği bağladılar-off arterdeki kalan ancak 5 mcL geçmemelidir. hakimse kanama, dikkatlice bir itina ile, geri çekme geliştirmek için geri çekme ipliği çekmehükümsüz aşırı gerilimden arteri zarar. </li><li> Bir metrik cetvel kullanarak kapatıcı dikiş ölçülmesi ve reperfüzyon esnasında tıkayıcı çıkarılması için 2-3 mm bir ilave ödenek ile dikiş kesti. 45 derecelik forseps ile oklüder tutun ve ilerlemesi için bir durak noktası işaretleme, MCA ulaşmak için uygun uzunlukta bir viraj oluşturmak için düz forseps kullanabilir. Not: viraj silikon burun ucundan 10 mm oklüzyon uzunluğu bu ağırlık aralığında P10 Sprague Dawley veya Long Evans sıçan yavrularının için kullanılır. </li><li> 45 ° forseps kullanılarak, arteriyotomi içine silikon kaplı naylon oklüzyon dikiş yem ve MCA (Şekil 1C) için önceden belirlenmiş bir mesafe işaret viraj sütürü ilerletin. ilerleme pürüzsüz hissediyor emin olun; Direnç hissedilirse derhal ilerleme durdurun. ilerlemesi sırasında, kafasına doğru CC / ECA paralel bir yönde dikiş hedefliyoruz. NOT: dikiş gelişmiş dorsal doğru ise,hayvanın omurga, bu pterigopalatin arter (PTA) içine çalıştırabilir. Direnç ilerleme 3-5 mm sonra hissedilirse sütür PTA kavşak vurdu. Silikon kafa ilerleme yönünü ayarlamadan önce arteriotomi yakın olana kadar arterin dışarı oklüder yedekleyin. Tamamen arteriotomi gelen oklüder kaldırmak gerekli değildir. </li><li> Geçici bitişik harfleri bağlama adımı 1.10 (Şekil 1D) gelen halat kolu kullanılması ile tıkayıcı elde edin. </li><li> retraktörü klibi çıkarın. düğüm çıkarmak için çekilir düğüm iplik düz forseps ile kavramak kolay ve düğüm sıkıştırmak üzere çekilir telin daha uzun olduğu şekilde geçici ligatür iki ipliklerini kesin. NOT: onlar kapanmasından sonra boşluğunda arapsaçı kalmamak ipliklerini kadar kısa olmalıdır. </li><li> Ekartörleri çıkarın ve üç ila dört tek dikiş oluşturmak için 6-0 örgülü ipek kullanılarak boşluğu kapatın. </li><li> dan yavru çıkarınAnestezi oda havasında bir ısıtma pedi üzerine yerleştirin ve. sternal yatma korumak ve tamamen baraj dönmeden önce kurtarıldı emin olmak için yeterli kendine geldi kadar yavru izleyin. yavru 35.5 ° C ve 37 ° C arasındaki bir vücut yüzey sıcaklığını muhafaza emin olun. </li><li> oklüzyon sırasında izofluran anestezi altında difüzyon ağırlıklı manyetik rezonans görüntüleme (-MRG) yaralanma uygun indüksiyon doğrulamak için kullanılabilir. Şekil 2 tMCAO 9 esnasında DW-MRI ile tespit edilen süregelen iskemik yaralanma göstermektedir. Not: difüzyon ağırlıklı spin eko planar görüntüleme öncesi reperfüzyon 10-15 dakika gerçekleştirilir. tüm beyin Aşağıdaki darbe dizisi ayarları kullanarak seri 2 mm kalınlığındaki taç bölümleri ile görüntülendiği: TR / TE = 5.000 / 60 ms, 4 ortalamaları, görüş alanı = 35 mm, veri matrisi = 128x128, difüzyon gradyan süresi = 20 ms ayrılması = 29.7 ms, genlik = 70mT / m, ve b faktörü = 1.045 s / mm2.bu, beyin sapı gibi kortikal ilgisi ya da atipik iskemik yaralanma, bir eksikliği sergileyen hayvanlar hariç tutulur. </li></ol> 2. reperfüzyon NOT: Oklüzyon striatum ve korteks karıştığı yaralanma orta-şiddetli miktarda neden 3 saat gerçekleştirilir. <ol><li> Yaklaşık 2 saat ve MCA 50 dakika aşağıdaki oklüzyon da% 100 O2 içerisinde% 3 izofluran yavru anestezi. Cerrahi aşamada altında bir ısıtma pedi kullanımı ile 35.5 ° C ve 37 ° C arasındaki bir vücut yüzey sıcaklığı muhafaza edin. </li><li> İki bitişik harfler ve kapatıcı dikiş arka ucu ile işaretlenir birleşme, Aşama 1.16 kesintiye sütür çıkarın ve bulun. Not: Sahte ameliyat edilen hayvanlar ile indüklenen ve tıkanmış hayvanlara eşdeğer bir süre boyunca anestezi altında kalır. kesi kez daha açıldı ve kapalı dikilir. sham-hayvanlar için 2.11 adıma devam eder. </li><li> dikkatle çözen dıştaki düğüm daha önce uzun telinin çekilmesi ile adım 1.14 bağladılar. NOT: düğüm deponun direnç varsa, düğüm doğru şerit çekti ediliyor sağlamak için durdurun. Direnç devam ederse, daha iyi görebilmek için büyütme artırır. adımı sırasında arteri zarar mümkün olduğu gibi, deponun dikkatli olun. </li><li> boşluktan dikiş ipliğini çıkarın. </li><li> MCA tıkanıklığı sonrası tam olarak 3 saat sonra, yavaşça arter dışına kapatıcı dikiş geri. direniş yok olacaktır. NOT: Çoğu durumda, herhangi bir kanama olmaz. kanama az miktarda oluşursa, Arteriyotomi yerinde artere basınç uygulayın. </li><li> Bir sonraki adım reperfüzyon için ICA kan akışını geri yükler gibi arteriotomi baskı uygulamak için forseps kullanın. </li><li> Dikkatle adım 2.3 ile aynı yöntem kullanılarak orta düğümü çöz. </li><li> Vücuttan dikiş ipliğini çıkarın ve kanamayı durdurmak için arteriotomi bir hemostatik ajan uygulanır. </li&gt; <li> Kanama durduktan emin olun. NOT: atardamarın orijinal şekil ve kırmızı rengin Dönüşü ICA kan akımı restore edilmiştir onaylar. </li><li> Ekartörleri çıkarın ve 6-0 örgülü ipek üç dört sütürler ile boşluğu kapatın. </li><li> anesteziden yavru çıkarın ve oda havasında bir ısıtma yastığı yerleştirin. sternal yatma korumak ve baraj dönmeden önce tam bir iyileşme sağlamak için yeterli kendine geldi kadar izleyin. yavru 35.5 ° C ve 37 ° C arasındaki bir vücut yüzey sıcaklığını muhafaza emin olun. </li><li> 5 gün boyunca her gün yavrular inceleyin. Onların ağırlıklarını Recprd ve uygun iyileşmesi için yakından kesi siteleri inceleyin. 7-14 gün sonra dikiş çıkarın. 9 istenirse Sonrası tMCAO hasarı, MRI ile görüntülenebilir. NOT: Hayvanlar ilk gününde ağırlığının 1 grama kadar kaybedebilir ancak genellikle tartmak benzer dahilinde müdahalesi olmadan ağırlığı yeniden ve olacakgünlerde 4-5 ile denetimlere t aralık. Nadiren, bir yavru ağızdan sonda gerektiren 2-3 gün için beslenir, aşırı kilo veya zorluk besleme gerekebilir. </li><li> P21 anda, yaralanma güvenilir böyle totarod veya silindir yetiştirme olarak Sensorimotor davranışsal testler ile değerlendirilebilir. Bilişsel test bu yeni nesne tanıma ya da Morris su labirenti 13 olarak değerlendirmeleri kullanarak yaş kadar erken olarak 4-6 hafta uygulanabilir. </li><li> Beyin hasat 11, 12 için Euthasol intraperitoneal enjeksiyonu (50 mg / kg) ile sıçanlar öldürülür. </li><li> Histolojik analiz müdahalelere yaralanma hacmi veya yanıt krezil moru veya H &amp; E boyama (Şekil 3) 10 ile yapılabilir değerlendirmek. </li></ol>

<ol>
	<li>Grunt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+outcomes+of+symptomatic+neonatal+arterial+ischemic+stroke.">Incidence and outcomes of symptomatic neonatal arterial ischemic stroke.</a> Pediatrics. 135 (5), 1220-1228 (2015).</li><li>Rice, J. E., Vannucci 3rd, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat.">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Ann Neurol. 9 (2), 131-141 (1981).</li><li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema.+I:+a+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area.">Experimental studies of ischemic brain edema. I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn J Stroke. 8 (8), (1986).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li><li>Labat-gest, V., Tomasi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photothrombotic+ischemia:+a+minimally+invasive+and+reproducible+photochemical+cortical+lesion+model+for+mouse+stroke+studies.">Photothrombotic ischemia: a minimally invasive and reproducible photochemical cortical lesion model for mouse stroke studies.</a> J Vis Exp. (76), (2013).</li><li>Renolleau, S., Aggoun-Zouaoui, D., Ben-Ari, Y., Charriaut-Marlangue, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+transient+unilateral+focal+ischemia+with+reperfusion+in+the+P7+neonatal+rat:+morphological+changes+indicative+of+apoptosis.">A model of transient unilateral focal ischemia with reperfusion in the P7 neonatal rat: morphological changes indicative of apoptosis.</a> Stroke. 29 (7), 1454-1460 (1998).</li><li>Perlman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intervention+strategies+for+neonatal+hypoxic-ischemic+cerebral+injury.">Intervention strategies for neonatal hypoxic-ischemic cerebral injury.</a> Clin Ther. 28 (9), 1353-1365 (2006).</li><li>Derugin, N., Ferriero, D. M., Vexler, Z. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+reversible+focal+cerebral+ischemia:+a+new+model.">Neonatal reversible focal cerebral ischemia: a new model.</a> Neurosci Res. 32 (4), 349-353 (1998).</li><li>Gonzalez, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+increases+neurogenesis+and+oligodendrogliosis+of+subventricular+zone+precursor+cells+after+neonatal+stroke.">Erythropoietin increases neurogenesis and oligodendrogliosis of subventricular zone precursor cells after neonatal stroke.</a> Stroke. 44 (3), 753-758 (2013).</li><li>Larpthaveesarp, A., Georgevits, M., Ferriero, D. M., Gonzalez, F. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+erythropoietin+therapy+improves+histological+and+behavioral+outcomes+after+transient+neonatal+stroke.">Delayed erythropoietin therapy improves histological and behavioral outcomes after transient neonatal stroke.</a> Neurobiol Dis. , (2016).</li><li>Rutherford, M. A., Ramenghi, L. A., Cowan, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+stroke.">Neonatal stroke.</a> Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 97 (5), 377-384 (2012).</li><li>van der Aa, N. E., Benders, M. J., Groenendaal, F., de Vries, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+stroke:+a+review+of+the+current+evidence+on+epidemiology,+pathogenesis,+diagnostics+and+therapeutic+options.">Neonatal stroke: a review of the current evidence on epidemiology, pathogenesis, diagnostics and therapeutic options.</a> Acta Paediatr. 103 (4), 356-364 (2014).</li><li>Gonzalez, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+sustains+cognitive+function+and+brain+volume+after+neonatal+stroke.">Erythropoietin sustains cognitive function and brain volume after neonatal stroke.</a> Dev Neurosci. 31 (5), 403-411 (2009).</li><li>Dudink, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+unilateral+perinatal+arterial+ischemic+stroke+on+conventional+and+diffusion-weighted+MR+imaging.">Evolution of unilateral perinatal arterial ischemic stroke on conventional and diffusion-weighted MR imaging.</a> AJNR Am J Neuroradiol. 30 (5), 998-1004 (2009).</li><li>Derugin, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+resonance+imaging+as+a+surrogate+measure+for+histological+sub-chronic+endpoint+in+a+neonatal+rat+stroke+model.">Magnetic resonance imaging as a surrogate measure for histological sub-chronic endpoint in a neonatal rat stroke model.</a> Brain Res. 1066 (1-2), 46-56 (2005).</li><li>Dzietko, M., Wendland, M., Derugin, N., Ferriero, D. M., Vexler, Z. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+resonance+imaging+(MRI)+as+a+translational+tool+for+the+study+of+neonatal+stroke.">Magnetic resonance imaging (MRI) as a translational tool for the study of neonatal stroke.</a> J Child Neurol. 26 (9), 1145-1153 (2011).</li><li>Mancuso, A., Derugin, N., Hara, K., Sharp, F. R., Weinstein, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mild+hypothermia+decreases+the+incidence+of+transient+ADC+reduction+detected+with+diffusion+MRI+and+expression+of+c-fos+and+hsp70+mRNA+during+acute+focal+ischemia+in+rats.">Mild hypothermia decreases the incidence of transient ADC reduction detected with diffusion MRI and expression of c-fos and hsp70 mRNA during acute focal ischemia in rats.</a> Brain Res. 887 (1), 34-45 (2000).</li><li>Kasdorf, E., Hyperthermia Perlman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation,+and+Perinatal+Brain+Injury.">Inflammation, and Perinatal Brain Injury.</a> Pediatric Neurology. 49 (1), 8-14 (2013).</li><li>Bouley, J., Fisher, M., Henninger, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+between+coated+vs.+uncoated+suture+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+rat+as+assessed+by+perfusion/diffusion+weighted+imaging.">Comparison between coated vs. uncoated suture middle cerebral artery occlusion in the rat as assessed by perfusion/diffusion weighted imaging.</a> Neurosci Lett. 412 (3), 185-190 (2007).</li><li>Shimamura, N., Matchett, G., Tsubokawa, T., Ohkuma, H., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+silicon-coated+nylon+suture+to+plain+nylon+suture+in+the+rat+middle+cerebral+artery+occlusion+model.">Comparison of silicon-coated nylon suture to plain nylon suture in the rat middle cerebral artery occlusion model.</a> J Neurosci Methods. 156 (1-2), 161-165 (2006).</li><li>Kirton, A., deVeber, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paediatric+stroke:+pressing+issues+and+promising+directions.">Paediatric stroke: pressing issues and promising directions.</a> Lancet Neurol. 14 (1), 92-102 (2015).</li><li>Nelson, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perinatal+ischemic+stroke.">Perinatal ischemic stroke.</a> Stroke. 38, 742-745 (2007).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

protokol dahilinde Kritik adımlar Hem olgun ve olgun hayvanlarda yapılan beyin zedelenmesinin ilerlemesi ile ilgili her iki hipotermi 17 ve hipertermi 18 etkilerini orada bilinen İlk olarak, tam iyileşme kadar anestezi başlatılmasından normotermi muhafaza etmek önemlidir. hayvan güvence ve nefes izlemek ve trakea sıkıştırma serbest olmasını sağlamak için kesi, optimum konumlandırma geri çekmek ise İkincisi, esastır. Bu vagal stimülasyon ile kalp hızında değişikliklere neden olabileceğinden Üçüncüsü, sıkma veya vagus siniri germe kaçının. ICA geri çekme arteriotomi sırasında kanamayı kontrol etmek gereklidir çünkü Dördüncüsü, dikkatler arteri zarar vermemek için geri çekilme sırasında gerginlik derecesine ödenmelidir. arter retraksiyon gelen gözyaşı yoksa zayıf arteriyotomi kesi varsa veya hayvan nedeniyle riske analize dahil edilmelidirkanama ve kötü reperfüzyon. Değişiklikler ve sorun giderme Bir kılavuz olarak MRI kullanılarak, ameliyat dikiş ipliği uzunluğunun silikon ucu doğru fokal iskemi oluşturmak için MCA tıkar sağlamak için optimize edilebilir. MR mevcut değilse diseksiyon dikiş yerleşimini görselleştirmek için, yavruların reperfüzyon öncesi ötenazi olabilir. Gerektiğinde dikiş uzunluğu ayarlayın. yavru ağırlığı yüksek kapatıcı dikiş uzunluğu gereksinimleri ile ilişkilidir. tıkanma süresi yaralanma şiddetine derecesini ayarlamak için değiştirilebilir. Buna ek olarak, dikiş şekli ve uzunluğu çok önemlidir. 19-21 g ağırlığında P10 Sprague-Dawley ve Long Evans sıçanlarda için, 10 mm &#39;lik bir deneyim ekleme optimal uzunluğudur. kapatıcı dikiş Ayrıca yerleştirme, MCA delinmesi ile sonuçlanabilir. Ayrıca, her bir cerrahi kapatıcı filament şeklinde tutarlılık yaralanması p artan bir kıvama neden olurattern 19, 20. Bu nedenle, bu özel amaç için profesyonel olarak üretilmiş sütür ile önerilir. Yaralanma desen nedeniyle teknik görünüşte dakika farklılıklara uygulayıcıları arasında farklılık dikkat etmek de önemlidir. tekniğin Sınırlamalar Küçük bir de bu tekniği Sahne, kemirgen gelişmekte önemli bir deneyim gerektirir. Doğru şekilde gerçekleştirilmemesi durumunda, cerrah, farklı boyutlarda hayvanlar arasında çok tutarlı bir yaralanma modeline neden% 95 daha yüksek bir hayatta kalma oranına ulaşmak mümkün. Ayrıca, uygun cerrahi aletler gereklidir. Cerrahi aletler de tüm enstrüman ipuçları düzgün yaklaşmasının sağlanması sağlanmalıdır. mevcut veya alternatif yöntemlere göre bu tekniğin Önemi Hipoksi, iskemi veya pirinç-Vannucci modeli 2 iken </sup&gt;, en yaygın olarak gelişmekte olan beyinde hipoksik-iskemik tahribatın incelemek için kullanılır, bir reperfüzyon fazı takip küresel hipoksi olmadan geçici fokal iskemi, orada tMCAO bu model, HI farklı olduğuna dikkat etmek önemlidir zaman tıkanıklığı kaldırılır ve kan akımı geri yüklenir. Bu, daha tutarlı ve tekrarlanabilir bir yaralanmaya neden olur ve klinik olarak daha translasyonel tam dönem neonatal inme görülene benzer bir yaralanma modeli neden gereğidir. Bu odak yaralanma desen ve yaralanmamış dokuda telafi edici tepkiler etüdüne olanak sağlamıştır. Bu tekniği mastering sonra Gelecekteki uygulamalar Bu model, insan yenidoğanlarda inme en yaygın nedeni, doğum sonrası 11, 21 boyunca meydana gelen bir geçici tıkayan trombozun benzerdir. etiyolojisi tam olarak net değildir ve büyük ihtimalle birden fazla faktöre dayanmaktadır, ancak çoğu durumda t tahmin edilirO plasenta 11 geçen emboli elde edilmektedir. Buna ek olarak, daha sonra nöbet aktivitesi veya ince fokal nörolojik muayene ile sıklıkla kabul perinatal inmeli birçok yenidoğan 22 anormallikler. Bu yaralanma ilerlemesi ve hayati olası terapötik stratejilerin mekanizmalarını tanımlamak için tutarlı, translasyonel yaralanması modelini kullanır.

Yenidoğan döneminde İnme gibi birçok 2,300 1 olarak canlı doğumda 1 meydana gelen, ölüm ve sakatlıkların önemli bir nedenidir. Bu değişmiş merkezi sinir sistemi gelişimine yol açar ve epilepsi görülme sıklığındaki artışın, serebral palsi, mental retardasyon ve motor veya bilişsel işlev bozukluğunun diğer türler dahil uzun vadeli morbidite, arttı. Erken felç yaşam boyu etkileri, bu popülasyonda yaralanma ve onarım mekanizmalarını inceleyen yaralı beyni korumak için ya da onarım geliştirmek için stratejiler dahil olmak üzere translasyonel hayvan modelleri esansiyel olun. Farklı iskemi modelleri yetişkin hayvanlarda, beyin hasarı incelemek için kullanılan ve edilmiştir 2 prosedür genel olarak gelişmekte olan beyinde hipoksik-iskemik tahribatın incelemek için kullanılır Pirinç-Vannucci (Modifiye Levine), fokal iskemi-reperfüzyon hasarının bir tat mekanizması ise yaralı bir çekirdek ve penu ile fokal yaralanmaya nedenmbra ve zarar görmemiş uzaktan doku. Koizumi 3 ve Longa 4 model, sırasıyla ortak karotid arter (CCA) ve dış karotid arter (ECA) ile geçici orta serebral arter oklüzyonu elde etmek için yetişkin farelerde geliştirilmiştir. Her iki modelde de, kalıcı ligasyonu ve arter dallarının dağlama kanamayı en aza indirmek ve aynı zamanda hayvanın yeteneği beslemeye ve yaralanma aşağıdaki kilo almaya üzerinde olumsuz etkilere neden olmaktadır cerrahi işlem, düzene önemlidir. Bundan başka, olgun olmayan beyin belirgin yaralanma mekanizması ve bunun bir sonucu olarak görülen yaralanma özel desenler vardır. Daha yakın zamanlarda, Fototrombotik inme (Rose Bengal yöntemi) 5 ve kalıcı MCA ligasyonu 6 yenidoğan ve yetişkin inme incelemek için kullanılmıştır. Hem Fototrombotik inme ve MCA ligasyon reperfus eksikliği ile sonuçlanabilir serebral kan akışındaki kalıcı değişiklikler oluşturmakiyon. Reperfüzyon artan eksitotoksisite, serbest radikal oluşumu ve işemik fazı 7 farklı olan sinyal silsilesini kapsamaktadır gecikmeli hücre ölümüne yol açar nitrik oksit üretimi ile, fokal yaralanma gelişmesi ve ilerlemesi önemli bir bileşenidir. Hipoksi-iskemi de yaralı çekirdek ve daha zorlu penumbra çalışma yapmak, insanlarda hipoksik iskemik yaralanma neden farklıdır ve tutarlı bir fokal yaralanma modeli neden olmayan küresel hipoksi, ardından kalıcı tek taraflı karotid ligasyonu içerir. Daha önce geçici orta serebral arter oklüzyonu (MCAO) 8, 9, 10 kullanılarak olgunlaşmamış sıçan olmayan bir hemorajik inme, iskemi-reperfüzyon modeli tarif edilmiştir. Bu kere ve kalıcı ligati olmaksızın, iç karotid arter yoluyla MCA kapatır daha az invaziv bir yöntemdirveya dağlama. Bu perinatal dönemde 11, 12 inme en yaygın nedeni benzer yaralanma bir model sağlamaktadır. aynı taraftaki striatum ve temporoparyetal korteks hasarı yaralanma Bu sonuç, iskemi-reperfüzyon modeli. tMCAO Bu model aynı zamanda oklüzyonu süresini değiştirerek yaralanma şiddetine üzerinde kontrol sağlar. sinyal iletim yolakları ve yaralı çekirdek ve penumbra ve yaralanmamış ipsilateral ve kontralateral dokuda histolojik değişiklikler incelenmesi ayrıca olgunlaşmamış beyinde yaralanma ve onarım mekanizmaları aydınlatmak olabilir. Bu çalışma gelişmekte olan beyinde için bu önemli yaralanma modeli gösterecektir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Isoflourane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>50033</td>
			<td>anesthetic, at 3%&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trinocular Surgioscope</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>PSMT5N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>000731-500-000</td>
			<td>low to medium setting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IR Thermometer</td>
			<td>Extech Instruments</td>
			<td>72-5270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retraction kit for small animals&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18200-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CermaCut Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14958-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5SF Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>112522-00</td>
			<td>2x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5/45 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-35</td>
			<td>2x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-2 Micro Clamp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00398-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcepts for Clamp Application</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00072-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Vannas Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-03</td>
			<td>2mm cutting edge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Occlusion Sutures</td>
			<td>Doccol</td>
			<td>602123PK10</td>
			<td>701712PK5Re</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ruler</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic Agent&#160;</td>
			<td>Avitene</td>
			<td>DVL1010590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Perma-Hand Silk Reverse CuttingSuture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>769G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Euthasol</td>
			<td>Virbac</td>
			<td>710101</td>
			<td>0.22 ml/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tipped Applicators</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>100-9249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laboratory Tape</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89097-990</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transient middle cerebral artery occlusion model of neonatal stroke in p10 rats

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature and mature brain. Stroke occurs commonly in the perinatal period in humans, and transient ischemia-reperfusion is the most common form of stroke in neonates. The reperfusion phase is a critical component of injury progression, which occurs over a period of days to weeks, and of the endogenous response to injury. This postnatal day 10 (p10) rat model of transient middle cerebral artery occlusion (tMCAO) creates a unilateral, non-hemorrhagic focal ischemia-reperfusion injury that can be utilized to study the mechanisms of focal injury and repair in the full-term-equivalent brain. The injury pattern that is produced by tMCAO is consistent and highly reproducible and can be confirmed with MRI or histological analyses. The severity of injury can be manipulated through changes in occlusion time and other methods that will be discussed.

tMCAO kaynaklanan yaralanma şiddetine tıkanması süresi ve cerrahın tecrübesine hem son derece bağlıdır. 3 saat bir orta-ciddi hasar üretir ise bir 90 dk&#39;lık bir tıkanması, genellikle yaralanma modeli orta hafif üretir. Yaralanma Şiddeti MRI, histoloji, ya kısa ya da uzun vadeli davranışsal analizler de dahil olmak üzere yöntemler çeşitli aracılığıyla değerlendirilebilir. Şekil 2, DW-MR bir örnek aynı taraf yarım küre içeren iskemik hasarın işaret eden bir 90-dakikalık bir oklüzyonundan ve 75. dakikada gerçekleştirilir gösterir. Difüzyon ağırlıklı görüntüleme akut iskemik safhasında, kontralateral değişiklik olmadan, ipsilateral striatum ve ipsilateral korteksin çoğunluğunda difüzyon artışı ortaya koyduğunu. Bu korteks ve derin gri madde hem kapsayan uzun dönemli yaralanma ılımlı bir seviyeye ilişkilidir. MCA sonuçlarının Oklüzyondaha az şiddetli yaralanma striatumda başlar ve daha uzun tıkanıklığı süreleri ve daha şiddetli yaralanma kortikal ve hipokampal yaralanma kötüleşen geliştirir hücre ölümü. Bu tıkanma 14, 15, 16 boyunca düzgün bir dikiş yerleştirme ve ödem ve yaralanma ilerlemesinin görsel doğrulanması için izin verdiği cerrahi teknik optimizasyonu esnasında, bu tür ameliyat dikiş ipliği ekleme uzunluğunu belirlemek olarak, MR, önerilir. MR mevcut değilse, H &amp; E ya da krezil moru boyama yaralanması morfolojisi belirlemek için basit ve güvenilir bir histolojik metotlar ve tMCAO sonra erken ve geç zaman noktalarında hem de kullanılabilir. Şekil 3, aynı taraftaki striatum ve korteks kist oluşumuna ve hacim gösteren, bir 3 saat oklüzyon aşağıdaki histopatolojik incelemede bir orta-ciddi yaralanma modeli gösterir. <p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1"&gt; Karşı hemisferik hacim ipsilateral oranını hesaplamak için kresil-moru ile boyanmış bölümlerin Unbiased stereolojik ölçümü aynı taraftaki iskemik-reperfüzyon yaralanması teyit etmektedir. Spesifik olarak, Euthasol hayvana anestezi sonra beyin% 4 paraformaldehid ile, 0.1 M PBS içinde transkardiyak perfüzyon ile hasat edilmiştir. % 30 sukroz içinde bir gece boyunca postfiksasyon ve dengelemeden sonra, tüm beyin 50 um aralıklarla bölümlere ayrılmıştır ve her on ikinci bölüm seçildi, monte edilmiş ve kresil moru 10 ile boyanmıştır. Hatta hafif hasar, örneğin çizerek ve hemiparezi olarak lokomotor değişiklikleri ile, oklüzyon sürecinin not edilir. daha şiddetli yaralanma, bu değişikliklerin reperfüzyon sonrası devam edecektir. Ek davranış testi sensorimotor fonksiyonu için rotarod veya silindir yetiştirme testi ve Morris su labirent için dahil olmak üzere yaralanma şiddetini değerlendirmek için kullanılabilirkognitif fonksiyon 13. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54830/54830fig1.jpg" /> Şekil 1: tMCAO Muhakemeleri Canlı Cerrahi Görüntüleri. Adım 1.6 ayrıntılı olarak, (A) ilk dikiş kordon, ICA kısmının etrafında döndürülür. (B) ilk geçici ligatür bağlanır ve ICA geri çekilir. Adım 1.9 ayrıntılı olarak ikinci bir dikiş kolu, birinci dikiş ipliğine yanal ICA kısmının etrafında döndürülür. Adım 1.12 ayrıntılı olarak (C), silikon kaplamalı oklüzyon dikiş, arteriyotomi beslenir. Adım 1.14 ayrıntılı olarak (D) ikinci geçici birleştirme, yerine kapatıcı sabitlemek için bağlıdır. Ölçü bar = 1 mm. <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54830/54830fig2.jpg" /> Occl sırasında MR: Şekil 2,usion Uygun Tek Taraflı Yaralanması gösterir. Ön akut fazda devam eden işemik yaralanması ile tutarlıdır ipsilateral hemisferi (oklar), içeren artmış difüzyon göstermektedir, posterior 90 dakika oklüzyon sırasında gerçekleştirilen-MRG koronal görüntü dilimleri için. Stroke 11 izniyle. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54830/54830fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54830/54830fig3.jpg" /> Şekil 3: tMCAO takip eden 4 hafta striatum ve Cortex katılımı tek taraflı Sakatlık. Arka kresil-moru ile boyanan koronal beyin kesitleri S38 hayvanlardan toplanan (her biri 50 um) göstermektedir, oldukça ağır yaralanma (oklar aynı taraftaki kist oluşumuna ve kortikal düşük ve anteriorP10 bir 3 saat tMCAO aşağıdaki striatal hacmi). Sol tarafta yuvarlak delik Kontralateral hemisferde temsilcidir. Ölçü bar = 5 mm olmalıdır. Hastalık 12 Nörobiyoloji izniyle. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54830/54830fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Neonatal Stroke in P10 Rats at JoVE.com

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Neonatal Stroke in P10 Rats

Neonatal stroke is a significant cause of early brain injury requiring a translational model with consistent focal injury patterns and high reproducibility in order to enable study. This study describes the detailed surgical procedure for creating a non-hemorrhagic, unilateral focal ischemia-reperfusion injury in full-term-equivalent rodents.

P10 Sıçanlarda Yenidoğan İnme Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature ...

transient-middle-cerebral-artery-occlusion-model-neonatal-stroke-p10

Research

JoVE Journal

Medicine

10.5K Görüntüleme.  University of California, San Francisco. Neonatal stroke is a significant cause of early brain injury requiring a translational model with consistent focal injury patterns and high reproducibility in order to enable study. This study describes the detailed surgical procedure for creating a non-hemorrhagic, unilateral focal ischemia-reperfusion injury in full-term-equivalent rodents.

Video: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Neonatal Stroke in P10 Rats

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

Fare Modelleme İnme - Filament Model Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Tıp

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

Odak Serebral İskemi Erken İskemik Tolerans tetikleyebilecek bir Yeterli Önkoşullama Uyarıcı olarak bilateral Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

Rat Lazer Doppler Flowmetri Rehberlik ile İskemik İnme için Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı sırasında Orta Serebral Arter görselleştirin bir Kranial Pencere kullanmak

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

Farelerde Modelleme İnme: Distal Orta Serebral Arter Daimi Pıhtılaşma

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Sıçanlar Homolog Kan pıhtısı ile İskemik İnme emboli Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO)

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week protocol for repetitive hypoxic preconditioning (RHP) induces long-term protection against central nervous system (CNS) injury in a mouse model of focal ischemic stroke. RHP consists of 9 stochastic exposures to hypoxia that vary in both duration (2 or 4 hr) and intensity (8% and 11% O2). RHP reduces infarct volumes, blood-brain barrier (BBB) disruption, and the post-stroke inflammatory response for weeks following the last exposure to hypoxia, suggesting a long-term induction of an endogenous CNS-protective phenotype. The methodology for the dual quantification of infarct volume and BBB disruption is effective in assessing neurovascular protection in mice with RHP or other putative neuroprotectants. Adult male Swiss Webster mice were preconditioned by RHP or duration-equivalent exposures to 21% O2 (i.e. room air). A 60 min transient middle cerebral artery occlusion (tMCAo) was induced 2 weeks following the last hypoxic exposure. Both the occlusion and reperfusion were confirmed by transcranial laser Doppler flowmetry. Twenty-two hr after reperfusion, Evans Blue (EB) was intravenously administered through a tail vein injection. 2 hr later, animals were sacrificed by isoflurane overdose and brain sections were stained with 2,3,5- triphenyltetrazolium chloride (TTC). Infarcts volumes were then quantified. Next, EB was extracted from the tissue over 48 hr to determine BBB disruption after tMCAo. In summary, RHP is a simple protocol that can be replicated, with minimal cost, to induce long-term endogenous neurovascular protection from stroke injury in mice, with the translational potential for other CNS-based and systemic pro-inflammatory disease states.

This protocol describes repetitive hypoxic preconditioning, or brief exposures to systemic hypoxia that reduce infarct volumes and blood-brain barrier disruption following transient middle cerebral artery occlusion in mice. It also details dual quantification of infarct volume and blood-brain barrier disruption after stroke to assess the efficacy of neurovascular protection.

Farelerde Tekrarlanan Hipoksik Önkoşullanma ve Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ardından Nörovasküler Koruma Kantitasyonu

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...