This work was funded by a grant from the National Medical Research Council of Singapore (NMRC/CIRG/1335/2012) awarded to Professor Kesavan Esuvaranathan.

<ol>
	<li>Gunther, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+(MB49).">Optimizing syngeneic orthotopic murine bladder cancer (MB49).</a> Cancer Res. 59, 2834-2837 (1999).</li><li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+murine+bladder+cancer.">An orthotopic model of murine bladder cancer.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2011).</li><li>Chade, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histopathological+characterization+of+a+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+model.">Histopathological characterization of a syngeneic orthotopic murine bladder cancer model.</a> Int Braz J Urol. 34, 220-226 (2008).</li><li>Chan, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+orthotopic+bladder+tumor+implantation+in+a+syngeneic+mouse+model.">Optimizing orthotopic bladder tumor implantation in a syngeneic mouse model.</a> J Urol. 182, 2926-2931 (2009).</li><li>Kasman, L., Voelkel-Johnson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+bladder+cancer+model+for+gene+delivery+studies.">An orthotopic bladder cancer model for gene delivery studies.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50181 (2013).</li><li>Ninalga, C., Loskog, A., Klevenfeldt, M., Essand, M., Totterman, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CpG+oligonucleotide+therapy+cures+subcutaneous+and+orthotopic+tumors+and+evokes+protective+immunity+in+murine+bladder+cancer.">CpG oligonucleotide therapy cures subcutaneous and orthotopic tumors and evokes protective immunity in murine bladder cancer.</a> J Immunother. 28, 20-27 (2005).</li><li>Tham, S. M., Ng, K. H., Pook, S. H., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+and+Microenvironment+Modification+during+Progression+of+Murine+Orthotopic+Bladder+Cancer.">Tumor and Microenvironment Modification during Progression of Murine Orthotopic Bladder Cancer.</a> Clin Dev Immunol. , 865684 (2011).</li><li>Chin, J., Kadhim, S., Garcia, B., Kim, Y. S., Karlik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+resonance+imaging+for+detecting+and+treatment+monitoring+of+orthotopic+murine+bladder+tumor+implants.">Magnetic resonance imaging for detecting and treatment monitoring of orthotopic murine bladder tumor implants.</a> J Urol. 145, 1297-1301 (1991).</li><li>Kikuchi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+quantitative+analysis+of+early+stage+orthotopic+murine+bladder+tumor+using+in+vivo+magnetic+resonance+imaging.">Detection and quantitative analysis of early stage orthotopic murine bladder tumor using in vivo magnetic resonance imaging.</a> J Urol. 170, 1375-1378 (2003).</li><li>Sweeney, S. K., Luo, Y., O'Donnell, M. A., Assouline, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnology+and+cancer:+improving+real-time+monitoring+and+staging+of+bladder+cancer+with+multimodal+mesoporous+silica+nanoparticles.">Nanotechnology and cancer: improving real-time monitoring and staging of bladder cancer with multimodal mesoporous silica nanoparticles.</a> Cancer nanotechnology. 7, 3 (2016).</li><li>Tanaka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+detection+of+bladder+cancer+in+an+orthotopic+murine+model+with+green+fluorescence+protein+cytology.">Noninvasive detection of bladder cancer in an orthotopic murine model with green fluorescence protein cytology.</a> J Urol. 170, 975-978 (2003).</li><li>Jurczok, A., Fornara, P., Soling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence+imaging+to+monitor+bladder+cancer+cell+adhesion+in+vivo:+a+new+approach+to+optimize+a+syngeneic,+orthotopic,+murine+bladder+cancer+model.">Bioluminescence imaging to monitor bladder cancer cell adhesion in vivo: a new approach to optimize a syngeneic, orthotopic, murine bladder cancer model.</a> BJU Int. 101, 120-124 (2008).</li><li>Newton, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-interleukin-10R1+monoclonal+antibody+in+combination+with+bacillus+Calmette--Guerin+is+protective+against+bladder+cancer+metastasis+in+a+murine+orthotopic+tumour+model+and+demonstrates+systemic+specific+anti-tumour+immunity.">Anti-interleukin-10R1 monoclonal antibody in combination with bacillus Calmette--Guerin is protective against bladder cancer metastasis in a murine orthotopic tumour model and demonstrates systemic specific anti-tumour immunity.</a> Clin Exp Immunol. 177, 261-268 (2014).</li><li>Patel, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transabdominal+micro-ultrasound+imaging+of+bladder+cancer+in+a+mouse+model:+a+validation+study.">Transabdominal micro-ultrasound imaging of bladder cancer in a mouse model: a validation study.</a> Urology. 75, 799-804 (2010).</li><li>Wu, Q., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+the+response+of+orthotopic+bladder+tumors+to+granulocyte+macrophage+colony-stimulating+factor+therapy+using+the+prostate-specific+antigen+gene+as+a+reporter.">Monitoring the response of orthotopic bladder tumors to granulocyte macrophage colony-stimulating factor therapy using the prostate-specific antigen gene as a reporter.</a> Clin Cancer Res. 10, 6977-6984 (2004).</li><li>Luo, Y., Chen, X., O'Donnell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+prostate+specific+antigen+to+measure+bladder+tumor+growth+in+a+mouse+orthotopic+model.">Use of prostate specific antigen to measure bladder tumor growth in a mouse orthotopic model.</a> J Urol. 172, 2414-2420 (2004).</li><li>Coralli, C., Cemazar, M., Kanthou, C., Tozer, G. M., Dachs, G. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+of+the+reporter+green+fluorescent+protein+under+simulated+tumor+conditions.">Limitations of the reporter green fluorescent protein under simulated tumor conditions.</a> Cancer Res. 61, 4784-4790 (2001).</li><li>Biot, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preexisting+BCG-specific+T+cells+improve+intravesical+immunotherapy+for+bladder+cancer.">Preexisting BCG-specific T cells improve intravesical immunotherapy for bladder cancer.</a> Sci Transl Med. 4 (137), 137ra172 (2012).</li><li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+near-infrared+cell+tracker+reagent+for+multiscopic+in+vivo+imaging+and+quantification+of+leukocyte+immune+responses.">A near-infrared cell tracker reagent for multiscopic in vivo imaging and quantification of leukocyte immune responses.</a> PLoS One. 2, 1075 (2007).</li><li>Jozwicki, W., Brozyna, A. A., Siekiera, J., Slominski, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequency+of+CD4+CD25+Foxp3++cells+in+peripheral+blood+in+relation+to+urinary+bladder+cancer+malignancy+indicators+before+and+after+surgical+removal.">Frequency of CD4+CD25+Foxp3+ cells in peripheral blood in relation to urinary bladder cancer malignancy indicators before and after surgical removal.</a> Oncotarget. , (2016).</li><li>Walk, E. L., McLaughlin, S. L., Weed, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-frequency+Ultrasound+Imaging+of+Mouse+Cervical+Lymph+Nodes.">High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes.</a> J Vis Exp. , e52718 (2015).</li><li>Rooks, V., Beecken, W. D., Iordanescu, I., Taylor, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonographic+evaluation+of+orthotopic+bladder+tumors+in+mice+treated+with+TNP-470,+an+angiogenic+inhibitor.">Sonographic evaluation of orthotopic bladder tumors in mice treated with TNP-470, an angiogenic inhibitor.</a> Academic radiology. 8, 121-127 (2001).</li><li>Folin, O., Morris, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+determination+of+creatinine+and+creatine+in+urine.">On the determination of creatinine and creatine in urine.</a> JBC. 17, 469-473 (1914).</li><li>Dykman, L. A., Bogatyrev, V. A., Khlebtsov, B. N., Khlebtsov, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protein+assay+based+on+colloidal+gold+conjugates+with+trypsin.">A protein assay based on colloidal gold conjugates with trypsin.</a> Anal Biochem. 341, 16-21 (2005).</li><li>Shi, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Joint+enhancement+strategy+applied+in+ECL+biosensor+based+on+closed+bipolar+electrodes+for+the+detection+of+PSA.">Joint enhancement strategy applied in ECL biosensor based on closed bipolar electrodes for the detection of PSA.</a> Talanta. 154, 169-174 (2016).</li><li>Ma, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrochemiluminescent+immunosensing+of+prostate-specific+antigen+based+on+silver+nanoparticles-doped+Pb+(II)+metal-organic+framework.">Electrochemiluminescent immunosensing of prostate-specific antigen based on silver nanoparticles-doped Pb (II) metal-organic framework.</a> Biosensors &amp; bioelectronics. 79, 379-385 (2016).</li><li>Kavosi, B., Salimi, A., Hallaj, R., Moradi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasensitive+electrochemical+immunosensor+for+PSA+biomarker+detection+in+prostate+cancer+cells+using+gold+nanoparticles/PAMAM+dendrimer+loaded+with+enzyme+linked+aptamer+as+integrated+triple+signal+amplification+strategy.">Ultrasensitive electrochemical immunosensor for PSA biomarker detection in prostate cancer cells using gold nanoparticles/PAMAM dendrimer loaded with enzyme linked aptamer as integrated triple signal amplification strategy.</a> Biosensors &amp; bioelectronics. 74, 915-923 (2015).</li><li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-species+comparison+of+orthologous+gene+expression+in+human+bladder+cancer+and+carcinogen-induced+rodent+models.">Cross-species comparison of orthologous gene expression in human bladder cancer and carcinogen-induced rodent models.</a> Am J Transl Res. 3, 8-27 (2010).</li><li>Gong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+Novel+Bladder+Cancer+Xenograft+Model+in+Humanized+Immunodeficient+Mice.">Establishment of a Novel Bladder Cancer Xenograft Model in Humanized Immunodeficient Mice.</a> Cellular physiology and biochemistry : international journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 37, 1355-1368 (2015).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

השלבים הקריטיים ביותר בפרוטוקול הם 1) בהצלחה שמירה על tumorigenicity של הקו הסלולרי; 2) להבטיח הפרשת PSA למדידה לפני ההשתלה תאים סרטניים בעכברים; 3) יצירת השעית תא יחיד להשתלה כדי להפחית וריאציה בגודל גידולים; ו -4) הקניית תאים בקצב איטי כדי למנוע ריפלוקס vesico-השופכן, וכתוצאה מכך ה...

המטרה של שיטה זו היא ליצור גידולים בשלפוחית ​​שתן orthotopic murine וכן לפקח על הגידולים המושתלים באופן מדויק ככל האפשר, כך שהעכברים ללא השתלת גידול לא מיוחסים נרפאו ב ניתוח נקודת סיום. בסך הכל, השיטה לראות תפחית את צורך כמויות גדולות של עכברים לניתוח הניסיון ולהבטיח דיוק רב יותר בקביעת תוצאות טיפוליות. פיתוח מודל orthotopic לסרטן חשוב, כמו תאים סרטניים להשתיל מתחת לעור לא לשחזר את הסביבה של מחלה קלינית או לאפשר פיתוח של אסטרטגיות טיפוליות. הארכיטקטורה של שלפוחית ​​השתן מאפשרת ההחדרה של טיפולים בסרטן שלפוחית ​​השתן ישירות לתוך שלפוחית ​​השתן עם תופעות מערכתיות מינימאליות. לכן, במודלים של בעלי חיים כי לשחזר בסביבה זו, כגון מודל orthotopic, שחשובים להעריך טיפולים חדשים. מסקנות מכל ניסוי הגדרה הם dependent על מגבלות המודל. טכניקות פותחו מספר לייצור גידולים בשלפוחית ​​השתן orthotopic בעכברים. אלה מסתמכים על הפגיעה בשכבת glycosaminoglycan של שלפוחית ​​השתן, מה שמאפשר לתאים נגועים להיות מושתלים. הטכניקות בשימוש כוללות electrocautery, שתוצאתה נקודה אחת של נזק לדופן השלפוחית, מה שמוביל להתפתחות גידולים באתר אחד בשלפוחית 1,2. עם זאת, שיעור ההצלחה של השתלת גידול באמצעות electrocautery הוא מפעיל תלוי הנע בין 10 - 90%, והיא כוללת את הסכנה כי לדופן השלפוחית ​​יהיה נקב, שמובילה גידולים המתפתחים חלל הצפק. כווייה כימית מתבצעת באמצעות כסף חנק, אשר פוגע בקיר השלפוחית 3. באופן דומה, חומצה נעשה שימוש כדי לפגוע בקיר השלפוחית 4. טריפסין גם נעשה שימוש כדי לפגוע השלפוחית כמו גם 5. שיטות אלה עלולות לגרום להתפתחות של יותר מ גידול אחד בשלפוחית.יתר על כן, קיימת סכנה של נזק חמור השלפוחית ​​אם הכימיקלים נשארים במגע עם דופן השלפוחית ​​במשך זמן רב מדי. השיטה שפותחה על ידי Ninalga et al. משתמש פולי- L- ליזין בעלי המטען החשמלי החיובי (PLL) 6 מולקולות כדי לצפות את קיר שלפוחית השתן; זה מאפשר לתאי הגידול טעונים שלילית להיצמד שכבת glycosaminoglycan של שלפוחית ​​השתן. שיטה זו בדרך כלל תוצאות יותר גידול אחד לפתח בשלפוחית, אך השתלת גידול היא 80 - 100% 4,7. מבחינה טכנית, זה גם ההליך הקל ביותר לבצע. כדי להבטיח כי הגידולים המתפתחים הם די אפילו בגודל, חשוב כי התאים הסרטניים אינם מקובצי גושים גדולים לפני ההשתלה. על מנת להעריך יעילות טיפולית, עדיף לבצע מחקר זה על עכברים עם גידולים בגודל דומים למדי. לפיכך, מערכת זיהוי טובה שיכול לכמת גודל גידול קצר לאחר ההשתלה היא חשובה. יש מספר אסטרטגיות דבורהn המשמש להערכת גידולים. אלה כוללים הדמיה בתהודה מגנטית (MRI) 8-10, קרינת 11, פליטת אור 12,13, אולטרסאונד 14, ו assay immunosorbent enzyme-linked (ELISA) 15,16. בעוד MRI ואולטרסאונד אינו דורשים שינויים של התאים הסרטניים, יש צורך סוכני ציוד והניגודיות רגישים עבור MRI. Fluorescence-, luminescence-, המבחנים המבוססים ELISA דורשים שינוי של התאים הסרטניים לבטא חלבוני סמן שיכול להיות מזוהה על ידי שיטות אלה. לקבלת הארה, מצע נדרש לצורך זיהוי של פעילות בלוציפראז; ובכך, יש שלב מוסף התייקרות. שניהם הארת הקרינה דורשות ציוד מיוחד. כדי לייצר קרינה, חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) cyclization, אשר מזורז על ידי חמצן מולקולרי, נדרש. לפיכך, ביטוי של GFP עשוי להיות משתנה בתוך מסת גידול תלוי גישת החמצן, מה שהופך את סמן למדי אמין <sup&gt; 17. שינוי של שורת התאים בעכברי שלפוחית שתן סרטן MB49 להפריש אנטיגן ספציפי לערמונית אדם (PSA) 15,16 כסמן פונדקאי הוא אסטרטגיה אחרת. סמנים אלה גם לספק אמצעים חלופיים המאשר נוכחות גידול על סיום הניסוי, מה שהופך אותם כחלופה אימונוהיסטוכימיה. מחקר זה מדווח על שיטת PLL של השתלת גידול orthotopic ומציג השוואה של מערכות גילוי גידול, כלומר ELISA, קרינה, והדמית אולטרסאונד.

<table><tbody><tr><td>MB49-PSA cells</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>ref (Wu QH, 2004)</td></tr><tr><td>RPMI 1640 media</td><td>HyClone</td><td>SH30027.01&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&#039;s Modified Eagle&#039;s Medium (DMEM) media</td><td>Biowest</td><td>L0102</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS) South American</td><td>Biowest</td><td>S1810</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS) South American, Premium</td><td>Biowest</td><td>S181B</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>HyClone</td><td>SH30088.03&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Biowest</td><td>X0550</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Biowest</td><td>L0022</td><td></td></tr><tr><td>Hygromycin B</td><td>Invitrogen</td><td>10687-010</td><td></td></tr><tr><td>free PSA (Human) ELISA kit</td><td>Abnova</td><td>KA0209</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Reagent for RNA extraction&amp;nbsp;</td><td>Ambion</td><td>15596026</td><td></td></tr><tr><td>High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit with RNase Inhibitor</td><td>Applied Biosystems</td><td>4374967</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Universal PCR Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>4304437</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Assay &amp;ndash; Mouse Actb</td><td>Applied Biosystems</td><td>4331182</td><td>Mm00607939_s1</td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Assay &amp;ndash; Human KLK3</td><td>Applied Biosystems</td><td>4331182</td><td>Hs00426859_g1</td></tr><tr><td>C57BL/6J female mice</td><td>In Vivos</td><td></td><td>4 - 6 wk old</td></tr><tr><td>Anesthesia (75 mg/kg Ketamine and 1 mg/kg Medetomidine)</td><td>Local pharmacy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Reversal drug (1 mg/kg Atipamezole)</td><td>Local pharmacy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ear punch</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72893-01</td><td></td></tr><tr><td>Hartmann&#039;s solution or Compound sodium lactate</td><td>B Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ophthalmic ointment - Duratears sterile ocular lubricant ointment</td><td>Alcon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heat pack - HotHands handwarmers</td><td>Heatmax Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Introcan Certo IV catheter</td><td>B Braun</td><td>4251300</td><td>24 G x 3/4&amp;Prime;</td></tr><tr><td>Aquagel Lubricating jelly</td><td>Local pharmacy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-lysine solution, 0.01%,</td><td>Sigma</td><td>P4707</td><td></td></tr><tr><td>cOmplete, Mini, EDTA-free Protease Inhibitor Cocktail</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td></td></tr><tr><td>Quantichrom Creatinine Assay Kit</td><td>BioAssay Systems</td><td>DICT-50&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescent dye - VivoTrack 680</td><td>Perkin Elmer</td><td>NEV12000&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>RNAlater-ICE Frozen Tissue Transition Solution</td><td>Ambion</td><td>4427575</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Equipment and Software&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>7500 Realtime PCR System</td><td>Applied Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7500 Software v2.3</td><td>Applied Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metabolic Cage</td><td>Tecniplast&amp;nbsp;</td><td>Vertical type rack for 12 cages</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSCanto I system&amp;nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD FACSDiva software v7</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IVIS SpectrumCT &lt;em&gt;in vivo&lt;/em&gt; imaging system&amp;nbsp;</td><td>Caliper Life Sciences&amp;nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Living Image Software v3.1</td><td>Caliper Life Sciences&amp;nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vevo 2100 imaging system&amp;nbsp;</td><td>VisualSonics&amp;nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

a murine orthotopic bladder tumor model and tumor detection system

פרוטוקול זה מתאר את הדור של גידולים בשלפוחית ​​השתן אצל נקבות עכברים C57BL / 6J באמצעות שורת תאים סרטניים בשלפוחית ​​השתן בעכברים MB49, אשר שונתה כדי להפריש אנטיגן ספציפי לערמונית האדם (PSA), ואת ההליך לאישור של ההשתלה הגידול. בקיצור, עכברים מורדמים באמצעות תרופות להזרקה והם עשויים להניח במצב הגבה. שתן מתפנה מן השלפוחית ​​50 μL של פולי- L- ליזין (PLL) הוא החדיר לאט בקצב של 10 μL / 20 שניות באמצעות קטטר 24 G IV. הוא עזב בשלפוחית ​​במשך 20 דקות על ידי וסותם את הקטטר. צנתר מוסר PLL הוא שפונה על ידי לחץ עדין על שלפוחית ​​השתן. זה ואחריו החדרה של הקו הסלולרי בעכברים שלפוחית השתן סרטן (1 x 10 5 תאים / 50 μL) בשיעור של 10 μL / 20 שניות. קטטר פקוק למנוע פינוי מוקדם. לאחר h 1, העכברים הם החיו עם תרופת היפוך, ואת שלפוחית ​​השתן שהתפנה. שיעור ההחדרה האיטי חשוב,כפי שהיא מקטינה ריפלוקס vesico-השופכן, אשר יכול לגרום לגידולים להתרחש בדרכי השתן העליונות בכליות. שורת התא צריך להיות גם מחדש תלוי להפחית clumping של תאים, כמו זה יכול להוביל בגדלי גידול אחידים לאחר השתלה. טכניקה זו גורמת גידולים עם יעילות גבוהה. צמיחת גידול מנוטרת על ידי הפרשת PSA שתן. ניטור סמן PSA הוא יותר אמין יותר מאשר אולטרסאונד או דימות פלואורסצנטי לאיתור נוכחות של גידולים בשלפוחית. גידולים בעכברים בדרך כלל להגיע לגודל מקסימאלי משפיע לרעה בריאות בכ 3 - 4 שבועות אם אינו מטופל. באמצעות מעקב אחר צמיחת הגידול, אפשר להבחין עכברים נרפאו מאלו שלא הושתלו בהצלחה עם גידולים. עם ניתוח נקודת סיום רק, זה האחרון עשוי להניח בטעות נרפא על ידי טיפול.

הפרשת PSA מתאי MB49 נמצאה להשתנות עם תקשורת הצמיחה. MB49-PSA הוא גדל DMEM התקשורת כי זה תוצאות הפרשת PSA מוגבר (איור 1 א). כדי לקבוע את הרגישות של ELISA PSA בזמן אמת PCR, מספרים שונים של תאים מפרישי MB49-PSA היו מעורבים עם תאים הורית MB49. PSA ELISA מזהה מינימום של 1 x 10 5...

Watch this Scientific Journal Video about A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System at JoVE.com

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

פרוטוקול זה מתאר את הדור של גידולים בשלפוחית ​​השתן בעכברים orthotopic אצל נקבות עכברים C57BL / 6J ועל ניטור של הגידול.

מודל גידול Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן סרטן מערכת איתור

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

a-murine-orthotopic-bladder-tumor-model-and-tumor-detection-system

Research

JoVE Journal

Cancer Research

14.6K Views.  National University of Singapore, National University Health System.  פרוטוקול זה מתאר את הדור של גידולים בשלפוחית ​​השתן בעכברים orthotopic אצל נקבות עכברים C57BL / 6J ועל ניטור של הגידול. 

Video: A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is important to control peritoneal dissemination. However, it is still unclear how tumor cells detach from primary lesions and attach to the mesothelium. The establishment of an appropriate animal model is needed to gain an understanding of the mechanism of peritoneal dissemination in vivo. In the current study, we introduce the process from the local injection of EOC cells into the murine ovarian surface to the development of metastasis, including the peritoneum and distant organs. Female nude mice (BALB/c nu/nu) at 8 weeks of age were used. Under a microscopic field of view, EOC cells (1 x 105 cells/&#181;l of medium-extracellular matrix (ECM)-based hydrogel/unilateral ovary/mouse) were injected into murine ovaries through a retroperitoneal approach from the dorsal flank. This proposed method is a less invasive procedure for the mouse and minimizes damage to the ovary. Here, we describe the methodological steps in the development of the original and metastatic tumor formation of EOC.

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

To clarify the multistep process of peritoneal dissemination of ovarian carcinoma, the current study presents a murine experimental model of original tumor development and peritoneal metastasis via orthotopic inoculation with these tumor cells.

Murine ניסיוני דגם של התפתחות גידולים מקורית גרור הצפק<em&gt; דרך</em&gt; Orthotopic הרכבה עם קרצינומה של תאי השחלות

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית ​​השתן Murine

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Medicine

Magnetic Resonance Imaging Assessment of Carcinogen-induced Murine Bladder Tumors

Murine bladder tumor models are critical for the evaluation of new therapeutic options. Bladder tumors induced with the N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine (BBN) carcinogen are advantageous over cell line-based models because they closely replicate the genomic profiles of human tumors, and, unlike cell models and xenografts, they provide a good opportunity for the study of immunotherapies. However, bladder tumor generation is heterogeneous; therefore, an accurate assessment of tumor burden is needed before randomization to experimental treatment. Described here is a BBN mouse model and protocol to evaluate bladder cancer tumor burden in vivo using a fast and reliable magnetic resonance (MR) sequence (true FISP). This method is simple and reliable because, unlike ultrasound, MR is operator-independent and allows for the straightforward post-acquisition image processing and review. Using axial images of the bladder, analysis of regions of interest along the bladder wall and tumor allow for the calculation of bladder wall and tumor area. This measurement correlates with ex vivo bladder weight (rs= 0.37, p = 0.009) and tumor stage (p = 0.0003). In conclusion, BBN generates heterogeneous tumors that are ideal for evaluation of immunotherapies, and MRI can quickly and reliably assess tumor burden prior to randomization to experimental treatment arms.

Murine bladder tumors are induced with the N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine carcinogen (BBN). Bladder tumor generation is heterogeneous; therefore, an accurate assessment of tumor burden is needed before randomization to experimental treatment. Here we present a fast, reliable MRI protocol to assess tumor size and stage.

דימות תהודה מגנטית הערכה של גידולים המושרה מסרטן שלפוחית השתן מאתר

Murine bladder tumor models are critical for the evaluation of new therapeutic options. Bladder tumors induced with the N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) ...

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder tumor model. The mouse model is established by urethral catheterization under inhaled general anesthetic. Chemical burn is then introduced to the bladder mucosa using intravesical silver nitrate solution to disrupt the bladder glycosaminoglycan layer and allows cells to attach. Following several washes with sterile water, human bladder cancer KU-7-luc2-GFP cells are instilled through the catheter into the bladder to dwell for 2 hours. Subsequent growth of bladder tumors is confirmed and monitored by in vivo bladder ultrasound and bioluminescent imaging. The tumors are then treated intravesically with saRNA formulated in lipid nanoparticles (LNPs). Tumor growth is monitored with ultrasound and bioluminescence. All steps of this procedure are demonstrated in the accompanying video.

Establishing an orthotopic bladder tumor model to evaluate antitumor effects of intravesically delivered saRNA and monitoring tumor growth by ultrasound and bioluminescent imaging.

שלפוחית ​​השתן Orthotopic גידול דגם ואת הערכת טיפול סרנה השלפוחית

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

Culture, Manipulation, and Orthotopic Transplantation of Mouse Bladder Tumor Organoids

The development of advanced tumor models has long been encouraged because current cancer models have shown limitations such as lack of three-dimensional (3D) tumor architecture and low relevance to human cancer. Researchers have recently developed a 3D in vitro cancer model referred to as tumor organoids that can mimic the characteristics of a native tumor in a culture dish. Here, experimental procedures are described in detail for the establishment of bladder tumor organoids from a carcinogen-induced murine bladder tumor, including culture, passage, and maintenance of the resulting 3D tumor organoids in vitro. In addition, protocols to manipulate the established bladder tumor organoid lines for genetic engineering using lentivirus-mediated transduction are described, including optimized conditions for the efficient introduction of new genetic elements into tumor organoids. Finally, the procedure for orthotopic transplantation of bladder tumor organoids into the wall of the murine bladder for further analysis is laid out. The methods described in this article can facilitate the establishment of an in vitro model for bladder cancer for the development of better therapeutic options.

This protocol provides detailed experimental steps to establish a three-dimensional in vitro culture of bladder tumor organoids derived from carcinogen-induced murine bladder cancer. Culture methods including passaging, genetic engineering, and orthotopic transplantation of tumor organoids are described.

תרבות, מניפולציה, והשתלת אורתוגרטופית של שלפוחית השתן של העכבר הגידול אורגנואידים

The development of advanced tumor models has long been encouraged because current cancer models have shown limitations such as lack of three-dimensional ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are needed. The tumor microenvironment can significantly influence tumor development and therapy response. It is therefore often desirable to grow tumor cells in the organ from which they originated. This protocol describes an orthotopic model of bladder cancer, in which MB49 murine bladder carcinoma cells are instilled into the bladder via catheterization. Successful tumor cell implantation in this model requires disruption of the protective glycosaminoglycan layer, which can be accomplished by physical or chemical means. In our protocol the bladder is treated with trypsin prior to cell instillation. Catheterization of the bladder can also be used to deliver therapeutics once the tumors are established. This protocol describes the delivery of an adenoviral construct that expresses a luciferase reporter gene. While our protocol has been optimized for short-term studies and focuses on gene delivery, the methodology of mouse bladder catheterization has broad applications.

Implantation of cancer cells into the organ of origin can serve as a useful preclinical model to evaluate novel therapies. MB49 bladder carcinoma cells can be grown within the bladder following intravesical instillation. This protocol demonstrates catheterization of the mouse bladder for the purpose of tumor implantation and adenoviral delivery.

סרטן שלפוחית ​​השתן לדגם orthotopic ג&#39;ין משלוח לימודים

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts

Orthotopic bladder cancer xenografts are the gold standard to study molecular cellular manipulations and new therapeutic agents&#160;in vivo. Suitable cell lines are inoculated either by intravesical instillation (model of nonmuscle invasive growth) or intramural injection into the bladder wall (model of invasive growth). Both procedures are complex and highly time-consuming. Additionally, the superficial model has its shortcomings due to the lack of cell lines that are tumorigenic following instillation. Intramural injection, on the other hand, is marred by the invasiveness of the procedure and the associated morbidity for the host mouse.
With these shortcomings in mind, we modified previous methods to develop a minimally invasive approach for creating orthotopic bladder cancer xenografts. Using ultrasound guidance we have successfully performed percutaneous inoculation of the bladder cancer cell lines UM-UC1, UM-UC3 and UM-UC13 into 50 athymic nude. We have been able to demonstrate that this approach is time efficient, precise and safe. With this technique, initially a space is created under the bladder mucosa with PBS, and tumor cells are then injected into this space in a second step. Tumor growth is monitored at regular intervals with bioluminescence imaging and ultrasound. The average tumor volumes increased steadily in in all but one of our 50 mice over the study period.
In our institution, this novel approach, which allows bladder cancer xenograft inoculation in a minimally-invasive, rapid and highly precise way, has replaced the traditional model.

The established technique to inoculate primary invasive orthotopic bladder cancer xenografts requires laparotomy and mobilization of the bladder. This procedure inflicts significant morbidity on the mice, is technically challenging and time-consuming. We therefore developed a high-precision, percutaneous approach utilizing ultrasound guidance.

פולשנית הקמת Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן xenografts

Orthotopic bladder cancer xenografts are the gold standard to study molecular cellular manipulations and new therapeutic agents&#160;in vivo. Suitable ...

Establishing a Murine Superficial Bladder Cancer Model via an Intravesical Cell Administration Technique

This study presents an innovative method for establishing an orthotopic murine bladder tumor model with high efficiency and precise tumor localization. After anesthetizing female C57BL/6J mice in a supine position, a 24 G intravenous needle is inserted into the bladder to evacuate its contents. A 34 G dispensing needle is then introduced through the catheter, rotated five times to create a focal injury to the bladder dome mucosa, and subsequently removed. The MB49 cell suspension is aspirated and connected to a 30 G dispensing needle, which is inserted into the bladder via the catheter. Tumor cells are injected submucosally into the bladder under pressure. This technique results in minimal trauma to the mice, a high tumor take rate, and a fixed tumor location. It is characterized by simplicity and excellent reproducibility. This model provides an ideal experimental platform for developing intravesical therapies for bladder cancer, facilitating the advancement and optimization of treatment strategies for this malignancy.

This protocol describes a unique method for constructing an orthotopic model of superficial bladder cancer.

This study presents an innovative method for establishing an orthotopic murine bladder tumor model with high efficiency and precise tumor localization. ...

Bladder Tumor Organoid Model: A Method for Orthotopic Transplantation of Bladder Organoids into Recipient Murine Bladder

Source: Kim, Y. et al. <a href="https://www.jove.com/video/60469" target="_blank">Culture, Manipulation, and Orthotopic Transplantation of Mouse Bladder Tumor Organoids.</a>&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2020)
In this video, we describe the orthotopic transplantation of cultured bladder tumor organoids into the murine bladder to study the role of the organ environment on developing tumors.

מודל אורגנואיד של גידול בשלפוחית השתן: שיטה להשתלה אורתוטופית של אורגנואידים משלפוחית השתן למושתלת שלפוחית השתן

Source: Kim, Y. et al. Culture, Manipulation, and Orthotopic Transplantation of Mouse Bladder Tumor Organoids.&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2020)
In this ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Urinary Tract Cancer

In vivo studies

Modeling Orthotopic Bladder Tumor in Mouse Model: A Procedure for Intravesical Administration of Cancer Cells into Murine Bladder

Source: Tham, S. M. et al. <a href="https://www.jove.com/video/55078" target="_blank">A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System.</a>&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2017)
In this video, we describe the intravesical procedure of delivering cancer cells into the bladder of a mouse model. This procedure helps generate an orthotopic bladder tumor model that can be used to develop therapeutic strategies.

מידול גידול אורתוטופי בשלפוחית השתן במודל עכבר: הליך למתן תוך שלפוחית של תאים סרטניים לשלפוחית השתן

Source: Tham, S. M. et al. A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System.&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2017)
In this video, we describe ...

מודל גידול Murine Orthotopic שלפוחית השתן סרטן מערכת איתור

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

Murine ניסיוני דגם של התפתחות גידולים מקורית גרור הצפק

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית השתן Murine

דימות תהודה מגנטית הערכה של גידולים המושרה מסרטן שלפוחית השתן מאתר

שלפוחית השתן Orthotopic גידול דגם ואת הערכת טיפול סרנה השלפוחית

תרבות, מניפולציה, והשתלת אורתוגרטופית של שלפוחית השתן של העכבר הגידול אורגנואידים

סרטן שלפוחית השתן לדגם orthotopic ג'ין משלוח לימודים

פולשנית הקמת Murine Orthotopic שלפוחית השתן xenografts

Establishing a Murine Superficial Bladder Cancer Model via an Intravesical Cell Administration Technique

מודל אורגנואיד של גידול בשלפוחית השתן: שיטה להשתלה אורתוטופית של אורגנואידים משלפוחית השתן למושתלת שלפוחית השתן

מידול גידול אורתוטופי בשלפוחית השתן במודל עכבר: הליך למתן תוך שלפוחית של תאים סרטניים לשלפוחית השתן

מודל גידול Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן סרטן מערכת איתור

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

Murine ניסיוני דגם של התפתחות גידולים מקורית גרור הצפק

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית ​​השתן Murine

דימות תהודה מגנטית הערכה של גידולים המושרה מסרטן שלפוחית השתן מאתר

שלפוחית ​​השתן Orthotopic גידול דגם ואת הערכת טיפול סרנה השלפוחית

תרבות, מניפולציה, והשתלת אורתוגרטופית של שלפוחית השתן של העכבר הגידול אורגנואידים

סרטן שלפוחית ​​השתן לדגם orthotopic ג'ין משלוח לימודים

פולשנית הקמת Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן xenografts

Establishing a Murine Superficial Bladder Cancer Model via an Intravesical Cell Administration Technique

מודל אורגנואיד של גידול בשלפוחית השתן: שיטה להשתלה אורתוטופית של אורגנואידים משלפוחית השתן למושתלת שלפוחית השתן

מידול גידול אורתוטופי בשלפוחית השתן במודל עכבר: הליך למתן תוך שלפוחית של תאים סרטניים לשלפוחית השתן

מודל גידול Murine Orthotopic שלפוחית השתן סרטן מערכת איתור

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית השתן Murine

שלפוחית השתן Orthotopic גידול דגם ואת הערכת טיפול סרנה השלפוחית

סרטן שלפוחית השתן לדגם orthotopic ג'ין משלוח לימודים

פולשנית הקמת Murine Orthotopic שלפוחית השתן xenografts