ברצוננו להודות למשרד המדע והטכנולוגיה של טייוואן (מספר מענק: MOST 104-2628-M-009-003-MY4) על התמיכה הכספית של עבודה זו.

פרוטוקול זה מניח כי כל השלבים מבוצעים בהתאם לתקנות הבטיחות המעבדה הרלוונטיות. חלק מהשלבים משתמשים במכשירים מסחריים - במקרים אלה, יש לפעול לפי הנחיות היצרן. כאשר הטיפול בכימיקלים רעילים, הנחיות MSDS צריך להיות אחריו. יש להפעיל את הציוד המותאם אישית 4 בזהירות. במיוחד, בעת טיפול בגזים דחוסים וחיווט חשמלי חי. 1. הכנת הפתרון הסטנדרטי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 6.2 x 10 -2 M פתרון המניות של לימונן באתנול על ידי ערבוב 10 לימוזינה μL עם אתנול 990 μL. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 10 מ&quot;ל של 6.2 x 10 -5 M פתרון לימון על ידי ערבוב 10 μL 6.2 x 10 -2 לימונן, אתנול 490 μL, והוספת מים טהורים לנפח הסופי של 10 מ&quot;ל. לנער את הבקבוק volumetric ביסודיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את הפתרון הסטנדרטי מוכן ל 20 מ&quot;ל בורג הדף בקבוקון headspace זכוכית עם septuמ &#39;מכסה. הפתרון הסטנדרטי מדולל ניתן להשתמש לבדיקת המערכת. </li></ol> 2. הכנת מדגם אמיתי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג מיץ לימון על ידי סחיטה פירות סיד טרי (לחתוך במחצית) על סחיטה במטבח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 10 מ&quot;ל של מיץ ליים מדולל על ידי ערבוב 2 מ&quot;ל מיץ ליים, 500 אתנול μL, והוספת מים טהורים לנפח הסופי של 10 מ&quot;ל. לנער את הבקבוק volumetric ביסודיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את המדגם מוכן ל 20 מ&quot;ל בורג העליון בקבוקון headspace זכוכית עם מכסה מחצה. </li></ol> 3. spiking המדגם האמיתי עם פתרון סטנדרטי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוספת תקן ראשון: הכן 10 מ&quot;ל של מדגם ממוסמר על ידי ערבוב 2 מ&quot;ל מיץ ליים, 10 μL 6.2 x 10 -2 פתרון לימונן M, 490 μL אתנול, והוספת מים טהורים לנפח הסופי של 10 מ&quot;ל. לנער את הבקבוק volumetric ביסודיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוספת סטנדרטית שנייה: הכן 10 מ&quot;ל של מדגם ממוסמר על ידי ערבוב 2 מ&quot;ל מיץ ליים, 20 μL 6.2 x 10 -2 M לימונןפתרון e, 480 אתנול μL, והוספת מים טהורים נפח סופי של 10 מ&quot;ל. לנער את הבקבוק volumetric ביסודיות. </li></ol> 4. הגדרת מערכת הפיצוץ פיזי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את מערכת מיצוי סחרחורת ( איור 1 ) 4 ליד מקור APCI של ספקטרומטר מסה משולש quadrupole. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את דו תחמוצת הפחמן גז על כניסת הגז של מערכת החילוץ סחרחורת. פתח את השסתום של הגז הרגולטור. הגדר את לחץ היציאה ל -1.5 בר (150 kPa). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את יציאת קאמרית החילוץ אל מקור הכניסה יון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את מערכת החילוץ סחרחורת אספקת החשמל 12-V. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת הנתונים רכישת תוכנה של ספקטרומטר מסה משולש quadrupole ( איור 2 ). הפעילו את המכשיר עם מקור APCI, במצב הניטור החיובי של תגובה מרובת יונים (MRM), כאשר הארגון מתנגשגַז. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את תוכנת רכישת הנתונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר באפשרות &quot;LCMS8030 בלבד&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר באפשרות &quot;MS On / Off&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את הטמפרטורה קו desolvation כדי 250 מעלות צלזיוס, ואת קצב הזרימה של גז ייבוש ל 15 L min -1 . המתן עד שהערך של כל פרמטר מכשיר יהיה זהה לערך שנקבע מראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר את קובץ שיטת רכישת נתוני MS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא מתח ההתנגשות הוא -20 V, יון מבשר מ / z הוא 137, ואת יון קטע m / z הם 81 ו 95 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על &quot;התחל הפעלה אחת&quot; כפתור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקלד את שם הקובץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר את נתיב הקובץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור לסעיף 5 (&quot;ביצוע מיצוי סחרחורת&quot;). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר באפשרות &quot;MS On / Off&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את חלון התוכנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טיק את הפריטים &quot;Nebulizing גז כבוי&quot;, &quot;דוד מחמם כבוי&quot;, &quot;חום בלוק כבוי&quot;, ו &quot;גז יבש כבוי&quot;. לחץ על &quot;אישור &amp;# 34 ;. </li></ol></li></ol> 5. ביצוע פיצה הפקת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים בקבוקון מדגם במערכת החילוץ תוסס באמצעות בורג הר. מערכת החילוץ מופעלת בטמפרטורת החדר (~ 25 ° C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על כפתור &quot;התחל&quot; על מגן ה- LCD של מערכת החילוץ המסוחררת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המתן בזמן תהליך מיצוי סחרחורת אוטומטי מבוצע ( איור 3 ). לבחון התפתחות של אותות יונים על המסך של ספקטרומטר מסה משולש quadrupole. הערה: השלבים הבאים מבוצעים באופן אוטומטי: הדגימה הראשית מסומנת בפחמן דו חמצני במהלך 60 שניות. הדוגמה היא בלחץ עם פחמן דו חמצני במהלך 60 s. מנוע Stirrer מופעל. המדגם הוא depressurized. בועות מרובות נוצרות. בשלב מאוחר יותר, מנוע stirrer הוא על מנת לשפר את מבעבע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציאים (לשחרר) את הבקבוקון מדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב את ציר המדגם מערבל עם רקמת תאית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו את הספירה המערבבתלהידבק עם אתנול, ולנגב אותו עם רקמות תאית שוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המערכת מוכנה לניתוח מדגם אחר (חזור על צעדים 5.1-5.6). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את ספק הכוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתק את יציאת מוצא החילוץ מסוחר מן המקור יון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את השסתום של גליל הגז, ונתק את צינורות הגז. </li></ol> 6. ניתוח נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ייצוא חילוץ יונים זרמים עבור מ &#39;/ z 81 מ משולש quadrupole מסה של ספקטרומטר נתונים הרכישה תוכנה לקבצי ASCII ( איור 4 ). הערה: זרם יון ב m / z 95 אינו משמש בהפגנה זו. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את תוכנת רכישת הנתונים. בחר באפשרות &quot;Postrun&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר באפשרות &quot;בחר פרויקט (תיקייה)&quot; ובחר את קובץ הנתונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על &quot;קובץ&quot; בתפריט, ובחר &quot;ייצוא נתונים&quot; / &quot;ייצוא נתונים ASCII&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר &amp;#34, קובץ פלט &quot;, ובחר את נתיב הקובץ.בחר&quot; MS Chromatogram (MC) &quot;. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ייבוא ​​נתוני הנתונים הגולמיים לתוכנות אינטגרציה שיא, ולמדוד אזורי שיא ( איור 5 ). הגדרות: בסיס לינארי; HVL. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את תוכנת אינטגרציית השיא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר באפשרות &quot;ייבוא&quot; מתפריט &quot;קובץ&quot;. לחץ על הלחצן &quot;כן&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר את הנתונים בעמודה X ו- Y. לחץ על &quot;אישור&quot; כפתור. בחר באפשרות &quot;AutoFit Peaks I Residuals&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתאים את שיא החילוץ למחצה באופן אוטומטי. ודא עקומת מצויד עוקב אחר נקודות נתונים ניסיוני. בחר באפשרות &quot;רשימת אומדני שיא&quot;. בחר באפשרות &quot;עורך ASCII&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העתק את התוצאות המתאימות ל &quot;לוח&quot;. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קלט את אזורי שיא נמדד לגיליון אלקטרוני בתוכנת ניתוח נתונים ( איור 6 ). &lt;Ol&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את תוכנת ניתוח הנתונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזן את ערכי הריכוז בעמודה X וערכים באזור השיא בעמודה Y. בחר באפשרות &quot;Symbol&quot; / &quot;Scatter&quot; מהתפריט &quot;Plot&quot;. בחר באפשרות &quot;Fitting&quot; / &quot;Fit Linear&quot; מתפריט &quot;Analysis&quot;. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב ריכוז הלימון במדגם האמיתי המדולל על בסיס הנוסחה: <img alt="משוואה 1" src="/files/ftp_upload/56008/56008eq1.jpg" /> שבו אני ליירט את הפונקציה ליניארית, בעוד S הוא המדרון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב הריכוז של הלימון במדגם האמיתי המקורי (לפני דילול) על בסיס הנוסחה: <img alt="משוואה 2" src="/files/ftp_upload/56008/56008eq2.jpg" /> כאשר DF הוא גורם הדילול (כאן, 5). </li></ol>

<ol>
	<li>McCallum, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decompression+sickness:+a+review.">Decompression sickness: a review.</a> Brit J Industr Med. 25, 4-21 (1968).</li><li>Pawliszyn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Comprehensive Sampling and Sample Preparation. , (2012).</li><li>Wang, T., Lenahan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+volatile+halocarbons+in+water+by+purge-closed+loop+gas+chromatography.">Determination of volatile halocarbons in water by purge-closed loop gas chromatography.</a> Bull Environ Contam Toxicol. 32, 429-438 (1984).</li><li>Chang, C. -. H., Urban, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fizzy+extraction+of+volatile+and+semivolatile+compounds+into+the+gas+phase.">Fizzy extraction of volatile and semivolatile compounds into the gas phase.</a> Anal Chem. 88, 8735-8740 (2016).</li><li>Zougagh, M., Valc&#225;rcel, M., R&#237;os, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supercritical+fluid+extraction:+a+critical+review+of+its+analytical+usefulness.">Supercritical fluid extraction: a critical review of its analytical usefulness.</a> Trends Anal Chem. 23, 399-405 (2004).</li><li>Urban, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Universal+electronics+for+miniature+and+automated+chemical+assays.">Universal electronics for miniature and automated chemical assays.</a> Analyst. 140, 963-975 (2015).</li><li>Urban, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-built+labware+stimulates+creativity.">Self-built labware stimulates creativity.</a> Nature. 532, 313 (2016).</li><li>Chen, H., Venter, A., Cooks, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extractive+electrospray+ionization+for+direct+analysis+of+undiluted+urine,+milk+and+other+complex+mixtures+without+sample+preparation.">Extractive electrospray ionization for direct analysis of undiluted urine, milk and other complex mixtures without sample preparation.</a> Chem Commun. , 2042-2044 (2006).</li><li>Haddad, R., Sparrapan, R., Kotiaho, T., Eberlin, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Easy+ambient+sonic-spray+ionization-membrane+interface+mass+spectrometry+for+direct+analysis+of+solution+constituents.">Easy ambient sonic-spray ionization-membrane interface mass spectrometry for direct analysis of solution constituents.</a> Anal Chem. 80, 898-903 (2008).</li><li>Dixon, R. B., Sampson, J. S., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+multiply+charged+peptides+and+proteins+by+radio+frequency+acoustic+desorption+and+ionization+for+mass+spectrometric+detection.">Generation of multiply charged peptides and proteins by radio frequency acoustic desorption and ionization for mass spectrometric detection.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 20, 597-600 (2009).</li><li>Wu, C. -. I., Wang, Y. -. S., Chen, N. G., Wu, C. -. Y., Chen, C. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+ionization+of+biomolecules.">Ultrasound ionization of biomolecules.</a> Rapid Commun Mass Spectrom. 24, 2569-2574 (2010).</li><li>Lo, T. -. J., Chen, T. -. Y., Chen, Y. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+salt+effects+in+ultrasonication-assisted+spray+ionization+mass+spectrometry.">Study of salt effects in ultrasonication-assisted spray ionization mass spectrometry.</a> J Mass Spectrom. 47, 480-483 (2012).</li><li>Urban, P. L., Chen, Y. -. C., Wang, Y. -. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Time-Resolved Mass Spectrometry: From Concept to Applications. , (2016).</li><li>Peacock, P. M., Zhang, W. -. J., Trimpin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+ionization+for+mass+spectrometry.">Advances in ionization for mass spectrometry.</a> Anal Chem. 89, 372-388 (2017).</li><li>Hu, J. -. B., Chen, S. -. Y., Wu, J. -. T., Chen, Y. -. C., Urban, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+system+for+extraction+and+instantaneous+analysis+of+millimeter-sized+samples.">Automated system for extraction and instantaneous analysis of millimeter-sized samples.</a> RSC Adv. 4, 10693-10701 (2014).</li><li>Chen, S. -. Y., Urban, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On-line+monitoring+of+Soxhlet+extraction+by+chromatography+and+mass+spectrometry+to+reveal+temporal+extract+profiles.">On-line monitoring of Soxhlet extraction by chromatography and mass spectrometry to reveal temporal extract profiles.</a> Anal Chim Acta. 881, 74-81 (2015).</li><li>Hsieh, K. -. T., Liu, P. -. H., Urban, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+on-line+liquid-liquid+extraction+system+for+temporal+mass+spectrometric+analysis+of+dynamic+samples.">Automated on-line liquid-liquid extraction system for temporal mass spectrometric analysis of dynamic samples.</a> Anal Chim Acta. 894, 35-43 (2015).</li><li>Veach, B. T., Mudalige, T. K., Rye, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RapidFire+mass+spectrometry+with+enhanced+throughput+as+an+alternative+to+liquid&#8722;liquid+salt+assisted+extraction+and+LC/MS+analysis+for+sulfonamides+in+honey.">RapidFire mass spectrometry with enhanced throughput as an alternative to liquid&#8722;liquid salt assisted extraction and LC/MS analysis for sulfonamides in honey.</a> Anal Chem. , (2017).</li><li>Carroll, D. I., Dzidic, I., Stillwell, R. N., Horning, M. G., Horning, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subpicogram+detection+system+for+gas+phase+analysis+based+upon+atmospheric+pressure+ionization+(API)+mass+spectrometry.">Subpicogram detection system for gas phase analysis based upon atmospheric pressure ionization (API) mass spectrometry.</a> Anal Chem. 46, 706-710 (1974).</li><li>Carroll, D. I., Dzidic, I., Stillwell, R. N., Haegele, K. D., Horning, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atmospheric+pressure+ionization+mass+spectrometry.+Corona+discharge+ion+source+for+use+in+a+liquid+chromatograph-mass+spectrometer-computer+analytical+system.">Atmospheric pressure ionization mass spectrometry. Corona discharge ion source for use in a liquid chromatograph-mass spectrometer-computer analytical system.</a> Anal Chem. 47, 2369-2373 (1975).</li><li>Hakim, I. A., McClure, T., Liebler, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+dietary+D-limonene+intake+for+epidemiological+studies.">Assessing dietary D-limonene intake for epidemiological studies.</a> J Food Compos Anal. 13, 329-336 (2000).</li></ol>

למחברים אין מה לגלות.

<html> כמה דרכים חכמות לספק דגימות ספקטרומטר מסה פותחו במחקרים שנערכו במהלך שלושת העשורים האחרונים ( למשל , הפניות 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 ). אחת...

תופעות שונות שנצפו בטבע ובחיי היומיום קשורות שיווי משקל בשלב נוזלי גז. פחמן דו חמצני הוא מומס משקאות רך ואלכוהול תחת לחץ מוגבר. כאשר בקבוק של משקה תוסס כזה נפתח, הלחץ יורד למטה, בועות גז למהר אל פני השטח נוזלי. במקרה זה, הזרימה משפרת תכונות organoleptic של משקאות. השחרור של בועות גז הוא גם הגורם העיקרי של מחלת הדקומפרסיה ( &quot;The Bends&quot;) 1. בשל לחץ לחץ פתאומי, בועות בצורת גופים צוללנים. אנשים הסובלים ממחלת לחץ לחץ דם מטופלים בתאי היפרברית. בועות גז יש יישומים שונים בכימיה אנליטית. יש לציין, שיטות sparging להסתמך על עובר בועות גז דרך דגימות נוזלים לחלץ תרכובות נדיפים 2 . לדוגמה, שיטה הנקראת &quot;לולאה סגורה טיהור&quot; משולב עם כרומטוגרפיה גז כדי לאפשר ניתוח מהיר של diתנודות נדיפות 3 . בעוד sparging יכול ברציפות לחלץ נדיפים לאורך זמן, זה לא להגביל אותם בחלל או בזמן. השלב גז השלב המיועד צריך להיות לכוד, ו - במקרים מסוימים - מרוכזים על ידי יישום תוכנית טמפרטורה או באמצעות סורבנטים. לכן, יש צורך להציג אסטרטגיות חדשות לטיפול מדגם חדש, אשר יכול להפחית את מספר הצעדים, ו - באותו זמן לרכז אנליטיות נדיפים בחלל או בזמן. כדי להתמודד עם האתגר של חילוץ תרכובות נדיפים מדגימות נוזלי, וביצוע ניתוח on-line, הצגנו לאחרונה &quot;מיצוי סחרחורת&quot; 4 . טכניקה חדשה זו מנצלת את תופעת התסיסה. בקצרה, גז המוביל (כאן, פחמן דו חמצני) הוא מומס הראשון במדגם על ידי הפעלת לחץ יתר וערבוב המדגם. לאחר מכן, החדר מדגם הוא decompressed בבת אחת. הלחץ הפתאומי מוביל להיווצרות בועות גז רבות<html> ב נוזלי המדגם. בועות אלה מסייעות לשחרור מינים אנליטיים מומסים מן הנוזל לשלב הגז. האנליסטים המשוחררים מועברים מיד לספקטרומטר המסה, המייצרים אותות בתחום הזמן. בגלל שחרורו של מינים אנליטיים מוגבל לתקופה קצרה של זמן (כמה שניות), האותות הזמניים יש אמפליטודות גבוהה יחסי אות לרעש גבוהה. הלחצים הכרוכים בתהליך החילוץ התוסס נמוכים מאוד (~ 150 kPa) 4 ; הרבה יותר נמוך מאשר מיצוי נוזל supercritical 5 ( למשל , 10 מגה פיקסל). הטכניקה אינה דורשת את השימוש של פריטים מתכלים מיוחדים (עמודות, מחסניות). רק כמות קטנה של ממיסים משמשים לדילול ולניקוי. מכשיר החילוץ ניתן להרכיב על ידי כימאים עם כישורים טכניים בינוניים באמצעות חלקים זמינים 4 ; לדוגמה, קוד פתוח מודולים אלקטרוניים&quot;6 , 7. ניתן להפיק את הפיצוץ הפיזי על הקו עם ספקטרומטרים המוניים המודרניים המצוידים בממשק יינון כימי בלחץ אטמוספרי (APCI), מכיוון שתמציות שלב גז מועברות למקור יון, פעולת החילוץ התזוזה אינה מזיקה באופן משמעותי לפגיע חלקים של ספקטרומטר מסה. מטרת מאמר זה ניסוי דמיינו היא להנחות את הצופים על איך ליישם תוצר מסוחרר במשימה אנליטית פשוטה. בעוד הליבה של מערכת החילוץ תוסס הוא כמתואר בדו&quot;ח הקודם שלנו 4 , שיפורים אחדים הוכנסו כדי להפוך את הפעולה פשוטה יותר. מיקרו-בקר מצויד במסך מסך LCD שולב במערכת כדי להציג את פרמטרים החילוץ המפתח בזמן אמת. כל הפונקציות מתוכנתות בסקריפטים של המיקרו-בקר, ואין עוד צורך להשתמש במחשב חיצוני כדי cOntrol מערכת החילוץ.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="963">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Water</td>
			<td style="width:197px;">Fisher</td>
			<td style="width:160px;">W6212</td>
			<td style="width:191px;">Diluent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Ethanol</td>
			<td style="width:197px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:160px;">32221-2.5L</td>
			<td>Diluent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">(R)-(+)-Limonene</td>
			<td style="width:197px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:160px;">183164-100ML</td>
			<td>Standard</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Carbon dioxide</td>
			<td style="width:197px;">ChiaLung</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Carrier gas</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Cellulose tissue, Kimwipes Kimtech</td>
			<td style="width:197px;">Kimberly-Clark</td>
			<td>34120</td>
			<td>Used for cleaning</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Triple quadrupole mass spectrometer</td>
			<td style="width:197px;">Shimadzu</td>
			<td style="width:160px;">LCMS-8030</td>
			<td>Detection system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Atmospheric pressure chemical ionization interface</td>
			<td style="width:197px;">Shimadzu</td>
			<td style="width:160px;">Duis</td>
			<td>Ion source</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">20-mL screw top headspace glass vial with septum cap</td>
			<td style="width:197px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:160px;">D-52379</td>
			<td>Sample vial</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">LabSolutions software</td>
			<td style="width:197px;">Shimadzu</td>
			<td>n/a</td>
			<td>version 5.82</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">PeakFit software</td>
			<td style="width:197px;">Systat Software</td>
			<td>n/a</td>
			<td>version 4.12</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">OriginPro software</td>
			<td style="width:197px;">OriginLab</td>
			<td>n/a</td>
			<td>version 8</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fizzy extraction of volatile organic compounds combined with atmospheric pressure chemical ionization quadrupole mass spectrometry

ניתוח כימי של תרכובות נדיפים ו semivolatile מומס בדגימות נוזלי יכול להיות מאתגר. את המרכיבים מומס צריך להביא לשלב הגז, ויעברו ביעילות למערכת איתור. הפקת סחרחורת מנצלת את תופעת התסיסה. ראשית, המוביל גז (כאן, דו תחמוצת הפחמן) הוא מומס במדגם על ידי הפעלת overpressure ו ערבוב המדגם. שנית, חדר המדגם הוא decompressed בבת אחת. לחץ לחץ מוביל להיווצרות של בועות גז רבים הנוזל המדגם נוזלי. בועות אלה מסייעות לשחרור המינים האנליטיים המומסים מן הנוזל אל השלב. האנליסטים שוחררו מועברים מיד את הלחץ אטמוספרי כימיים ממשק יינון של ספקטרומטר מסה משולש quadrupole. מינים אנליטי ionizable לעורר אותות ספקטרומטריים המוניים בתחום הזמן. בגלל שחרור מינים אנליטית מתרחשת על פני תקופות קצרות של זמן (כמה שניותOnds), האותות הזמניים יש אמפליטודות גבוהות יחס אות לרעש גבוהה. אמפליטודות ואזורים של פסגות הזמני יכול להיות מתואם עם ריכוזי האנליסטים בדגימות נוזלי נתון לחילוץ תוסס, המאפשר ניתוח כמותי. היתרונות של מיצוי סחרחורת כוללים: פשטות, מהירות ושימוש מוגבל בכימיקלים (ממיסים).

בתחילה, מערכת החילוץ תוסס נבדק עם פתרון סטנדרטי. לאחר מכן, המדגם האמיתי המדגם האמיתי spiked עם תקן מנותחים. שטחי הפסגות הטמפורליות של אירועי החילוץ מתואמים עם ריכוזים של האנליטים בדגימות הנוזליות הנתונות למיצוי תוסס, המאפשר ניתוח כמותי. כאן, ביצענו תקן...

Watch this Scientific Journal Video about Fizzy Extraction of Volatile Organic Compounds Combined with Atmospheric Pressure Chemical Ionization Quadrupole Mass Spectrometry at JoVE.com

Fizzy Extraction of Volatile Organic Compounds Combined with Atmospheric Pressure Chemical Ionization Quadrupole Mass Spectrometry

מיצוי סחרחורת הוא טכניקה מעבדה חדשה לניתוח תרכובות נדיפות וחצי למחצה. גז המוביל הוא מומס במדגם נוזלי על ידי הפעלת overpressure ו ערבוב המדגם. תא המדגם ואז decompressed. מינים האנליטי משוחררים לשלב הגז עקב התפשטות.

פיצי הפקה של תרכובות אורגניות נדיפות בשילוב עם לחץ אטמוספרי כימי יוניזציה Quadropole מסה ספקטרומטריית

Chemical analysis of volatile and semivolatile compounds dissolved in liquid samples can be challenging. The dissolved components need to be brought to ...

fizzy-extraction-volatile-organic-compounds-combined-with-atmospheric

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Analytical Chemistry

Chemistry

Unit 1

Mass Spectrometry Fragmentation Methods

SCIENTISTS IN ACTION

7.6K Views.  National Chiao Tung University.  מיצוי סחרחורת הוא טכניקה מעבדה חדשה לניתוח תרכובות נדיפות וחצי למחצה. גז המוביל הוא מומס במדגם נוזלי על ידי הפעלת overpressure ו ערבוב המדגם. תא המדגם ואז decompressed. מינים האנליטי משוחררים לשלב הגז עקב התפשטות. 

Video: Fizzy Extraction of Volatile Organic Compounds Combined with Atmospheric Pressure Chemical Ionization Quadrupole Mass Spectrometry

High-pressure Sapphire Cell for Phase Equilibria Measurements of CO2/Organic/Water Systems

The high pressure sapphire cell apparatus was constructed to visually determine the composition of multiphase systems without physical sampling. Specifically, the sapphire cell enables visual data collection from multiple loadings to solve a set of material balances to precisely determine phase composition. Ternary phase diagrams can then be established to determine the proportion of each component in each phase at a given condition. In principle, any ternary system can be studied although ternary systems (gas-liquid-liquid) are the specific examples discussed herein. For instance, the ternary THF-Water-CO2 system was studied at 25 and 40&#160;&#176;C and is described herein. Of key importance, this technique does not require sampling. Circumventing the possible disturbance of the system equilibrium upon sampling, inherent measurement errors, and technical difficulties of physically sampling under pressure is a significant benefit of this technique. Perhaps as important, the sapphire cell also enables the direct visual observation of the phase behavior. In fact, as the CO2 pressure is increased, the homogeneous THF-Water solution phase splits at about 2 MPa. With this technique, it was possible to easily and clearly observe the cloud point and determine the composition of the newly formed phases as a function of pressure.
The data acquired with the sapphire cell technique can be used for many applications. In our case, we measured swelling and composition for tunable solvents, like gas-expanded liquids, gas-expanded ionic liquids and Organic Aqueous Tunable Systems (OATS)1-4. For the latest system, OATS, the high-pressure sapphire cell enabled the study of (1) phase behavior as a function of pressure and temperature, (2) composition of each phase (gas-liquid-liquid) as a function of pressure and temperature and (3) catalyst partitioning in the two liquid phases as a function of pressure and composition. Finally, the sapphire cell is an especially effective tool to gather accurate and reproducible measurements in a timely fashion.

High-pressure Sapphire Cell for Phase Equilibria Measurements of CO2/Organic/Water Systems

The high pressure sapphire cell apparatus is a unique tool to study, without sampling, phase behavior under a wide range of pressures. Using a cathetometer, very precise volume measurements can be recorded to measure liquid expansion and phase composition. Thus, this synthetic method enables the study of (1) phase equilibria of multi-component mixtures and (2) the partition behavior of catalyst or model compounds as a function of pressure.

תא ספיר בלחץ גבוהים למדידות שלב שיווי משקל של CO<sub&gt; 2</sub&gt; מערכות אורגניות / / מים

The high pressure sapphire cell apparatus was constructed to visually determine the composition of multiphase systems without physical sampling. ...

Analysis of Volatile and Oxidation Sensitive Compounds Using a Cold Inlet System and Electron Impact Mass Spectrometry

This video presents a protocol for the mass spectrometrical analysis of volatile and oxidation sensitive compounds using electron impact ionization. The analysis of volatile and oxidation sensitive compounds by mass spectrometry is not easily achieved, as all state-of-the-art mass spectrometric methods require at least one sample preparation step, e.g., dissolution and dilution of the analyte (electrospray ionization), co-crystallization of the analyte with a matrix compound (matrix-assisted laser desorption/ionization), or transfer of the prepared samples into the ionization source of the mass spectrometer, to be conducted under atmospheric conditions. Here, the use of a sample inlet system is described which enables the analysis of volatile metal organyls, silanes, and phosphanes using a sector field mass spectrometer equipped with an electron impact ionization source. All sample preparation steps and the sample introduction into the ion source of the mass spectrometer take place either under air-free conditions or under vacuum, enabling the analysis of compounds highly susceptible to oxidation. The presented technique is especially of interest for inorganic chemists, working with metal organyls, silanes, or phosphanes, which have to be handled using inert conditions, such as the Schlenk technique. The principle of operation is presented in this video.

This video presents a protocol for the mass spectrometrical analysis of volatile and oxidation sensitive compounds using electron impact ionization. The presented technique is especially of interest for inorganic chemists, working with metal organyls, silanes, or phosphanes which have to be handled using inert conditions, such as the Schlenk technique.

ניתוח של תרכובות נדיפות רגישות וחמצון באמצעות מערכת קרה מפרצון ואלקטרוני השפעה המוני ספקטרומטריית

This video presents a protocol for the mass spectrometrical analysis of volatile and oxidation sensitive compounds using electron impact ionization. The ...

A Study of the Complexation of Mercury(II) with Dicysteinyl Tetrapeptides by Electrospray Ionization Mass Spectrometry

In this study we evaluated a method for the characterization of complexes, formed in different relative ratios of mercury(II) to dicysteinyl tetrapeptide, by electrospray ionization orbitrap mass spectrometry. This strategy is based on previous successful characterization of mercury-dicysteinyl complexes involving tripeptides by utilizing mass spectrometry among other techniques. Mercury(II) chloride and a dicysteinyl tetrapeptide were incubated in a degassed buffered medium at varying stoichiometric ratios. The complexes formed were subsequently analyzed on an electrospray mass spectrometer consisting of a hybrid linear ion- and orbi- trap mass analyzer. The electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) spectra were acquired in the positive mode and the observed peaks were then analyzed for distinct mercury isotopic distribution patterns and associated monoisotopic peak. This work demonstrates that an accurate stoichiometry of mercury and peptide in the complexes formed under specified electrospray ionization conditions can be determined by using high resolution ESI MS based on distinct mercury isotopic distribution patterns.

A Study of the Complexation of MercuryII with Dicysteinyl Tetrapeptides by Electrospray Ionization Mass Spectrometry

The characterization of complexes formed in different relative ratios of mercury(II) to dicysteinyl tetrapeptides by electrospray ionization orbitrap mass spectrometry is presented.

חקר complexation של מרקורי (II) עם Dicysteinyl Tetrapeptides ידי Ionization electrospray ספקטרומטריית המסה

In this study we evaluated a method for the characterization of complexes, formed in different relative ratios of mercury(II) to dicysteinyl tetrapeptide, ...

Visualization of Ambient Mass Spectrometry with the Use of Schlieren Photography

This manuscript outlines how to visualize mass spectrometry ambient ionization sources using schlieren photography. In order to properly optimize the mass spectrometer, it is necessary to characterize and understand the physical principles of the source. Most commercial ambient ionization sources utilize jets of nitrogen, helium, or atmospheric air to facilitate the ionization of the analyte. As a consequence, schlieren photography can be used to visualize the gas streams by exploiting the differences in refractive index between the streams and ambient air for visualization in real time. The basic setup requires a camera, mirror, flashlight, and razor blade. When properly configured, a real time image of the source is observed by watching its reflection. This allows for insight into the mechanism of action in the source, and pathways to its optimization can be elucidated. Light is shed on an otherwise invisible situation.

This paper presents a protocol for the visualization of gaseous streams of an ambient ionization source using schlieren photography and mass spectrometry.

ויזואליזציה של ספקטרומטריית אמביינט המוני עם השימוש של צילומי שליארן

This manuscript outlines how to visualize mass spectrometry ambient ionization sources using schlieren photography. In order to properly optimize the mass ...

Real-time Breath Analysis by Using Secondary Nanoelectrospray Ionization Coupled to High Resolution Mass Spectrometry

Exhaled volatile organic compounds (VOCs) have aroused considerable interest, since they can serve as biomarkers for disease diagnosis and environmental exposure in a non-invasive manner. In this work, we present a protocol to characterize the exhaled VOCs in real time by using secondary nanoelectrospray ionization coupled to high resolution mass spectrometry (Sec-nanoESI-HRMS). The homemade Sec-nanoESI source was readily set up based on a commercial nanoESI source. Hundreds of peaks were observed in the background-subtracted mass spectra of exhaled breath, and the mass accuracy values are -4.0-13.5 ppm and -20.3-1.3 ppm in the positive and negative ion detection modes, respectively. The peaks were assigned with accurate elemental composition according to the accurate mass and isotopic pattern. Less than 30 s is used for one exhalation measurement, and it takes approximately 7 min for six replicated measurements.

A protocol for characterizing chemical composition of exhaled breath in real time by using secondary nanoelectrospray ionization coupled to high resolution mass spectrometry is demonstrated.

אנליזת נשימה בזמן אמת באמצעות Nanoelectrospray משני יינון מצמידים ספקטרומטר מסה ברזולוציה גבוהה

Exhaled volatile organic compounds (VOCs) have aroused considerable interest, since they can serve as biomarkers for disease diagnosis and environmental ...

Characterization of Synthetic Polymers via Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight (MALDI-TOF) Mass Spectrometry

There are many techniques that can be employed in the characterization of synthetic homopolymers, but few provide as useful of information for end group analysis as matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS). This tutorial demonstrates methods for optimization of the sample preparation, spectral acquisition, and data analysis of synthetic polymers using MALDI-TOF MS. Critical parameters during sample preparation include the selection of the matrix, identification of an appropriate cationization salt, and tuning the relative proportions of the matrix, cation, and analyte. The acquisition parameters, such as mode (linear or reflector), polarization (positive or negative), acceleration voltage, and delay time, are also important. Given some knowledge of the chemistry involved to synthesize the polymer and optimizing both the data acquisition parameters and the sample preparation conditions, spectra should be obtained with sufficient resolution and mass accuracy to enable the unambiguous determination of the end groups of most homopolymers (masses below 10,000) in addition to the repeat unit mass and the overall molecular weight distribution. Though demonstrated on a limited set of polymers, these general techniques are applicable to a much wider range of synthetic polymers for determining mass distributions, though end group determination is only possible for homopolymers with narrow dispersity.

Characterization of Synthetic Polymers via Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight MALDI-TOF Mass Spectrometry

A protocol for the matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) characterization of synthetic polymers is described including the optimization of sample preparation, spectral acquisition, and data analysis.

אפיון של פולימרים סינתטיים באמצעות מטריקס בסיוע לייזר Desorption יינון שעת הטיסה (MALDI-TOF) ספקטרומטר מסה

There are many techniques that can be employed in the characterization of synthetic homopolymers, but few provide as useful of information for end group ...

Analysis of Complex Molecules and Their Reactions on Surfaces by Means of Cluster-Induced Desorption/Ionization Mass Spectrometry

Desorption/Ionization Induced by Neutral SO2 Clusters (DINeC) is employed as a very soft and efficient desorption/ionization technique for mass spectrometry (MS) of complex molecules and their reactions on surfaces. DINeC is based on a beam of SO2 clusters impacting on the sample surface at low cluster energy. During cluster-surface impact, some of the surface molecules are desorbed and ionized via dissolvation in the impacting cluster; as a result of this dissolvation-mediated desorption mechanism, low cluster energy is sufficient and the desorption process is extremely soft. Both surface adsorbates and molecules of which the surface is composed of can be analyzed. Clear and fragmentation-free spectra from complex molecules such as peptides and proteins are obtained. DINeC does not require any special sample preparation, in particular no matrix has to be applied. The method yields quantitative information on the composition of the samples; molecules at a surface coverage as low as 0.1 % of a monolayer can be detected. Surface reactions such as H/D exchange or thermal decomposition can be observed in real-time and the kinetics of the reactions can be deduced. Using a pulsed nozzle for cluster beam generation, DINeC can be efficiently combined with ion trap mass spectrometry. The matrix-free and soft nature of the DINeC process in combination with the MSn capabilities of the ion trap allows for very detailed and unambiguous analysis of the chemical composition of complex organic samples and organic adsorbates on surfaces.

Neutral SO2 clusters of low kinetic energy (&#60; 0.8 eV/constituent) are used to desorb complex surface molecules such as peptides or lipids for further analysis by means of mass spectrometry using an ion trap mass spectrometer. No special sample preparation is required, and real-time observation of reactions is possible.

ניתוח של מולקולות מורכבות והתגובות שלהם על משטחים באמצעות מצבר-המושרה באמצעות אשכול/אינון המסה ספקטרומטריה

Desorption/Ionization Induced by Neutral SO2 Clusters (DINeC) is employed as a very soft and efficient desorption/ionization technique for mass ...

Mass Spectrometry-Guided Genome Mining as a Tool to Uncover Novel Natural Products

The chemical space covered by natural products is immense and widely unrecognized. Therefore, convenient methodologies to perform wide-ranging evaluation of their functions in nature and potential human benefits (e.g., for drug discovery applications) are desired. This protocol describes the combination of genome mining (GM) and molecular networking (MN), two contemporary approaches that match gene cluster-encoded annotations in whole genome sequencing with chemical structure signatures from crude metabolic extracts. This is the first step towards the discovery of new natural entities. These concepts, when applied together, are defined here as MS-guided genome mining. In this method, the main components are previously designated (using MN), and structurally related new candidates are associated with genome sequence annotations (using GM). Combining GM and MN is a profitable strategy to target new molecule backbones or harvest metabolic profiles in order to identify analogues from already known compounds.

A mass spectrometry-guided genome mining protocol is established and described here. It is based on genome sequence information and LC-MS/MS analysis and aims to facilitate identification of molecules from complex microbial and plant extracts.

המסה ספקטרומטר מודרמטריה מונחה הגנום ככלי לחשוף מוצרים טבעיים הרומן

The chemical space covered by natural products is immense and widely unrecognized. Therefore, convenient methodologies to perform wide-ranging evaluation ...

Gas Chromatography-Mass Spectrometry Paired with Total Vaporization Solid-Phase Microextraction as a Forensic Tool

Gas Chromatography &#8211; Mass Spectrometry (GC-MS) is a frequently used technique for the analysis of numerous analytes of forensic interest, including controlled substances, ignitable liquids, and explosives. GC-MS can be coupled with Solid-Phase Microextraction (SPME), in which a fiber with a sorptive coating is placed into the headspace above a sample or immersed in a liquid sample. Analytes are sorbed onto the fiber which is then placed inside the heated GC inlet for desorption. Total Vaporization Solid-Phase Microextraction (TV-SPME) utilizes the same technique as immersion SPME but immerses the fiber into a completely vaporized sample extract. This complete vaporization results in a partition between only the vapor phase and the SPME fiber without interference from a liquid phase or any insoluble materials. Depending upon the boiling point of the solvent used, TV-SPME allows for large sample volumes (e.g., up to hundreds of microliters). On-fiber derivatization may also be performed using TV-SPME. TV-SPME has been used to analyze drugs and their metabolites in hair, urine, and saliva. This simple technique has also been applied to street drugs, lipids, fuel samples, post-blast explosive residues, and pollutants in water. This paper highlights the use of TV-SPME to identify illegal adulterants in very small samples (microliter quantities) of alcoholic beverages. Both gamma-hydroxybutyrate (GHB) and gamma-butyrolactone (GBL) were identified at levels that would be found in spiked drinks. Derivatization by a trimethylsilyl agent allowed for conversion of the aqueous matrix and GHB into their TMS derivatives. Overall, TV-SPME is quick, easy, and requires no sample preparation aside from placing the sample into a headspace vial.

Total Vaporization Solid Phase Microextraction (TV-SPME) completely vaporizes a liquid sample whilst analytes are sorbed onto a SPME fiber. This allows for partitioning of the analyte between only the solvent vapor and the SPME fiber coating.

ספקטרומטריית כרומטוגרפיה-מסה של גז בשילוב עם מיקרו-אקסטרציה מוצקה של אידוי מוחלט ככלי משפטי

Gas Chromatography &#8211; Mass Spectrometry (GC-MS) is a frequently used technique for the analysis of numerous analytes of forensic interest, including ...

Organic Solvent-Based Protein Precipitation for Robust Proteome Purification Ahead of Mass Spectrometry

While multiple advances in mass spectrometry (MS) instruments have improved qualitative and quantitative proteome analysis, more reliable front-end approaches to isolate, enrich, and process proteins ahead of MS are critical for successful proteome characterization. Low, inconsistent protein recovery and residual impurities such as surfactants are detrimental to MS analysis. Protein precipitation is often considered unreliable, time-consuming, and technically challenging to perform compared to other sample preparation strategies. These concerns are overcome by employing optimal protein precipitation protocols. For acetone precipitation, the combination of specific salts, temperature control, solvent composition, and precipitation time is critical, while the efficiency of chloroform/methanol/water precipitation depends on proper pipetting and vial manipulation. Alternatively, these precipitation protocols are streamlined and semi-automated within a disposable spin cartridge. The expected outcomes of solvent-based protein precipitation in the conventional format and using a disposable, two-stage filtration and extraction cartridge are illustrated in this work. This includes the detailed characterization of proteomic mixtures by bottom-up LC-MS/MS analysis. The superior performance of SDS-based workflows is also demonstrated relative to non-contaminated protein.

The present protocol describes solvent-based protein precipitation under controlled conditions for robust and rapid recovery and purification of proteome samples prior to mass spectrometry.

משקעי חלבון אורגניים מבוססי ממסים לטיהור פרוטאום חזק לפני ספקטרומטריית מסה

While multiple advances in mass spectrometry (MS) instruments have improved qualitative and quantitative proteome analysis, more reliable front-end ...