העברת העובר פולשני המינימלי העובר ויטריפיקציה בשלב העובר אופטימלית במודל ארנב

המטרה העיקרית של ניסוי זה היא לתאר הליך העברת עובר לפרוסקופי בארנב כמודל. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי זה עובד כדי להעביר עוברים באמצעות טכניקה קלה, פולשנית מינימלית. יתר על כן, פרוטוקול ההקפאה היעיל של העובר המתואר כאן פועל גם לאחסון ארוך טווח של עוברי הארנב, ומספק יכולת לוגיסטית גמישה בזמן ויכולת להעביר את המדגם.

כידענו, טכנולוגיות רבייה בסיוע נמצאות בהערכה רציפה כדי לשפר את התוצאות ולהפחית את הסיכונים הקשורים. לכן, באמצעות שתי הטכניקות, ארנב יכול לשמש כמודל בעלי חיים אידיאלי של רבייה אנושית כדי לענות על שאלות מפתח בתחום זה, כגון ההשפעות של מניפולציה העובר במבחנה על צאצאים. הדגמה חזותית של עניינים אלה הם קריטיים כמו צעדי העברת העובר קשה ללמוד, כי זה חייב להיעשות בדיוק רב כדי להבטיח את ההצלחה של הטכניקה.

עבור vitrification עוברי, לטבול את העוברים בתווית שיווי משקל במשך שתי דקות, ואחריו דגירה דקה אחת בתת פתרון vitrification. בסוף הדגירה, לטעון את העוברים לתוך מיני קש פלסטיק 125 microliter, וזוג הקצה הסגור של מיני קש עם מיקרו-חיוני מיליליטר מתאים. בסיס שאפות בינוני עד שליש מאורך הקש, ואחריו בועת אוויר קטנה.

לאחר מכן, השתמש בסטריאומיקרוסקופ כדי לשאוף את העוברים ב -40 מיקרוליטרים של פתרון vitrification, ואחריו עוד בועת אוויר קטנה ומספיק מדיום בסיס כדי להעביר את השבר הנוזלי הראשון עד הכותנה של המיני קש. לאחר מכן לסגור את הקצה שנפתח של מיני קש עם תקע קש, לצלול מיני קש ישירות לתוך חנקן נוזלי כדי להשיג vitrification, ולאחסן את המיני קש במנוון חנקן נוזלי. כדי להפשיר את העוברים להעברה, מניחים את המיני קש אופקית 10 ס"מ מאיד החנקן הנוזלי במשך 20 עד 30 שניות.

כאשר תהליך ההתגבשות מתחיל בתוך המיני קש, טובלים את המיני קש באמבט המים 25 מעלות צלזיוס למשך 10 עד 15 שניות. מיד להסיר את תקעי מיני קש וכותנה ולהשתמש microdispenser מזוגת לגרש את תכולת מיני קש לתוך צלחת המכילה 25 מעלות צלזיוס בסיס בינוני בתוספת 0.33 פתרון סוכרוז טוחנת, שבו עוברים חייבים להישאר במשך חמש דקות. ואז להעביר את העוברים לצלחת של מדיום בסיס טרי עוד חמש דקות דגירה.

כמו ימים רבים לפני גיל העוברים להיות מועבר, להתבונן טורגידות וצבע של הפות של ארנבות בוגרת מינית זמין 4.5 חודשים נקבה, ולזרז ביוץ בבעלי החיים פתוחים עם זריקה תוך שרירית אחת של מיקרוגרם אחד של אצטט buserelin ללא קשר למשקל הגוף. ביום ההעברה, שוטפים את העוברים הטריים או המופשרים במדיום בסיס צלזיוס של 37 מעלות תחת סטריאומיקרוסקופ, ומצמידים קטטר אפידורלי 17-מד מוגדר כראוי למזרק מיליליטר אחד. שאף סנטימטר אחד של מדיום בסיס לתוך הקטטר, ואחריו בועת אוויר קטנה.

לאחר מכן שאף חמישה עד שבעה עוברים ו-10 מיקרוליטרים של מדיום בסיס, ואחריו עוד בועת אוויר קטנה, וס"מ אחד אחרון של מדיום בסיס. לאחר שהעוברים נטענו, מניחים את הארנב המותקבל הרדמה בכלוב על במת התחממות, ומחילים משחה על עיני החיה. לאחר אישור חוסר תגובה רפלקס הדוושה, לגלח את הפרווה מהבטן הגחונית, לנקות את האזור הכירורגי עם סבון גלוקונטי כלורקסידין, ולהסיר את כל השיער שנותר.

מכסים את האזור עם וילון סטרילי עם חור עבור האזור הכירורגי, ולהכניס אחד פורל אנדוסקופי חמישה סנטימטרים לתוך חלל הבטן, שני סנטימטרים caudal לתהליך zyphoid, ולהשתמש מנפח מכני ויסות לחץ כדי לנפח את חלל peritoneal. הכנס את מצלמת האנדוסקופ דרך הטרופי האנדוסקופי, והכנס את מחט האפידורל 17-מד לאזור inguinal, שניים עד שלושה סנטימטרים מן infundibulum. הכנס את הקטטר טעון דרך מחט אפידורל לתוך הבטן, ולהכניס אחד עד שני סנטימטרים של קטטר אפידורל דרך infundibulum באמפולה.

בעדינות לדכא את הבוכנה קטטר לשחרר את העוברים לתוך oviduct. שתי בועות האוויר חייבות לצאת מהקטטר. הסר את הקטטר מיד לאחר שהעוברים שוחררו, ושאוף ושחרר את המדיום הנותר כדי לאשר את היעדר העוברים.

לאחר אישור העברה מוצלחת של העוברים, הסר את המחט האפידורלית ואת מצלמת האנדוסקופ, ושחרר את דו תחמוצת הפחמן בבטן דרך האזור האנדוסקופי. נקה את החתך trocar עם פתרון chlorhexidine, ולסגור את הפצע עם אלומיניום micronised ורוטב פלסטיק. לאחר מכן לטפל בבעלי החיים עם אנטיביוטיקה המתאימה משככי כאבים, ולפקח על החיה עד להחלמה מלאה.

העברת עובר לפרוסקופית זעיר פולשנית ממקמת את הארנב בין המודלים הטובים ביותר של בעלי חיים למחקרי פוריות, כאשר אחוז גבוה של עוברים טריים שהועברו וכתוצאה מכך גור. יש לציין כי ערכים גבוהים יותר מושגים כאשר העברת העובר הטרי מבוצעת עם עוברים בשלב מורולה מוקדם או קומפקטי. תוצאות דומות נצפו לאחר העברת מורולה ארנבת מוטורית מוקדמת ודחוסה, במיוחד עם מורולה קומפקטית, המאשר את היעילות והאמינות של טכניקה זו להעברת עוברים טריים ב vitrified בארנבים.

בעקבות הליך זה, שיטות אחרות כמו טכנולוגיות רבייה מסייעת מותנית ניתן לבצע על מנת לענות על שאלות נוספות כמו איך תוספת של צפיפות יכול לגרום אפקט משכך כאבים בהמשך החיים. לאחר ההתפתחות האחרונה, טכניקה זו סוללת את הדרך עבור מדענים בתחום הרבייה לחקור את האפקט הזה בבני אדם בהתבסס על המרחק ההיגלוגנטי ההדוק בין ארנב לבני אדם. לכן, טכניקה זו יכולה לספק תוצאות הניתנות להעברה בקלות לרפואה קלינית אנושית, כמו גם במין יונקים אחרים.

אל תשכח כי השיטה שלנו מציעה כמה יתרונות היגייניים וכלכליים התואמים את המושג של שלושה R של רווחת בעלי חיים, החלפה, צמצום, ועידון, על ידי כוונה המטרה של שיפור הטיפול האנושי בבעלי חיים ניסיוניים.