Bu deneyin temel amacı bir model olarak tavşan bir laparoskopik embriyo transferi prosedürü tanımlamaktır. Bu tekniğin en büyük avantajı, bu kolay, minimal invaziv bir teknik kullanarak embriyo transferi için çalışıyor olmasıdır. Ayrıca, burada açıklanan etkili embriyo kriyoprezervasyon protokolü de uzun vadeli depolama tavşan embriyoları için çalışır, zaman esnek lojistik kapasiteleri ve örnek taşıma yeteneği sağlayan.
Bildiğimiz gibi, yardımcı üreme teknolojileri sonuçları iyileştirmek ve ilişkili riskleri azaltmak için sürekli değerlendirme de bulunmaktadır. Bu nedenle, her iki teknik kullanarak, tavşan bu alanda anahtar soruları cevaplamak için insan üreme ideal bir hayvan modeli olarak kullanılabilir, yavrular üzerinde in vitro embriyo manipülasyon etkileri gibi. Embriyo transfer adımlarını öğrenmek zor olduğu için bu konuların görsel olarak gösterilmesi çok önemlidir, çünkü tekniğin başarısını sağlamak için büyük bir hassasiyetle yapılması gerekir.
Embriyonik vitrifikasyon için, iki dakika boyunca denge çözeltisi embriyolar batırın, vitrifikasyon çözeltisi bir dakika kuluçka takip. Kuluçka sonunda, 125 mikrolitrelik plastik mini-saman içine embriyolar yükleyin ve uygun bir mililitre mikrodispenser ile mini-saman kapalı ucunu çift. Hasır uzunluğunun üçte birine kadar aspire tabanı orta, küçük bir hava kabarcığı takip.
Daha sonra, embriyoları 40 mikrolitre vitrifikasyon çözeltisi içinde aspire etmek için bir stereomikroskop kullanın, ardından başka bir küçük hava kabarcığı ve ilk sıvı fraksiyonunu mini saman pamuğuna taşımak için yeterli baz ortamı. Daha sonra mini pipetin açılan ucunu bir saman fişi ile kapatın, mini pipeti doğrudan sıvı nitrojene daldırArak vitrifikasyonelde edin ve mini pipeti sıvı nitrojen dewar'da saklayın. Bir transfer için embriyoları eritmek için, 20 ila 30 saniye sıvı azot buharından 10 santimetre yatay olarak mini-saman yerleştirin.
Kristalizasyon işlemi mini pipetin içinde başladığında, mini pipeti 25 derece lik su banyosuna 10 ila 15 saniye batırın. Hemen mini-saman ve pamuk fişleri çıkarın ve embriyolar beş dakika boyunca kalması gereken 0,33 molar sakaroz çözeltisi ile takviye 25 derece santigrat baz orta içeren bir plaka içine mini-saman içeriğini çıkarmak için birleştirilmiş mikrodispenser kullanın. Sonra embriyoları bir tabak daha taze baz aparatına aktarın.
Transfer edilecek embriyoların yaşı kadar önce birçok gün olarak, mevcut cinsel olgun 4.5 aylık dişi tavşan vulvas ların bulanıklığını ve rengini gözlemlemek ve vücut ağırlığı ne olursa olsun buserelin asetat tek bir intramüsküler enjeksiyon ile alıcı hayvanlarda yumurtlama neden. Transfer günü, taze veya çözülmüş embriyoları stereomikroskop altında 37 derece santigrat baz ortamda durular ve uygun şekilde yapılandırılmış 17 kalibrelik epidural kateteri bir mililitreşşile rendele. Bir santimetrelik taban ortamını katetere aspire edin ve ardından küçük bir hava kabarcığı ekleyin.
Sonra 5-7 embriyo ve 10 mikrolitre baz orta, başka bir küçük hava kabarcığı ve baz orta son bir santimetre takip aspire. Embriyolar yüklendikten sonra, anestezi alan tavşanı ısınma evresinde bir kafese yerleştirin ve hayvanın gözlerine merhem uygulayın. Pedal refleksyanıt eksikliği doğruladıktan sonra, ventral karın kürk tıraş, klorheksidin glukonat sabun ile cerrahi alanı temizlemek, ve kalan saç kaldırmak.
Cerrahi alan için bir delik ile steril bir perde ile alanı kaplayın ve karın boşluğuna bir endoskopik trokar beş santimetre, zyphoid sürecine iki santimetre kaudal yerleştirin ve periton boşluğu şişirmek için mekanik insufflator düzenleyen bir basınç kullanın. Endoskop kamerasını endoskopik trokardan takın ve 17-gauge epidural iğneyi infundibulumdan 2-3 santimetre uzaklıktaki inguinal bölgeye takın. Yüklü kateteri epidural iğneden karın içine yerleştirin ve ampulla infundibulum aracılığıyla epidural kateterin 1-2 santimetre yerleştirin.
Yavaşça oviduct içine embriyolar serbest bırakmak için kateter piston depresif. Her iki hava kabarcıkları kateter çıkmak gerekir. Embriyolar serbest bırakıldıktan hemen sonra kateteri çıkarın ve embriyoların yokluğunu doğrulamak için kalan ortamı aspire edin ve bırakın.
Embriyoların başarılı bir transferdoğruladıktan sonra, epidural iğne ve endoskop kamera çıkarın, ve endoskopik trokar aracılığıyla karın karbondioksit serbest. Trokar kesisini klorheksidin çözeltisi ile temizleyin ve yarayı mikroniste alüminyum ve plastik bir pansumanla kapatın. Sonra uygun antibiyotik ve analjezikler ile hayvan tedavi ve tam iyileşme kadar hayvan izlemek.
Minimal invaziv laparoskopik embriyo transferi üreme çalışmaları için en iyi hayvan modelleri arasında tavşan yerleştirir, transfer taze embriyoların yüksek bir yüzdesi ile bir yavru sonuçlanan. Özellikle, taze embriyo transferi erken veya kompakt morula etabında embriyolarla yapıldığında daha yüksek değerler elde edilir. Benzer sonuçlar erken ve sıkıştırılmış vitrifiye tavşan morula transferi nden sonra gözlenir, özellikle kompakt morula ile, tavşan taze in-vitrified embriyoların transferi için bu tekniğin etkinliğini ve güvenilirliğini doğrulayan.
Bu prosedürü takiben, koşullu Yardımcı Üreme Teknolojileri gibi diğer yöntemler yoğunlukları eklenmesi daha sonra hayatında bir analjezik etkiye neden olabilir gibi ek soruları cevaplamak için yapılabilir. Son gelişimden sonra, bu teknik üreme alanında bilim adamları için tavşan ve insanlar arasındaki yakın filogenetik mesafedayalı insanlarda bu etkiyi keşfetmek için önünü açıyor. Böylece, bu teknik insan klinik tıp kolayca aktarılabilir sonuçlar sağlayabilir, hem de diğer memeli türlerinde.
Metodumuz, deneysel hayvanların insan tedavisini iyileştirmeyi amaçlayan üç R'lik hayvan refahı, Değiştirme, Azaltma ve Arıtma konseptine uygun hijyenik ve ekonomik avantajlar sunduğunu unutmayın.
