הקרנות מועברות בתדירות הגבוהה ביותר באמצעות מאיצים ליניאריים. פרוטוקול זה מאפשר לחוקרים להעריך את ההשפעות הביולוגיות של קרינה על תאים באמצעות מאיץ ליניארי. היתרון של טכניקה זו הוא כי באמצעות מאיץ ליניארי, החוקרים יכולים לחקור מגוון רחב של מינונים רלוונטיים קלינית שיעורי המינון.
יתר על כן, פרוטוקול זה יכול לשמש עבור כל סוגי התאים הסרטניים. ניתן לבצע שיטה זו באמצעות ציוד דומה לזה המוצג כאן. לדוגמה, מאיצים ליניאריים המיוצרים על-ידי ספקים אחרים.
אנשים שלא חוו ביצוע חישובים דו-סימטריים באמצעות מאיץ ליניארי עשויים להיאבק כדי לחשב את המספר הנכון של יחידות צג הנדרשות כדי לספק את המינון הרצוי למדגם. הם ירוויחו על ידי המבקשים ייעוץ של פיזיקאי רפואי ניסיון או dosimetrist. מתן מינון לדגימה במדויק באמצעות מאיץ ליניארי דורש מיקום זהיר.
יומיים לפני הקרנה מתוכננת, עובד מכסה המנוע תרבות, להשתמש פיפטה סטרילי חמישה מיליליטר כדי לאסוף תאים דמויי גזע גליומה מצלחת תרבות לתוך צינור צנטריפוגה 15 מיליליטר. צנטריפוגה התאים ב 200 פעמים g במשך שלוש דקות בצנטריפוגה משטח. השלך את העל-טבעי ולחץ מחדש על גלולת התא עם מיליליטר אחד של טריפסין-EDTA.
דגירה בטמפרטורת החדר במשך חמש דקות כדי לעכל את גלולה ולעשות השעיה תא יחיד טריפסין-EDTA. כל שתי דקות במהלך העיכול, בעדינות לנער את החלק התחתון של צינור צנטריפוגה כדי לוודא את התאים מתעכלים ביסודיות. לאחר מכן הוסיפו שלושה מיליליטר של מדיה לתרבות תאי גזע כדי להתרווה על טריפסין, לערבב בעדינות, וצנטריפוגה במהירות של 200 פעמים g במשך שלוש דקות בצנטריפוגה על השיש.
לאחר השלכת supernatant, resuspend את גלולת התא עם חמישה מיליליטר של מדיה תא תרבות לספור את התאים עם המוציטמטר. לוח חמישה מיליון תאים מחולקים לשני לוחות 10 ס"מ המכילים 10 מיליליטר של מדיה תרבות התא דגירה 48 שעות ב 37 מעלות צלזיוס. ממש לפני ההקרנה המתוכננת, לאסוף את התאים צנטריפוגה כפי שנעשה בעבר.
השלך את העל-טבעי ולחץ מחדש על גלולת התא עם חמישה מיליליטר של מדיה של תרבות תאים. מעבירים מיליליטר אחד של השעיית תאים לצלחת של 35 מילימטר המכילה שני מיליליטר של מדיום תרבות התא, ומוודאים שהמדיום מגיע לגובה של סנטימטר אחד. מעבירים את התאים המפוקחיים למיכל משני כדי להפחית את הסיכון לזיהום ולהביא את התאים במיכל על עגלת שירות למתקן ההקרנה כדי להקרין את התאים.
יום אחד לפני הקרנה, עובד מכסה המנוע של תא התרבות, להשתמש פיפטה פסטר מחובר ואקום כדי להסיר מדיום DMEM מצלחת תרבות התא לקו התא המצורף. ואז לשטוף את התאים עם חמישה מיליליטר של PBS סטרילי לשטוף את המדיום שיורית. מוסיפים מיליליטר של טריפסין-EDTA לתוך צלחת התרבות בעדינות להטות את צלחת התרבות כדי לוודא כי המנה כולה מכוסה.
לאחר הדגירה בטמפרטורת החדר במשך חמש דקות, מרווה את תגובת טריפסין-EDTA עם שלושה מיליליטר של מדיה DMEM. השתמש פיפט חמישה מיליליטר כדי לאסוף את התאים לתוך צינור צנטריפוגה 15 מיליליטר, צנטריפוגה, ולאחר מכן תרבות התאים כמתואר בכתב היד. כדי להקרין תאים אלה שהוכנו בעבר באמצעות תוכנת המסוף של LINAC, הגדר את גנט המאיץ ואת הקולימאטור לאפס מעלות, פתח את לסתות x ו- y לגודל שדה סימטרי של חמישה על חמישה סנטימטרים רבועים, וחזור בו מהקולימטורים הרב-שלביים.
מוסיפים לפחות חמישה סנטימטרים של חומר שווה ערך למים על ספת הטיפול וממקמים את צלחת התא להיות מוקרן על זה במרכז הכוונת LINAC. מניחים את התאים בעומק של מינון מרבי בקרן רנטגן של שישה מגה וולט סביב 1.5 ס"מ ומוסיפים סנטימטר נוסף של חומר שווה ערך למים על גבי המנה. הדביקו את המצביע הקדמי לראש ה-LINAC והרחיבו אותו עד שהוא נוגע בפני השטח של חומר ההצטברות.
כוונן את גובה הטבלה עד שהמרחק מהמקור למשטח ההצטברות יהיה 100 ס"מ. לעזוב את כספת הטיפול, לוודא שכל האנשים האחרים עזבו. ודא שאין תאים אחרים בחדר ולאחר מכן סגור את דלת הכספת.
אשר את גודל השדה, יחידות הצג ויחידות הצג לדקה במסוף ולאחר מכן הפעל את הקרן לתא קרינה. שלוש דגימות של תאים דמויי גזע גליומה הוכנו באמצעות פרוטוקול זה ואספו 24 שעות לאחר הקרנה. שם חושבו פרופילי מחזור תאים והוצג עם אחוזי התאים בשלבים שונים של מחזור התא.
מעצר מחזור תא G2 נצפתה לאחר הקרנה של תאי גזע גליומה עם שיעור מינון סטנדרטי או שיעור מינון גבוה במיוחד, בהשוואה לתאי בקרה שאינם מוקרנים. על מנת לקבל את המינון הנכון נמסר, חשוב ביותר למדוד את הגובה של התקשורת בצלחת התרבות כדי לוודא שהוא מגיע סנטימטר אחד. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע בדיקות ביולוגיות אחרות, כגון כשל חיסוני, כתם מערבי וניתוח מחזור תאים.
מאז הליך זה מספק לחוקרים רלוונטי קלינית מינון והגדרות שיעור המינון, זה יכול לשמש כדי להעריך את השפעת הקרינה על מודלים מבוססי תרבות תאים רבים.
