פחמן-11 הוא אחד הרדיויזוטופים הנפוצים ביותר בטומוגרפיה של פליטת פוזיטרונים בגלל השפע שלו במולקולות אורגניות ומחצית חיים קצרה של 20 דקות. בסרטון זה, אנו מראים טכניקת radiolabeling פחמן-11 יעיל באמצעות מחסניות מיצוי בשלב מוצק. בהשוואה לשיטות קונבנציונליות, טכניקות מבוססות מחסנית מיתירות את השימוש ב- HPLC, מקצרת את זמן הרדיוסינתזה, משפרת את אמינות הסינתזה, מפשטת את תהליך האוטומציה ומאפשרת עמידה בשיטות הייצור הטובות, GMP.
הטכניקה מבוססת המחסנית מוכחת כאן ברדיוסינתזה של C11 PiB, מעקב PET המשמש להדמיית in vivo של לוחות עמילואיד במוחם של חולים הסובלים ממחלת אלצהיימר. לאחרונה, יישמו את הטכניקה של שלושה באחד על radiosynthesis של C11 ABP688, מעקב PET להדמיה של קולטני גלוטמט metabotropic סוג חמש, כמו גם אחרים פחמן-11 מתויגים עוקבים. לשלב 450 מיליליטר של 0.2-טוחן פתרון של חומצה אצטית עם 50 מיליליטר של 0.2-טוחן פתרון של נתרן אצטט כדי להכין את מאגר אצטט ב pH 3.7 כמו חיץ אחד.
אמת את ה- pH של המאגר באמצעות פסי pH או מד pH. לאחר מכן, לשלב 12.5 מיליליטר של אתנול מוחלט עם 87.5 מיליליטר של חיץ אצטט בבקבוק 100 מיליליטר כדי להפוך 12.5% פתרון אתנול מים כמו לשטוף אחד. לשלב 15 מיליליטר של אתנול מוחלט עם 85 מיליליטר של חיץ אצטט בבקבוק 100 מיליליטר כדי להפוך 15% פתרון אתנול מים כמו לשטוף שני.
שלב חמישה מיליליטר של אתנול מוחלט עם חמישה מיליליטר של חיץ אצטט כדי להפוך 50% פתרון אתנול מים כמו eluent הסופי, ולמשוך 2.5 מיליליטר של פתרון זה לתוך מזרק 10 מיליליטר. כדי ליצור מראש את מחסנית tC18, מהסוף הנשי, השתמש במזרק כדי להעביר 10 מיליליטר מים ואחריו חמישה מיליליטר של אצטון דרך המחסנית. יבש את המחסנית עם זרם של חנקן ב 50 מיליליטר לדקה במשך דקה אחת.
בצינור אפנדורף, להמיס שני מיליגרם של מבשר 6-OH-BTA-0 במיליליטר אחד של אצטון נטול מים. מחזיק לור קצה, 250 מיקרוליטר, מזרק זכוכית מדויק כלפי מטה, למשוך 100 microliters של פתרון מבשר ולאחר מכן 50 microliters של כרית אוויר. הסר את המחט, והקש על המזרק כדי לוודא כרית האוויר היא מעל הפתרון במזרק.
החל את הפתרון מבשר על מחסנית tC18 מהסוף הנשי על ידי דחיפת הבוכנה לאט כל הדרך למטה. אל תדחוף את האוויר עוד יותר. אבטח והרכב את הסעפת החד-פעמית הסטנדרטית בת חמש היציאות במודול הסינתזה.
ליציאה 1 יש שתי עמדות. חבר את המזרק האופקי למתקן האוטומטי המצויד במזרק של 20 מיליליטר. חבר את הפניש האנכי לבקבוק עם לשטוף אחד.
חבר את הפלט של המודול המייצר C11 מתיל טריפלאט ליציאה 2 של סעפת. התקן את מחסנית tC18 עמוסה במבשר 6-OH-BTA-0 בין יציאות 3 ו-4. לפורט 5 יש שתי עמדות.
חבר את השקע האופקי לבקבוק הפסולת ואת השקע האנכי לבקבוקון הסטרילי לאיסוף מעקב באמצעות המסנן הסטרילי. בתא החם המוגן על-ידי עופרת, השתמש בקו טפלון כדי לספק טריפלאט מתיל C11 לתוך הסעפת דרך יציאה 2, ולהעביר אותו דרך מחסנית tC18 טעונה ב 20 מיליליטר לדקה זרימת פלט. מודול טריפלאט מתיל C11 מווסת את הזרימה דרך יציאות שלוש וארבע ולתוך בקבוק הפסולת.
לאחר שכל הרדיואקטיביות הועברה ונלכדה במחסנית tC18 כפי המנוטרת על ידי גלאי הרדיואקטיביות, לעצור את זרימת הגז על ידי סגירת יציאה 2. תן את המחסנית לשבת במשך שתי דקות כדי להשלים את התגובה. ואז, דרך נמל אחד, למשוך 19 מיליליטר של לשטוף פתרון אחד מבקבוק 100 מיליליטר למזרק המתקן ב 100 מיליליטר לדקה.
לוותר על 18.5 מיליליטר של לשטוף פתרון אחד מהמתקן דרך מחסנית tC18 דרך יציאות שלוש וארבע ולתוך בקבוק הפסולת ב 50 מיליליטר לדקה. להבטיח היעדר בועות אוויר בסעפת, כפי שהם עשויים להפחית את יעילות ההפרדה. חזור על הנסיגה וחלוקה ארבע פעמים עם 18.5 מיליליטר של לשטוף פתרון אחד בכל פעם נפח כולל של 92.5 מיליליטר עובר דרך tC18.
העבר את קו הקלט ליציאה 1 מכביסה אחת כדי לשטוף שתיים. חזור על הנסיגה וחלוקה שלוש פעמים עם 18.5 מיליליטר של לשטוף שני פתרון בכל פעם ואת הנפח הכולל של 55.5 מיליליטר עובר דרך tC18. החלף מצב שסתום חמש לקראת הבקבוקון הסופי.
נתק את הקו מהמתקן, וחבר אותו למזרק 10 מיליליטר המכיל 2.5 מיליליטר של פתרון eluent הסופי ו 7.5 מיליליטר של אוויר. מחזיק את המזרק כלפי מטה, באופן ידני לדחוף את הפתרון eluent הסופי ואחריו את האוויר דרך מחסנית tC18 דרך יציאות שלוש וארבעה לתוך בקבוקון סטרילי עבור אוסף מעקב באמצעות המסנן סטרילי. העבר את המזרק למזרק המכיל 10 מיליליטר של מאגר הפוספט הסטרילי, ודחוף את כל אמצעי האחסון דרך מחסנית tC18 לתוך הבקבוקון הסטרילי.
נתק את המזרק, ושטף את הקו עם 10 מיליליטר של אוויר באמצעות אותו מזרק. באמצעות מזרק אחד מיליליטר, למשוך דגימות עבור הליכי בקרת איכות טרום הפצה, בדיקת אנדוטוקסין חיידקי, ומבחן סטריליות. כדי לבצע הליכי בקרת איכות טרום הפצה, תחילה לקבוע את הזהות הרדיוכימית, טוהר רדיוכימי, טוהר כימי, ופעילות טוחנת של tracer על ידי מערכת HPLC אנליטי מצויד גלאי רדיואקטיביות UV ועמודה הפוכה פאזה.
קבע את זמני השמירה של 6-OH-BTA-0 ו- 6-OH-BTA-1 וכייל את המכשיר לכימות התוכן של כל תרכובת. קבע את תוכן הממס שיורית על ידי מערכת כרומטוגרפיה גז אנליטי מצויד בעמוד נימי. לקבוע את זמני השמירה של אצטון ואתנול, ולכייל את המכשיר כדי לכמת את התוכן של כל ממס.
מחקר זה ביצע את הרדיוסינתזה של C11 PiB על ידי C11-מתילציה של 6-OH-BTA-0 מבשר עם C11 מתיל טריפלאט. בקרת איכות HPLC אנליטי של C11 PiB מראה את הטוהר הרדיוכימי היה 98%זמני השמירה של 6-OH-BTA-0 מבשר ו 6-OH-BTA-1 מעקב שיא על כרומטוגרמה UV היו 3.6 ו 5.9 דקות, בהתאמה. הניתוח של עקבות UV מראה ריכוז מבשר שיורית מתחת לגבול המקובל של 1.3 מיקרוגרם בהיעדר זיהומים לא רדיואקטיביים אחרים.
זה מצביע על הטוהר הרדיוכימי והכימי של המעקב מקובל על מחקרי PET קליניים. הגדלת הכמות של 6-OH-BTA-0 מ-0.1 מיליגרם ל-0.3 מיליגרם שיפרה את התשואה הרדיוכימית מ-18.1% ל-32.1% על חשבון כמות מעט גבוהה יותר של המבשר במוצר הסופי. טכניקה זו צריכה להיות ישימה למערכות רבות ושונות עם הבדל מתאים בקוטביות בין הקדמה לבין מוצר radiolabeled.
כל המניפולציות הכרוכות איזוטופים רדיואקטיביים חייב להתבצע בתא חם מוגן עופרת על ידי כוח אדם עם הכשרה נאותה לטיפול בחומרים רדיואקטיביים.
