פרוטוקול זה מאפשר אספקה ישירה של טיפולים למערכת העצבים המרכזית של החולדה כדי להעריך את הפרמקוקינטיקה, הפרמקודינמיקה והיעילות של טיפולים חדשניים במודלים של מחלות עכברושים. הליך זה בטוח, יעיל ואינו דורש ציוד יקר או כלים כירורגיים. הדגמת ההליך יהיו יי חן יי לואו, מדעני מחקר מהמעבדה שלי.
כדי להכין את המדריך המיוחד cannulas, להשתמש בכלי סיבובי עם גלגל לחתוך כדי לחתוך את שני הקצוות של מחט מד 19 כדי לקבל בערך אחד וחצי עד שני סנטימטר ארוך מדריך cannula. לאחר מכן השתמש בגלגל השחזה של הכלי הסיבובי כדי להחליק את שני הקצוות. כדי להכין את מכלול חוט הקטטר, לחתוך חתיכה אחת באורך שמונה ס"מ של צינורות PE10 בקוטר 011 אינץ 'כדי לשמש קטטר תוך-פתקל עבור כל בעל חיים.
השתמש בעט סמן עמיד באתנול כדי לסמן שני סנטימטרים מקצה אחד של כל פיסת צינורות. עבור כל חיה, הכנס חוט 11 ס"מ ארוך סגנון לחתוך מ polytetrafluoroethylene מצופה חוט נירוסטה לתוך הלומן של קטטר PE10 שמונה ס"מ. כדי להכין את מכלול קטטר המסירה, לחתוך חתיכה של חמישה עד 10 ס"מ 023 אינץ ' קוטר PE50 קטטר ולהכניס מתאם צינורות מד 23 לתוך קצה אחד של הקטטר.
לאחר מכן הכנס מחט 30 מד עם רכזת חתוכה לחתיכה כ 0.5 ס"מ של צינורות PE10 ולחבר את צינורות PE10 לקצה השני של הקטטר. כדי להכין הרכבה מדריך מחט cannula, מניחים cannula מדריך על קצה של מחט 23 מד. לפני תחילת הניתוח, מניחים כרית חימום על שולחן הניתוחים ומכסים את הפנקס עם גיליון וילון סטרילי.
מניחים צינור צנטריפוגה חרוט 50mL על הסדין ולאשר חוסר תגובה קמצוץ הבוהן בחולדה ניסיונית הרדמה. לאחר שקילה של החיה, לגלח את הגב מהזנב אל עמוד השדרה החזי caudal ולהמקם את החולדה מגולחת על הסדין הסטרילי במצב נוטה. מקם את צינור 50mL מתחת לבטן כדי להגמיש את עמוד השדרה באזור המותני, ולהחיל משחה עיניים על העיניים.
לאחר מכן, להזריק תת עורית מיליגרם אחד לקילוגרם של Buprenorphine שחרור מתמשך ולנקות את העור החשוף עם povidone רציף וקרצוף אלכוהול. עוטף את החיה עם סדין שקוף סטרילי. למיקום הקטטר והזרקת המתחם, זהה את שני הבורות הטבעיים בין השרירים שמעל האגן המגולח, וביד אחת החזקת הבורות, השתמש ביד השנייה כדי ללחוץ בעדינות ולהרגיש את עמוד השדרה מן caudal לכיוון rostral כדי לאתר את הכניסה הגדולה הראשונה בין החוליות.
לאחר זיהוי הרווח הבין חולייתי בין חוליות S1 ו- L6, לנוע מעט rostrally כדי לזהות את החלל הבין חולייתי בין חוליות L5 ו L6 חוליות. השתמש אזמל לעשות חתך ארוך לא יותר משני סנטימטר בעור ובקפסולה שרירים באתר זה לאורך קו האמצע מן rostral לכיוון caudal, כך אתר ההזרקה יהיה במרכז החתך. השתמש מספריים ניתוח לנתח את רקמת החיבור עד שכבת השריר ניתן לדמיין.
בצע חתך של סנטימטר אחד בקפסולת השריר מיד בצלבי לתהליך עמוד השדרה הגבי של חוליית המותני L6. מקם את מכלול מחט המדריך ליד ההיבט הראשון של החוליה המותנית השישית ודחוף את ההרכבה לחלל הבין חולייתי לאורך ההיבט הראשון של החוליה השישית כך שסוף המחט חודר לתעלת עמוד השדרה. השתמש מדחפים קהה כדי לאתר את תהליך עמוד השדרה הגבי של חוליית המותני L6 ואז לדחוף את המחט לאורך ההיבט הראשון של החוליה השישית לתוך החלל invertebrata.
לדחוף את המדריך cannula במקום לאורך המחט, להסיר את המחט, ולהכניס את הרכבת חוט קטטר לתוך cannula מדריך. הריסת הקטטר בזווית של כ-45 מעלות לתעלת עמוד השדרה, כפתה את קצה הקטטר כ-0.3 ס"מ לתוך התעלה. הסר את חוט הסגנון כ -2.5 ס"מ מהטיפ התוך-תת-תאי של הקטטר וקדם את הקטטר לתעלת עמוד השדרה עד שסימון שני הס"מ על הקטטר נראה ממש מתחת לשריר.
כאשר הקטטר נמצא במקום, להסיר את המדריך cannula להשאיר את קטטר חוט סגנון במקום. מקדמים את הקטטר לתעלת עמוד השדרה עד שסימן שני סנטימטרים נמצא בכניסה לתעלה ומושכים לחלוטין את חוט הסגנון. נוזל השדרה המוחי עשוי להיות חזותי נכנס קטטר מושתל.
לאחר מכן חבר את מכלול קטטר המסירה לקצה הדיסטלי של הקטטר המושתל דרך קצה המחט 30 מד. לאחר מכן, לטעון 60 microliters של מלוחים סטריליים לתוך מזרק 100 microliter ולהעמיס בולוס של 30 microliters של תרכובת הבדיקה לתוך מזרק שני. חבר את מזרק מלוחים לקצה מתאם צינורות של הרכבה קטטר משלוח לשטוף 20 microliters של מלוחים סטריליים לתוך החלל התוך-תיאה.
כאשר כל תמיסת מלח כבר סמוק, להחליף את מזרק מלוחים עם מזרק טעון בולוס ולהזריק 30 microliters של תרכובת הבדיקה לתוך החלל התוך-תיאה על פני תקופה של 30 שניות. כאשר כל הבולוס נמסר, להחליף את המזרק טעון בולוס עם מזרק טעון מלוחים אחר לשטוף את הקטטר עם 40 microliters נוספים של מלוחים. כאשר הנפח השני של מלוחים נמסר, לנתק את הרכבה קטטר משלוח מן קטטר מושתל ולהשתמש בזוג מלקחיים מאוד חם חום מעוקר ניתוח כדי להדק על הצינור לחתוך באופן בלתי מתאים ולאטום את הקטטר המושתל.
השתמש תפרים monofilament לספוג כדי לאבטח את קטטר אטום בחום לרקמת החיבור ולאחר מכן להשתמש תפרים nonabsorbable כדי לסגור את העור. לאחר מכן השתמש גזה מלוחים לשטוף כל דם מן העור ולה מניחים את החולדה באינקובטור מחומם עם ניטור עד הגינות מלאה. בניסוי מייצג זה, נוקאאוט טוב מאוד הושג בכל האזורים שנאספו לאחר משלוח אחד של בולוס אנטיסנס אוליגונוקלאוטיד כפי שהוכח.
עם זאת, מידה מסוימת של שונות אזורית נמדדה כאשר חוט השדרה מציג את האחוז הגבוה ביותר של הפלה. לאחר זריקה מוצלחת של אוליגונוקלאוטיד antisense, או טיפולים אחרים, לתוך מודל מתאים, אפשר להעריך את פרמקוקינטיקה, פרמקודינמיקה, ויעילות של טיפולי.
