המחקר שדווח כאן נתמך בחלקו על ידי המכון הלאומי לסרטן של המכונים הלאומיים לבריאות תחת פרס לא. R33 CA217702 והיוזמה למיקסום תוכנית פיתוח התלמידים (IMSD). התוכן הוא באחריות המחברים בלבד ואינו מייצג בהכרח את ההשקפה הרשמית של המכונים הלאומיים לבריאות.

דגימות סרום אנושי התקבלו ממתנדבים בהסכמה באישור IRB ובהתאם לעקרונות שבאו לידי ביטוי בהצהרת הלסינקי. דגימות קודדו ולא זוהו לפני המעבר למעבדה האנליטית.
1. הכנת מדגם
<ol><li>תפילת תאים HepG2
	<ol>
<li>זרע על 10 x 106 HepG2 תאים לכל בקבוקון ב 16 T75 צלוחיות עם 14 מ"ל של מדיה EMEM בתוספת 10% סרום בקר עוברי (FBS) ולגדל תאים במשך 2 ימים.</li>
		<li>הכן חוצץ RIPA: בצינור 50 מ"ל, להוסיף 1.5 מ"ל של 5 M NaCl, 2.5 מ"ל של 1 M Tris-HCl (pH = 7), 500 μL של NP-40 ריאגנט, ולאחר מכן להביא את הנפח הסופי ל 50 מ"ל עם מי DI.</li>
		<li>הכן מאגר תמיסת: aliquot 20 מ"ל של מאגר RIPA לתוך צינור 50 מ"ל ולהוסיף 200 μL של תמיסת מעכב פרוטאז 100x כדי לעכב חלבון השפלת שומנים בדם. יש לאחסן ב-4 °C (75°F). הערה: מאגר תמוגה תואם עם ריאגנטים TBARS ואינו מפריע לספיגה ב 532 ננומטר. אם אתם מתכננים להשתמש במאגר תמוגה אחר או להוסיף מרכיבים נוספים למאגר התמוגה, יש לבצע מחקרי אימות ראשוניים כדי לוודא שרכיבי מאגר תמוגה תואמים ל- TBARS assay.</li>
		<li>הסר מדיה המכילה 10% FBS ותאי לשטוף 2x עם 5 מ"ל של PBS קר, סטרילי 1x.</li>
		<li>הוסף 1 מ"ל של מאגר תמוגה לבקבוקי T75 המכילים את התאים ודגר אותם במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר (RT) עם מערבולת מתמדת כדי להבטיח את המאגר מופץ היטב.</li>
		<li>לאסוף ליסאטים לתוך תוויות מתאימות 2 מ"ל צינורות פוליפרופילן snap-cap ודגרה על קרח במשך 10 דקות.</li>
		<li>סובבו את ה-lysates ב-5,000 x g למשך 10 דקות ב-RT כדי לאסוף פסולת תאים, ושאפו את פסולת העל לצינור יחיד של 15 מ"ל.</li>
		<li>לרכז תא ליסאט supernatant פי ארבעה באמצעות Speed Vac ב 50 °C ו 3 mbar ולעשות aliquots של 94 μL כל לתוך 2 mL snap-cap צינורות פוליפרופילן. יש לאחסן דגימות ב-80 °C (80 °F) עד שהן משמשות לחמצון במבחנה ו/או לבדיקת TBARS. הערה: כדי להימנע מריכוז התא lysate supernatant, תאים יכולים גם להיות מנותקים באמצעות 3 מ"ל של טריפסין 1x, מנוטרלים עם 6 מ"ל של מדיה, שטף 2x עם 5 מ"ל של PBS קר. לאחר מכן ניתן לשחזר כדורי תאים ב 250 μL של מאגר תמה, ולאחר מכן ניתן לבצע שלבים 1.1.6 ו- 1.1.7.</li>
		<li>הכן פתרון מלאי CuCl2 35 mM בחומצה אצטית (pH = 4).<ol>
<li>הכן פתרון חומצה אצטית (pH = 4): לדלל 1 μL של חומצה אצטית קרחונית ב 100 מ"ל של מים DI (pH צריך להיות כ 4 אבל לאשר את זה עם מד pH). מוסיפים עוד מים או חומצה אצטית כדי להתאים את ה- pH ל -4.</li>
			<li>משקל על 0.1936 גרם של נחושת II כלוריד להתמוסס ב 10 מ"ל של פתרון חומצה אצטית (pH = 4) כדי להפוך 144 mM CuCl2 מלאי. Aliquot 490 μL מפתרון זה ולהוסיף 1,510 μL של חומצה אצטית (pH = 4) כדי להפוך פתרון CuCl2 35 מ"מ.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Aliquot 6 μL מפתרון מלאי CuCl2 35 mM ולהוסיף אותו לשש דגימות המכילות 94 μL של ליסאט תא כדי להפוך את ריכוז CuCl2 הסופי של כ 2 מ"מ. הוסף 6 μL של פתרון חומצה אצטית (pH = 4) שאין לו CuCl2 עד שש דגימות המכילות 94 μL של ליסאטים תא לשימוש כפקדים. הנפח הסופי של ליסאט תא צריך להיות 100 μL, וזה מה שישמש לבדיקת TBARS. הערה: ביצוע פתרון מלאי CuCl2 35 mM בחומצה אצטית (pH = 4) יש צורך למנוע משקעים של הידרוקסיד נחושת.</li>
		<li>מדגם דגימות בתנור ב 37 °C (24 שעות) ולבצע TBARS בדיקות על כל מדגם המכיל נפח סופי של 100 μL.</li>
		<li>חזור על שלבים 1.1.9 ו- 1.1.11 2x בימים נפרדים כדי לבדוק את יכולת השחזור של בדיקת TBARS עבור lysates תא HepG2.</li>
	</ol></li>
	<li>ליפופרוטאינים בצפיפות נמוכה הערה: בדרך כלל, ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה מטוהר מראש (LDL) מכיל כמות מסוימת של EDTA. דגימות LDL בשימוש כאן מכילות 0.01% EDTA. EDTA יכול לעכב את החמצון במבחנה Cu(II) בתיווך של LDL. לפיכך, ייתכן שיהיה צורך להסיר EDTA מדגימות LDL לפני ניסויים או ניתוחים. שלבים 1.2.1–1.2.5 מתארים תהליך זה. אזהרה: נתרן הידרוקסיד הוא מאכל וגורם לגירוי בעור ובעיניים. השתמש בציוד מגן אישי מתאים.<ol>
<li>Aliquot 24 μL ממלאי LDL 5.51 מ"ג /מ"ל (ריכוז חלבונים שנקבע בשיטת לאורי שונה באמצעות BSA כסטנדרט) לצינורות פוליפרופילן 1 מ"ל המסומנים כראוי. יש להפוך כמה עליקוטים לפי הצורך ולאחסן ב-4 מעלות צלזיוס עד לשימוש בבדיקת חמצון ו/או TBARS.</li>
		<li>הכן מאגר HEPES של 10 מ"מ ב- 0.15 M NaCl מותאם ל- pH = 7 עם חרוזי NaOH: המיס 4.39 גרם של NaCl ב- 0.49 ליטר מים, ולאחר מכן הוסף 1.19 גרם של HEPES. ממיסים היטב עם בר ערבוב. מוסיפים חרוזי נתרן הידרוקסיד עד pH הוא 7. לדלל ל 0.5 L עם מים. יש לאחסן מאגר במהירות של 4 °C (5%), ולהשתמש תוך 3 חודשים.</li>
		<li>הוסף 476 μL של מאגר HEPES 10 mM ב 0.15 M NaCl (pH = 7) לדגימות LDL aliquoted להביא נפח סופי ל 500 μL. הוסף דגימת LDL מדוללת למכשיר מסנן ספין צנטריפוגלי 0.5 מ"ל עם ניתוק משקל מולקולרי של 100K.</li>
		<li>ספין דגימות ב 14,000 x g במשך 10 דקות ב RT, משאיר נפח retentate סופי של כ 30 μL. דגימות reconstit ב 480 μL של 10 mM HEPES חוצץ ב 0.15 M NaCl (pH = 7) ולהסתובב שוב ב 14,000 x g במשך 10 דקות ב RT. בצע שלב זה 2x עבור סך של ארבעה ספין-דרך.</li>
		<li>מקם את התקן המסנן הפוך לתוך צינור פוליפרופילן snap-cap חדש 2 מ"ל, וצנטריפוגה ב 1000 x g במשך 2 דקות כדי לאסוף דגימת LDL (נפח סופי = כ 30 μL).</li>
		<li>דגימת Aliquot לתוך כראוי שכותרת 1 mL צינור ולהוסיף 20 μL של מים לכל מדגם כדי להשיג נפח סופי של 50 μL.</li>
		<li>הכנת 200 תמיסת מלאי CuCl2 μM בחומצה אצטית (pH = 4)<ol>
<li>הכן פתרון חומצה אצטית (pH = 4): ראה שלב 1.1.9.1.</li>
			<li>הכן פתרון מלאי CuCl2 144 mM (ראה שלב 1.1.9.2), ולאחר מכן aliquot 5.5 μL מן 144 mM CuCl2 מניות להתמוסס בנפח הסופי של 4 מ"ל של חומצה אצטית (pH = 4) כדי להפוך את פתרון 200 μM.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Aliquot 2.7 μL מפתרון מלאי 200 μM CuCl2 ולהוסיף אותו לשש דגימות המכילות 50 μL של LDL כדי להשיג ריכוז CuCl2 הסופי של ~ 10 מיקרומטר. הוסף 2.7 μL מפתרון חומצה אצטית (pH = 4) שאינו מכיל CuCl2 לשש דגימות המכילות 50 μL של LDL שישמשו עבור הפקדים.</li>
		<li>מדגם דגימות LDL במשך 2 שעות בתנור ב 37 °C (50 °F). לאחר 2 שעות, להביא את הנפח הסופי ל 100 μL עבור כל מדגם עם 10 mM HEPES חוצץ ב 0.15 M NaCl (pH = 7). לבצע מיד TBARS אסייד.</li>
		<li>חזור על שלבים 1.2.3–1.2.9x ביומיים שונים כדי לבדוק את הרבייה של בדיקת TBARS.</li>
	</ol></li>
	<li>נסיוב אנושי
	<ol>
<li>מדגם סרום אנושי, לעשות aliquots של 94 μL כל לתוך 2 mL snap-cap צינורות פוליפרופילן ולאחסן דגימות ב -80 °C (80 °F).</li>
		<li>הכן פתרון מלאי CuCl2 35 mM בחומצה אצטית (pH = 4): ראה שלב 1.1.9.</li>
		<li>Aliquot 6 μL מפתרון מלאי CuCl2 ולהוסיף אותו לשש דגימות המכילות 94 μL של סרום אנושי כדי להפוך את ריכוז CuCl2 הסופי של כ 2 מ"ר. הוסף 6 μL של פתרון חומצה אצטית (pH = 4) שאין לו CuCl2 עד שש דגימות המכיל 94 μL של סרום אנושי לשימוש כמו פקדים.</li>
		<li>לדגור דגימות סרום אנושי במשך 24 שעות בתנור ב 37 °C ולקבוע רמות של חמצון עם TBARS בדיקת (סעיף 4).</li>
		<li>חזור על שלבים 1.3.2–1.3.4x ביומיים נפרדים כדי לקבוע את יכולת השחזור של בדיקת TBARS.</li>
	</ol></li>
</ol>2. הכנת ריאגנט
אזהרה: חומצה תיוברביטורית גורמת לגירוי בעור ובעיניים ואולי מזיקה על ידי שאיפה או ספיגת העור. חומצה אצטית עלולה לפגוע באיברים פנימיים אם שואפים. הכן את כל פתרונות החומצה במכסה אדים.
<ol><li>הכנת פתרון נתרן 8.1% (w/v) דודסילסולפט (SDS)<ol>
<li>משקל 32.4 גרם של SDS להתמוסס ב 350 מל של מים DI ב. השתמשו בסרגל ערבוב מגנטי כדי להמיס בעדינות SDS ולהימנע מיצירת בועות. הבא נפח סופי ל-400 מ"ל עם מי DI ואחסן פתרון SDS ב-RT. הערה: כאן מוכן פתרון SDS עודף של 8.1%; עם זאת, עבור 96 דגימות, רק על 20 מ"ל של פתרון 8.1% SDS נדרשים. הכן פתרון זה בהתאם למספר הדגימות המנותחות.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכנת 3.5 M נתרן אצטט חוצץ (pH = 4)<ol>
<li>לדלל 100 מ"ל של חומצה אצטית קרחונית ב 350 מ"ל של מים DI בכוס. השתמש בסרגל ערבוב מגנטי כדי להמיס אותו בעדינות.</li>
		<li>הכן פתרון 6.5 M NaOH באמצעות חרוזי נתרן הידרוקסיד במים. להמיס 13 גרם של חרוזי NaOH ב 40 מ"ל של מים DI ולהביא לנפח סופי של 50 מ"ל עם מים DI.</li>
		<li>לאט להוסיף כ 46 מ"ל של פתרון 6.5 M NaOH לתמיסת חומצה אצטית תוך ערבוב עם מוט ערבוב (זה צריך להעלות את ה- pH ל 4, אבל לאשר על ידי הוספה איטית של פתרון NaOH תוך מדידה באמצעות מד pH).</li>
		<li>להביא נפח סופי ל 500 מ"ל עם מים DI ולאחסן מאגר אצטט נתרן ב RT.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכנת 0.8% תמיסה מימית של חומצה תיוברביטורית (מותאם ל- pH = 4) הערה: בשלב זה, הכנת חומצה thiobarbituric ממוטב עבור כרכים גדולים, שכן מספר רב של דגימות הולך להיות מנותח (108 דגימות, לא כולל הסטנדרטים). הכן פתרון זה בהתאם למספר הדגימות המתוכננות לניתוח.<ol>
<li>הכן פתרון נתרן הידרוקסיד 5 M באמצעות חרוזי נתרן הידרוקסיד ומים: להמיס 4 גרם של חרוזי נתרן הידרוקסיד בנפח סופי של 20 מ"ל של מים. יש לאחסן במיכל פלסטיק. פתרון זה צריך להיות מוכן טרי עבור כל אצווה.</li>
		<li>משקל 4 גרם של חומצה thiobarbituric ולהוסיף 450 מ"ל של מים DI. השתמש בסרגל ערבוב מגנטי כדי להמיס אותו בעדינות. הערה: פתרון זה יובא בסופו של דבר לנפח כולל של 500 מ"ל.</li>
		<li>תוך כדי המסת חומצה thiobarbituric עם מוט ערבוב, להוסיף (לאט ובאופן dropwise) על 3 מ"ל של פתרון 5 M NaOH במרווחים 100 μL. לאחר הוספת פתרון NaOH, חלקיקי חומצה thiobarbituric יתחילו להתמוסס.</li>
		<li>אם חלקיקי החומצה התיוברביטורית עדיין לא נמסו במלואם, הוסיפו עוד מפתרון 5 M NaOH במרווחים של 100 מיקרול עד שכל חלקיקי החומצה התיוברביטורית יתמוססו במלואם. עבור נפח מסוים זה של פתרון, סך של 4 מ"ל של פתרון 5 M NaOH מתווסף להמיס באופן מלא את חלקיקי חומצה thiobarbituric. הערה: בריכוז זה, חומצה thiobarbituric לא יתמוסס באופן מלא אלא אם כן ה- pH הוא כמעט 4.</li>
		<li>תפסיקו להוסיף NaOH אחרי כל החומצה thiobarbituric התמוסס לחלוטין. הימנעו מ-pH של 4. pH הסופי ניתן לאמת על ידי לקיחת 1 μL מן פתרון חומצה thiobarbituric ערבוב והנחת אותו על נייר pH.</li>
		<li>הביאו את הנפח הסופי ל-500 מ"ל עם מים DI וחסנו תמיסת חומצה תיוברביטורית מימית ב-RT.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Malondialdehyde bis (דימתיל אצטל) הכנה מדגם סטנדרטי
הערה: Malondialdehyde (מד"א) אינו יציב ואינו זמין מסחרית. עם זאת, ישנן צורות כימיות שונות של מד"א הזמינות מסחרית, כגון מלח טטרבוטילמוניום של מד"א, ביס מד"א (דימתיל אצטל) ומד"א (דיאתיל אצטל). מתוך שלוש צורות כימיות אלה, מד"א ביס (דימתיל אצטל) משמש כאן, כי רוב המחקרים להשתמש באותו תקן 21,22. אם בוחרים להשתמש בשתי הצורות הכימיות האחרות של מד"א, יש לבצע אימות מוקדם של התאמתן.
<ol><li>הכן פתרון מלאי ביס 550 מיקרומטרי (דימתיל אצטל) על ידי דילול 92 μL של ביס טהור מד"א (דימתיל אצטל) ב 1 ליטר של מים DI. השתמש מוט ערבוב מגנטי לערבב את הפתרון ביסודיות במשך 10 דקות. יש לאחסן את הפתרון במהירות של 4 °C (7%), ולהשתמש תוך חודש אחד.</li>
	<li>הכן 200 מיקרומטר ביס מד"א (דימתיל אצטל) על ידי דילול 726 μL מתוך 550 μM ביס (דימתיל אצטל) מלאי ב 1274 μL של מים DI. פתרון 200 מיקרומטרי ביס של מד"א צריך להיות מוכן טרי בכל פעם שמבצעים בדיקת TBARS.</li>
	<li>הכנת עקומה סטנדרטית: לקחת שמונה צינורות פוליפרופילן snap-cap 2 מ"ל ולתייג אותם עם אותיות A עד H. להוסיף ביס מד"א (דימתיל אצטל) מתוך מלאי 200 מיקרומטר לדלל במים כמתואר בטבלה 1.</li>
	<li>קח שמונה צינורות זכוכית (13 מ"מ x 100 מ"מ) ולתייג אותם A-H, ולאחר מכן להוסיף 100 μL של תקן צינורות המתאימים. בצע שישה שכפולים עבור התקן הריק (מדגם A) כדי לחשב את מגבלות הזיהוי של TBARS. הערה: ניתן להשהות את הפרוטוקול כאן למשך לא יותר משעה אחת.</li>
</ol>4. TBARS אסייד
הערה: לאחר בדיקת TBARS מופעלת, זה צריך להסתיים בלי לעצור.
<ol><li>קח כמה צינורות זכוכית לפי הצורך עבור מספר הדגימות להיות מנותח ולתייג אותם עם שמות הדגימות. לאחר מכן, להוסיף 100 μL של כל מדגם מוכן (כמתואר לעיל) לכל צינור זכוכית.</li>
	<li>הוסף 200 μL של 8.1% SDS לכל מדגם וסטנדרט וסובב בעדינות את צינור הזכוכית בתנועה מעגלית כדי לערבב את הדגימה.</li>
	<li>הוסף 1.5 מ"ל של מאגר נתרן אצטט 3.5 M (pH = 4) לכל מדגם וסטנדרט.</li>
	<li>הוסיפו 1.5 מ"ל לתמיסת החומצה התיוברביטורית (pH = 4) לכל דגימה ותקן.</li>
	<li>הבא את הנפח הסופי ל 4 מ"ל עבור כל מדגם וסטנדרט על ידי הוספת 700 μL של מים DI.</li>
	<li>מכסים בחוזקה כל צינור זכוכית ודגרה בבלוק חימום להגדיר 95 °C (55 °F) במשך 1 שעה. לכסות את צינורות הזכוכית עם רדיד אלומיניום כדי למנוע עיבוי בחלק העליון של הצינורות.</li>
	<li>הסר את צינורות הזכוכית מבלוק החימום ודגרה על קרח במשך 30 דקות.</li>
	<li>דגימות צנטריפוגות ותקנים ב 1500 x גרם במשך 10 דקות ב 4 °C (70 °F). לאחר צנטריפוגה, לשמור על צינורות זכוכית המכילים את הדגימות ואת הסטנדרטים ב RT. הערה: שמירה על הדגימות על קרח או ב 4 °C (4 °F) תגרום המדגם כולו או תקן לזרז.</li>
	<li>מיד לאחר צנטריפוגה, aliquot 150 μL של supernatant מכל צינור ומניחים לתוך באר נפרדת של צלחת 96 באר.</li>
	<li>הסר את כל הבועות מכל באר באמצעות קצה פיפטה. הערה: נוכחות של בועות תניב קריאות ספיגה לא עקביות, מה שיוביל לחוסר סילוק מהותי גבוה.</li>
	<li>קרא ספיגות ב 532 ננומטר. הפחת את קריאת הספיגה הממוצעת של הדגימות הריקות מכל קריאות הספיגה האחרות.</li>
	<li>צור עקומה סטנדרטית על-ידי התוויית קריאות הספיגה החסרות ריקות ב- 532 ננומטר לעומת הריכוז הידוע של כל תקן. התאם את נקודות הנתונים באמצעות רגרסיה ליניארית. חשב ריכוזי מדגם לא ידועים באמצעות המשוואה של קו הרגרסיה הליניארית המתקבלת מהעיקול הסטנדרטי.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Tsikas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+lipid+peroxidation+by+measuring+malondialdehyde+(MDA)+and+relatives+in+biological+samples:+Analytical+and+biological+challenges.">Assessment of lipid peroxidation by measuring malondialdehyde (MDA) and relatives in biological samples: Analytical and biological challenges.</a> Analytical Biochemistry. 524, 13-30 (2017).</li><li>Ohkawa, H., Ohishi, N., Yagi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reaction+of+linoleic+acid+hydroperoxide+with+thiobarbituric+acid.">Reaction of linoleic acid hydroperoxide with thiobarbituric acid.</a> Journal of Lipid Research. 19 (8), 1053-1057 (1978).</li><li>Khoubnasabjafari, M., Soleymani, J., Jouyban, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avoid+Using+Spectrophotometric+Determination+of+Malondialdehyde+as+a+Biomarker+of+Oxidative+Stress.">Avoid Using Spectrophotometric Determination of Malondialdehyde as a Biomarker of Oxidative Stress.</a> Biomarkers in Medicine. 12 (6), 551-554 (2018).</li><li>Morales, M., Munn&#233;-Bosch, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malondialdehyde:+Facts+and+artifacts.">Malondialdehyde: Facts and artifacts.</a> Plant Physiology. 180 (3), 1246-1250 (2019).</li><li>Devasagayam, T. P. A., Boloor, K. K., Ramasarma, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+estimating+lipid+peroxidation:+An+analysis+of+merits+and+demerits.">Methods for estimating lipid peroxidation: An analysis of merits and demerits.</a> Indian Journal of Biochemistry and Biophysics. 40 (5), 300-308 (2003).</li><li>Dasgupta, A., Klein, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+Measuring+Oxidative+Stress+in+the+Laboratory.">Methods for Measuring Oxidative Stress in the Laboratory.</a> Antioxidants in Food, Vitamins and Supplements. , 19-40 (2014).</li><li>Wade, C. R., van Rij, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+malondialdehyde,+lipid+peroxides,+and+the+thiobarbituric+acid+reaction.">Plasma malondialdehyde, lipid peroxides, and the thiobarbituric acid reaction.</a> Clinical Chemistry. 35 (2), 336-336 (1989).</li><li>Khoubnasabjafari, M., Ansarin, K., Jouyban, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+of+malondialdehyde+as+a+biomarker+of+oxidative+stress+in+psychological+disorders.">Reliability of malondialdehyde as a biomarker of oxidative stress in psychological disorders.</a> BioImpacts. 5 (3), 123-127 (2015).</li><li>Khoubnasabjafari, M., Ansarin, K., Jouyban, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comments+Concerning+"Comparison+of+Airway+and+Systemic+Malondialdehyde+Levels+for+Assessment+of+Oxidative+Stress+in+Cystic+Fibrosis".">Comments Concerning "Comparison of Airway and Systemic Malondialdehyde Levels for Assessment of Oxidative Stress in Cystic Fibrosis".</a> Lung. 193 (5), 867-868 (2015).</li><li>Khoubnasabjafari, M., Ansarin, K., Vaez-Gharamaleki, J., Jouyban, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comments+on+"Salivary+8-hydroxy-2-deoxyguanosine,+malondialdehyde,+vitamin+C,+and+vitamin+E+in+oral+pre-cancer+and+cancer:+diagnostic+value+and+free+radical+mechanism+of+action".">Comments on "Salivary 8-hydroxy-2-deoxyguanosine, malondialdehyde, vitamin C, and vitamin E in oral pre-cancer and cancer: diagnostic value and free radical mechanism of action".</a> Clinical Oral Investigations. 20 (2), 395-396 (2016).</li><li>Khoubnasabjafari, M., Ansarin, K., Jouyban, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comments+on+"An+Investigation+into+the+Serum+Thioredoxin+Superoxide+Dismutase,+Malondialdehyde,+and+Advanced+Oxidation+Protein+Products+in+Patients+with+Breast+Cancer".">Comments on "An Investigation into the Serum Thioredoxin Superoxide Dismutase, Malondialdehyde, and Advanced Oxidation Protein Products in Patients with Breast Cancer".</a> Annals of Surgical Oncology. 24, 573-576 (2017).</li><li>Azizi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+analytical+procedures+on+the+repeatability+of+malondialdehyde+determinations+in+biological+samples.">Effects of analytical procedures on the repeatability of malondialdehyde determinations in biological samples.</a> Pharmaceutical Sciences. 23 (3), 193-197 (2017).</li><li>Azizi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+possible+reason+for+the+low+reproducibility+of+malondialdehyde+determinations+in+biological+samples.">A possible reason for the low reproducibility of malondialdehyde determinations in biological samples.</a> Bioanalysis. 8 (21), 2179-2181 (2016).</li><li>Wasowicz, W., Neve, J., Peretz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+steps+in+fluorometric+determination+of+thiobarbituric+acid-+reactive+substances+in+serum:+Importance+of+extraction+pH+and+influence+of+sample+preservation+and+storage.">Optimized steps in fluorometric determination of thiobarbituric acid- reactive substances in serum: Importance of extraction pH and influence of sample preservation and storage.</a> Clinical Chemistry. 39 (12), 2522-2526 (1993).</li><li>Jentzsch, A. M., Bachmann, H., F&#252;rst, P., Biesalski, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+analysis+of+malondialdehyde+in+human+body+fluids.">Improved analysis of malondialdehyde in human body fluids.</a> Free Radical Biology and Medicine. 20 (2), 251-256 (1996).</li><li>Buege, J. A., Aust, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microsomal+lipid+peroxidation.">Microsomal lipid peroxidation.</a> Methods in Enzymology. 52, 302-310 (1978).</li><li>Gutteridge, J. M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free-Radical+Damage+to+Lipids,+Amino-Acids,+Carbohydrates+and+Nucleic-Acids+Determined+by+Thiobarbituric+Acid+Reactivity.">Free-Radical Damage to Lipids, Amino-Acids, Carbohydrates and Nucleic-Acids Determined by Thiobarbituric Acid Reactivity.</a> International Journal of Biochemistry. 14 (7), 649-653 (1982).</li><li>Khoubnasabjafari, M., Ansarin, K., Jouyban, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+malondialdehyde+as+an+oxidative+stress+biomarker+in+oral+and+systemic+diseases.">Salivary malondialdehyde as an oxidative stress biomarker in oral and systemic diseases.</a> J Dent Res Dent Clin Dent Prospects. 10 (2), 71-74 (2016).</li><li>Halliwell, B., Whiteman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+reactive+species+and+oxidative+damage+in+vivo+and+in+cell+culture:+How+should+you+do+it+and+what+do+the+results+mean.">Measuring reactive species and oxidative damage in vivo and in cell culture: How should you do it and what do the results mean.</a> British Journal of Pharmacology. 142 (2), 231-255 (2004).</li><li>Lee, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+oxidative+stress+in+human+cardiovascular+disease:+methodological+aspects+and+considerations.">Evaluating oxidative stress in human cardiovascular disease: methodological aspects and considerations.</a> Current medicinal chemistry. 19 (16), 2504-2520 (2012).</li><li>Morel, D. W., Hessler, J. R., Chisolm, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+density+lipoprotein+cytotoxicity+induced+by+free+radical+peroxidation+of+lipid.">Low density lipoprotein cytotoxicity induced by free radical peroxidation of lipid.</a> Journal of Lipid Research. 24 (8), 1070-1076 (1983).</li><li>Guzm&#225;n-Chozas, M., Vicario-Romero, I. M., Guill&#233;n-Sans, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2-thiobarbituric+acid+test+for+lipid+oxidation+in+food:+Synthesis+and+spectroscopic+study+of+2-thiobarbituric+acid-malonaldehyde+adduct.">2-thiobarbituric acid test for lipid oxidation in food: Synthesis and spectroscopic study of 2-thiobarbituric acid-malonaldehyde adduct.</a> Journal of the American Oil Chemists Society. 75 (12), 1711-1715 (1998).</li><li>Shibata, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+lipid+peroxidation+product+as+a+potential+trigger+of+the+p53+pathway.">Identification of a lipid peroxidation product as a potential trigger of the p53 pathway.</a> Journal of Biological Chemistry. 28 (2), 1196-1204 (2006).</li><li>Skoog, D. A., West, D. M., Holler, F. J., Crouch, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sampling,+standardization,+and+calibration.">Sampling, standardization, and calibration.</a> Fundamentals of Analytical Chemistry. 9th ed. , 153-196 (2014).</li><li>Skoog, D. A., Holler, F. J., Crouch, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction.">Introduction.</a> Principles of Instrumental Analysis. 6th ed. , 1-24 (2007).</li><li>Seibig, S., Van Eldik, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+[FeII(edta)]+Oxidation+by+Molecular+Oxygen+Revisited.+New+Evidence+for+a+Multistep+Mechanism.">Kinetics of [FeII(edta)] Oxidation by Molecular Oxygen Revisited. New Evidence for a Multistep Mechanism.</a> Inorganic Chemistry. 36 (18), 4115-4120 (1997).</li><li>Jeffs, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delta-S-Cys-Albumin:+A+Lab+Test+that+Quantifies+Cumulative+Exposure+of+Archived+Human+Blood+Plasma+and+Serum+Samples+to+Thawed+Conditions.">Delta-S-Cys-Albumin: A Lab Test that Quantifies Cumulative Exposure of Archived Human Blood Plasma and Serum Samples to Thawed Conditions.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics. 18 (10), 2121-2137 (2019).</li><li>Yagi, K., Armstrong, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+Assay+for+the+Level+of+Total+Lipid+Peroxides+in+Serum+or+Plasma.">Simple Assay for the Level of Total Lipid Peroxides in Serum or Plasma.</a> Free Radical and Antioxidant Protocols. Methods in Molecular Biology. , 101-106 (1998).</li><li>Bernheim, F., Bernheim, M. L. C., Wilbur, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reaction+between+thiobarbituric+acid+and+the+oxidation+products+of+certain+lipides.">The reaction between thiobarbituric acid and the oxidation products of certain lipides.</a> Journal of Biological Chemistry. 174 (1), 257-264 (1948).</li><li>Wilbur, K. M., Bernheim, F., Shapiro, O. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+thiobarbituric+acid+reagent+as+a+test+for+the+oxidation+of+unsaturated+fatty+acids+by+various+agents.">The thiobarbituric acid reagent as a test for the oxidation of unsaturated fatty acids by various agents.</a> Archives of Biochemistry. 24 (2), 305-313 (1949).</li><li>Kwon, T. W., Watts, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+malonaldehyde+by+ultraviolet+spectrophotometry.">Determination of malonaldehyde by ultraviolet spectrophotometry.</a> Journal of Food Science. 28 (6), 627-630 (1963).</li><li>Esterbauer, H., Schaur, F. J., Zollner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemistry+and+biochemistry+of+4-hydroxynonenal,+malonaldehyde+and+related+aldehydes.">Chemistry and biochemistry of 4-hydroxynonenal, malonaldehyde and related aldehydes.</a> Free Radical Biology &amp; Medicine. 11 (1), 81-128 (1991).</li><li>Dalle-Donne, I., Rossi, R., Colombo, R., Giustarini, D., Milzani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomarkers+of+oxidative+damage+in+human+disease.">Biomarkers of oxidative damage in human disease.</a> Clinical Chemistry. 52 (4), 601-623 (2006).</li><li>Jentzsch, A. M., Bachmann, H., F&#252;rst, P., Biesalski, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+analysis+of+malondialdehyde+in+human+body+fluids.">Improved analysis of malondialdehyde in human body fluids.</a> Free Radical Biology and Medicine. 20 (2), 251-256 (1996).</li><li>Jo, C., Ahn, D. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorometric+Analysis+of+2-Thiobarbituric+Acid+Reactive+Substances+in+Turkey.">Fluorometric Analysis of 2-Thiobarbituric Acid Reactive Substances in Turkey.</a> Poultry Science. 77 (3), 475-480 (1998).</li><li>Tsikas, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development,+validation+and+biomedical+applications+of+stable-isotope+dilution+GC-MS+and+GC-MS/MS+techniques+for+circulating+malondialdehyde+(MDA)+after+pentafluorobenzyl+bromide+derivatization:+MDA+as+a+biomarker+of+oxidative+stress+and+its+relation+to+15(S)-8-iso-prostaglandin+F2&#945;+and+nitric+oxide+(NO).">Development, validation and biomedical applications of stable-isotope dilution GC-MS and GC-MS/MS techniques for circulating malondialdehyde (MDA) after pentafluorobenzyl bromide derivatization: MDA as a biomarker of oxidative stress and its relation to 15(S)-8-iso-prostaglandin F2&#945; and nitric oxide (NO).</a> Journal of Chromatography. B, Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences. 1019, 95-111 (2016).</li><li>Barden, A. E., Mas, E., Croft, K. D., Phillips, M., Mori, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimizing+artifactual+elevation+of+lipid+peroxidation+products+(F+2-isoprostanes)+in+plasma+during+collection+and+storage.">Minimizing artifactual elevation of lipid peroxidation products (F 2-isoprostanes) in plasma during collection and storage.</a> Analytical Biochemistry. 449 (1), 129-131 (2014).</li><li>Jeffs, J. W., Ferdosi, S., Yassine, H. N., Borges, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+instability+of+glycated+albumin:+A+role+for+autoxidative+glycation.">Ex vivo instability of glycated albumin: A role for autoxidative glycation.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 629, 36-42 (2017).</li><li>Lee, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malondialdehyde+in+Stored+Plasma.">Malondialdehyde in Stored Plasma.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 95 (4), 1663-1672 (1980).</li><li>Tsikas, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+GC-MS/MS+measurement+of+malondialdehyde+and+4-hydroxy-2-nonenal+in+human+plasma:+Effects+of+long-term+L-arginine+administration.">Simultaneous GC-MS/MS measurement of malondialdehyde and 4-hydroxy-2-nonenal in human plasma: Effects of long-term L-arginine administration.</a> Analytical Biochemistry. 524, 31-44 (2017).</li></ol>

למחברים אין אינטרסים פיננסיים מתחרים או ניגודי עניינים אחרים לחשוף.

למרות מגבלותיו1,3,4,7,8,10,12,13,14,15,19 וחוסר התאמה להשוואה בין מעבדות, מתקן TBARS הוא אחד הוותיקים ביותר <sup ...

peroxidation השומנים הוא תהליך שבו רדיקלים חופשיים, כגון מינים חמצן תגובתי ומינים חנקן תגובתי, לתקוף קשרים כפולים פחמן פחמן שומנים, תהליך הכולל הפשטה של מימן מפחמן והכנסת מולקולת חמצן. תהליך זה מוביל לתערובת של מוצרים מורכבים כולל, רדיקלים פרוקסיל שומנים, הידרופרוקסידים כמוצרים העיקריים, כמו גם malondialdehyde (מד"א) ו 4-hydroxynonenal כמוצרים משניים השולטים1.
מד"א נמצא בשימוש נרחב במחקר ביו-רפואי כסמן של פרוקסידציה שומנית בשל תגובתו הקלינית עם חומצה תיוברביטורית (TBA). התגובה מובילה להיווצרות מד"א-TBA2, מצומדת הנקלטת בספקטרום הנראה ב-532 ננומטר ומייצרת צבע אדום-ורוד2. מולקולות אחרות המופקות מפרוקסידציה שומנית מלבד מד"א יכולות להגיב גם הן עם TBA ולספוג אור במהירות של 532 ננומטר, מה שתורם לאות הקליטה הכולל הנמדד. באופן דומה, מד"א יכול להגיב עם רוב המעמדות העיקריים האחרים של ביומולקולים, מה שעלול להגביל את הנגישות שלו לתגובה עם TBA3,4. ככזה, זה בדיקת מסורתית נחשב פשוט למדוד "חומרים תגובתי חומצה thiobarbituric" או TBARS5.
כאשר מיושם כראוי ופרש, TBARS assay נחשב בדרך כלל אינדיקטור טוב של רמות הכולל של עקה חמצונית במדגם ביולוגי6. למרבה הצער, כפי שתועד על ידי Khoubnasabjafari ואחרים, TBARS בדיקות מתבצע לעתים קרובות ומתפרש בדרכים המאפשרות מסקנות מפוקפקות3,4,7,8,9,10,11. הסיבות לכך נעוצות בעיקר במשתנים טרום-אנליטיים הקשורים לדגימה ובהיעדר קשיחות של מטען האוסר על שינויים קלים לכאורה בפרוטוקול ההסתה ללא שינויים מהותיים בתוצאות ה-assay1,7,12,13.
משתנים preanalytical הקשורים biospecimen טיפול ואחסון (למשל, פלזמת דם נשמר באופן זמני ב -20 °C)14,15 יכול להיות בעל השפעה גדולה על תוצאות בדיקת TBARS16,17; עד כדי כך, כי תוצאות TBARS בוחן אין להשוות על פני מעבדות שונות אלא אם כן מוצדק על ידי נתוני אימות אנליטיים interlaboratory מפורשים. המלצה זו דומה לאופן שבו נפוץ להשתמש בכתמים מערביים ולפרש. השוואות של צפיפות רצועות תקפות למחקרים בתוך כתם ואולי בתוך המעבדה, אבל השוואת צפיפות הרצועה בין מעבדות נחשבת בדרך כלל פרקטיקה לא חוקית.
כמה חוקרים הציעו כי מד"א כפי שנמדד על ידי TBARS בחינה פשוט לא עונה על הקריטריונים האנליטיים או הקליניים הנדרשים של סמן ביולוגי מקובל3,9,10,18,19. ואכן, אם ההבחנה לא הייתה מפותחת לפני יותר מ -50 שנה, היא כנראה לא הייתה זוכה לשימוש הנרחב ולמקובלות שבשתהון שיש לה כיום. למרות שיש בדיקות אחרות עם רגישות אנליטית גדולה יותר, ספציפיות, ו מחוספס המשמש לקביעת עקה חמצונית, TBARS בדיקות המבוססות על ספיגה ב 532 ננומטר נשאר ללא ספק אחד בדיקות הנפוצות ביותר לקביעת peroxidation השומנים20, ובכך הערכה של עקה חמצונית.
ניתן למצוא את TBARS assay רק כערכה יקרה (מעל 400 דולר אמריקאי), שבה ההוראות אינן מספקות מידע מפורט על רוב הריכוזים של ריאגנטים בשימוש. בנוסף, ריאגנטים שסופקו יכולים לשמש רק לניסוי אחד, מכיוון שניתן לבצע רק עקומת תקן צבעונית אחת לכל ערכה. זה יכול להיות בעייתי עבור חוקרים שמתכוונים לקבוע רמות של חמצון בתוך כמה דגימות בנקודות זמן שונות, כי אותה עקומה סטנדרטית לא ניתן להשתמש במספר פעמים. לפיכך, ערכות מרובות יש לרכוש עבור ניסויים מרובים. נכון לעכשיו, אלא אם כן נרכשת ערכה יקרה, אין פרוטוקול מפורט זמין לביצוע בדיקות TBARS. כמה חוקרים בעבר תיארו במעורפל כיצד לבצע TBARS assay21,22, אבל לא פרוטוקול מפורט לחלוטין או וידאו מקיף על איך לנהל את TBARS בדיקה ללא ערכה יקרה זמין בספרות.
כאן אנו מדווחים על מתודולוגיה מפורטת, מאומתת אנליטית למטרה כיצד לבצע בדיקת TBARS בצורה פשוטה, ניתנת לשחזור וזולה. שינויים peroxidation השומנים של סרום אנושי, HepG2 ליסאטים, וליפופרוטאינים בצפיפות נמוכה על הטיפול עם Cu(II) יונים מוצגים כיישומים להמחשה עבור בדיקת TBARS. התוצאות מראות כי ת.ב.ס.ק זה עקבי וזמין לשחזור על בסיס יומיומי.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1x Sterile PBS pH 7.4 1 L</td>
			<td>VWR, PA</td>
			<td>101642--262</td>
			<td>cell lysis reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL self-standing centrifuge tube</td>
			<td>Corning, NY</td>
			<td>CLS430897</td>
			<td>General material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well plate, Non-Treated, clear, with lid, Non-sterile</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, MA</td>
			<td>280895</td>
			<td>To measure absorbance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra-0.5 100 kD centrifugal spin filter device</td>
			<td>Fisher Scientific, NH</td>
			<td>UFC510024</td>
			<td>LDL purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caps for glass tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, MA</td>
			<td>14-930-15D</td>
			<td>for TBARS assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper II Chloride</td>
			<td>SIGMA, MO</td>
			<td>222011-250G</td>
			<td>to induce oxidation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture tubes, Disposable, with Screw-Cap Finish, Borosilicate Glass (13 x 100 mm)</td>
			<td>VWR, PA</td>
			<td>53283-800</td>
			<td>for TBARS assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eagle&#39;s Minimum Essential Medium (EMEM)</td>
			<td>ATCC, VA</td>
			<td>HB-8065</td>
			<td>HepG2 cell media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1.5 mL</td>
			<td>eppendorf, NY</td>
			<td>22363204</td>
			<td>General material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes, 2.0 mL</td>
			<td>Genesee Sceitific, CA</td>
			<td>22363352</td>
			<td>General material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum US Source</td>
			<td>Omega Scientific, CA</td>
			<td>FB-11</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial Acetic Acid</td>
			<td>SIGMA, MO</td>
			<td>27225-1L-R</td>
			<td>TBARS Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halt Protease Inhibitor Cocktail (100x)</td>
			<td>Thermo Scientific, MA</td>
			<td>87786</td>
			<td>cell lysis reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>SIGMA, MO</td>
			<td>H3375-250G</td>
			<td>LDL solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HepG2 Cells</td>
			<td>ATCC, VA</td>
			<td>HB-8065</td>
			<td>Biological matrix prototype</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocloric acid (HCl)</td>
			<td>Fisher Scientific, NH</td>
			<td>A144-212</td>
			<td>cell lysis reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Legend Micro 17 Centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific, MA</td>
			<td>75002431</td>
			<td>General material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low Density Lipoprotein, Human Plasma</td>
			<td>Athens Research &#38; Technology, GA</td>
			<td>12-16-120412</td>
			<td>Biological matrix prototype</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Stir Bars, Octagon 6-Assortment</td>
			<td>VWR, PA</td>
			<td>58948-025</td>
			<td>General material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malondialdehyde bis (dimethyl acetal)</td>
			<td>SIGMA, MO</td>
			<td>8207560250</td>
			<td>TBARS Standard</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiskan Go Microplate Spectrophotometer</td>
			<td>Fisher Scientific, NH</td>
			<td>51119200</td>
			<td>To measure absorbance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NP-40</td>
			<td>EMD Millipore Corp, MA</td>
			<td>492016-100ML</td>
			<td>cell lysis reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>SIGMA, MO</td>
			<td>S7653-1KG</td>
			<td>cell lysis reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulfate (SDS)</td>
			<td>SIGMA, MO</td>
			<td>436143-100G</td>
			<td>TBARS Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>SIGMA, MO</td>
			<td>367176-2.5KG</td>
			<td>TBARS Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpeedVac Concentrator</td>
			<td>Thermo Scientific, MA</td>
			<td>SC250EXP</td>
			<td>For concentrating cell lysates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-75 Flask, Tissue Culture Treated, 250 mL, w/filter cap</td>
			<td>USA Scientific, FL</td>
			<td>658175</td>
			<td>cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiobarbituric Acid</td>
			<td>SIGMA, MO</td>
			<td>T5500-100G</td>
			<td>TBARS Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIS base</td>
			<td>Fluka, GA</td>
			<td>93362</td>
			<td>cell lysis reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin (1x)</td>
			<td>VWR, PA</td>
			<td>16777-166</td>
			<td>To detach HepG2 cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of oxidative stress in biological samples using the thiobarbituric acid reactive substances assay

למרות הספציפיות האנליטית המוגבלת שלה ואת המחוספס, החומרים תגובתי חומצה thiobarbituric (TBARS) בדיקה כבר בשימוש נרחב כמדד גנרי של peroxidation שומנים בדם בנוזלים ביולוגיים. זה נחשב לעתים קרובות אינדיקטור טוב של רמות של עקה חמצונית בתוך מדגם ביולוגי, בתנאי המדגם טופל כראוי מאוחסן. ההבחנה כוללת תגובה של מוצרי פרוקסידציה שומנים בדם, בעיקר malondialdehyde (מד"א), עם חומצה thiobarbituric (TBA), אשר מוביל להיווצרות של תוספים מד"א-TBA2 בשם TBARS. TBARS מניב צבע אדום-ורוד שניתן למדוד באופן ספקטרופוטומטרי ב- 532 ננומטר. בדיקת TBARS מתבצעת בתנאים חומציים (pH = 4) וב 95 °C (75 °F). מד"א טהור אינו יציב, אך תנאים אלה מאפשרים את שחרורו של מד"א מד"א (דימתיל אצטל), המשמש כסטנדרט אנליטי בשיטה זו. בדיקת TBARS היא שיטה פשוטה שניתן להשלים בכ 2 שעות. הכנת ריאגנטים של בדיקות מתוארים בפירוט כאן. חוקרים מודעים לתקציב יכולים להשתמש בריגנטים אלה לניסויים מרובים בעלות נמוכה במקום לקנות ערכת TBARS יקרה המאפשרת בניית עקומה סטנדרטית אחת בלבד (ולכן ניתן להשתמש בה רק לניסוי אחד). הישימות של בדיקת TBARS זו מוצגת בסרום אנושי, ליפופרוטאינים בצפיפות נמוכה, וליזאטים לתאים. ההסתה עקבית וניתן לשחזור, וניתן להגיע למגבלות הזיהוי של 1.1 מיקרומטר. המלצות לשימוש ופרשנות של בדיקת TBARS ספקטרופוטומטרית מסופקות.

בתנאים חומציים (pH = 4) וב 95 °C(5 °F), malondialdehyde (מד"א) ביס (דימתיל אצטל) מניב מד"א23. מד"א ומקורבים כימיים קשורים מגיבים עם שתי מולקולות של חומצה תיוברביטורית (TBA) כדי לייצר תרכובות הנקראות חומרים תגובתיים לחומצה תיוברביטורית (TBARS), המעניקות צבע אדום-ורוד ויש להן λmax סופג ב-532 ננומטר (...

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Oxidative Stress in Biological Samples Using the Thiobarbituric Acid Reactive Substances Assay at JoVE.com

Evaluation of Oxidative Stress in Biological Samples Using the Thiobarbituric Acid Reactive Substances Assay

המטרה של חומרים תגובתיים חומצה thiobarbituric assay היא להעריך מתח חמצוני בדגימות ביולוגיות על ידי מדידת הייצור של מוצרי peroxidation השומנים, בעיקר malondialdehyde, באמצעות ספקטרופוטומטריית אורך גל גלוי ב 532 ננומטר. השיטה המתוארת כאן ניתן ליישם סרום אנושי, ליסאטים תאים, ליפופרוטאינים בצפיפות נמוכה.

הערכה של עקה חמצונית בדגימות ביולוגיות באמצעות חומצה Thiobarbituric חומרים תגובתיים אסייד

Despite its limited analytical specificity and ruggedness, the thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) assay has been widely used as a generic ...

evaluation-oxidative-stress-biological-samples-using-thiobarbituric

Research

JoVE Journal

Chemistry

27.5K Views.  Arizona State University. המטרה של חומרים תגובתיים חומצה thiobarbituric assay היא להעריך מתח חמצוני בדגימות ביולוגיות על ידי מדידת הייצור של מוצרי peroxidation השומנים, בעיקר malondialdehyde, באמצעות ספקטרופוטומטריית אורך גל גלוי ב 532 ננומטר. השיטה המתוארת כאן ניתן ליישם סרום אנושי, ליסאטים תאים, ליפופרוטאיני...

Video: Evaluation of Oxidative Stress in Biological Samples Using the Thiobarbituric Acid Reactive Substances Assay

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first separated into polar and non-polar fractions by a liquid-liquid phase extraction, and partially purified to facilitate downstream analysis. Both aqueous (polar metabolites) and organic (non-polar metabolites) phases of the initial extraction are processed to survey a broad range of metabolites. Metabolites are separated by different liquid chromatography methods based upon their partition properties. In this method, we present microflow ultra-performance (UP)LC methods, but the protocol is scalable to higher flows and lower pressures. Introduction into the mass spectrometer can be through either general or compound optimized source conditions. Detection of a broad range of ions is carried out in full scan mode in both positive and negative mode over a broad m/z range using high resolution on a recently calibrated instrument. Label-free differential analysis is carried out on bioinformatics platforms. Applications of this approach include metabolic pathway screening, biomarker discovery, and drug development.

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry UPLC-HRMS

Untargeted metabolomics provides a hypothesis generating snapshot of a metabolic profile. This protocol will demonstrate the extraction and analysis of metabolites from cells, serum, or tissue. A range of metabolites are surveyed using liquid-liquid phase extraction, microflow ultraperformance liquid chromatography/high-resolution mass spectrometry (UPLC-HRMS) coupled to differential analysis software.

Metabolomics לא ממוקדים ממקורות ביולוגיים באמצעות Ultraperformance כרומטוגרפיה נוזלית-רזולוציה גבוהה ספקטרומטריית מסה (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first ...

Anticancer Metal Complexes: Synthesis and Cytotoxicity Evaluation by the MTT Assay

Titanium (IV) and vanadium (V) complexes are highly potent anticancer agents. A challenge in their synthesis refers to their hydrolytic instability; therefore their preparation should be conducted under an inert atmosphere. Evaluation of the anticancer activity of these complexes can be achieved by the MTT assay.
The MTT assay is a colorimetric viability assay based on enzymatic reduction of the MTT molecule to formazan when it is exposed to viable cells. The outcome of the reduction is a color change of the MTT molecule. Absorbance measurements relative to a control determine the percentage of remaining viable cancer cells following their treatment with varying concentrations of a tested compound, which is translated to the compound anticancer activity and its IC50 values. The MTT assay is widely common in cytotoxicity studies due to its accuracy, rapidity, and relative simplicity.
Herein we present a detailed protocol for the synthesis of air sensitive metal based drugs and cell viability measurements, including preparation of the cell plates, incubation of the compounds with the cells, viability measurements using the MTT assay, and determination of IC50 values.

A method for synthesis of air-sensitive titanium and vanadium anticancer agents is described, along with the evaluation of their cytotoxic activity towards human cancer cell line by the MTT Assay.

מכלולים נגד סרטן מתכת: סינתזה וCytotoxicity הערכה על ידי assay MTT

Titanium (IV) and vanadium (V) complexes are highly potent anticancer agents. A challenge in their synthesis refers to their hydrolytic instability; ...

Supercritical Nitrogen Processing for the Purification of Reactive Porous Materials

Supercritical fluid extraction and drying methods are well established in numerous applications for the synthesis and processing of porous materials. Herein, nitrogen is presented as a novel supercritical drying fluid for specialized applications such as in the processing of reactive porous materials, where carbon dioxide and other fluids are not appropriate due to their higher chemical reactivity. Nitrogen exhibits similar physical properties in the near-critical region of its phase diagram as compared to carbon dioxide: a widely tunable density up to ~1 g ml-1, modest critical pressure (3.4 MPa), and small molecular diameter of ~3.6 &#197;. The key to achieving a high solvation power of nitrogen is to apply a processing temperature in the range of 80-150 K, where the density of nitrogen is an order of magnitude higher than at similar pressures near ambient temperature. The detailed solvation properties of nitrogen, and especially its selectivity, across a wide range of common target species of extraction still require further investigation. Herein we describe a protocol for the supercritical nitrogen processing of porous magnesium borohydride.

Nitrogen is an effective supercritical fluid for extraction or drying processes due to its small molecular size, high density in the near-liquid supercritical regime, and chemical inertness. We present a supercritical nitrogen drying protocol for the purification treatment of reactive, porous materials.

עיבוד חנקן סופר קריטי עבור הטיהור של חומרים נקבוביים ריאקטיבי

Supercritical fluid extraction and drying methods are well established in numerous applications for the synthesis and processing of porous materials. ...

Using Polystyrene-block-poly(acrylic acid)-coated Metal Nanoparticles as Monomers for Their Homo- and Co-polymerization

We present a template-free method for &#8220;polymerizing&#8221; nanoparticles into long chains without side branches. A variety of nanoparticles are encapsulated in polystyrene-block-poly(acrylic acid) (PSPAA) shells and then used as monomers for their self-assembly. Spherical PSPAA micelles upon acid treatment are known to assemble into cylindrical micelles. Exploiting this tendency, the core-shell nanoparticles are induced to aggregate, coalesce, and then transform into long chains. When more than one type of nanoparticles are used, random and block &#8220;copolymers&#8221; of nanoparticles can be obtained. Detailed procedures are reported for the PSPAA encapsulation of nanoparticles, homo- and co-polymerization of the core-shell nanoparticles, separation and purification of the resulting nanoparticle chains. Transformations of single-line chains into double- and triple-line chains are also presented. The synergy between the polymer shell and the embedded nanoparticles leads to an unusual chain-growth polymerization mode, giving long nanoparticle chains that are distinct from the products of the traditional step-growth aggregation process.

Using Polystyrene-block-polyacrylic acid-coated Metal Nanoparticles as Monomers for Their Homo- and Co-polymerization

We report protocols for &#8220;polymerizing&#8221; various types of polymer-encapsulated metal nanoparticles into long chains of &#8220;homo-&#8220; and &#8220;co-polymers&#8221;.

באמצעות Polystyrene-<em&gt; בלוק</em&gt; -poly (חומצה אקרילית) -coated מתכת חלקיקים כמו מונומרים להומו- ושיתוף פילמור

We present a template-free method for &#8220;polymerizing&#8221; nanoparticles into long chains without side branches. A variety of nanoparticles are ...

Photochemical Oxidative Growth of Iridium Oxide Nanoparticles on CdSe@CdS Nanorods

We demonstrate a procedure for the photochemical oxidative growth of iridium oxide catalysts on the surface of seeded cadmium selenide-cadmium sulfide (CdSe@CdS) nanorod photocatalysts. Seeded rods are grown using a colloidal hot-injection method and then moved to an aqueous medium by ligand exchange. CdSe@CdS nanorods, an iridium precursor and other salts are mixed and illuminated. The deposition process is initiated by absorption of photons by the semiconductor particle, which results with formation of charge carriers that are used to promote redox reactions. To insure photochemical oxidative growth we used an electron scavenger. The photogenerated holes oxidize the iridium precursor, apparently in a mediated oxidative pathway. This results in the growth of high quality crystalline iridium oxide particles, ranging from 0.5 nm to about 3 nm, along the surface of the rod. Iridium oxide grown on CdSe@CdS heterostructures was studied by a variety of characterization methods, in order to evaluate its characteristics and quality. We explored means for control over particle size, crystallinity, deposition location on the CdS rod, and composition. Illumination time and excitation wavelength were found to be key parameters for such control. The influence of different growth conditions and the characterization of these heterostructures are described alongside a detailed description of their synthesis. Of significance is the fact that the addition of iridium oxide afforded the rods astounding photochemical stability under prolonged illumination in pure water (alleviating the requirement for hole scavengers).

A protocol for the photochemical oxidative growth of small crystalline iridium oxide nanoparticles on the surface of CdSe@CdS seeded rod nanoparticles is presented.

צמיחת פוטו חמצונים של חלקיקים אירידיום תחמוצת על Nanorods CdSe @ התקליטורים

We demonstrate a procedure for the photochemical oxidative growth of iridium oxide catalysts on the surface of seeded cadmium selenide-cadmium sulfide ...

NMR Spectroscopy as a Robust Tool for the Rapid Evaluation of the Lipid Profile of Fish Oil Supplements

The western diet is poor in n-3 fatty acids, therefore the consumption of fish oil supplements is recommended to increase the intake of these essential nutrients. The objective of this work is to demonstrate the qualitative and quantitative analysis of encapsulated fish oil supplements using high-resolution 1H and 13C NMR spectroscopy utilizing two different NMR instruments; a 500 MHz and an 850 MHz instrument. Both proton (1H) and carbon (13C) NMR spectra can be used for the quantitative determination of the major constituents of fish oil supplements. Quantification of the lipids in fish oil supplements is achieved through integration of the appropriate NMR signals in the relevant 1D spectra. Results obtained by 1H and 13C NMR are in good agreement with each other, despite the difference in resolution and sensitivity between the two nuclei and the two instruments. 1H NMR offers a more rapid analysis compared to 13C NMR, as the spectrum can be recorded in less than 1 min, in contrast to 13C NMR analysis, which lasts from 10 min to one hour. The 13C NMR spectrum, however, is much more informative. It can provide quantitative data for a greater number of individual fatty acids and can be used for determining the positional distribution of fatty acids on the glycerol backbone. Both nuclei can provide quantitative information in just one experiment without the need of purification or separation steps. The strength of the magnetic field mostly affects the 1H NMR spectra due to its lower resolution with respect to 13C NMR, however, even lower cost NMR instruments can be efficiently applied as a standard method by the food industry and quality control laboratories.

Here, high-resolution 1H and 13C Nuclear Magnetic Resonance (NMR) spectroscopy was used as a rapid and reliable tool for quantitative and qualitative analysis of encapsulated fish oil supplements.

NMR ספקטרוסקופיה כמו כלי חזק עבור ההערכה המהירה של פרופיל השומנים של תוספי שמן דגים

The western diet is poor in n-3 fatty acids, therefore the consumption of fish oil supplements is recommended to increase the intake of these essential ...

In Situ Characterization of Boehmite Particles in Water Using Liquid SEM

In situ imaging and elemental analysis of boehmite (AlOOH) particles in water is realized using the System for Analysis at the Liquid Vacuum Interface (SALVI) and Scanning Electron Microscopy (SEM). This paper describes the method and key steps in integrating the vacuum compatible SAVLI to SEM and obtaining secondary electron (SE) images of particles in liquid in high vacuum. Energy dispersive x-ray spectroscopy (EDX) is used to obtain elemental analysis of particles in liquid and control samples including deionized (DI) water only and an empty channel as well. Synthesized boehmite (AlOOH) particles suspended in liquid are used as a model in the liquid SEM illustration. The results demonstrate that the particles can be imaged in the SE mode with good resolution (i.e., 400 nm). The AlOOH EDX spectrum shows significant signal from the aluminum (Al) when compared with the DI water and the empty channel control. In situ liquid SEM is a powerful technique to study particles in liquid with many exciting applications. This procedure aims to provide technical know-how in order to conduct liquid SEM imaging and EDX analysis using SALVI and to reduce potential pitfalls when using this approach.

In Situ Characterization of Boehmite Particles in Water Using Liquid SEM

We present a procedure for real-time imaging and elemental composition analysis of boehmite particles in deionized water by in situ liquid Scanning Electron Microscopy.

בחיי עיר איפיון חלקיקים Boehmite במים באמצעות נוזלי SEM

In situ imaging and elemental analysis of boehmite (AlOOH) particles in water is realized using the System for Analysis at the Liquid Vacuum Interface ...

The MPLEx Protocol for Multi-omic Analyses of Soil Samples

Mass spectrometry (MS)-based integrated metaproteomic, metabolomic, and lipidomic (multi-omic) studies are transforming our ability to understand and characterize microbial communities in environmental and biological systems. These measurements are even enabling enhanced analyses of complex soil microbial communities, which are the most complex microbial systems known to date. Multi-omic analyses, however, do have sample preparation challenges, since separate extractions are typically needed for each omic study, thereby greatly amplifying the preparation time and amount of sample required. To address this limitation, a 3-in-1 method for the simultaneous extraction of metabolites, proteins, and lipids (MPLEx) from the same soil sample was created by adapting a solvent-based approach. This MPLEx protocol has proven to be both simple and robust for many sample types, even when utilized for limited quantities of complex soil samples. The MPLEx method also greatly enabled the rapid multi-omic measurements needed to gain a better understanding of the members of each microbial community, while evaluating the changes taking place upon biological and environmental perturbations.

A protocol is presented for simultaneously extracting metabolites, proteins, and lipids from a single soil sample, allowing reduced sample preparation times and enabling multi-omic mass spectrometry analyses of samples with limited quantities.

פרוטוקול MPLEx עבור ניתוחים מולטי-omic של דגימות אדמה

Mass spectrometry (MS)-based integrated metaproteomic, metabolomic, and lipidomic (multi-omic) studies are transforming our ability to understand and ...

Separation of Aldehydes and Reactive Ketones from Mixtures Using a Bisulfite Extraction Protocol

The purification of organic compounds is an essential component of routine synthetic operations. The ability to remove contaminants into an aqueous layer by generating a charged structure provides an opportunity to use extraction as a simple purification technique. By combining the use of a miscible organic solvent with saturated sodium bisulfite, aldehydes and reactive ketones can be successfully transformed into charged bisulfite adducts that can then be separated from other organic components of a mixture by the introduction of an immiscible organic layer. Here, we describe a simple protocol for the removal of aldehydes, including sterically-hindered neopentyl aldehydes and some ketones, from chemical mixtures. Ketones can be separated if they are sterically unhindered cyclic or methyl ketones. For aliphatic aldehydes and ketones, dimethylformamide is used as the miscible solvent to improve removal rates. The bisulfite addition reaction can be reversed by basification of the aqueous layer, allowing for the re-isolation of the reactive carbonyl component of a mixture.

Here, we present a protocol to remove aldehydes and reactive ketones from mixtures by a liquid-liquid extraction protocol directly with saturated sodium bisulfite in a miscible solvent. This combined protocol is rapid and facile to perform. The aldehyde or ketone can be re-isolated by the basification of the aqueous layer.

פרידה של Aldehydes, קטונים תגובתי תערובות באמצעות פרוטוקול החילוץ ביסולפאט

The purification of organic compounds is an essential component of routine synthetic operations. The ability to remove contaminants into an aqueous layer ...

Reactive Inkjet Printing and Propulsion Analysis of Silk-based Self-propelled Micro-stirrers

In this study, a protocol for using reactive inkjet printing to fabricate enzymatically propelled silk swimmers with well-defined shapes is reported. The resulting devices are an example of self-propelled objects capable of generating motion without external actuation and have potential applications in medicine and environmental sciences for a variety of purposes ranging from micro-stirring, targeted therapeutic delivery, to water remediation (e.g., cleaning oil spills). This method employs reactive inkjet printing to generate well-defined small-scale solid silk structures by converting water soluble regenerated silk fibroin (silk I) to insoluble silk fibroin (silk II). These structures are also selectively doped in specific regions with the enzyme catalase in order to produce motion via bubble generation and detachment. The number of layers printed determines the three-dimensional (3D) structure of the device, and so here the effect of this parameter on the propulsive trajectories is reported. The results demonstrate the ability to tune the motion by varying the dimensions of the printed structures.

This protocol demonstrates the ability to utilize reactive inkjet printing to print self-motile biocompatible and environmentally friendly micro-stirrers for use in biomedical and environmental applications.

הדפסת הזרקת דיו וניתוח הנעה של משי מבוסס עצמית הנעה מיקרו-שטירים

In this study, a protocol for using reactive inkjet printing to fabricate enzymatically propelled silk swimmers with well-defined shapes is reported. The ...