שיטה זו מסייעת להבין כיצד שיעורי ההפרשה משתנים עם הזמן וכיצד תאים מגיבים לאותות מוצקים משתנים בזמן. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שעלותה הנמוכה, דורשת הכשרה מועטה וניתן להתאים את מערך מערכת השפע לניסויים חדשניים. התחילו במילוי מזרק אחד בתמיסת רקע וטענו אותו למשאבת המזרקים הראשונה.
מלאו מזרק נוסף בתמיסת מעקב וטענו אותו למשאבת המזרק השנייה. חבר את שני המזרקים לשתיים מתוך שלוש היציאות של תחנה לארבעה כיוונים באמצעות מחברי luer. סגור את ה-stopcock לתמיסת הרקע ושאב את תמיסת העקיבה לתוך ה-stopcock עד שהוא מטפטף החוצה מהיציאה הפתוחה.
עצור את המשאבה ואל תכוונן את המזרק עוד יותר. ודא שהמוט הנע של משאבות המזרקים נדחף כלפי מעלה כנגד בוכנות המזרק כך שהזרימה תתחיל מיד עם הפעלת המשאבה. סגור את ה-stopcock לתמיסת העקיבה ושאב את תמיסת הרקע לתוך ה-stopcock עד שכל תמיסת המעקב השיורית תשטוף מהיציאה הפתוחה.
עצור את המשאבה ואל תכוונן את המזרק עוד יותר. הגדר את רכיב מערכת הזרימה הרצוי לניתוח RTD. הכנס את הקצה למתקן קצה פיפטה ושאב תמיסת רקע דרך הרכיב עד שהוא מתמלא לחלוטין.
הגדר את המשאבה עבור תמיסת המעקב לקצב הזרימה הרצוי. סגור את ה-stopcock לתמיסת הרקע והתחל את הזרימה של תמיסת העקיבה. במקביל, הפעל את אספן השברים.
המשך את זרימת תמיסת העקיבה למשך פרק זמן קצר כדי להעריך קלט דחף של העקיבה. משך דופק של 10 דקות מומלץ עבור RTDs בקצב זרימה של מיליליטר אחד לשעה. עצרו את משאבת תמיסת העקיבה בסוף תקופת הדופק של תמיסת העקיבה.
סגור במהירות את ה- stopcock לפתרון המעקב והתחל את הזרימה של תמיסת הרקע באותו קצב זרימה. אפשרו לפתרון הרקע לזרום ולאסוף שברים עד שכל העקיבה תעבור דרך המערכת ולתוך השברים שנאספו. בתנאים סטריליים, מכניסים את הפקקים עם המחטים לתרביות הצלחת של הבאר עם המחטים נמשכות למעלה.
לאחר שהפקק נמצא במקומו, הורידו את המחטים לגובה הרצוי לצורך זלוף מכיוון שגובה מחט היציאה קובע את רמת הנוזל היציבה. מכסים את המחטים בכובעים זכריים ושומרים את כל לוח הבאר באינקובטור שנקבע על 37 מעלות צלזיוס עד לשימוש. הכינו את שתי המדיות שישמשו לזלוף, תוך תיוג המדיום שיחולק תחילה כאחת והשנייה כמדיום שתיים.
כדי שכל תרבית תפורע, מלאו מזרק אחד במזרק בינוני כדי להחזיק מעמד לאורך כל משך החלוקה שלו בתוספת נפח מספיק כדי למלא בתחילה את מערכת ההזלפה. מלאו מזרק שני בשתיים בינוניות שיחזיקו מעמד לאורך כל משך החלוקה שלו. חברו את שני המזרקים לשתיים מתוך שלוש היציאות של תחנה בעלת ארבעה כיוונים.
ייתכן שיהיה צורך באורך של צינורות לחיבור המזרקים לסטופקוקים. הכינו את הסטופקוקים על ידי סגירת הסטלוק לבינוני אחד וחלוקת בינוני שניים לתוך הסטלוק עד שהוא פשוט מתחיל לטפטף החוצה מהיציאה הפתוחה. לאחר מכן סגרו את ה-stopcock לבינוני שניים ופיצו את ה-medium one לתוך ה-stopcock עד שכל שאריות המדיום שתיים נשטפו אל מחוץ ליציאה הפתוחה.
חברו את הצינורות במעלה הזרם ליציאת ה-stopcock הפתוחה באמצעות מחבר נקבה ל-barb luer. הכנס מחבר זכר לבר לסיכה בקצה השני של הצינור. הוציאו את המזרק הבינוני מהמזרק עד שהצינור במעלה הזרם יתמלא במדיום והמשיכו בהכנת צינורות במורד הזרם כפי שהודגם קודם לכן.
הכנס מחבר זכר לבר לתוך קצה אחד של הצינורות במורד הזרם והכובש אותו בכובע לואר נקבי. בזהירות להביא את כל צינורות מוכנים, מזרקים ואת צלחת הבאר לחממה כי ישמש עבור perfusion. מקם את משאבת המזרק ואת אספן השברים במיקומים הרצויים ליד האינקובטור.
מניחים את משאבת המזרק על גבי האינקובטור או בסמוך לו ומניחים את אספן השברים ליד האינקובטור ליד הנמל. טענו את המזרקים לתוך המשאבה. חברו יחד את הקצוות המכוסים של כל הצינורות במעלה ובמורד הזרם ודחפו אותם מהחלק החיצוני של האינקובטור פנימה דרך היציאה.
הכנס את הקצוות הפתוחים של הצינורות במורד הזרם לתוך קצות הפיפטה של מתקן ריבוי הראשים של אספן השברים. בתוך האינקובטור, משכו כמה שיותר רפיון של הצינורות במעלה הזרם לתוך האינקובטור כדי למקסם את אורך הצינורות שדרכם המדיום הזורם יכול לקבל חום ופחמן דו חמצני. עבור כל באר מחוברת, שחררו במהירות את המחטים ואת הצינורות במעלה הזרם ובמורד הזרם עבור באר זו, ולאחר מכן חברו אותן יחד עם מחברי הפיתוי שלהם.
לאחר שכל החלקים מחוברים, הפעילו לזמן קצר את משאבת המזרק במהירות גבוהה יחסית כדי להבטיח שכל הנחלים זורמים כראוי. בשלב זה, אם רוצים להתחיל את הניסוי עם הצינורות במורד הזרם המלאים בתווך, המשיכו להפעיל את המשאבה עד שכולם יתמלאו, אחרת, עצרו את המשאבה. הגדר את קצב זרימת משאבת המזרק עבור בינוני אחד ואת תדירות איסוף השברים והתחל את שתי המכונות בו זמנית כדי להתחיל את הניסוי.
כאשר יש צורך להחליף את המקור הבינוני, יש להפסיק במהירות את משאבת המזרק עבור אחד בינוני. סובבו את ה-stopcock סגור לבינוני והתחילו את משאבת המזרק לשניים בינוניים. אם תרצה בהמשך, החלף את המקור בחזרה לבינוני באופן דומה.
אסוף שברים למשך הניסוי הרצוי. ריכוזי העקיבה בשברים משני ניסויי RTD נמדדו והוזנו ל-RTD מתוך סקריפט MATLAB של נתונים כדי לייצר את שני ה-RTDs. צינורות בודדים ופיסות צינורות מרובות בסדרה מתאימים היטב על ידי מודל פיזור צירי יחיד והוספת לוחית 48 באר מחוררת בקו גרמה לסטייה זניחה המאפשרת הן לצינור המטר האחד RTD והן ל-RTD של המערכת כולה להתאים לפונקציות פיזור ציריות.
דוגמה להתאמת מודל לקויה הודגמה באמצעות מודל הפיזור הצירי שהותאם לנתוני RTD של שפופרת מטר אחד והותווה לצד הנתונים. ניחושי הפרמטרים הראשוניים שונו כדי לייצר התאמה טובה למודל שבו טאו היה שווה בערך לנפח מערכת הזלוף חלקי קצב הזרימה הנפחי שלו. פולס של 90 דקות של TNF-alpha הוגדר כאות הכניסה למערכת והתפתל עם צינור ה-RTD של מטר אחד כדי לקבוע את אות TNF-alpha בכניסה לצלחת הבאר.
אות הקלט היה גם מפותל עם RTD של המערכת כולה כדי לקבוע את אות TNF-אלפא ביציאה של המערכת בשברים שנאספו. תאי HEK 293 הונדסו להפריש GLuc המונעים על ידי מקדם המכיל את אלמנט התגובה NF-kappaB. הניסוי גילה עלייה משמעותית בביטוי וירידה איטית בביטוי GLuc המונעת על ידי NF-kappaB בעקבות חשיפה ל-TNF-אלפא.
וריאציות של המערכת מתוארות במאמר הנלווה, כולל התקנה פשוטה יותר לניסויים שאינם דורשים הזנת אותות וחשיפת תאים לפרופילי מומס חיבור פארמה-הו.
