שיטה חזותית רגישה לאיתור חיידקים מייצרי מימן גופרתי

חיידקים מייצרי מימן גופרתי יכולים לנצל חומצות אמינו וחלבונים המכילים גופרית כדי לייצר מימן גופרתי. כאן ביססנו שיטה רגישה ופשוטה לאיתור מימן גופרתי בחיידקים. שיטה זו היא גרסה שונה של משקעי ביסמוט סולפיד שהשתמשו בלוחות מיקרוטיטר שקופים של 96 בארות.

תרבית חיידקים שולבה עם תמיסת ביסמוט המכילה L-ציסטאין ותורבת במשך 20 דקות, שבסופן נצפה משקע שחור. מי שידגים את הנהלים יהיה ווי ג'ו, עוזר מחקר מהמעבדה שלנו. התחילו בהעברת מושבות החיידקים מצלחת אגר לוריא-ברטאני או LB ל-100 מיליליטר של תווך LB, ותרבית בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 12 עד 16 שעות עד שריכוז החיידקים הוא כמיליארד תאים למיליליטר.

מעבירים מושבת חיידקים אחת של Fusobacterium nucleatum ו-Proteus vulgaris מציר סויה טריפטיקייס או צלחות אגר TSB ל-100 מיליליטר של TSB בינוני, ותרבית בטמפרטורה אנאירובית של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות עד שריכוז החיידקים הוא כמיליארד תאים למיליליטר. מערבבים 100 מיקרוליטר של תרבית חיידקים עם 100 מיקרוליטר של תמיסת ביסמוט שהוכנה לאחרונה בצלחות מיקרוטיטר 96 בארות, ותרבית במשך 20 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. עבור כל זן חיידקי, לבצע את הניתוח משולש.

לאחר 20 דקות, בדוק אם יש שינוי צבע. אם צבע התמיסה משתנה מצהוב בהיר לשחור, הדבר מצביע על כך שהחיידקים מסוגלים לייצר מימן גופרתי או H2S. חזור על מדידה זו שלוש פעמים.

לקבוע את הרגישות של השיטה באמצעות ריכוזים שונים של hydrosulfide נתרן מעורבב עם תמיסת ביסמוט סולפיד. לבסוף, לקבוע את נוכחותם של יונים bisulfide ו sulfide על ידי התבוננות היווצרות של משקע ביסמוט סולפיד שחור. הניקוד את צבע הבארות באמצעות סקאלה חזותית מחוסר הפקת צבע להפקת הצבע השחור הכהה ביותר.

ביצוע בדיקת המימן הגופרתי נחקר באמצעות תרביות טהורות של זני חיידקים נבחרים. התוצאות הצביעו על כך שסלמונלה פאראטיפי B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, ו- Proteus vulgaris יכולים לייצר מימן גופרתי עם משקע ביסמוט סולפיד שחור. בעוד סלמונלה paratyphi A, Staphylococcus aureus, Aeromonas hydrophila, ו Klebsiella pneumoniae לא הראה שום משקע שחור.

היתרון העיקרי של שיטה זו הוא כי קל לשכפל ואינו דורש ציוד מיוחד.