황화수소 생성 박테리아는 황 함유 아미노산과 단백질을 활용하여 황화수소를 생성할 수 있습니다. 여기에서 우리는 박테리아에서 황화수소를 검출하는 민감하고 간단한 방법을 확립했습니다. 이 방법은 96웰 투명 마이크로타이터 플레이트를 사용한 황화비스무트 침전의 변형된 버전입니다.
박테리아 배양액을 L-시스테인을 함유하는 비스무트 용액과 합하여 20분 동안 배양한 결과, 마지막에 검은색 침전물이 관찰되었습니다. 절차를 시연하는 것은 우리 실험실의 연구 조교 인 Wei Zhu가 될 것입니다. 먼저 박테리아 콜로니를 Luria-Bertani 또는 LB 한천 플레이트에서 100밀리리터의 LB 배지로 옮기고 박테리아 농도가 밀리리터당 약 10억 세포가 될 때까지 섭씨 37도에서 12-16시간 동안 배양합니다.
Fusobacterium nucleatum 및 Proteus vulgaris의 박테리아 콜로니 1개를 Trypticase 콩 배지 또는 TSB 한천 플레이트에서 TSB 배지 100ml로 옮기고 박테리아 농도가 밀리리터당 약 10억 세포가 될 때까지 섭씨 37도에서 24시간 동안 혐기성 배양합니다. 100 마이크로 리터의 박테리아 배양액과 100 마이크로 리터의 새로 준비된 비스무트 용액을 96 웰 마이크로 타이터 플레이트에 혼합하고 섭씨 37도에서 20 분 동안 배양합니다. 각 박테리아 균주에 대해 분석을 세 번 수행하십시오.
20분 후 색상 변화를 확인합니다. 용액의 색이 연한 노란색에서 검은색으로 변하면 박테리아가 황화수소 또는 H2S를 생성할 수 있음을 나타냅니다. 이 측정을 세 번 반복하십시오.
황화 비스무트 용액과 혼합 된 다양한 농도의 나트륨 하이드로 설파이드를 사용하여 방법의 민감도를 결정하십시오. 마지막으로, 흑색 황화비스무트 침전물의 형성을 관찰하여 중황화물 및 황화물 이온의 존재를 확인합니다. 색상 생성이 없는 것부터 가장 어두운 검은색 색상까지 시각적 척도를 사용하여 웰의 색상을 채점합니다.
황화수소 시험의 성능은 선택된 박테리아 균주의 순수 배양을 사용하여 조사되었습니다. 결과는 살모넬라 파라티피 B, 푸소박테리움 뉴클레아툼, 엔테로코커스 패칼리스, 녹농균 및 프로테우스 불가리스가 흑색 황화비스무트 침전물로 황화수소를 생성할 수 있음을 나타냅니다. 살모넬라 파라티피 A, 황색포도상구균, 에어로모나스 하이드로필라, 클렙시엘라 뉴모니아는 검은색 침전물을 나타내지 못했습니다.
이 방법의 주요 장점은 복제가 쉽고 특수 장비가 필요하지 않다는 것입니다.
