Las bacterias productoras de sulfuro de hidrógeno pueden utilizar aminoácidos y proteínas que contienen azufre para producir sulfuro de hidrógeno. Aquí, establecimos un método sensible y simple para detectar el sulfuro de hidrógeno en bacterias. Este método es una versión modificada de la precipitación de sulfuro de bismuto que utilizó placas de microtitulación transparentes de 96 pocillos.
El cultivo de bacterias se combinó con una solución de bismuto que contenía L-cisteína y se cultivó durante 20 minutos, al final de los cuales se observó un precipitado negro. Demostrando los procedimientos estará Wei Zhu, un asistente de investigación de nuestro laboratorio. Comience transfiriendo las colonias bacterianas de una placa de agar Luria-Bertani o LB a 100 mililitros de medio LB, y cultive a 37 grados centígrados durante 12 a 16 horas hasta que la concentración bacteriana sea de aproximadamente mil millones de células por mililitro.
Transfiera una colonia bacteriana de Fusobacterium nucleatum y Proteus vulgaris del caldo de soja tripticasa o las placas de agar TSB a 100 mililitros de medio TSB, y cultive anaeróbicamente a 37 grados centígrados durante 24 horas hasta que la concentración bacteriana sea de aproximadamente 1 mil millones de células por mililitro. Mezcle 100 microlitros de cultivo bacteriano con 100 microlitros de solución de bismuto recién preparada en las placas de microtitulación de 96 pocillos y cultive durante 20 minutos a 37 grados centígrados. Para cada cepa bacteriana, realizar el análisis por triplicado.
Después de 20 minutos, compruebe si hay cambio de color. Si el color de la solución cambia de amarillo claro a negro, esto indica que la bacteria es capaz de producir sulfuro de hidrógeno o H2S. Repita esta medición tres veces.
Determinar la sensibilidad del método utilizando diferentes concentraciones de hidrosulfuro de sodio mezclado con solución de sulfuro de bismuto. Finalmente, determine la presencia de iones bisulfuro y sulfuro observando la formación de un precipitado de sulfuro de bismuto negro. Puntúe el color de los pozos utilizando una escala visual desde ninguna producción de color hasta la producción de color negro más oscuro.
La realización de la prueba de sulfuro de hidrógeno se investigó utilizando cultivos puros de cepas bacterianas seleccionadas. Los resultados indicaron que Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa y Proteus vulgaris pueden producir sulfuro de hidrógeno con precipitado de sulfuro de bismuto negro. Mientras que Salmonella paratyphi A, Staphylococcus aureus, Aeromonas hydrophila y Klebsiella pneumoniae no mostraron ningún precipitado negro.
La ventaja clave de este método es que es fácil de replicar y no requiere equipo especializado.
