Чувствительный визуальный метод обнаружения бактерий, продуцирующих сероводород

Бактерии, продуцирующие сероводород, могут использовать серосодержащие аминокислоты и белки для производства сероводорода. Здесь мы разработали чувствительный и простой метод обнаружения сероводорода в бактериях. Этот метод представляет собой модифицированную версию осаждения сульфида висмута, в которой используются 96-луночные прозрачные микротитровальные планшеты.

Культуру бактерий объединяли с раствором висмута, содержащим L-цистеин, и культивировали в течение 20 минут, в конце которого наблюдался черный осадок. Продемонстрирует процедуры Вэй Чжу, научный сотрудник нашей лаборатории. Начните с переноса бактериальных колоний из агаровой пластины Лурия-Бертани или LB в 100 миллилитров среды LB и культивируйте при 37 градусах Цельсия в течение 12-16 часов, пока концентрация бактерий не составит около 1 миллиарда клеток на миллилитр.

Перенесите одну бактериальную колонию Fusobacterium nucleatum и Proteus vulgaris из соевого бульона Trypticase или агаровых пластин TSB в 100 миллилитров среды TSB и культивируйте при 37 градусах Цельсия анаэробно в течение 24 часов, пока бактериальная концентрация не составит около 1 миллиарда клеток на миллилитр. Смешайте 100 микролитров бактериальной культуры со 100 микролитрами вновь приготовленного раствора висмута в 96-луночных микротитровальных планшетах и закультурируйте в течение 20 минут при температуре 37 градусов Цельсия. Для каждого бактериального штамма проводите анализ в трех экземплярах.

Через 20 минут проверьте, не изменилось ли цвет. Если цвет раствора меняется со светло-желтого на черный, это говорит о том, что бактерии способны вырабатывать сероводород или H2S. Повторите это измерение три раза.

Определяют чувствительность метода, используя различные концентрации гидросульфида натрия в смеси с раствором сульфида висмута. Наконец, определите наличие бисульфида и сульфидных ионов, наблюдая за образованием черного осадка сульфида висмута. Оцените цвет лунок, используя визуальную шкалу от отсутствия производства цвета до получения самого темного черного цвета.

Эффективность сероводородного теста исследовали с использованием чистых культур отобранных штаммов бактерий. Результаты показали, что Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa и Proteus vulgaris могут продуцировать сероводород с осадком черного сульфида висмута. В то время как Salmonella paratyphi A, Staphylococcus aureus, Aeromonas hydrophila и Klebsiella pneumoniae не показали никакого черного осадка.

Ключевое преимущество этого метода заключается в том, что он легко воспроизводится и не требует специализированного оборудования.