הפלום נאסף ישירות מצמחים כדי לבחון את הטרנסלוקציה של תרכובות אורגניות דרך מרחקים ארוכים, בעוד שקשה להשיג פלואם משתילי צמחים. שיטה פשוטה ויעילה, טכניקת השורש המפוצל, הוצגה כדי לחקור את הטרנסלוקציה של PFAAs בצמחים, במהלך חשיפה לטווח קצר יחסית. שיטה זו יכולה גם לחשוף את ההובלה למרחקים ארוכים של תרכובות שונות בצמחים.
הריכוז הנתון של PFAAs היעד חייב להיות גבוה יחסית לריכוזם בסביבה האמיתית, מה שמבטיח את הניטור של PFAAs היעד בחיטה בתמיסה לא מחודדת. התחילו בבחירת Triticum aestivum בגודל דומה, או זרעי חיטה, וחטאו אותם במשך 15 דקות עם תמיסת מי חמצן 8%. שטפו היטב את הזרעים המחוטאים במים שעברו דה-יוניזציה.
מניחים את הזרעים על נייר הסינון הלח בחושך בטמפרטורת החדר למשך 5 ימים לנביטה. בחר כ 9 שתילים נבוטים, בגודל אחיד, ולהעביר אותם כוסות פלסטיק עם 250 מיליליטר של 1/4 חוזק של הפתרון של Hoagland. לפני הטיפול, לטפח את השתילים בתאי הצמיחה במשך 7 ימים עם מחזור של 14 שעות ב 22 מעלות צלזיוס, ו 10 שעות ב 27 מעלות צלזיוס.
לגידול שתילים, הכינו 2 צינורות צנטריפוגה, A ו- B, שכל אחד מהם מכיל 50 מיליליטר של 1/4 כוח של הפתרון של Hoagland. ממיסים את חומצת הפרפלואורוקטאן המסחרית, או PFOA, ואת החומצה הפרפלואורוקטאנסולפונית, או PFOS, במתנול, ומדללים אותה עם התמיסה המזינה הסטרילית כתמיסת המלאי, ולאחר מכן מוסיפים את תמיסת המלאי לצינור B ב-100 מיקרוגרם לליטר של PFOA ו-PFOS. לאחר מכן, להפריד את כל השורשים של שתיל חיטה לתוך 2 חלקים שווים באמצעות פינצטה עם השורשים מחוברים לאותה יורה, ולאחר מכן להכניס אותם לתוך צינורות A ו- B בהתאמה.
אוטמים את 2 הצינורות עם רדיד אלומיניום לפני גידולם באינקובטור במשך 7 ימים עם מחזור של 14 שעות ב 22 מעלות צלזיוס, ו 10 שעות ב 27 מעלות צלזיוס. לאחר 7 ימים, לאסוף את שתילי החיטה ולהפריד אותם ל -3 חלקים באמצעות מספריים, כגון יורה ושורשים בתרבית בתמיסה מחודדת של חומצות perfluoroakyl, או PFAAs, בתמיסה unspiked. הקפיאו יבשו את דגימות הצמח בליאופיליזר במינוס 55 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות.
לאחר יומיים, הומוגניות. שוקלים את השורש ויורים דוגמאות. אסוף את דגימות התמיסה המחורצות והלא מחודדות.
בצינור פוליפרופילן 15 מיליליטר, להוסיף 2 מיליליטר של חיץ נתרן פחמתי, 1 מיליליטר של tetrabutylammonium מימן גופרתי, 5 מיליליטר של מתיל טרט-בוטיל אתר, ואת השורש הומוגני או לירות. בסיום, יש לנער את השפופרת במהירות 250 סל"ד למשך 20 דקות, לפני הצנטריפוגה ב-2000 גרם למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר כדי לקבל את הפאזה האורגנית הסופר-נאטנטית. לאחר המיצוי השני, איגמו את תמציות הטיפול הדומות ואידו אותן ליובש בזרם חנקן עדין, ולאחר מכן צרו מחדש עם 5 מיליליטר מתנול ומערבבים אותן, תוך שמירה על אותה מהירות במשך כ-30 שניות.
מרכך את מחסנית PestiCarb עם 5 מיליליטר של 0.1% אמוניום הידרוקסיד במתנול, 5 מיליליטר מים ו -5 מיליליטר מתנול. הוסף 5 מיליליטר של מיצוי תמיסת מתנול דרך מחסנית PestiCarb כדי להסיר את הפיגמנט. Elute את המחסנית עם 5 מיליליטר של מתנול ולאסוף את צינורות הדגימה.
לאדות את 10 מיליליטר שנאספו של תמיסת מתנול ליובש וליצור מחדש עם 200 מיקרוליטר של מתנול לפני מערבולת, ולאחר מכן צנטריפוגה את הדגימה ב 10, 000 גרם במשך 20 דקות בטמפרטורת החדר. מרכך את מחסנית מיצוי הפולימר המשופרת בקוטב עם 5 מיליליטר מתנול ו-5 מיליליטר מים להפעלה. הוסף 1 מיליליטר של תמיסה spiked או 50 מיליליטר של דגימות תמיסה un spiked דרך המחסנית.
חמקו מ-PFAAs היעד עם 10 מיליליטר מתנול. מאדים את התמצית עם זרם חנקן עדין ואז משחזרים את התמצית המאודה עם 200 מיקרוליטרים של מתנול לניתוח. ניסוי השורש המפוצל חקר את ההובלה למרחקים ארוכים של PFAAs בחיטה.
נצפה כי PFOA ו-PFOS נלקחו על ידי שורש החיטה בריכוז של 11.94 ננוגרם לגרם ו-30.67 ננוגרם לגרם משקל יבש בתמיסה מחודדת בהתאמה, והועברו ליורה בריכוז של 5.01 ננוגרם לגרם ו-4.17 ננוגרם לגרם משקל יבש. נמצא כי PFOA ו-PFOS זוהו בשורשי חיטה שגודלו בתרבית בתמיסה הלא מרוסקת בריכוז של 0.26 ננוגרם לגרם ו-0.64 ננוגרם לגרם משקל יבש בהתאמה. הוא הציע ש-PFOA ו-PFOS יוכלו לחוות הובלה למרחקים ארוכים דרך הפלום מהירי אל השורש.
צוין כי PFOA ו-PFOS נמצאו גם בתמיסת החומרים המזינים הלא מרוסקת עם ריכוז של 17.8 ננוגרם לליטר ו-28.5 ננוגרם לליטר בהתאמה, מה שמרמז על כך ש-PFOA ו-PFOS יכולים לעבור דרך רצועת השורש הקספריאנית. יש לנקוט אמצעי זהירות כדי להבטיח שהתמיסה המחודדת בצינור B לא תזהם את התמיסה הלא מרוסקת בצינור A.ההדגמה החזותית של שיטה זו יכולה לספק פעולה פשוטה לחשיפת ההובלה למרחקים ארוכים של PFAAs בחיטה.
