O floema foi coletado diretamente das plantas para observar a translocação de compostos orgânicos por longas distâncias, sendo difícil adquirir floema de plântulas vegetais. Um método simples e eficaz, a técnica de raiz dividida, foi introduzido para estudar a translocação de PFAAs em plantas, durante uma exposição relativamente curta a prazo. Este método também pode revelar o transporte de longa distância de diferentes compostos em plantas.
A concentração dada de PFAAs alvo deve ser relativamente maior do que sua concentração no ambiente real, garantindo o monitoramento dos PFAAs alvo em trigo em solução não cravada. Comece selecionando o Triticum aestivum de tamanho semelhante, ou sementes de trigo, e desinfete-os por 15 minutos com uma solução de peróxido de hidrogênio a 8%. Lave bem as sementes desinfetadas com água deionizada.
Coloque as sementes no papel de filtro úmido no escuro à temperatura ambiente por 5 dias para germinação. Selecione aproximadamente 9 mudas germinadas, de tamanho uniforme, e transfira-as para copos plásticos com 250 mililitros de 1/4 de força da solução de Hoagland. Antes do tratamento, cultive as mudas em câmaras de crescimento por 7 dias com um ciclo de 14 horas a 22 graus Celsius e 10 horas a 27 graus Celsius.
Para o cultivo de mudas, prepare 2 tubos de centrífuga, A e B, cada um contendo 50 mililitros de 1/4 de força da solução de Hoagland. Dissolva o ácido perfluorooctano comercial, ou PFOA, e o ácido perfluorooctanossulfônico, ou PFOS, em metanol, e dilua-o com a solução nutritiva estéril como solução-mãe, em seguida, adicione a solução-mãe ao tubo B a 100 microgramas por litro de PFOA e PFOS. Em seguida, separe as raízes inteiras de uma muda de trigo em 2 partes iguais usando pinças com as raízes conectadas à mesma parte aérea e, em seguida, insira-as nos tubos A e B, respectivamente.
Sele os 2 tubos com folha de alumínio antes de cultivá-los em uma incubadora por 7 dias com um ciclo de 14 horas a 22 graus Celsius e 10 horas a 27 graus Celsius. Após 7 dias, colete as mudas de trigo e separe-as em 3 partes usando tesouras, como brotos e raízes cultivadas na solução cravada de ácidos perfluoroaquilos, ou PFAAs, em solução sem espinhos. Liofilizar as amostras da planta em um liofilizador a menos 55 graus Celsius por 48 horas.
Após 2 dias, homogeneizar. Pesar as amostras de raiz e parte aérea. Recolha as amostras de solução com e sem pontas.
Em um tubo de polipropileno de 15 mililitros, adicione 2 mililitros de tampão de carbonato de sódio, 1 mililitro de sulfato de hidrogênio de tetrabutilamônio, 5 mililitros de éter metil terc-butílico e a raiz ou parte aérea homogeneizada. Quando terminar, agitar o tubo a 250 RPM durante 20 minutos, antes de centrifugar a 2000 g durante 10 minutos à temperatura ambiente para obter a fase orgânica sobrenadante. Após a segunda extração, agrupe os extratos de tratamento semelhantes e vaporize-os até a secura em um fluxo suave de nitrogênio, em seguida, reconstitua com 5 mililitros de metanol e vortex-os, mantendo a mesma velocidade por aproximadamente 30 segundos.
Condicione o cartucho PestiCarb com 5 mililitros de hidróxido de amónio a 0,1% em metanol, 5 mililitros de água e 5 mililitros de metanol. Adicione 5 mililitros de solução de metanol de extração através do cartucho PestiCarb para remover o pigmento. Eluir o cartucho com 5 mililitros de metanol e recolher nos tubos de amostragem.
Evaporar os 10 mililitros de solução de metanol coletados até a secura e reconstituir com 200 microlitros de metanol antes do vórtice, em seguida, centrifugar a amostra a 10.000 g por 20 minutos à temperatura ambiente. Condicione o cartucho de extração de polímero com reforço polar com 5 mililitros de metanol e 5 mililitros de água para ativar. Adicionar 1 mililitro da solução cravada ou 50 mililitros das amostras de solução não cravada através do cartucho.
Iludir os PFAAs alvo com 10 mililitros de metanol. Evaporar o extracto com uma corrente suave de azoto e, em seguida, reconstituir o extracto evaporado com 200 microlitros de metanol para análise. O experimento de raiz dividida investigou o transporte de longa distância de PFAAs em trigo.
Observou-se que PFOA e PFOS foram absorvidos pela raiz de trigo com concentração de 11,94 nanogramas por grama e 30,67 nanogramas por grama de peso seco em solução cravada, respectivamente, e foram transferidos para a parte aérea com concentração de 5,01 nanogramas por grama e 4,17 nanogramas por grama de peso seco. Verificou-se que PFOA e PFOS foram detectados em raízes de trigo cultivadas na solução sem espinhos com uma concentração de 0,26 nanogramas por grama e 0,64 nanogramas por grama de massa seca, respectivamente. Sugeriu que o PFOA e o PFOS poderiam experimentar o transporte de longa distância através do floema da parte aérea até a raiz.
Observou-se que PFOA e PFOS também foram encontrados na solução nutritiva sem espinhos com uma concentração de 17,8 nanogramas por litro e 28,5 nanogramas por litro, respectivamente, sugerindo que PFOA e PFOS poderiam passar através da tira Casparian raiz. Devem ser tomadas precauções para garantir que a solução cravada no tubo B não contamina a solução não cravada no tubo A.A demonstração visual deste método pode fornecer uma operação simples para revelar o transporte a longa distância de PFAAs no trigo.
