Флоэму собирали непосредственно с растений для наблюдения за транслокацией органических соединений на большие расстояния, тогда как из саженцев растений трудно приобрести флоэму. Простой и эффективный метод, метод расщепления корней, был введен для изучения транслокации PFAA в растениях во время относительно кратковременного воздействия. Этот способ также может раскрыть перенос различных соединений в растениях на большие расстояния.
Заданная концентрация целевых PFAA должна быть относительно выше их концентрации в реальной среде, обеспечивая мониторинг целевых PFAA в пшенице в несыпанном растворе. Начните с выбора аналогичного размера Triticum aestivum, или семян пшеницы, и продезинфицируйте их в течение 15 минут 8% раствором перекиси водорода. Тщательно промойте продезинфицированные семена деионизированной водой.
Поместите семена на влажную фильтровальную бумагу в темноте при комнатной температуре на 5 дней для прорастания. Отберите примерно 9 проросших саженцев одинакового размера и переложите их на пластиковые стаканы с 250 миллилитрами 1/4 прочности раствора Хоугланда. Перед обработкой культивируйте рассаду в камерах роста в течение 7 дней с циклом 14 часов при 22 градусах Цельсия и 10 часов при 27 градусах Цельсия.
Для выращивания рассады подготовьте 2 центрифужные трубки А и В, каждая из которых содержит 50 миллилитров 1/4 прочности раствора Хоугланда. Растворить коммерческую перфтороктановую кислоту, или ПФОК, и перфтороктансульфоновую кислоту, или ПФОС, в метаноле и разбавить его стерильным питательным раствором в качестве исходного раствора, а затем добавить исходный раствор в пробирку В по 100 мкг на литр ПФОК и ПФОС. Далее разделите целые корни саженца пшеницы на 2 равные части с помощью пинцета с корнями, соединенными с одним и тем же побегом, затем вставьте их в трубки А и В соответственно.
Запечатайте 2 тубы алюминиевой фольгой перед культивированием их в инкубаторе в течение 7 дней с циклом 14 часов при 22 градусах Цельсия и 10 часов при 27 градусах Цельсия. Через 7 дней соберите рассаду пшеницы и разделите их на 3 части с помощью ножниц, таких как побеги и корни, культивированные в шипованном растворе перфторакиловых кислот, или PFAA, в невыжатом растворе. Сублимируйте образцы растений в лиофилизаторе при минус 55 градусах Цельсия в течение 48 часов.
Через 2 дня гомогенизировать. Взвесьте образцы корней и побегов. Соберите образцы шипованного и несыпанного раствора.
В 15-миллилитровую полипропиленовую трубку добавьте 2 миллилитра карбонатного буфера натрия, 1 миллилитр сероводорода тетрабутиламмония, 5 миллилитров метил-трет-бутилового эфира и гомогенизированный корень или побег. Когда это будет сделано, встряхните трубку при 250 об/мин в течение 20 минут, перед центрифугированием при 2000 г в течение 10 минут при комнатной температуре для получения надмной органической фазы. После второй экстракции объедините аналогичные обработанные экстракты и испарите их до сухости в мягком потоке азота, затем восстановите 5 миллилитрами метанола и вихрьте их, поддерживая ту же скорость в течение примерно 30 секунд.
Кондиционируйте картридж PestiCarb с 5 миллилитрами 0,1% гидроксида аммония в метаноле, 5 миллилитрами воды и 5 миллилитрами метанола. Добавьте 5 миллилитров экстрагированного раствора метанола через картридж PestiCarb для удаления пигмента. Элюируйте картридж с 5 миллилитрами метанола и соберите в пробирки.
Выпаривают собранные 10 миллилитров раствора метанола до сухости и восстанавливают 200 микролитрами метанола перед вихрем, затем центрифугируют образец при 10 000 г в течение 20 минут при комнатной температуре. Обусловите активацию полярно-усиленного полимерного экстракционного картриджа с 5 миллилитрами метанола и 5 миллилитрами воды. Добавьте 1 миллилитр шипованного раствора или 50 миллилитров образцов без шипованного раствора через картридж.
Ускользают от целевых PFAA с 10 миллилитрами метанола. Выпарите экстракт мягким потоком азота, а затем восстановите выпаренный экстракт 200 микролитрами метанола для анализа. Эксперимент с расщепленным корнем исследовал перенос PFAA в пшенице на большие расстояния.
Было отмечено, что ПФОК и ПФОС поглощаются корнем пшеницы с концентрацией 11,94 нанограмма на грамм и 30,67 нанограмма на грамм сухой массы в шипованном растворе, соответственно, и переносятся в побеги с концентрацией 5,01 нанограмма на грамм и 4,17 нанограмма на грамм сухого веса. Было установлено, что ПФОК и ПФОС были обнаружены в корнях пшеницы, культивируемых в несыпанном растворе, с концентрацией 0,26 нанограмма на грамм и 0,64 нанограмма на грамм сухого веса, соответственно. Она предположила, что ПФОК и ПФОС могут подвергаться транспортировке на большие расстояния через флоэму от побега к корню.
Было отмечено, что ПФОК и ПФОС были также обнаружены в неиспываемом питательном растворе с концентрацией 17,8 нанограмма на литр и 28,5 нанограмма на литр, соответственно, что позволяет предположить, что ПФОК и ПФОС могут проходить через корневую каспарианскую полоску. Необходимо принять меры предосторожности для обеспечения того, чтобы шипованный раствор в пробирке В не загрязнял несыпанный раствор в пробирке А. Визуальная демонстрация этого метода может обеспечить простую операцию по выявлению переноса PFAA в пшенице на большие расстояния.
