קביעת יעילות ההזדווגות של הפלואידים ב-Saccharomyces cerevisiae

Summary

בעבודה זו מתוארת שיטה חזקה לכימות יעילות ההזדווגות בשמרים Saccharomyces cerevisiae . שיטה זו שימושית במיוחד לכימות מחסומים קדם-זיגוטיים במחקרי התמיינות.

Abstract

Saccharomyces cerevisiae הוא אורגניזם מודל נפוץ בגנטיקה, אבולוציה וביולוגיה מולקולרית. בשנים האחרונות, הוא הפך גם אורגניזם מודל פופולרי ללמוד בעיות הקשורות speciation. מחזור החיים של שמרים כולל הן שלבי רבייה א-מיניים והן שלבי רבייה מינית. קלות ביצוע ניסויי האבולוציה וזמן הדור הקצר של האורגניזם מאפשרים לחקור את האבולוציה של מחסומי רבייה. היעילות שבה שני סוגי ההזדווגות (a ו-α) מזדווגים כדי ליצור את הדיפלואיד a/α מכונה יעילות ההזדווגות. כל ירידה ביעילות ההזדווגות בין הפלואידים מצביעה על מחסום קדם-זיגוטי. לכן, כדי לכמת את מידת בידוד הרבייה בין שני הפלואידים, נדרשת שיטה חזקה לכימות יעילות ההזדווגות. לשם כך מוצג כאן פרוטוקול פשוט וניתן לשחזור. הפרוטוקול כולל ארבעה שלבים עיקריים, הכוללים תיקון הפלואידים על צלחת YPD, ערבוב הפלואידים במספרים שווים, דילול וציפוי למושבות בודדות, ולבסוף חישוב היעילות בהתבסס על מספר המושבות על צלחת נשירה. סמנים אוקסוטרופיים משמשים כדי לעשות בבירור את ההבחנה בין הפלואידים לדיפלואידים.

Introduction

שמרי אפייה (Saccharomyces cerevisiae), הנקראים בדרך כלל שמרים ניצנים, הם אאוקריוט חד-תאי. יש לו שני סוגי הזדווגות, A ו- α, והוא מציג מחזורי רבייה א-מיניים ומיניים. סוגי ההזדווגות a ו-α הם הפלואידים ויכולים להתחלק באופן מיטוטי בהיעדר סוג ההזדווגות האחר בסביבה, המייצג את המחזור הא-מיני של שמרים. כאשר שני סוגי ההזדווגות נמצאים בסמיכות, הם מפסיקים להתחלק באופן מיטוטי ומתמזגים ליצירת תא דיפלואידי. השמרים הדיפלואידים יכולים להתחלק באופן מיטוטי כאשר קיימים חומרים מזינים או לעבור מיוזה בתנאים של רעב חנקן בנוכחות מקור פחמן דל שאינו ניתן לתסיסה, כגון אצטט¹. התוצאה היא היווצרות נ....