מחקר זה מספק הדרכה תיאורטית לגידול זני פלפל עמידים למלח ולכיול יבול ואיכות גבוהים בקרקע מליחה-אלקלית. תקופת הניסוי היא 15 יום עם יעילות גבוהה, מהירות גבוהה יותר, חזרתיות טובה ותוצאות מדויקות. טכנולוגיה זו יכולה לספק הפניות טכניות והדרכה תיאורטית להערכת סובלנות מלח של גידולים אחרים.
רוצה מומחה ראשוני כדי להעריך את סובלנות מלח של זרעים. התחילו בהכנת זרעי היבול לזן Hongtianhu 101 עם סבילות חזקה למלח, ולזן Xinxiang 8 עם סבילות נמוכה. הכינו 2000 מיליליטר של תמיסת 0.2% אשלגן פרמנגנט כמגיב חיטוי זרעים ממש לפני השימוש.
הכינו את תמיסת המלח המעורבת באמצעות שבעה מלחים, כולל נתרן פחמתי, סודיום ביקרבונט, נתרן כלורי, סידן כלורי, מגנזיום כלורי, מגנזיום גופרתי ונתרן גופרתי. לאחר מכן הכינו צלחות פטרי לשימוש חד פעמי, תשעה ס"מ ונייר סינון איכותי במהירות בינונית של תשעה סנטימטרים. בחרו זרעי פלפל בגודל אחיד ובחלקיקים מלאים מכל זן, בקוטר ממוצע של 4.2 מילימטרים עבור Hongtianhu 101 ו-3.7 מילימטרים עבור Xinxiang 8 זרעים.
חשב את המספר הכולל של זרעים שנבחרו בהתאם לעומס העבודה של הבדיקה. לחיטוי זרעים, השרו זרעי פלפל נבחרים בתמיסת פרמנגנט אשלגן 0.2%. לאחר 15 דקות, שטפו את הזרעים חמש פעמים במים מזוקקים.
מעבירים את הזרעים המעוקרים למים מזוקקים למשך 24 שעות להשריה. לאחר שסיימתם, שטפו את הזרעים מספר פעמים במים מזוקקים לפני ייבושם לשימוש נוסף. הכינו שישה ריכוזים של המלחים המעורבים ומדדו את מוליכות תמיסת המלח, באמצעות מד מוליכות.
בצלחת פטרי עם שתי שכבות של נייר פילטר, מניחים באופן שווה 40 זרעי פלפל. הכינו את הזרעים לשישה טיפולים ניסיוניים וחמישה שכפולים. הוסיפו כמות מתאימה של ששת ריכוזי המלח המעורבים לצלחת הפטרי לצורך נביטה, כדי להבטיח שנייר הסינון יהיה לח.
מניחים את הזרעים באינקובטור אוויר בטמפרטורה של 28 מעלות צלזיוס ולחות אוויר של 80% לנביטה בחושך. לאחר נביטת הזרעים, אפשרו לשתילים לגדול במשך 14 יום בעוצמת אור של כ-450 לוקס. עם מחזור אור של 12 שעות חושך, ו-12 שעות אור באינקובטור.
לחדש את הפתרון בצלחת התרבות כל 12 שעות כדי לשמור על נייר מסנן לח, ולשטוף לחלוטין את נייר המסנן כל 24 שעות עם הריכוז המתאים של תמיסת מלח מעורב, כדי לשמור על ריכוז מלח מעורב קבוע בצלחת פטרי. עבור מדדי נביטת הזרעים, קבע את קצב הנביטה, מדי יום, לאחר הזריעה עם הרדיקלי שובר את מעיל הזרע, ומגיע למחצית אורך קוטר הזרע כסמן הנביטה. כדי לקבוע את מדד צמיחת השתילים, בחרו באופן אקראי 10 שתילים מייצגים מכל צלחת פטרי ביום ה-14 לאחר הזריעה, ומדדו את אורך השורש ואת אורך ההיפוקוטיל.
השתמשו בסכין כדי לחלק את שתילי הפלפל לחלקים רדיקליים ומעל הקרקע. מוציאים את המים מהשתילים על ידי ניגוב, ושוקלים את השתילים בנפרד כדי לקבוע את המשקל הטרי. כדי לשמר את שתילי הפלפל, בחר כ 24 גרם של שתילי פלפל שלם מייצגים מכל טיפול ביום 14 לאחר הזריעה.
לאחר הסרת המים על פני השטח, מיד להקפיא את שתילים בחנקן נוזלי במשך דקה אחת. ולאחסן אותם במקרר ב מינוס 80 מעלות צלזיוס. יש לשלוף דגימת שתיל של גרם אחד מכל טיפול שנאסף בשלשה.
מיד, מניחים את דגימת השתיל בצינור צנטריפוגה. מוסיפים חנקן נוזלי, וטוחנים את הדגימה באמצעות מוט השחזה כדי לקבוע את המדדים הפיזיולוגיים של השתילים, כולל פעילות האנזים המגן על השתילי, מלונדיאלדהיד ותכולת פרולין. ככל שריכוז המלח המעורב עלה, פוטנציאל הנביטה ומדד הנביטה של Hongtianhu 101 ו- Xinxiang 8 ירדו באופן משמעותי.
ככל שריכוזי המלחים המעורבים עלו, קצב הנביטה של שני הזנים ירד בהדרגה, ושיעור נזקי המלח היחסי של הזנים עלה. מדד מרץ נביטת הזרעים של Hongtianhu 101 היה גבוה מזה של Xinxiang 8 בכל רמת ריכוז מלח מעורב. בריכוז מעורב של 15 גרם לליטר, אורך השורש של Hongtianhu 101 ו-Xinxiang 8 ירד ב-89.4% ו-91.1% ומשקל השורש הטרי ירד ב-81.7% ו-71.2% בהתאמה, בהשוואה לקבוצת הביקורת.
בהתבסס על הבדלי הזנים, אורך ההיפוקוטיל והמשקל הטרי מעל פני הקרקע של Xinxiang 8 היו גבוהים יותר מהונגטיאנהו 101 בכל ריכוז מלח. בחמישה ושלושה גרם לליטר הגיעו ריכוזי תכולת המלונדיאלדהיד והפרולין לערכים הנמוכים ביותר בהתאמה. בריכוז מלח של שלושה עד 15 גרם לליטר, תכולת הפרולין של Xinxiang 8 עלתה לאט ונשארה יציבה יחסית, בעוד שתכולת הפרולין של Hongtianhu 101 עלתה במהירות.
ככל שריכוז המלח המעורב עלה, פעילות הקטלאז, הפרוקסידז והסופראוקסיד דיסמוטאז של שתילי Hongtianhu 101 ו- Xinxiang 8 פחתה, ולאחר מכן עלתה, כאשר הערכים הנמוכים ביותר שהתקבלו היו שלושה גרם לליטר. פעילויות הקטלאז והפרוקסידז של Hongtianhu 101 היו גבוהות יותר משין-שיאנג 8, וההפרש ביניהן גדל בהדרגה. שמור על ריכוז קבוע של מלח מעורב בצלחת פטרי על ידי שמירה על נייר מסנן לח ושטיפה מלאה של נייר המסנן.
חוקרים יכולים לחדש על בסיס ניסוי זה, כגון שינוי היחס בין מלחים מעורבים שונים כדי להשיג תוצאות נרחבות ומעמיקות יותר.
