המטרה העיקרית של מחקר זה היא להדגים מתודולוגיה מפורטת של בדיקה של מחלות ריקבון שורש יבש, כגון טכניקת נייר סופג וטכניקת סיר חולה. טכניקות אלה יהיו מועילות ללמוד את האינטראקציה בין צמח חומוס ו Rhizoctonia bataticola. הבנת האינטראקציה צמח אפרוח עם פתוגן פטרייתי Rhizoctonia bataticola חשוב מבחינה חקלאית.
לשם כך, יש צורך בהסטות רב-תכליתיות ומשוחזרות מאוד. כאן, שני בדיקות בשימוש נרחב במעבדה שלנו מוכחות. אחד מהם הוא נייר סופג מבוסס, והשני הוא בדיקה מבוססת סיר חולה.
כדי לבצע את הבדיקה נייר סופג, להכין Rhizoctonia bataticola פטריית inoculum על ידי קנה המידה מתרבות שפויה לצלחת פטרי ולאחר מכן לתרבות נוזלית. מכינים משתלת חומוס על ידי, זריעת זרעים בסיר גדול. לעקור אותם ולשים אותם ב inoculum הנוזלי ולשים אותם על נייר סופג.
שימו לב לתסמיני מחלה, כלומר נמק על השורש, ריקבון השורש ועלה מצהיב שמונה ימים לאחר החיסון. מוצג כאן הוא קצה המזלג, השלבים בטכניקת נייר סופג. כדי לבצע את ההקדמה סיר חולה, לחסן ארוחת חומוס עם פטרייה.
לאחר הדגירה ב 30 מעלות צלזיוס במשך 15 ימים, תרבות החולה מתקבלת. לאחר מכן, אבקת אותם ומערבבים עם תערובת סיר. לזרוע זרעים על סיר שליטה וסיר חולה.
בימים הבאים, להתבונן סימפטומים, כלומר נמק על השורש, ריקבון השורש, ועלה מצהיב על הצמחים הנגועים, 10 ימים לאחר זריעה. סיר חולה ניתן לשנות את קנה המידה והוא יכול לשמש הקרנות בקנה מידה גדול. מוצג כאן הוא קצה המזלג של צעדים בטכניקת סיר חולה.
ריזוקטוניה באטטיקה היא פתוגן מתפתח. פטרייה זו מייצרת hyphae ו microsclerotia, אשר פועלים כמו inuclum העיקרי במהלך זיהום הצמח. התרבות הטהורה החלה באמצעות השיטה האסולאטית משמשת לראיה.
נקודת המפתח לתסקים המוצלחים האלה היא עומס אינוקולום אופטימלי. הדגמה של טכניקת הנייר הנתמה מתחילה כאן. כדי להכין נוזלי Rhizoctonia bataticola inoculum, לחסן את מרק 500 מ"ל עם תקע אגר פטרייתי משלושה ימים תרבות צלחת טריים להדגירה את הבקבוק באינקובטור ב 28 מעלות צלזיוס במשך חמישה ימים.
סנן את המיגלה הפטרייתי האפור הכהה עם מיקרו-סקלרוטיה. להשעות במים autoclaved ולהסיר את התקשורת. שוב, לסנן את המיסליה ולהסיר לחות על ידי כתם ייבוש המיקליה במשך כמה דקות.
להשעות 100 גרם של אינוקולום פטרייתי ב 200 מ"ל של מים autoclaved בבקבוק ריבה ומערבבים אותו כראוי. לפתח משתלת חומוס על ידי זריעת זרעים מעוכלים משטח סולרנט. לעקור את הצמחים שמונה ימים לאחר זריעה, לשטוף אותם ולשטוף אותם עם RO autoclaved. קח נייר סופג ולקפל אותו פעם אחת ולה מניחים חצי ממנו על המגש.
לעשות את זה רטוב עם מים autoclaved. קח צמחים לטבול לתוך inoculum במשך 30 שניות עם תנועה לסירוגין למעלה ולמטה. מניחים את הצמחים בצורה כזו כי השורשים מכוסים בתוך הסדין פוליה נשאר בחוץ.
מקפלים את החצי השני ומכופפים את הנייר. לשליטה, לטבול את הצמחים במים autoclaved, לשמור את המגשים בתא צמיחה במשך שמונה ימים. תוצאות. שימו לב לתסמינים כגון הצהבה של עלים, ריקבון שורשים, נמק בשורש וירידה במספר השורשים.
הדגמה של טכניקת הסיר החולה מתחילה כאן. קח קילוגרם אחד של זרעי חומוס מסחריים. לשטוף את הזרעים עם מי ברז ולשטוף שוב עם מי RO.
משרים את הזרעים במשך חמש שעות. שוב, לשטוף את הזרעים עם מי RO להוסיף 300 גרם בבקבוק ריבה. יש לבודד אותם אוטומטית ב-121 LVS למשך 15 דקות פעמיים ברציפות.
לאחר הקירור, מעבירים את הבקבוק דרך זרימת המינאר. לחסן את הבקבוקים עם שלושה אנגרי פטרייתי תקעים כארבעה גדלים רבועים מילימטר לנער אותו היטב לערבב כראוי. עוטפים את הבקבוקים ומטמיע אותם באינקובטור ב 30 מעלות צלזיוס במשך 15 ימים.
שימו לב לבקבוקים עם צמיחה מיסליאלית כהה סביב זרעי החומוס ולהסיר את הזרעים. מייבשים אותם בטמפרטורת החדר ואבקתם. מערבבים אבקת ריזוקטיניה באטטולה עם סולוריט ולשמור אותם בטמפרטורת החדר במשך חמישה ימים.
פני השטח מעקרים את זרעי GT62 וזורעים אותם בעומק של שני סנטימטרים. תוצאות. שימו לב לתמותה של 90% בסיר חולה. 10 ימים לאחר זריעה, לבחון את הסימפטומים כגון נמק בשורשים וירידה במספר השורשים ההיברטיים ועלה מצהבה בימים הבאים.
סיר חולה יכול להיות מוכן באדמת שדה גם כן. בצורת וזיהום ריזוקטוניה באטטולה. לכפות לחץ בצורת בסיר החולה על ידי מניעת המים.
המוצגים כאן הם הצמחים נתונים לשליטה, בצורת, פתוגן, ובצורת בו זמנית ומתח פתוגן. שימו לב לתסמינים, כלומר, יותר נמק, ריקבון שורש וירידה במספר השורשים, ואורך השורש בטיפול הלחץ המשולב בהשוואה לטיפול בפתוגן בלבד. מסקנות. טכניקת נייר סופג יכול להתבצע בתנאי ויטרו.
טכניקת סיר חולה יכולה להתבצע בתנאי ויוו. בנמל חולה, מתח abiotic, כלומר, מתח בצורת, ניתן להטיל יחד עם זיהום פתוגן. באמצעות טכניקות אלה, אפשר ללמוד את דפוס זיהום פתוגן.
רוב השינויים הפיזיולוגיים מתרחשים במהלך האינטראקציה חומוס-Rhizoctonia bataticola, וגם לסנן את גנוטיפים חומוס להתנגדות. הבדיקה של נייר סופג שימושית מאוד ליצירת דגימות איכותיות למחקרי מיקרוסקופיה וביולוגיה מולקולרית. המבדיקה בסיר החולה, המחקה את תנאי הזיהום הטבעיים, ישימה להקרנת נמק חומוס.
