אנו אסירי תודה על המכשור והמעבדה שסופקו על ידיהרחבת תודתנו לפקולטה לרפואה מונגולית של האוניברסיטה הרפואית המונגולית הפנימית, סין.מחקר זה נתמך על ידי, על מתן המכשור הדרוש ומתקני מעבדה. מחקר זה קיבל תמיכה כספית מהקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מענק מס '81760762) ומפרויקט האוניברסיטה הרפואית של מונגוליה הפנימית של סין (מענק מס '. YKD2022MS074), ופרויקט המחקר המדעי להשכלה גבוהה במונגוליה הפנימית, סין (מענק מס' NJZY22661) ופרויקט הקרן הפתוחה של מעבדת מפתח לרפואה סינית ומונגולית באזור האוטונומי מונגוליה הפנימית, סין (מענק מס. MYX2023-K07).

פרוטוקולי הניסוי קיבלו אישור מהוועדה לטיפול באתיקה של ניסויים בבעלי חיים באוניברסיטה הרפואית של מונגוליה הפנימית (YKD202301172) ועמדו בהנחיות המכונים הלאומיים לבריאות לטיפול ואתיקה בבעלי חיים. מספר הרישוי של מרכז בעלי החיים שלנו הוא NO.110324230102364187. עשרים וארבע חולדות ספראג-דולי (SD) זכרים, כל אחת בת 8 שבועות (200 גרם ±-20 גרם), נרכשו ושוכנו בסביבה מבוקרת עם טמפרטורה של 22 מעלות צלזיוס ±-2 מעלות צלזיוס ולחות של 55% ±-15%. האכילו את החולדות בתזונה של תחזוקת מכרסמים ומים טהורים בקלחי תירס למצעים. החולדות היו נתונות למחזור אור/חושך של 12 שעות/12 שעות במשך שבוע לפני הניסויים.
1. הקמת מודל חולדות CUMS
<ol><li>קיבוץ<ol><li>חלקו את 24 החולדות באופן אקראי לשתי קבוצות: קבוצת הביקורת (CON), שלא תהיה חשופה לבידוד או ללחץ, וקבוצת המודל (MOD). כל קבוצה מכילה 12 חולדות.</li>
		<li>מאכלסים את החולדות בכלובים סטנדרטיים בגודל 55X40X20 ס"מ, עם 6 חולדות בכל כלוב. יש לשמור על הקצאת הכלוב לאורך כל תקופת ההתאקלמות, אלא אם צוין אחרת.</li>
		<li>מלאו כל כלוב גידול במצעים רעננים והחליפו אותו פעמיים בשבוע.</li>
		<li>יש לבצע תקופת התאקלמות של שבוע. אפשרו לחולדות גישה בלתי מוגבלת למזון ומים, למעט במהלך הפעלת לחץ CUMS. יש לשמור על סביבה קבועה עם טמפרטורה של 22°C ±-2°C, לחות של 55% ±-15%, ומחזור אור/חושך של 12 שעות/12 שעות בין השעות 08:00 ל-20:00, אלא אם צוין אחרת.</li>
		<li>לפני תחילת הניסוי, טפלו בחולדות מדי יום כדי להרגיל אותן בפני החוקר ולמזער עקה נוספת במהלך שלב הניסוי.</li>
	</ol></li>
	<li>בידוד עם מתח קל כרוני בלתי צפוי<ol><li>במקביל, מקם את קבוצות MOD ו- CON בחדרים נפרדים. בית חולדות קבוצת MOD בנפרד, תוך שמירה על חולדות קבוצת CON יחד. שמור על כל התנאים האחרים קבועים.</li>
		<li>יישמו משטר לחצים של 28 יום25. כדי למנוע התרגלות ולהבטיח לחץ בלתי צפוי, לנהל גורם לחץ אקראי אחד ביום, הימנעות משימוש באותו גורם לחץ בימים רצופים.</li>
		<li>יש להפעיל באופן אקראי אחד מתשעת גורמי הלחץ הבאים 26,27 בימים שונים: מניעת מים למשך 24 שעות, מניעת מזון למשך 24 שעות, ריפוד רטוב, שיפוע הכלוב, היפוך מחזור האור/חושך, חשיפה לקור ב-4°C, חשיפה לחום ב-45°C, הידוק זנב למשך דקה אחת או טלטול של 15 דקות ב-160 סל"ד. העיצוב הספציפי מתואר בטבלה 1.</li>
		<li>במהלך הפעלת גורם הדחק, יש להגביל את הגישה למזון ומים לקבוצת MOD עד לסיום הלחץ, למעט במהלך היפוך מחזור האור/חושך. קבוצת CON לא נדרשה להגביל מים ודיאטה.</li>
	</ol></li>
	<li>שיטות לחץ<ol><li>התחל את הניסוי על ידי הפעלת גירויי דיכאון בשילוב עם בידוד של 28 יום לכל החולדות, למעט קבוצת הביקורת. אכסנו את החולדות האלה בכלובים נפרדים. עיין בטבלה 2 עבור מצבים הקשורים לגירויי דיכאון.</li>
		<li>כדי לבצע את שיטת מהדק הזנב, אבטחו זנב של חולדה מקבוצת MOD על ידי הידוק הזנב עם אטב נייר סטנדרטי במרחק של 1-2 ס"מ משורש זנב החולדה. מדוד את זמן ההידוק למשך דקה אחת (n = 12).</li>
		<li>בשיטת המחסור במים, יש למנוע מים מחולדה מקבוצת MOD על ידי הוצאת בקבוק המים שלה ולהקליט במשך 24 שעות. הערה: שעת תחילת המחסור במים נרשמה כך שניתן היה לחשב במדויק את שעת הסיום; נצפתה התנהגות החולדות בתקופה זו, כולל פעילות, תיאבון ומצב נפשי.</li>
		<li>בשיטת מניעת מזון, יש למנוע מזון מחולדה מקבוצת MOD ולרשום במשך 24 שעות. הערה: רשום את הזמן שבו מתחיל מחסור במזון כדי שניתן יהיה לחשב במדויק את שעת הסיום; להבטיח כי חולדות הם hydrated כראוי בתקופה זו; ולהתבונן בהתנהגות החולדות בתקופה זו, כולל פעילות ומצב נפשי וכו'.</li>
		<li>לגירוי קר ב 4 מעלות צלזיוס, הניחו חולדה מקבוצת MOD בדלי מים קרים והקליטו במשך 5 דקות. יש לוודא שטמפרטורת המים נשארת עקבית לאורך כל הבדיקה. בסיום הניסוי, יבשו את החולדה עם מפוח והחזירו אותה לכלוב המקורי שלה. הערה: שמור על טמפרטורת המים הקרים ב -4 °C באמצעות מדחום וקוביות קרח כדי לווסת את טמפרטורת המים כאשר היא עולה. יש להחליף את המים באופן קבוע כדי להבטיח שאיכות המים נקייה והטמפרטורה קבועה. בעת שחייה, כל הגפיים והגזעים של החולדות צריכים להיות שקועים במים קרים למעט הראש. עומק המים חייב להיות גדול מאורך גוף החולדה כדי למנוע מהחולדה לקפוץ מהמים עקב מגע עם תחתית הדלי.</li>
		<li>כדי לנהל עקת חום של 45 מעלות צלזיוס, הניחו חולדה מקבוצת MOD באינקובטור והקליטו במשך 5 דקות, כדי להבטיח שהטמפרטורה תישאר יציבה לאורך כל הבדיקה.</li>
		<li>בהיפוך מחזור האור-חושך, עטפו את הכלוב בבד שחור למשך שעה אחת כדי לדמות חושך בשעות היום. לאחר מכן, האר את הכלוב למשך 12 שעות במהלך הלילה כדי לחקות את אור היום. רשמו את התנהגות החולדה, צריכת המזון והמים ודפוסי השינה שלה במשך 24 שעות.</li>
		<li>לניסוי הריפוד הרטוב, הכניסו 200 מ"ל מים לכלוב המכיל 100 גרם ריפוד. משכן חולדה מקבוצת MOD בכלוב הרטוב ומתעד את התנהגות החולדות תחת לחץ מצעים רטוב, כולל פעילות, תיאבון, צריכת מים וכו'. שימו לב אם יש התנהגויות חריגות או תגובות לא נוחות, כגון מצב העור והשיער של החולדות, שעלולות להיגרם על ידי הריפוד הרטוב, ותיעדו אותן בזמן לניתוח הבא במשך 24 שעות. לאחר הבדיקה יבשו את החולדה עם מפוח והחזירו אותה לכלוב עם שבבי עץ טריים.</li>
		<li>בשיטת שיפוע הכלוב, מקמו חולדה מקבוצת MOD בכלוב המוטה בזווית של 45 מעלות כנגד קיר ותיעדו במשך 24 שעות. השתמש במבנה מסגרת הכלוב כדי להתאים את הזווית ולאבטח את הכלוב במקומו. הערה: חשב את הזמן מתחילתו ועד סופו והתבונן בהתנהגות החולדות במהלך תקופת הטיית הכלוב, כולל פעילות, תיאבון ומצב נפשי, וודא שזווית הכלוב המוטה מוגדרת כראוי ונשארת יציבה כדי להבטיח את הדיוק והשחזור של הניסוי.</li>
		<li>לניעור במהירות גבוהה, הניחו חולדה מקבוצת MOD בשייקר מכני המכוון ל-160 סל"ד ותיעדו את החולדה למשך 15 דקות. שיטות בדיקה התנהגותיות משמשות לאחר מכן כדי להעריך את ההקמה המוצלחת של המודל.</li>
		<li>לאחר הפעלת גורמי לחץ, העבירו את הכלובים הקבוצתיים של משרד הביטחון מחדר ה-CUMS בחזרה לחדר הדיור. במהלך תקופת החשיפה לסטרס של 4 שבועות, שמרו על קבוצת CON בכלובים הביתיים שלהם הממוקמים בחדר הדיור.</li>
	</ol></li>
	<li>אמצעי זהירות במהלך ניסויים<ol><li>העברת כלובי קבוצת משרד הביטחון חזרה לחדר הדיור הכללי לאחר הפעלת גורם הלחץ בחדר ה- CUMS.</li>
		<li>ניטור בעלי חיים במהלך מידול CUMS<ol><li>במהלך הידוק הזנב, בעל החיים צפוי להיאבק בשל הגירוי המושרה. במהלך תקופה זו, ברציפות לפקח על המהדק. אם הוא מתנתק, השהה את הטיימר, הפעל מחדש את המהדק ולאחר מכן חדש את הטיימר למשך דקה.</li>
			<li>אין להטיל מניעת מים ולחצים על מצעים רטובים בו זמנית. הערה: הימנעות מכפייה בו זמנית של ריפוד רטוב ומניעת מים מסייעת לשמור על שלמות הניסוי, מפחיתה משתנים מבלבלים ומקדמת רווחת בעלי חיים.</li>
			<li>טמפרטורת הגוף של בעל החיים וטמפרטורת החדר עשויים להעלות את טמפרטורת המים במהלך שחייה במים קרים. לכן, התאימו על ידי הוספת מי קרח או קוביות קרח כדי לשמור על טמפרטורת מים קבועה.</li>
			<li>התבוננו בחולדות במרווחים של 30 דקות במהלך הפעלת גורמי סטרס, למעט במהלך היפוך יומי. שימו לב במיוחד לסימנים של מצוקה חריגה, כגון רעד, עייפות או חוסר תנועה. אם נצפים תסמינים כאלה - במיוחד היפותרמיה פוטנציאלית במהלך 4 מעלות צלזיוס, שחייה במים קרים ומצעים רטובים - הסר מיד את החולדה מגורם הלחץ. הערה: הסר את חיות הניסוי מהמחקר כאשר יש להן בעיות בריאותיות, כגון זיהום, טראומה חמורה, התנהגויות תוקפניות, ניידות לא תקינה וכו ', התנאים להוצאת בעלי החיים מהמחקר סובבים בדרך כלל סביב הגנה על בריאותם ובטיחותם תוך הבטחת שלמות תוצאות הניסוי.</li>
			<li>ערכו בדיקות יומיות לאיתור פצעים או הפרעות פיזיות או התנהגותיות אחרות בכל חולדה. אם נצפות חריגות כלשהן, התייעצו עם וטרינר המעבדה כדי לקבוע אם יש להוציא את החולדה מהניסוי.</li>
			<li>שוקלים כל חולדה כל 3 ימים. אם בעל חיים מאבד יותר מ -20% ממשקל גופו הבסיסי לפני ההאכלה, יש להוציא אותו מהניסוי.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>2. מבחנים התנהגותיים
<ol><li>כדי להתחיל, לתת את גירויי דיכאון בשילוב עם בידוד במשך 28 ימים לכל החולדות, למעט קבוצת הביקורת. אכסנו את החולדות בכלובים נפרדים. עיין בטבלה 2 לקבלת פרטים על מצבי גירויי דיכאון.</li>
	<li>עבור בדיקת השדה הפתוח, חלק קופסה שחורה ל- 25 מקטעים מרובעים בעלי שטח שווה. התקן מערכת ניתוח מעקב וידאו בתיבה. הניחו את החולדה בריבוע המרכזי ועקבו אחר פעילותה האופקית והאנכית למשך 5 דקות. הערה: מידות התיבה הן 500 מ"מ x 500 מ"מ x 300 מ"מ. נתוני הפעילות ייאספו באמצעות מערכת מעקב הווידאו כדי להעריך התנהגויות הקשורות לחרדה אצל מכרסמים כאשר הם נחשפים לסביבה חדשה.</li>
	<li>לאחר מכן, ספרו את מספר הריבועים שהחולדה חצתה, תוך שימוש בכל הכפות, כדי לכמת את הפעילות האופקית. ספור מופעים של עמידה וטיפוח כאינדיקטורים לפעילות אנכית. לאחר כל בדיקה, יש לחטא את הקופסה באמצעות 75% אלכוהול כדי לסלק שאריות ריחות של חולדות בבדיקות הבאות.</li>
	<li>לאחר מכן, anhedonia מוערך באמצעות מבחן העדפת סוכרוז. הניחו שני בקבוקים על מכסה הכלוב: בקבוק A מכיל מים טהורים, ואילו בקבוק B מכיל תמיסת סוכרוז 1%. אפשר גישה לשני הפתרונות עבור החולדה. שקלו את הבקבוקים לפני ואחרי הצריכה כדי לחשב את שיעורי העדפת סוכרוז של 60 דקות בימים 0, 7, 14, 21 ו-28. הנוסחה היא כדלקמן: צריכת סוכרוז = <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65889/65889eq01.jpg" style="margin: auto;"> × 100%</li>
	<li>כדי למדוד זיכרון מרחבי ויכולות למידה, השתמשו במבחן מבוך המים מוריס. חלקו את הבריכה לארבעה רבעים, וספרו אותם מאחד עד ארבעה. הניחו ברביע השלישי משטח מנוחה שקוע 1 ס"מ מתחת לפני המים.</li>
	<li>הכניסו חלב לבריכה כדי להגביר את אטימות המים ולשמור על טמפרטורת מים של כ -23 מעלות צלזיוס לאורך כל הליך הניסוי.</li>
	<li>מקמו כל חולדה ברבעים שונים של המבוך, ואפשרו להם 120 שניות לאתר את הפלטפורמה הנסתרת. החולדות צריכות להסתמך על זיכרון מרחבי ומיומנויות למידה כדי לזכור את מיקום הרציף. ברגע שהם לומדים את מיקום הרציף, הם יכולים לשחות ישירות אליו. הקלט את זמן ההשהיה באמצעות מערכת מעקב הווידאו של מבוך המים מוריס.</li>
	<li>מקמו את החולדה במקום קבוע בבריכה. אם הנושא אינו מצליח לאתר את הפלטפורמה המוסתרת בתוך 120 שניות, רשום את ההשהיה כ- 120 שניות.</li>
	<li>לבסוף, הסירו את הפלטפורמה הנסתרת, החזירו את החולדה למים, ותיעדו את מספר מעברי האזור במשך תקופה של 120 שניות.</li>
</ol>3. ניתוח סטטיסטי
<ol><li>כדי להעריך הבדלים משמעותיים בפרמטרים ביוכימיים, השתמש בניתוח חד-כיווני של שונות (ANOVA) ואחריו מבחן פוסט-הוק של דאנקן. הצג את הנתונים כממוצע ± שגיאת תקן (SE) והתייחס לערך p של פחות מ- 0.05 כמובהק סטטיסטית.</li>
</ol>

ביסוס ותיקוף מודל של חולדות דחק קלות כרוניות ובלתי צפויות

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

דיכאון הוא הפרעה נפשית המאופיינת בתסמינים כגון מצב רוח ירוד, חוסר הנאה ואנרגיה מופחתת30. בתחום חקר הדיכאון, ביסוס מודל אמין של בעלי חיים הוא חיוני לקידום התערבויות טיפוליות. בין מודלים שונים של בעלי חיים, מודל CUMS ראוי לציון במיוחד בשל אמינותו הגבוהה, תוקפו, וחפיפתו למאפייני הדי...

הפרעת דיכאון מג'ורי (MDD) היא מחלת נפש נפוצה, המדורגת כגורם השלישי המוביל לנכות ברחבי העולם ומשפיעה על יותר מ -300 מיליון אנשים1,2,3. יש לציין כי ההערכה היא כי לפחות מחצית מהאנשים שנפגעו אינם מקבלים טיפול הולם4. בהינתן פער זה, מודלים של בעלי חיים משמשים כלי מכריע לחקר האטיולוגיה של דיכאון. נכון להיום, קיימים יותר מ -20 מודלים שונים של בעלי חיים לדיכאון5. מבין אלה, מודל הלחץ המתון הכרוני הבלתי צפוי (CUMS), ששוכלל על ידי פול וינר בשנת 1987, הוא הנפוץ ביותר6. מודל CUMS פועל על בסיס ההנחה שחשיפת מכרסמים למגוון רחב של גורמי עקה חברתיים-סביבתיים מובילה לתסמינים הדומים לחרדה, מתח ודיכאון. המתודולוגיה כוללת חשיפת בעלי חיים לגורמי עקה קלים שונים במשך מספר שבועות, ששיאם במגוון שינויים התנהגותיים, כולל אנהדוניה והתנהגויות דיכאוניות7,8. שינויים אלה מלווים בשינויים בפרופילים האנדוקריניים והנוירוטרנסמיטרים, כגון ירידה ב-5-HT9,10. תוצאות אלה דומות מאוד לאלה שנצפו בבני אדם שאובחנו עם MDD, ובכך מאמתות את התועלת של המודל. מודל CUMS מוערך במיוחד בשל יעילותו בהערכת תרופות נוגדות דיכאון, המבטאות רמות גבוהות של תקפות פני השטח, המבנה והחיזוי11,12. שלא כמו מודלים אחרים, CUMS רגיש להשפעות של ניהול כרוני של תרופות נוגדות דיכאון מונואמינרגיות. לדוגמה, מעכבי ספיגה חוזרת של סרוטונין סלקטיביים (SSRI) כגון citalopram, paroxetine ו- fluoxetine הוכחו כמונעים והופכים אנהדוניה בתנאים של לחץ כרוני12,13. בנוסף, תרופות נוגדות דיכאון מהירות פעולה חדשות, כגון קטמין, הוכיחו יעילות גם במודל זה14,15. לעומת זאת, מבחנים אחרים כמו מבחן השחייה הכפויה (FST) ומבחן מתלה הזנב (TST) הם פחות אמינים למידול שינויים התנהגותיים ארוכי טווח, ולעתים קרובות משקפים הסתגלות ללחץ אקוטי ולא סימפטומים מתמשכים של דיכאון16. מאפיינים אלה מדגישים את התוקף האיתן של מודל CUMS במחקר דיכאון. אחד המאפיינים הבולטים ביותר של מודל CUMS, המוכר באמינותו הגבוהה בלימודים קלאסיים, הוא anhedonia - חוסר היכולת לחוות הנאה או עניין בפעילויות יומיומיות17,18. תופעה זו מוערכת בדרך כלל באמצעות בדיקות העדפת סוכרוז, ותרופות נוגדות דיכאון רבות הוכחו כמחזירות את צריכת הסוכרוז המופחתת. מספר מדדים אחרים משמשים בדרך כלל גם בספרות CUMS, כולל מבחן שדה פתוח (OFT), אשר מעריך התנהגות מוטורית רצונית, נטיות גישוש, ומתח, ובכך מודד את חומרת הדיכאון19. מבחנים אחרים כגון מבוך פלוס מוגבה (EPM) מעריכים התנהגויות דמויות חרדה, מבחן מבוך המים מוריס (MWM) בוחן תפקוד קוגניטיבי20וה- FST מעריך רגישות לרגשות שליליים וייאוש התנהגותי.,20. יתר על כן, רוב גורמי הלחץ המשפיעים על בני אדם הם חברתיים מטבעם. אנשים עם קשרים חברתיים לא אופטימליים, המאופיינים בפעילויות חברתיות מוגבלות, רשתות ותמיכה, נמצאים בסיכון מוגבר למחלות שונות21,22. זה רלוונטי גם במקרה של מכרסמים, שהם בעלי חיים חברתיים החיים בקבוצות. לדוגמה, חולדות השוכנות בבידוד מציגות מאפיינים של מה שמכונה תסמונת בידוד, הגורמת ללחץ חברתי ומזרזת את הופעת הדיכאון23.
הרפואה המונגולית, ענף משמעותי של הרפואה הסינית, מניחה כי הופעת המחלה היא יחסי גומלין מורכבים בין גורמים פנימיים וחיצוניים. גורמים חיצוניים אלה, המכונים ארבעת תנאי העזר, כוללים שינויי אקלים, תזונה, אורח חיים ואירועים פתאומיים כגון זיהומים, אירועים מבהילים והפרעות פסיכולוגיות. תהליך המחלה מושג כאינטראקציה מתמשכת בין שלושה יסודות - המכונים שלושת סוגי ההומורים - לבין שבעת מרכיבי הגוף בתיאום עם ארבעת תנאי העזר24 . הרפואה המונגולית גורסת כי גוף האדם מתפקד כישות משולבת, הנשמרת על ידי איזון יחסי בין שלושת ההומורים. הפרעה באיזון זה נחשבת כמבשרת מחלה24 . בהתחשב בתפקיד המרכזי של ניסויים בבעלי חיים בגישור בין רפואה מסורתית למודרנית, חיוני לפתח מודלים של בעלי חיים הרלוונטיים למחקר בתחום הרפואה המונגולית. בהתאם לכך, השתמשנו במתודולוגיית בידוד של 28 יום יחד עם CUMS כדי לדמות גורמי לחץ פיזיולוגיים ופסיכולוגיים אלה. בחרנו תשעה גורמי לחץ בלתי צפויים ספציפיים וביקשנו לבסס את שיטת המידול הזו באמצעות תיאוריית שלושת ההומורים של הרפואה המונגולית. ביסוס מודל חזק של בעלי חיים הוא יסוד לקידום המחקר הבסיסי ברפואה המונגולית ויתרום משמעותית למחקרי היסוד שלו.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL centrifuge tube</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>EP-150-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L Pipette</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>IC021198160223</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L pipette tip</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>IC012395160823</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L pipette tip</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>TP-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1250 &#181;L pipette tip</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>TP-1250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL centrifuge tube</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>EP-200-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L pipette tip</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>TP-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L pipette tip</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>IC021029160323</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>300 &#181;L Multi-Channel Pipette</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>IC091006161022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 &#181;L Pipette</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>DS35110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic plate washing machine</td>
			<td>rayto Life Sciences Co., Ltd</td>
			<td>RT-3100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchtop High-Speed Freezing Centrifuge</td>
			<td>dalong construction Co., Ltd</td>
			<td>D3024R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electronic balance</td>
			<td>Mettler Toledo International Trade (Shanghai) Co., Ltd</td>
			<td>ME203E/02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrothermal blast drying oven</td>
			<td>Labotery Experimental Instrument Equipment Co., Ltd</td>
			<td>GEL-70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme Label Detector</td>
			<td>BioTeK Co., Ltd</td>
			<td>Epoch</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Speed Tissue Grinder</td>
			<td>service Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>KZ-<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/65889/65889eq02.jpg" style="margin: auto;" />-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horizontal Freezer</td>
			<td>Mellow Group Co., Ltd</td>
			<td>BCD-318AT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laboratory Ultrapure Water Machine</td>
			<td>Jinan Aiken Environmental Protection Technology Co., Ltd&#160;&#160;</td>
			<td>AK-RO-C2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Morris water maze video trail analysing system&#160;</td>
			<td>Tai Meng Tech Co., Ltd</td>
			<td>WMT-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat 5-HT ELISA Kit</td>
			<td>Lian Ke bio Co., Ltd,China</td>
			<td>96T/48T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPF grade Sprague Dawley (SD) rats</td>
			<td>SPF (Beijing) Biotechnology Co&#160;</td>
			<td>SCXK(JING)2019-0010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprague Dawley rats</td>
			<td>Beijing Biotechnology Co., Ltd, China</td>
			<td>&#160;SCXK (JING) 2019-0010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical Refrigerated Display Cabinet</td>
			<td>Xingx Group Co., Ltd</td>
			<td>LSC-316C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>video tracking system</td>
			<td>Tai Meng Tech Co., Ltd</td>
			<td>ZH-ZFT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vortex mixer</td>
			<td>Servicebio technology Co., Ltd</td>
			<td>MV-100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

chronic unpredictable mild stress in rats based on the mongolian medicine

דיכאון הוא הפרעה רגשית נפוצה ומהווה גורם מוביל לנכות עולמית. מגבלות ההתערבויות הפרמקולוגיות הנוכחיות תורמות לנטל הבריאותי המשמעותי המיוחס למצב זה. יש צורך דחוף בהבנה עמוקה יותר של המנגנונים הבסיסיים של דיכאון, מה שהופך מודלים פרה-קליניים עם פוטנציאל תרגומי בעלי ערך רב. הרפואה המונגולית, תת-קבוצה של הרפואה המסורתית, מניחה כי הופעת מחלות קשורה קשר הדוק לשיווי המשקל של רוח, מרה וליחה. במחקר זה אנו מציגים פרוטוקול לשיטת העקה הקלה הכרונית הבלתי צפויה (CUMS) בחולדות. במסגרת זו, חולדות חשופות לסדרה של גורמי עקה משתנים וקלים כדי לגרום לפנוטיפ דמוי דיכאון, המחקה את הפתוגנזה של דיכאון אנושי. בדיקות התנהגותיות המשמשות בפרוטוקול זה כוללות את מבחן העדפת סוכרוז (SPT), המעיד על אנהדוניה - תסמין ליבה של דיכאון; מבחן השדה הפתוח (OFT), המודד את רמות החרדה; ומבחן מבוך המים מוריס (MWM), המעריך זיכרון מרחבי ויכולות למידה. שיטת CUMS מדגימה את היכולת לגרום לאנהדוניה ולגרום לליקויים התנהגותיים ארוכי טווח. יתר על כן, פרוטוקול זה תואם יותר את התיאוריה הרפואית המונגולית מאשר מודלים אחרים של בעלי חיים שנועדו לעורר התנהגות דמוית דיכאון. פיתוח מודל זה של בעלי חיים והמחקר שבעקבותיו מספקים בסיס איתן למחקרים חדשניים עתידיים בתחום הרפואה המונגולית.

Major depressive disorder (MDD) is a prevalent mental illness, ranking as the third leading cause of disability globally and affecting over 300 million people1,2,3. Notably, it is estimated that at least half of the affected individuals do not receive adequate treatment4. Given this gap, animal models serve as a crucial tool for investigating the etiology of depression. To date, more than 20 different animal models for depression exist5. Among these, the chronic unpredictable mild stress (CUMS) model, refined by Paul Winer in 1987, is the most frequently utilized6. The CUMS model operates on the premise that exposing rodents to a diverse range of socio-environmental stressors leads to symptoms akin to anxiety, tension, and depression. The methodology involves exposing animals to various mild stressors over several weeks, culminating in a range of behavioral alterations, including anhedonia and depressive-like behaviors7,8. These changes are accompanied by shifts in endocrine and neurotransmitter profiles, such as a reduction in 5-HT9,10. These outcomes closely mirror those observed in humans diagnosed with MDD, thereby validating the model's utility. The CUMS model is particularly valued for its effectiveness in evaluating antidepressants, manifesting high levels of surface, structural, and predictive validity11,12. Unlike other models, CUMS is sensitive to the effects of chronic administration of monoaminergic antidepressants. For instance, selective serotonin reuptake inhibitors (SSRIs) such as citalopram, paroxetine, and fluoxetine have been shown to prevent and reverse anhedonia under conditions of chronic stress12,13. Additionally, new rapid-acting antidepressants, such as ketamine, have also demonstrated efficacy in this model14,15. In contrast, other tests like the forced swimming test (FST) and tail suspension test (TST) are less reliable for modeling long-term behavioral changes, often reflecting adaptations to acute stress rather than enduring symptoms of depression16. These characteristics underscore the robust validity of the CUMS model in depression research. One of the most salient features of the CUMS model, recognized for its high reliability in classical studies, is anhedonia-the incapacity to experience pleasure or interest in everyday activities17,18. This phenomenon is commonly evaluated using sucrose preference tests, and many antidepressants have been shown to reverse reduced sucrose consumption. Several other metrics are also commonly employed in the CUMS literature, including the open field test (OFT), which assesses voluntary motor behavior, exploratory tendencies, and tension, thereby gauging the severity of depression19. Other tests such as the elevated plus maze (EPM) evaluate anxiety-like behaviors, the Morris water maze test (MWM) examines cognitive functioning20, and the FST assesses susceptibility to negative emotions and behavioral despair20. Furthermore, the majority of stressors that impact humans are social in nature. Individuals with suboptimal social relationships, characterized by limited social activities, networks, and support, are at a heightened risk for various diseases21,22. This is also relevant in the case of rodents, who are social animals living in groups. For example, rats that are housed in isolation exhibit characteristics of what is termed isolation syndrome, which induces social stress and expedites the onset of depression23.
Mongolian medicine, a significant branch of Chinese medicine, posits that the onset of disease is a complex interplay between intrinsic and external factors. These external factors, referred to as the four auxiliary conditions, encompass climate change, diet, lifestyle, and sudden events such as infections, startling incidents, and psychological disorders. The disease process is conceptualized as an ongoing interaction between three elements-referred to as the three types of homors-and the Seven Bodily Constituents in concert with the four auxiliary conditions24. Mongolian medicine holds that the human body functions as an integrated entity, maintained by a relative balance among the three homors. A disruption in this balance is considered to be a precursor to illness24. Given the pivotal role of animal experimentation in bridging traditional and modern medicine, it is crucial to develop animal models that are relevant for research in the field of Mongolian medicine. Accordingly, we employed a 28-day isolation methodology coupled with CUMS to simulate these physiological and psychological stressors. We selected nine specific unpredictable stressors and sought to underpin this modeling method through the Three homors theory of Mongolian medicine. Establishing a robust animal model is fundamental for advancing basic research in Mongolian medicine and will contribute significantly to its foundational studies.

מחבר זרקור: ביסוס מודל מכרסמים לחקר גורמי דיכאון ברפואה מונגולית מסורתית

לחץ כרוני בלתי צפוי קל בחולדות מבוסס על התרופה המונגולית

The scope of our research is Mongolian medical research. In this study, we are investigating the factors contributing to depression in Mongolian medicine, with a particular emphasis on the interaction between internal factors, such as wind, biofilm, and external factors. The problem of conforming to the lack of traditional Mongolian medical models was solved.This protocol addresses the establishment of an animal model based on Mongolian medical theory and then provides some suggestions for future research in Mongolian medicine. In a depressive disorder study, establishing an animal model is crucial for understanding new drugs'pathological mechanisms and effects. Compared with other techniques, this protocol is more in line with the pathogenesis and treatment principles of depression in traditional Mongolian medicine, which will help future research on the treatment of depression in Mongolian medicine.The protocol can demonstrate the relationship between external and internal factors interacting to produce disease and is in accordance with the theoretical system of Mongolian medicine. It will advance the basic research of traditional medicine on depression and provide some recommendations that will help subsequent researchers to research, develop, and utilize traditional medicines.

תוצאות המבחנים ההתנהגותיים במודל דיכאון חולדות הנגרם על ידי CUMS כדי לאשש את היעילות של הליך CUMS לגרימת התנהגויות דמויות דיכאון, בוצעה בדיקת מניפולציה. חולדות Sprague-Dawley (SD) זכרים הוקצו באופן אקראי לקבוצת MOD או CON לתקופה של 4 שבועות, כמתואר בשלב 1.2.3. לאחר מכן, החולדות הוקרבו, וההיפוקמפוס...

Watch this Scientific Journal Video about Chronic Unpredictable Mild Stress in Rats based on the Mongolian medicine at JoVE.com

פרוטוקול זה מתאר מודל לחץ קל כרוני בלתי צפוי (CUMS) לדיכאון המבוסס על תיאוריה רפואית מונגולית, יחד עם שיטות לאימות מבחנים התנהגותיים.

Depression is a prevalent affective disorder and constitutes a leading cause of global disability. The limitations of current pharmacological ...

היקף המחקר שלנו הוא מחקר רפואי מונגולי. במחקר זה אנו חוקרים את הגורמים התורמים לדיכאון ברפואה המונגולית, עם דגש מיוחד על האינטראקציה בין גורמים פנימיים, כגון רוח, ביופילם וגורמים חיצוניים. בעיית ההתאמה להיעדר מודלים רפואיים מונגוליים מסורתיים נפתרה.פרוטוקול זה מתייחס להקמת מודל בעלי חיים המבוסס על תיאוריה רפואית מונגולית ולאחר מכן מספק כמה הצעות למחקר עתידי ברפואה המונגולית. במחקר על הפרעות דיכאון, ביסוס מודל של בעלי חיים הוא חיוני להבנת המנגנונים וההשפעות הפתולוגיות של תרופות חדשות. בהשוואה לטכניקות אחרות, פרוטוקול זה תואם יותר את הפתוגנזה ואת עקרונות הטיפול בדיכאון ברפואה המונגולית המסורתית, מה שיסייע למחקר עתידי על הטיפול בדיכאון ברפואה המונגולית.הפרוטוקול יכול להדגים את הקשר בין גורמים חיצוניים ופנימיים הפועלים ליצירת מחלות והוא תואם את המערכת התיאורטית של הרפואה המונגולית. זה יקדם את המחקר הבסיסי של הרפואה המסורתית על דיכאון ויספק כמה המלצות שיסייעו לחוקרים הבאים לחקור, לפתח ולהשתמש בתרופות מסורתיות.

chronic-unpredictable-mild-stress-rats-based-on-mongolian

Research

JoVE Journal

Medicine

Chronic Unpredictable Mild Stress in Rats based on the Mongolian medicine

528 Views.  Inner Mongolia Medical University. היקף המחקר שלנו הוא מחקר רפואי מונגולי. במחקר זה אנו חוקרים את הגורמים התורמים לדיכאון ברפואה המונגולית, עם דגש מיוחד על האינטראקציה בין גורמים פנימיים, כגון רוח, ביופילם וגורמים חיצוניים. בעיית ההתאמה להיעדר מודלים רפואיים מונגוליים מסורתיים נפתרה.פרוטוקול זה מתייחס ...

Video: מחבר זרקור: ביסוס מודל מכרסמים לחקר גורמי דיכאון ברפואה מונגולית מסורתית

Depression is a prevalent affective disorder and constitutes a leading cause of global disability. The limitations of current pharmacological interventions contribute to the substantial health burden attributed to this condition. There is a pressing need for a deeper understanding of the underlying mechanisms of depression, making pre-clinical models with translational potential highly valuable. Mongolian medicine, a subset of traditional medicine, posits that disease occurrence is closely tied to the equilibrium of wind, bile, and Phlegm. In this study, we introduce a protocol for the chronic unpredictable mild stress (CUMS) method in rats. Within this framework, rats are subjected to a series of fluctuating, mild stressors to induce a depression-like phenotype, mimicking the pathogenesis of human depression. Behavioral assays employed in this protocol include the sucrose preference test (SPT), indicative of anhedonia-a core symptom of depression; the open field test (OFT), which measures anxiety levels; and the Morris water maze test (MWM), which evaluates spatial memory and learning abilities. The CUMS method demonstrates the capability to induce anhedonia and to cause long-term behavioral deficits. Furthermore, this protocol is more aligned with Mongolian medical theory than other animal models designed to elicit depression-like behavior. The development of this animal model and subsequent research provide a robust foundation for future innovative studies in the realm of Mongolian medicine.

This protocol outlines a chronic unpredictable mild stress (CUMS) model for depression based on Mongolian medical theory, along with methods for validating behavioral tests.

Stress Induction Methods for Establishing the Chronic Unpredictable Mild Stress Rat Model

After dividing the rats into a control, or con, and model, or mod, group, house them in individual cages. For the tail-clamp method, secure the tail of a rat and measure the clamping time for one minute. In the water deprivation method, remove the feeding bottle from the cage and record the rat for 24 hours.For the food deprivation method, remove the food from the cage and record the rat for 24 hours. For cold stimulation at four degrees Celsius, place a rat in a bucket of cold water and monitor its activity for five minutes. Then dry the rat with a blower and return it to its original cage.To administer 45 degrees Celsius heat stress, place the rat in an oven and monitor for five minutes. For the inversion of the light-dark cycle, wrap the cage in a black cloth for one hour to stimulate daytime darkness. Subsequently illuminate the cage for 12 hours at night to mimic daylight and record the data for 24 hours.For the wet padding experiment, pour 200 milliliters of water into a cage containing 100 grams of padding. Place the rat in the wet cage and monitor for 24 hours. After drying the rat as demonstrated earlier, return it to a cage containing fresh wood shavings.In the cage incline method, place the rat in a cage angled at 45 degrees against a wall and monitor it for 24 hours. For high speed shaking, place the rat in the mechanical shakers set at 160 RPM, and record data for 15 minutes. After applying stressors, transfer the mod group cage from the CUMS room to the housing room.

שיטות השראת עקה לביסוס מודל חולדת הלחץ המתונה הכרונית והבלתי צפויה

Behavioral Tests for Assessing Depression-Related Behaviors in Rats

After dividing the rats into a control, or a CON, and model, or MOD group, house them in individual cages. For the open field test, partition a black box into 25 square sections of equal area. Install a video tracking analysis system in the box.Place the rat in the central square and monitor its horizontal and vertical activities for five minutes. After the test, sanitize the box with 75%alcohol to remove any remaining rat odors. To assess anhedonia through the sucrose preference test, weigh bottle A containing water and bottle B containing 1%sucrose.Place both bottles on the cage lid and allow ad libitum access to both solutions for the rat. After consumption, weigh the bottles, and, using the given formula, calculate the 60 minute sucrose preference rates on given days. To perform the Morris water maze test, divide the pool into four quadrants, and number them from one to four.In the third quadrant, place a resting platform one centimeter below the water surface. Add milk to the pool to increase water opacity and maintain a water temperature of approximately 23 degrees Celsius throughout the experiment. Place the rat in one quadrant of the maze, and using the Morris Water Maze video tracking system, record the latency time to identify the platform for 120 seconds.Finally, remove the hidden platform from the pool. Then, place the rat into the water and record the number of zone crossings for 120 seconds. In the open field test, the MOD group exhibited lower vertical and horizontal scores compared to the CON group, indicating successful induction of anxiety.After 28 days, the MOD group showed a lower sucrose preference percentage than the CON group. The Morris water maze test revealed that the MOD group had a longer latency to locate the platform and crossed fewer times compared to the CON group. Further, the MOD group exhibited reduced hippocampal 5-HT levels compared to the CON group.