ברצוננו להודות לאוניברסיטת EAN ולאוניברסיטת לה לגונה.

1. הכנת מלאי ופתרונות עבודה
הערה: מטעמי בטיחות, מומלץ ללבוש כפפות ניטריל, מעיל מעבדה ומשקפי בטיחות לאורך כל הפרוטוקול.
<ol><li>הכינו תמיסות מלאי נפרדות של כל אחד מ-45 תקני חומרי ההדברה המסחריים (ראו טבלת חומרים) במינון של כ-1,000 מ"ג/ליטר אצטוניטריל בצלוחיות נפחיות של 10 מ"ל.</li>
	<li>שלב את תמיסות המלאי הבודדות לעיל כדי להכין תמיסת מלאי של 400 מ"ג / ליטר באצטוניטריל בצלוחית נפחית של 25 מ"ל. הערה: פתרון מעורב זה ישמש להכנת פתרונות העבודה לניסויי התאוששות וכיול.</li>
	<li>הכינו תמיסות מלאי של אטרזין-D5 וטריפניל פוספט (TPP) בריכוזים של 750 מ"ג/ליטר ו-1,050 מ"ג/ליטר, בהתאמה, באצטוניטריל בצלוחיות נפחיות של 10 מ"ל. השתמש ב-atrazine-d5 כתקן פנימי פרוצדורלי (P-IS) וב-TPP כתקן פנימי להזרקה (I-IS). הערה: התרחיש האידיאלי יכלול שימוש בתקן פנימי מסומן איזוטופית עבור כל ניתוח מטרה ספציפי.</li>
	<li>הכינו בנפרד תמיסות להשבת מלאי באצטוניטריל המכילות 0.05% (v/v) של חומצה פורמית (למניעת התפרקות) בצלוחיות נפחיות של 10 מ"ל כדי להניב 10, 100 ו-400 מיקרוגרם/ק"ג שווה ערך לדגימה עבור חומרי ההדברה ו-200 מיקרוגרם/ק"ג עבור P-IS. אחסנו תמיסות אלה בבקבוקוני זכוכית ענבר בחושך בטמפרטורה של -20°C.</li>
	<li>הכינו תמיסות כיול של חומרי ההדברה ו-P-IS יחד באצטוניטריל עם 0.05% (v/v) של חומצה פורמית בצלוחיות נפחיות של 10 מ"ל כדי להניב 5, 10, 25, 75, 200, 400 ו-600 מיקרוגרם/ק"ג ו-200 ננוגרם/ננוגרם, בהתאמה, ואחסנו אותן בבקבוקוני זכוכית ענבר בחושך בטמפרטורה של -20°C. הערה: ניתן להשתמש באותם פתרונות לאורך כל עבודת הניסוי, אך אחסונם בתנאים שצוינו מיד לאחר כל שימוש הוא חיוני.</li>
	<li>הכינו תערובת של מגני אנליטים המכילים 100 גרם/ליטר של 3-אתוקסי-1,2-פרופנדיול, 10 גרם/ליטר של חומצה L-גולונית γ-לקטון, 10 גרם/ליטר של D-סורביטול, ו-5 גרם/ליטר של חומצה שיקמית ביחס של 4/1 (v/v) של אצטוניטריל למים עם 0.5% (v/v) של חומצה פורמית. הערה: יש להוסיף תערובת זו של מגני אנליטים ממש לפני ההזרקה כדי להקל עלי.</li>
</ol>2. איסוף דוגמאות
<ol><li>אספו דגימות משלושה מיני אבוקדו (למשל, Criollo, Hass ו-Lorena) הזמינים בסופרמרקטים. ודא שכל דגימה שוקלת כ -1 ק"ג, וזה מספיק לביצוע כל המחקרים הבאים ומיישר קו עם הנחיה 2002/63/CE21. הערה: דגימות אורגניות נבחרו באופן מועדף כדי למזער את הסבירות לנוכחות שאריות חומרי הדברה.</li>
	<li>מעבירים את דגימות האבוקדו שנאספו למעבדה, ומהומוגניים אותן בנפרד ללא הצינור באמצעות מסוק (ראו טבלת חומרים). אחסנו את הדגימות ההומוגניות במיכלי זכוכית ענבר בטמפרטורה של 4°C עד לניתוח. הערה: אותן דגימות אבוקדו ישמשו לאורך כל המחקר. לכן, חשוב לאחסן אותם בתנאים שצוינו מיד לאחר כל שימוש.</li>
</ol>3. הכנת דוגמאות בשיטת QuEChERS עם פורמט אמוניום
הערה: איור 1 מדגים ייצוג סכמטי של שיטת QuEChERS עם פורמט אמוניום.
<ol><li>שוקלים 5 גרם מכל דגימת אבוקדו בצינור צנטריפוגה של 50 מ"ל (ראו טבלת חומרים).</li>
	<li>הוסף 50 μL של תמיסת P-IS כדי להניב ריכוז של 200 מיקרוגרם / ק"ג. להערכת התאוששות, הוסיפו גם את תמיסות חומרי ההדברה שהוכנו בשלב 1.4 לריכוזי יבול של 10, 100 ו-400 מק"ג/ק"ג (n = 5 כל אחת).</li>
	<li>סובבו את הצינור במשך 30 שניות כדי להבטיח שילוב יסודי של הספייק בדגימה.</li>
	<li>הוסף 10 מ"ל של acetonitrile לצינור צנטריפוגה. נערו את הצינור במהירות 70 סל"ד למשך 5 דקות.</li>
	<li>מוסיפים 2.5 גרם של פורמט אמוניום, מנערים את הצינור שוב ב-70 סל"ד למשך 5 דקות, ולאחר מכן צנטריפוגות אותו ב-1,800 × גרם למשך 5 דקות.</li>
	<li>לצינור צנטריפוגה בנפח 2 מ"ל המכיל 150 מ"ג MgSO4 נטול מים, 50 מ"ג אמין ראשוני-משני (PSA), 50 מ"ג אוקטדצילסילן (C18), 10 מ"ג פחמן שחור גרפי (GCB) ו-60 מ"ג של נוזל סורבנט Z-Sep+ מבוסס תחמוצת זירקוניום, יש להוסיף 1 מ"ל תמצית לטיהור באמצעות מיצוי פאזה מפוזרת-מוצקה (d-SPE). סובבו את הצינור במשך 30 שניות וצנטריפוגו אותו במהירות של 1,800 × גרם למשך 5 דקות.</li>
	<li>להעביר 200 μL של תמצית בקבוקון autosampler, להוסיף 20 μL של פתרון הגנה analyte מוכן בשלב 1.6, ולכלול 50 μL של פתרון TPP.</li>
	<li>ביצוע ניתוח אינסטרומנטלי באמצעות מערכת GC-MS/MS (ראה סעיף 4).</li>
	<li>בצע כיול מותאם מטריצה בהתאם לאותו הליך שתואר לעיל, תוך שימוש בתמציות ריקות, למעט, במהלך שלב d-SPE (שלב 3.6), נקה 5 מ"ל של הסופרנאטנט בצינורות של 15 מ"ל. הוסף את פתרונות spike ו- P-IS בשלב 3.7. הוסף את פתרונות הכיול הסטנדרטיים לבקבוקוני הדוגם האוטומטי כדי להפיק 5, 10, 25, 50, 100, 200, 400 ו- 600 מיקרוגרם/ק"ג, יחד עם ה- TPP, והתוצאה היא נפח סופי של 270 מיקרוליטר. הערה: באופן כללי, הקפד לבנות עקומות כיול תואמות מטריצה עבור כל זן אבוקדו בתוספת כיול אצטוניטריל בלבד.</li>
</ol>4. ניתוח אינסטרומנטלי באמצעות GC-MS/MS
<ol><li>בצע את האנליזות באמצעות מערכת GC-MS/MS עם משולש מרובע (TQ) המצויד בממשק יינון אלקטרונים (-70 eV) ודוגם אוטומטי (ראה טבלת חומרים).</li>
	<li>השתמש בעמוד MS GC (קשר סיליקה באורך 30 מטר, קוטר פנימי 0.25 מ"מ, עובי סרט 0.25 מיקרומטר) יחד עם הליום טוהר במיוחד כגז המוביל בקצב זרימה קבוע של 1.2 מ"ל/דקה.</li>
	<li>אמת את הפרמטרים הבאים לפני שתמשיך בפעולת הציוד:<ol><li>ודא כי לחצי הגז נכונים: הליום ב 140 psi וארגון ב 65 psi.</li>
		<li>בדוק את מצב שמן המשאבה הסיבובי כדי לוודא שהוא צלול וברמה המתאימה.</li>
		<li>יש לוודא כי מזרק ההזרקה אינו סובל מחסימות מהזרקות קודמות.</li>
		<li>ודא כי בקבוקוני לשטוף מכילים נפח מספיק של כל ממס.</li>
		<li>בדוק כי מונה מתכלים (מחיצה, אניה) לא הגיע לקצה גבול יכולתו.</li>
	</ol></li>
	<li>הפעל את מתג ה- GC הראשי הממוקם בלוח הקדמי והפעל את מתג MS הממוקם מאחור.</li>
	<li>פתח את תוכנת GCMS Real Time Analysis השולטת בכל הפרמטרים של מערכת GC-MS/MS. הערה: מערכת המכשירים כוללת את תוכנת GCMS Real Time Analysis כברירת מחדל.</li>
	<li>לחץ על בקרת ואקום | מתקדם | משאבה סיבובית 1 להפעלת מערכת הוואקום. הערה: בחלון זה, עקוב אחר הלחץ כדי לקבוע את ערכי הריק האופטימליים, שאמורים להיות נמוכים מ- 9.0 Pa. זה ייקח בערך 12 שעות.</li>
	<li>לחץ על התחל כדי להפעיל משאבת טורבו מולקולרית 1 ומשאבת טורבו מולקולרית 2.</li>
	<li>לחץ על התחל עבור אפשרות מחמם מקור יונים . הערה: לאחר זמן מומלץ של שעה, בדוק את שואב המערכת כדי לוודא שהערך המומלץ נמוך מ- 1.6e-3 Pa.</li>
	<li>הגדר את טמפרטורת ממשק MS ל- 250 ° C ואת טמפרטורת מקור היונים ל- 300 ° C.</li>
	<li>יש לשמור על תנור GC בטמפרטורה התחלתית של 50°C למשך דקה אחת, ולאחר מכן להעלות אותו ל-180° C בקצב של 25°C/min. לאחר מכן, הגדל את הטמפרטורה ל 230 ° C ב 5 ° C / דקה ולאחר מכן ל 290 ° C ב 25 ° C / דקה. לבסוף, שמור על טמפרטורה קבועה ב 290 ° C במשך 6 דקות. זמן הניתוח הכולל הוא 24.6 דקות.</li>
	<li>לחץ על סגור ברגע שכל המערכות הללו מופעלות.</li>
	<li>לחץ על אפשרות הכוונון מתוכנת הניתוח ולחץ על תצוגת צג שיא כדי לבצע אימות ראשוני של תנאי ספקטרומטר המסות. הערה: במידת הצורך, בצע כוונון אוטומטי.</li>
	<li>לחץ על רכישה, ומהחלון המוצג, לחץ על הורד פרמטרים ראשוניים. ודא שהציוד מוכן GC ומוכן MS.</li>
</ol>5. רכישת נתונים
<ol><li>לחץ על קובץ אצווה חדש מהתוכנה וצור רצף המכיל מידע כגון שם מדגם, מזהה דוגמה, קובץ שיטה, קובץ נתונים, נפח הזרקה וקובץ כוונון. הוסף שורות לפי הצורך ולחץ על שמור.</li>
	<li>לחץ על התחלה אצווה ותן לתהליך ההזרקה להתחיל.</li>
	<li>בצע את ההזרקה ב 250 ° C במצב מפוצל, שמירה על נפח הזרקה של 1 μL. לאחר דקה לאחר ההזרקה, פתח את הפיצול. הערה: בין הזרקות, הקפד לנקות את מזרק 10 μL עם מתנול, אתיל אצטט ואצטוניטריל, באמצעות שטיפה אחת עם כל ממס. כל הזריקות מבוצעות בשלשה.</li>
	<li>נתח את האנליטות באמצעות מצב ניטור תגובות מרובות (MRM), שהוא המצב הסטנדרטי המשמש במערכות MS/MS עם TQ. הערה: טבלה 1 מספקת את זמני השמירה (בדקות) ואת מעברי הכימות וההסמכה עבור חומרי ההדברה הרב-מחלקתיים, P-IS, ו-I-IS. הניתוח הכמותי מסתמך על היחס בין שטח השיא של יון הכימות לבין יון P-IS. ה- I-IS משמש לבקרת איכות במהלך ההזרקה. קובץ משלים 1 מכיל כרומטוגרמות לכל 45 חומרי ההדברה שנותחו.</li>
	<li>פתח את התוכנה Postrun Analysis לניתוח נתונים. הערה: מערכת המכשירים כוללת את תוכנת GCMS Postrun Analysis כברירת מחדל.</li>
	<li>לחץ על הזריקה לניתוח, נווט בטבלה המכילה את האנליטים ובחר את שיא העניין.</li>
	<li>לחץ על הפסגה או על אזור העניין כדי לדמיין את הכרומטוגרמה. סקור את אינטגרציות השיא, ובמידת הצורך, בצע אינטגרציה ידנית. אמת את האזורים של כל האנליטות כדי לבצע את החישובים הדרושים ואת הערכת השיטה.</li>
</ol>

ניתוח חומרי הדברה באבוקדו בשיטת QuEChERS ו-CG-MS/MS

<ol>
	<li>Raposo, F., Barcel&#243;, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+and+strategies+of+matrix+effects+using+chromatography-mass+spectrometry:+An+overview+from+research+versus+regulatory+viewpoints.">Challenges and strategies of matrix effects using chromatography-mass spectrometry: An overview from research versus regulatory viewpoints.</a> Trends Analyt Chem. 134, 116068 (2021).</li><li>Rahman, M. M., Abd El-Aty, A. M., Shim, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+enhancement+effect:+a+blessing+or+a+curse+for+gas+chromatography?-A+review.">Matrix enhancement effect: a blessing or a curse for gas chromatography?-A review.</a> Anal Chim Acta. 801, 14-21 (2013).</li><li>Poole, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix-induced+response+enhancement+in+pesticide+residue+analysis+by+gas+chromatography.">Matrix-induced response enhancement in pesticide residue analysis by gas chromatography.</a> J Chromatogr A. 1158 (1-2), 241-250 (2007).</li><li>Anastassiades, M., Ma&#353;tovsk&#225;, K., Lehotay, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+analyte+protectants+to+improve+gas+chromatographic+analysis+of+pesticides.">Evaluation of analyte protectants to improve gas chromatographic analysis of pesticides.</a> J Chromatogr A. 1015 (1-2), 163-184 (2003).</li><li>Trufelli, H., Palma, P., Famiglini, G., Cappiello, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+matrix+effects+in+liquid+chromatography-mass+spectrometry.">An overview of matrix effects in liquid chromatography-mass spectrometry.</a> Mass Spectrom Reviews. 30 (3), 491-509 (2011).</li><li>European Commission SANTE/11312/2021. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidance+document+on+analytical+quality+control+and+method+validation+procedures+for+pesticide+residues+analysis+in+food+and+feed.">Guidance document on analytical quality control and method validation procedures for pesticide residues analysis in food and feed.</a> European Commission. , (2021).</li><li>Kwon, H., Lehotay, S. J., Geis-Asteggiante, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variability+of+matrix+effects+in+liquid+and+gas+chromatography-mass+spectrometry+analysis+of+pesticide+residues+after+QuEChERS+sample+preparation+of+different+food+crops.">Variability of matrix effects in liquid and gas chromatography-mass spectrometry analysis of pesticide residues after QuEChERS sample preparation of different food crops.</a> J Chromatogr A. 1270, 235-245 (2012).</li><li>Lehotay, S. J., Ma&#353;tovsk&#225;, K., Yun, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+two+fast+and+easy+methods+for+pesticide+residue+analysis+in+fatty+food+matrixes.">Evaluation of two fast and easy methods for pesticide residue analysis in fatty food matrixes.</a> J AOAC Int. 88 (2), 630-638 (2005).</li><li>Gonz&#225;lez-Curbelo, M. &. #. 1. 9. 3. ;., Gonz&#225;lez-S&#225;lamo, J., Varela-Mart&#237;nez, D. A., Hern&#225;ndez-Borges, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+pesticide+residues+in+pollen+and+dairy+products.">Analysis of pesticide residues in pollen and dairy products.</a> Sustainable Agriculture Reviews 47. 47, 47-89 (2020).</li><li>Madej, K., Kalenik, T. K., Piekoszewski, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+preparation+and+determination+of+pesticides+in+fat-containing+foods.">Sample preparation and determination of pesticides in fat-containing foods.</a> Food Chem. 269, 527-541 (2018).</li><li>Yanty, N. A. M., Marikkar, J. M. N., Long, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+varietal+differences+on+composition+and+thermal+characteristics+of+avocado+oil.">Effect of varietal differences on composition and thermal characteristics of avocado oil.</a> J Am Oil Chem Soc. 88, 1997-2003 (2011).</li><li>Pano-Farias, N. S., Ceballos-Maga&#241;a, S. G., Muniz-Valencia, R., Gonzalez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+and+assessment+of+matrix+effect+and+uncertainty+of+a+gas+chromatography+coupled+to+mass+spectrometry+method+for+pesticides+in+papaya+and+avocado+samples.">Validation and assessment of matrix effect and uncertainty of a gas chromatography coupled to mass spectrometry method for pesticides in papaya and avocado samples.</a> J Food Drug Anal. 25 (3), 501-509 (2017).</li><li>Pano-Farias, N. S., Ceballos-Maga&#241;a, S. G., Jurado, J. M., Aguayo-Villarreal, I. A., Mu&#241;iz-Valencia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytical+method+for+pesticides+in+avocado+and+papaya+by+means+of+ultra-high+performance+liquid+chromatography+coupled+to+a+triple+quadrupole+mass+detector:+Validation+and+uncertainty+assessment.">Analytical method for pesticides in avocado and papaya by means of ultra-high performance liquid chromatography coupled to a triple quadrupole mass detector: Validation and uncertainty assessment.</a> J Food Sci. 83 (8), 2265-2272 (2018).</li><li>Pano-Farias, N. S., Ceballos-Maga&#241;a, S. G., Gonzalez, J., Jurado, J. M., Mu&#241;iz-Valencia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supercritical+fluid+chromatography+with+photodiode+array+detection+for+pesticide+analysis+in+papaya+and+avocado+samples.">Supercritical fluid chromatography with photodiode array detection for pesticide analysis in papaya and avocado samples.</a> J Sep Sci. 38 (7), 1240-1247 (2015).</li><li>Lozano, A., Rajski, &. #. 3. 2. 1. ;., Ucl&#233;s, S., Belmonte-Valles, N., Mezcua, M., Fern&#225;ndez-Alba, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+zirconium+dioxide-based+sorbents+to+decrease+the+matrix+effect+in+avocado+and+almond+multiresidue+pesticide+analysis+followed+by+gas+chromatography+tandem+mass+spectrometry.">Evaluation of zirconium dioxide-based sorbents to decrease the matrix effect in avocado and almond multiresidue pesticide analysis followed by gas chromatography tandem mass spectrometry.</a> Talanta. 118, 68-83 (2014).</li><li>Han, L., Matarrita, J., Sapozhnikova, Y., Lehotay, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+recent+product+to+remove+lipids+and+other+matrix+co-extractives+in+the+analysis+of+pesticide+residues+and+environmental+contaminants+in+foods.">Evaluation of a recent product to remove lipids and other matrix co-extractives in the analysis of pesticide residues and environmental contaminants in foods.</a> J Chromatogr A. 1449, 17-29 (2016).</li><li>Chamkasem, N., Ollis, L. W., Harmon, T., Lee, S., Mercer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+136+pesticides+in+avocado+using+a+modified+QuEChERS+method+with+LC-MS/MS+and+GC-MS/MS.">Analysis of 136 pesticides in avocado using a modified QuEChERS method with LC-MS/MS and GC-MS/MS.</a> J Agric Food Chem. 61 (10), 2315-2329 (2013).</li><li>Rajski, &. #. 3. 2. 1. ;., Lozano, A., Ucl&#233;s, A., Ferrer, C., Fern&#225;ndez-Alba, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+pesticide+residues+in+high+oil+vegetal+commodities+by+using+various+multi-residue+methods+and+clean-ups+followed+by+liquid+chromatography+tandem+mass+spectrometry.">Determination of pesticide residues in high oil vegetal commodities by using various multi-residue methods and clean-ups followed by liquid chromatography tandem mass spectrometry.</a> J Chromatogr A. 1304, 109-120 (2013).</li><li>Hern&#225;ndez-Borges, J., Ravelo-P&#233;rez, L. M., Hern&#225;ndez-Su&#225;rez, E. M., Carnero, A., Rodr&#237;guez-Delgado, M. &. #. 1. 9. 3. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+abamectin+residues+in+avocados+by+high-performance+liquid+chromatography+with+fluorescence+detection.">Analysis of abamectin residues in avocados by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection.</a> J Chromatogr A. 1165 (1-2), 52-57 (2007).</li><li>Moreno, J. F., Li&#233;banas, F. A., Frenich, A. G., Vidal, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+different+sample+treatments+for+determining+pesticide+residues+in+fat+vegetable+matrices+like+avocado+by+low-pressure+gas+chromatography-tandem+mass+spectrometry.">Evaluation of different sample treatments for determining pesticide residues in fat vegetable matrices like avocado by low-pressure gas chromatography-tandem mass spectrometry.</a> J Chromatogr A. 1111 (1), 97-105 (2006).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commission+Directive+2002/63/EC+of+11+July+2002+establishing+Community+methods+of+sampling+for+the+official+control+of+pesticide+residues+in+and+on+products+of+plant+and+animal+origin+and+repealing+Directive+79/700/EEC.">Commission Directive 2002/63/EC of 11 July 2002 establishing Community methods of sampling for the official control of pesticide residues in and on products of plant and animal origin and repealing Directive 79/700/EEC.</a> Official Journal of the European Union. L187, 30-43 (2002).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=European+Regulation,+396/2005,+Regulation+(EC)+NO+396/2005+of+the+European+Parliament+and+of+the+Council+of+23+February+2005+on+maximum+residue+levels+of+pesticides+in+or+on+food+and+feed+of+plant+and+animal+origin+and+amending+Council+Directive+91/414/EEC.">European Regulation, 396/2005, Regulation (EC) NO 396/2005 of the European Parliament and of the Council of 23 February 2005 on maximum residue levels of pesticides in or on food and feed of plant and animal origin and amending Council Directive 91/414/EEC.</a> Official Journal of the European Union. L70, 1-16 (2005).</li><li>Gonz&#225;lez-Curbelo, M. &. #. 1. 9. 3. ;., Lehotay, S. J., Hern&#225;ndez-Borges, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+modified+QuEChERS+version+for+high-throughput+analysis+of+a+wide+range+of+pesticides+in+foods.">Validation of a modified QuEChERS version for high-throughput analysis of a wide range of pesticides in foods.</a> Abstracts of Papers of the American Chemical Society. 246, (2013).</li><li>Gonz&#225;lez-Curbelo, M. &. #. 1. 9. 3. ;., Lehotay, S. J., Hern&#225;ndez-Borges, J., Rodr&#237;guez Delgado, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ammonium+formate+buffer+in+QuEChERS+for+high+throughput+analysis+of+pesticides+in+food+by+fast,+low-pressure+GC-MS/MS+and+LC-MS/MS.">Ammonium formate buffer in QuEChERS for high throughput analysis of pesticides in food by fast, low-pressure GC-MS/MS and LC-MS/MS.</a> Abstracts of Papers of the American Chemical Society. 248, (2014).</li><li>Gonz&#225;lez-Curbelo, M. &. #. 1. 9. 3. ;., Lehotay, S. J., Hern&#225;ndez-Borges, J., Rodr&#237;guez-Delgado, M. &. #. 1. 9. 3. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+ammonium+formate+in+QuEChERS+for+high-throughput+analysis+of+pesticides+in+food+by+fast,+low-pressure+gas+chromatography+and+liquid+chromatography+tandem+mass+spectrometry.">Use of ammonium formate in QuEChERS for high-throughput analysis of pesticides in food by fast, low-pressure gas chromatography and liquid chromatography tandem mass spectrometry.</a> J Chromatogr A. 1358, 75-84 (2014).</li><li>Varela-Mart&#237;nez, D. A., Gonz&#225;lez-S&#225;lamo, J., Gonz&#225;lez-Curbelo, M. &. #. 1. 9. 3. ;., Quick Hern&#225;ndez-Borges, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quick,+easy,+cheap,+effective,+rugged,+and+safe+(QuEChERS)+extraction.">Quick, easy, cheap, effective, rugged, and safe (QuEChERS) extraction.</a> Handbooks in Separation Science. , 399-437 (2020).</li><li>Gonz&#225;lez-Curbelo, M. &. #. 1. 9. 3. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+organochlorine+pesticides+in+a+soil+sample+by+a+modified+QuEChERS+approach+using+ammonium+formate.">Analysis of organochlorine pesticides in a soil sample by a modified QuEChERS approach using ammonium formate.</a> J Vis Exp. 191, e64901 (2023).</li><li>Gonz&#225;lez-Curbelo, M. &. #. 1. 9. 3. ;., Dionis-Delgado, S., Asensio-Ramos, M., Hern&#225;ndez-Borges, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pesticide+analysis+in+toasted+barley+and+chickpea+flours.">Pesticide analysis in toasted barley and chickpea flours.</a> J Sep Sci. 35 (2), 299-307 (2012).</li><li>Varela-Mart&#237;nez, D. A., Gonz&#225;lez-Curbelo, M. &. #. 1. 9. 3. ;., Gonz&#225;lez-S&#225;lamo, J., Hern&#225;ndez-Borges, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+analysis+of+pesticides+in+minor+tropical+fruits+from+Colombia.">High-throughput analysis of pesticides in minor tropical fruits from Colombia.</a> Food Chem. 280, 221-230 (2019).</li><li>Li, L., Li, W., Qin, D. M., Jiang, S. R., Liu, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+graphitized+carbon+black+to+the+QuEChERS+method+for+pesticide+multiresidue+analysis+in+spinach.">Application of graphitized carbon black to the QuEChERS method for pesticide multiresidue analysis in spinach.</a> J AOAC Int. 92 (2), 538-547 (2009).</li></ol>

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

המגבלה העיקרית הקשורה לכיול תואם מטריצה נובעת מהשימוש בדוגמאות ריקות כתקני כיול. זה מוביל למספר מוגבר של דגימות שיש לעבד לניתוח והזרקה מוגברת של רכיבי מטריצה בכל רצף אנליטי, מה שעלול להוביל לדרישות תחזוקת מכשירים גבוהות יותר. עם זאת, אסטרטגיה זו מתאימה יותר מתוספת סטנדרטית, שתייצר מספר גד...

באנליזה כימית, אפקט המטריצה (ME) יכול להיות מוגדר בדרכים שונות, אך הגדרה כללית מקובלת היא כדלקמן: הוא מתייחס לשינוי באות, במיוחד שינוי בשיפוע עקומת הכיול כאשר מטריצת הדגימה או חלק ממנה נוכחים במהלך ניתוח של אנליטי מסוים. כהיבט קריטי, ME מחייב חקירה יסודית במהלך תהליך התיקוף של כל שיטה אנליטית, שכן הוא משפיע ישירות על דיוק המדידה הכמותית עבור יעד אנליטי1. באופן אידיאלי, הליך קדם-טיפול לדוגמה צריך להיות סלקטיבי מספיק כדי למנוע חילוץ רכיבים כלשהם ממטריצת הדגימה. עם זאת, למרות מאמצים משמעותיים, רבים מרכיבי מטריצה אלה עדיין בסופו של דבר במערכות הקביעה הסופית ברוב המקרים. כתוצאה מכך, רכיבי מטריצה כאלה לעתים קרובות לסכן את ערכי ההתאוששות והדיוק, להציג רעש נוסף, ולהסלים את העלות הכוללת ואת העבודה הכרוכה בשיטה.
בכרומטוגרפיית גז (GC), ME נובע מנוכחותם של אתרים פעילים במערכת GC, אשר מקיימים אינטראקציה עם ניתוח המטרה באמצעות מנגנונים שונים. מצד אחד, מרכיבי המטריצה חוסמים או מסווים את האתרים הפעילים הללו שאחרת היו מתקשרים עם מנתחי המטרה, וכתוצאה מכך שיפור אותתכוף 2. מצד שני, אתרים פעילים שנשארים ללא הפרעה עלולים לגרום לשיא זנב או לפירוק אנליטי עקב אינטראקציות חזקות, מה שמוביל ל- ME שלילי. עם זאת, זה יכול להציע יתרונות פוטנציאליים במקרים מסוימים2. חשוב להדגיש כי השגת אינרטיות מלאה במערכת GC היא מאתגרת ביותר, למרות השימוש ברכיבים אינרטיים מאוד ותחזוקה נאותה. עם שימוש מתמשך, הצטברות של רכיבי מטריצה במערכת GC הופך בולט יותר, גרימת ME מוגברת. כיום, ידוע כי אנליטים המכילים חמצן, חנקן, זרחן, גופרית ואלמנטים דומים, מציגים ME גדול יותר מכיוון שהם מתקשרים בקלות עם אתרים פעילים אלה. לעומת זאת, תרכובות יציבות מאוד כגון פחמימנים או אורגנוהלוגנים אינם עוברים אינטראקציות כאלה ואינם מראים ME נצפה במהלך ניתוח 2,3.
בסך הכל, ME לא ניתן לבטל לחלוטין, מה שמוביל לפיתוח של מספר אסטרטגיות פיצוי או תיקון כאשר הסרה מלאה של רכיבי מטריצה אינו אפשרי. בין אסטרטגיות אלה, השימוש בתקנים פנימיים (ISs), מגני אנליטים, כיול תואם מטריצה, שיטת התוספת הסטנדרטית, או שינוי טכניקות הזרקה תועדו בספרות המדעית 1,2,4,5. הנחיות SANTE/11312/2021 המליצו גם הן על אסטרטגיות אלה6.
באשר ליישום כיול מותאם מטריצה כדי לפצות על MEs, רצפי דגימות במצבים מעשיים מקיפים סוגים שונים של מזונות או דגימות שונות מאותה סחורה. במקרה זה, ההנחה היא כי שימוש בכל מדגם מאותה סחורה יפצה למעשה על ME בכל הדגימות. עם זאת, חסרים מחקרים מספיקים בספרות הקיימת הבוחנים סוגיה זובאופן ספציפי 7.
קביעת ריבוי שאריות של חומרי הדברה במטריצות המכילות אחוז ניכר של שומן ופיגמנטים מהווה משימה מאתגרת. הכמות הניכרת של החומר המופק יכולה להשפיע באופן משמעותי על יעילות החילוץ ולהפריע לקביעה הכרומטוגרפית שלאחר מכן, מה שעלול לפגוע בעמודה, במקור ובגלאי, וכתוצאה מכך MEsמשמעותיים 8,9,10. כתוצאה מכך, ניתוח חומרי הדברה ברמות קורט במטריצות כאלה מחייב הפחתה משמעותית של רכיבי המטריצה לפני הניתוח תוך הבטחת ערכי התאוששות גבוהים7. השגת ערכי התאוששות גבוהים היא חיונית כדי להבטיח שניתוחי חומרי הדברה יישארו אמינים, מדויקים ועומדים בתקנים רגולטוריים. זה חיוני להבטחת בטיחות מזון, הגנה על הסביבה, וקבלת החלטות מושכלת בחקלאות ובתחומים קשורים.
אבוקדו הוא פרי בעל ערך מסחרי גבוה המגודל באקלים טרופי וים תיכוני ברחבי העולם ונצרך באופן נרחב הן באזורי מוצאו והן בשוקי הייצוא הרבים. מבחינה אנליטית, אבוקדו הוא מטריצה מורכבת המכילה מספר משמעותי של חומצות שומן (כלומר, אולאית, פלמיטית ולינולאית), בדומה לאגוזים, תכולת פיגמנט משמעותית, כמו בעלים ירוקים, וכן סוכרים וחומצות אורגניות, בדומה לאלה הנמצאים בפירות אחרים11. בשל אופיו השומני, יש לתת תשומת לב מיוחדת בעת שימוש בכל שיטה אנליטית לניתוח. בעוד שניתוח שאריות חומרי הדברה בוצע על אבוקדו באמצעות GC-MS במקרים מסוימים 8,12,13,14,15,16,17,18,19,20, הוא היה יחסית פחות שכיח בהשוואה למטריצות אחרות. ברוב המקרים, גרסה של שיטת Quick-E asy-Ch eap-E ffective-R ugged-S afe (QuEChERS) יושמה 8,12,13,14,15,16,17,18. אף אחד מהמחקרים הללו לא בדק את העקביות של MEs בין זני אבוקדו שונים.
לכן, מטרת עבודה זו הייתה לחקור את העקביות של MEs ואת ערכי ההתאוששות של 45 חומרי הדברה מייצגים על פני זנים שונים של אבוקדו (כלומר, Criollo, Hass, ו Lorena) באמצעות שיטת QuEChERS עם פורמט אמוניום ו GC-MS/MS. למיטב ידיעתנו, זו הפעם הראשונה שמחקר מסוג זה נערך על דגימות מטריקס שומניות כאלה.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-Ethoxy-1,2-propanediol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>260428-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1006652500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium formate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>156264-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AOAC 20i/s autosampler</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td>221-723115-58</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic shaker MX-T6-PRO</td>
			<td>SCILOGEX</td>
			<td>8.23222E+11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balance</td>
			<td>OHAUS</td>
			<td>PA224</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes, 15 mL</td>
			<td>Nest</td>
			<td>601002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes, 2 mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>4610-1815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes, 50 mL</td>
			<td>Nest</td>
			<td>602002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Z206A</td>
			<td>MERMLE</td>
			<td>6019500118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Choper 2L</td>
			<td>Oster</td>
			<td>2114111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Column SH-Rxi-5sil MS, 30 m x 0.25 mm, 0.25 &#181;m</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td>221-75954-30</td>
			<td>MS GC column&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispensette 5-50 mL</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>4600361</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DSC-18</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>52600-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Sorbitol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>240850-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1313181212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GCMS-TQ8040&#160;</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td>211552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphitized carbon black</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>57210-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection syringe</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td>LC2213461800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Gulonic acid &#947;-lactone</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>310301-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linner splitless</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td>221-4887-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate anhydrus</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M7506-2KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>131091.12.12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q ultrapure (type 1) water</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>F4H4783518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips 10 - 100 &#181;L</td>
			<td>Biologix</td>
			<td>200010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips 100 - 1000 &#181;L</td>
			<td>Brand</td>
			<td>541287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips 20 - 200 &#181;L</td>
			<td>Brand</td>
			<td>732028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes Pasteur</td>
			<td>NORMAX</td>
			<td>5426023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pippette Transferpette S variabel 10 - 100 &#181;L</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>704774</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pippette Transferpette S variabel 100 - 1000 &#181;L</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>704780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pippette Transferpette S variabel 20 - 200 &#181;L</td>
			<td>SCILOGEX</td>
			<td>7.12111E+11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary-secondary amine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>52738-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shikimic acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5375-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Filter PTFE/L 25 mm, 0.45 &#181;m</td>
			<td>NORMAX</td>
			<td>FE2545I</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triphenyl phosphate (QC)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>241288-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vials with fused-in insert</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>29398-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Z-SEP+</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>55299-U</td>
			<td>zirconium oxide-based sorbent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pesticides</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CAS registry number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4,4&#180;-DDD</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>35486-250MG</td>
			<td>72-54-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4,4&#180;-DDE</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>35487-100MG</td>
			<td>72-55-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4,4&#180;-DDT</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>31041-100MG</td>
			<td>50-29-3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alachlor</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45316-250MG</td>
			<td>15972-60-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aldrin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36666-25MG</td>
			<td>309-00-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atrazine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45330-250MG-R</td>
			<td>1912-24-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atrazine-d5 (IS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>34053-10MG-R</td>
			<td>163165-75-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprofezin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>37886-100MG</td>
			<td>69327-76-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbofuran</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32056-250-MG</td>
			<td>1563-66-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorpropham</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45393-250MG</td>
			<td>101-21-3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorpyrifos</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45395-100MG</td>
			<td>2921-88-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorpyrifos-methyl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45396-250MG</td>
			<td>5598-13-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deltamethrin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45423-250MG</td>
			<td>52918-63-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloran</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45435-250MG</td>
			<td>99-30-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichlorvos</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45441-250MG</td>
			<td>62-73-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dieldrin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>33491-100MG-R</td>
			<td>60-57-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diphenylamine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45456-250MG</td>
			<td>122-39--4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endosulfan A</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32015-250MG</td>
			<td>115-29-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endrin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32014-250MG</td>
			<td>72-20-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EPN</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36503-100MG</td>
			<td>2104-64-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Esfenvalerate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>46277-100MG</td>
			<td>66230-04-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethion</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45477-250MG</td>
			<td>563-12-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fenamiphos</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45483-250MG</td>
			<td>22224-92-6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fenitrothion</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45487-250MG</td>
			<td>122-14-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fenthion</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36552-250MG</td>
			<td>55-38-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fenvalerate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45495-250MG</td>
			<td>51630-58-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCB</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45522-250MG</td>
			<td>118-74-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iprodione</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36132-100MG</td>
			<td>36734-19-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lindane</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45548-250MG</td>
			<td>58-89-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malathion</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36143-100MG</td>
			<td>121-75-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metalaxyl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32012-100MG</td>
			<td>57837-19-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methidathion</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36158-100MG</td>
			<td>950-37-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myclobutanil</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>34360-100MG</td>
			<td>88671-89-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxyfluorfen</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>35031-100MG</td>
			<td>42874-03-3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parathion-methyl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36187-100MG</td>
			<td>298-00-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penconazol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36189-100MG</td>
			<td>66246-88-6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pirimiphos-methyl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32058-250MG</td>
			<td>29232-93-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propiconazole</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45642-250MG</td>
			<td>60207-90-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propoxur</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45644-250MG</td>
			<td>114-26-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propyzamide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45645-250MG</td>
			<td>23850-58-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyriproxifen</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>34174-100MG</td>
			<td>95737-68-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tolclofos-methyl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>31209-250MG</td>
			<td>5701804-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triadimefon</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45693-250MG</td>
			<td>43121-43-3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triflumizole</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32611-100MG</td>
			<td>68694-11-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-HCH</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>33377-50MG</td>
			<td>319-86-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-HCH</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>33376-100MG</td>
			<td>319-85-7</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

determination of 45 pesticides in avocado varieties by the quechers method and gas chromatography-tandem mass spectrometry

כרומטוגרפיית גז (GC) ספקטרומטריית מסה טנדם (MS/MS) עומדת כמכשיר אנליטי מוביל המשמש באופן נרחב למעקב אחר שאריות חומרי הדברה במזון. עם זאת, שיטות אלה פגיעות לאפקטים מטריציוניים (MEs), אשר עשויים להשפיע על כימות מדויק בהתאם לשילוב הספציפי של אנליטה ומטריצה. בין האסטרטגיות השונות להפחתת MEs, כיול מותאם מטריצה מייצג את הגישה הרווחת ביישומי שאריות חומרי הדברה בשל עלות-תועלת ויישומו הפשוט. במחקר זה, 45 חומרי הדברה מייצגים נותחו בשלושה זנים שונים של אבוקדו (כלומר, Criollo, Hass ו- Lorena) באמצעות שיטת Quick-E asy-Ch eap-E ffective-R ugged-S afe (QuEChERS) עם פורמט אמוניום ו- GC-MS/MS.
לשם כך, 5 גרם של דגימת אבוקדו הופק עם 10 מ"ל של acetonitrile, ולאחר מכן 2.5 גרם של אמוניום formate נוסף כדי לגרום הפרדת פאזה. לאחר מכן, הסופרנאטנט עבר תהליך ניקוי באמצעות מיצוי שלב מוצק מפוזר תוך שימוש ב-150 מ"ג של MgSO4 נטול מים, 50 מ"ג אמין ראשוני-משני, 50 מ"ג אוקטדצילסילן, 10 מ"ג פחמן שחור גרפי ו-60 מ"ג של חומר סורבנט מבוסס תחמוצת זירקוניום (Z-Sep+). ניתוח GC-MS/MS בוצע בהצלחה תוך פחות מ-25 דקות. ניסויי תיקוף קפדניים בוצעו כדי להעריך את ביצועי השיטה. בחינת עקומת כיול מותאמת מטריצה לכל זן אבוקדו העלתה כי ה-ME נשאר עקבי יחסית ופחות מ-20% (נחשב ל-ME רך) עבור רוב שילובי חומרי ההדברה/זן. יתר על כן, גבולות הכימות של השיטה היו נמוכים מ-5 מק"ג/ק"ג עבור כל שלושת הזנים. לבסוף, ערכי ההתאוששות של רוב חומרי ההדברה היו בטווח המקובל של 70-120%, עם ערכי סטיית תקן יחסית מתחת ל-20%.

In chemical analysis, the matrix effect (ME) can be defined in various ways, but a widely accepted general definition is as follows: it refers to the change in the signal, particularly a change in the slope of the calibration curve when the sample matrix or portion of it is present during the analysis of a specific analyte. As a critical aspect, ME necessitates thorough investigation during the validation process of any analytical method, as it directly affects the accuracy of quantitative measurement for the target analytes1. Ideally, a sample pretreatment procedure should be selective enough to avoid extracting any components from the sample matrix. However, despite significant efforts, many of these matrix components still end up in the final determination systems in most cases. Consequently, such matrix components often compromise the recovery and precision values, introduce additional noise, and escalate the overall cost and labor involved in the method.
In gas chromatography (GC), ME arises due to the presence of active sites within the GC system, which interact with the target analytes through various mechanisms. On the one hand, the matrix constituents block or mask these active sites that would otherwise interact with the target analytes, resulting in frequent signal enhancement2. On the other hand, active sites that remain unobstructed may cause peak tailing or analyte decomposition due to strong interactions, leading to a negative ME. However, this can offer potential benefits in certain cases2. It is crucial to emphasize that achieving complete inertness in a GC system is exceedingly challenging, despite using highly inert components and proper maintenance. With continuous use, the accumulation of matrix components in the GC system becomes more pronounced, causing an increased ME. Nowadays, it is widely recognized that analytes containing oxygen, nitrogen, phosphorus, sulfur, and similar elements, exhibit a greater ME as they readily interact with these active sites. Conversely, highly stable compounds such as hydrocarbons or organohalogens do not undergo such interactions and do not show observable ME during analysis2,3.
Overall, ME cannot be fully eliminated, leading to the development of several strategies for compensation or correction when complete removal of matrix components is not feasible. Among these strategies, the utilization of deuterated internal standards (ISs), analyte protectants, matrix-matched calibration, the standard addition method, or the modification of injection techniques have been documented in scientific literature1,2,4,5. The SANTE/11312/2021 guidelines have also recommended these strategies6.
Regarding the application of matrix-matched calibration to compensate for MEs, sample sequences in practical situations encompass diverse types of foods or various samples from the same commodity. In this case, the assumption is made that employing any sample from the same commodity will effectively compensate for ME in all samples. However, there is a lack of sufficient studies in the existing literature that specifically investigate this issue7.
The multiresidue determination of pesticides in matrices containing an appreciable percentage of fat and pigments constitutes a challenging task. The considerable amount of coextracted material can significantly affect the extraction efficiency and interfere with the subsequent chromatographic determination, potentially damaging the column, source, and detector, and resulting in significant MEs8,9,10. Consequently, the analysis of pesticides at trace levels in such matrices necessitates a significant reduction of matrix components before analysis while ensuring high recovery values7. Obtaining high recovery values is crucial to ensure that pesticide analyses remain reliable, accurate, and compliant with regulatory standards. This is vital for ensuring food safety, environmental protection, and informed decision-making in agriculture and related fields.
Avocado is a fruit of high commercial value cultivated in tropical and Mediterranean climates worldwide and widely consumed both in its regions of origin and in the numerous export markets. From the analytical point of view, avocado is a complex matrix containing a significant number of fatty acids (i.e., oleic, palmitic, and linoleic), similar to nuts, a significant pigment content, as in green leaves, as well as sugars and organic acids, similar to those found in other fruits11. Due to its fatty nature, special attention must be given when employing any analytical method for analysis. While pesticide residue analysis has been conducted on avocados using GC-MS in some instances8,12,13,14,15,16,17,18,19,20, it has been relatively less frequent compared to other matrices. In most cases, a version of the Quick-Easy-Cheap-Effective-Rugged-Safe (QuEChERS) method has been applied8,12,13,14,15,16,17,18. None of these studies have investigated the consistency of MEs among different avocado varieties.
Therefore, the aim of this work was to study the consistency of MEs and recovery values for 45 representative pesticides across different varieties of avocado (i.e., Criollo, Hass, and Lorena) using the QuEChERS method with ammonium formate and GC-MS/MS. To the best of our knowledge, this is the first time that this type of study has been conducted on such fatty matrix samples.

הכנת דגימת אבוקדו בשיטת QuEChERS עם אמוניום פורמט לניתוח חומרי הדברה

קביעת 45 חומרי הדברה בזני אבוקדו בשיטת QuEChERS וספקטרומטריית מסה טנדם כרומטוגרפיית גז

To begin the sample preparation using the QuEChERS method, weigh five grams of an avocado sample of interest in a 50 milliliter centrifuge tube. Add 50 microliters of the procedural internal standard or P-IS solution to the tube. Add 10 milliliters of aceto nitrile to the centrifuge tube and shake the tube at 70 RPM for five minutes.Then add 2.5 grams of ammonium formate to it and shake the tube again at 70 RPM for five minutes. Subsequently, centrifuge the tube at 1, 800 G for five minutes. Next, in a two milliliter centrifuge tube, take the appropriate amounts of the reagents displayed on the screen.Then add one milliliter of the extract into the tube for purification using dispersive solid phase extraction. Vortex the tube for 30 seconds before centrifuging it at 1, 800 G for five minutes. Transfer 200 microliters of the purified extract to an auto-sampler vial, and add 20 microliters of the analyte protectant solution, followed by adding 50 microliters of a pre-prepared triphenyl phosphate solution.Finally, perform instrumental analysis using a GC-MS/MS system.

תיקוף מקיף של השיטה האנליטית נערך בהתאם להנחיות SANTE/11312/20216, הכוללות הערכות של ליניאריות, ME, התאוששות וחזרתיות.
לצורך הערכת הלינאריות, נבנו עקומות כיול תואמות מטריצה באמצעות דגימות ריקות קוצניות ברמות ריכוז מרובות (בטווח שבין 5 ל-600 מק"ג/ק"ג). מקדמי הקביעה (R2) ?...

Read this Scientific Article Protocol about Author Spotlight: A Matrix-Matched Calibration Approach for Mitigating Matrix Effects in Avocado Pesticide Residue Analysis at JoVE.com

הפרוטוקול הנוכחי מתאר ניתוח של שאריות חומרי הדברה רב-מעמדיים בזני אבוקדו באמצעות שיטת Quick-E asy-Ch eap-E ffective-R ugged-S afe (QuEChERS) עם פורמט אמוניום, ואחריה ספקטרומטריית מסה של כרומטוגרפיה-טנדם גז.

Gas chromatography (GC) tandem mass spectrometry (MS/MS) stands as a preeminent analytical instrument extensively employed for the surveillance of ...

כדי להתחיל את הכנת הדגימה בשיטת QuEChERS, שוקלים חמישה גרם של דגימת אבוקדו מעניינת בצינור צנטריפוגה של 50 מיליליטר. הוסף 50 מיקרוליטר של התקן הפנימי הפרוצדורלי או פתרון P-IS לצינור. מוסיפים 10 מיליליטר של ניטריל אצטו לצינור הצנטריפוגה ומנערים את הצינור ב-70 סל"ד למשך חמש דקות.לאחר מכן להוסיף 2.5 גרם של פורמט אמוניום אליו ולנער את הצינור שוב ב 70 סל"ד במשך חמש דקות. לאחר מכן, צנטריפוגה הצינור ב 1, 800 G במשך חמש דקות. לאחר מכן, בצינור צנטריפוגה של שני מיליליטר, קח את הכמויות המתאימות של הריאגנטים המוצגים על המסך.לאחר מכן הוסף מיליליטר אחד של תמצית לתוך הצינור לטיהור באמצעות מיצוי שלב מוצק מפוזר. סובב את הצינור במשך 30 שניות לפני צנטריפוגה אותו ב 1, 800 G במשך חמש דקות. מעבירים 200 מיקרוליטר של התמצית המטוהרת לבקבוקון דוגם אוטומטי, ומוסיפים 20 מיקרוליטר של תמיסת ההגנה האנליטית, ולאחר מכן מוסיפים 50 מיקרוליטר של תמיסת טריפניל פוספט מוכנה מראש.לבסוף, בצע ניתוח אינסטרומנטלי באמצעות מערכת GC-MS/MS.

determination-45-pesticides-avocado-varieties-quechers-method-gas

Research

JoVE Journal

Chemistry

Determination of 45 Pesticides in Avocado Varieties by the QuEChERS Method and Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

415 Views.  Universidad EAN. כדי להתחיל את הכנת הדגימה בשיטת QuEChERS, שוקלים חמישה גרם של דגימת אבוקדו מעניינת בצינור צנטריפוגה של 50 מיליליטר. הוסף 50 מיקרוליטר של התקן הפנימי הפרוצדורלי או פתרון P-IS לצינור. מוסיפים 10 מיליליטר של ניטריל אצטו לצינור הצנטריפוגה ומנערים את הצינור ב-70 סל"ד למשך חמש דקות.לאח?...

Video: הכנת דגימת אבוקדו בשיטת QuEChERS עם אמוניום פורמט לניתוח חומרי הדברה

Gas chromatography (GC) tandem mass spectrometry (MS/MS) stands as a preeminent analytical instrument extensively employed for the surveillance of pesticide residues in food. Nevertheless, these methods are vulnerable to matrix effects (MEs), which can potentially affect accurate quantification depending on the specific combination of analyte and matrix. Among the various strategies to mitigate MEs, matrix-matched calibration represents the prevailing approach in pesticide residue applications due to its cost-effectiveness and straightforward implementation. In this study, a total of 45 representative pesticides were analyzed in three different varieties of avocado (i.e., Criollo, Hass, and Lorena) using the Quick-Easy-Cheap-Effective-Rugged-Safe (QuEChERS) method with ammonium formate and GC-MS/MS. 
For this purpose, 5 g of the avocado sample was extracted with 10 mL of acetonitrile, and then 2.5 g of ammonium formate was added to induce phase separation. Subsequently, the supernatant underwent a cleanup process via dispersive solid-phase extraction employing 150 mg of anhydrous MgSO4, 50 mg of primary-secondary amine, 50 mg of octadecylsilane, 10 mg of graphitized carbon black, and 60 mg of a zirconium oxide-based sorbent (Z-Sep+). The GC-MS/MS analysis was successfully performed in less than 25 min. Rigorous validation experiments were carried out to assess the performance of the method. The examination of a matrix-matched calibration curve for each variety of avocado revealed that the ME remained relatively consistent and less than 20% (considered as a soft ME) for most pesticide/variety combinations. Furthermore, the method&#180;s limits of quantification were lower than 5 &#181;g/kg for all three varieties. Finally, the recovery values for most pesticides fell within the acceptable range of 70-120%, with relative standard deviation values below 20%.

The present protocol describes the analysis of multiclass pesticide residues in avocado varieties using the Quick-Easy-Cheap-Effective-Rugged-Safe (QuEChERS) method with ammonium formate, followed by gas chromatography-tandem mass spectrometry.