EAN Üniversitesi'ne ve La Laguna Üniversitesi'ne teşekkür ederiz.

1. Stok ve çalışma solüsyonlarının hazırlanması
NOT: Güvenlik nedeniyle, protokol boyunca nitril eldiven, laboratuvar önlüğü ve koruyucu gözlük takılması tavsiye edilir.
<ol><li>45 ticari pestisit standardının her birinin (Malzeme Tablosuna bakınız) 10 mL hacimsel şişelerde asetonitril içinde yaklaşık 1.000 mg / L'de ayrı stok çözeltileri hazırlayın.</li>
	<li>25 mL'lik hacimsel bir şişede asetonitril içinde 400 mg/L'lik bir stok çözeltisi hazırlamak için yukarıdaki bireysel stok çözeltilerini birleştirin. NOT: Bu karışık çözelti, geri kazanım ve kalibrasyon deneyleri için çalışma çözeltilerini hazırlamak için kullanılacaktır.</li>
	<li>10 mL hacimsel şişelerde asetonitril içinde sırasıyla 750 mg / L ve 1.050 mg / L konsantrasyonlarda atrazin-d5 ve trifenil fosfat (TPP) stok çözeltileri hazırlayın. Atrazin-d5'i prosedürel bir iç standart (P-IS) ve TPP'yi bir enjeksiyon iç standardı (I-IS) olarak kullanın. NOT: İdeal senaryo, her bir spesifik hedef analit için izotopik olarak etiketlenmiş bir dahili standardın kullanılmasını içerecektir.</li>
	<li>Pestisitler için 10, 100 ve 400 μg/kg numune eşdeğerleri ve P-IS için ayrı ayrı 200 μg/kg numune eşdeğeri elde etmek için 10 mL hacimsel şişelerde %0,05 (h/h) formik asit (bozunmayı önlemek için) içeren asetonitrilde stok geri kazanım solüsyonları hazırlayın. Bu solüsyonları amber cam şişelerde karanlıkta -20 °C'de saklayın.</li>
	<li>Pestisitlerin ve P-IS'nin kalibrasyon çözeltilerini asetonitril içinde 10 mL hacimsel şişelerde %0,05 (h/h) formik asit ile birlikte sırasıyla 5, 10, 25, 75, 200, 400 ve 600 μg/kg ve 200 ng/ng verecek şekilde hazırlayın ve bunları -20 °C'de karanlıkta amber cam şişelerde saklayın. NOT: Deneysel çalışma boyunca aynı çözeltiler kullanılabilir, ancak her kullanımdan hemen sonra belirtilen koşullar altında saklanması esastır.</li>
	<li>100 g/L 3-etoksi-1,2-propandiol, 10 g/L L-gulonik asit γ-lakton, 10 g/L D-sorbitol ve 5 g/L şikimik asit içeren bir analit koruyucu karışımı hazırlayın 4/1 (h/h) asetonitrilin suya oranı %0.5 (h/h) formik asit ile. NOT: Bu analit koruyucu karışımı, ME'yi hafifletmek için enjeksiyondan hemen önce eklenmelidir.</li>
</ol>2. Örnek toplama
<ol><li>Süpermarketlerde bulunan üç avokado türünden (örneğin, Criollo, Hass ve Lorena) örnekler toplayın. Her bir numunenin yaklaşık 1 kg ağırlığında olduğundan emin olun, bu sonraki tüm çalışmaları yürütmek için yeterlidir ve 2002/63/CE21 Direktifi ile uyumludur. NOT: Pestisit kalıntılarının bulunma olasılığını en aza indirmek için organik numuneler tercihen seçilmiştir.</li>
	<li>Toplanan avokado örneklerini laboratuvara taşıyın ve bir doğrayıcı kullanarak boru olmadan tek tek homojenize edin (bkz. Malzeme Tablosu). Homojenize edilmiş numuneleri amber cam kaplarda analize kadar 4 °C'de saklayın. NOT: Tüm çalışma boyunca aynı avokado örnekleri kullanılacaktır. Bu nedenle, her kullanımdan hemen sonra belirtilen koşullar altında saklanması çok önemlidir.</li>
</ol>3. Amonyum format ile QuEChERS yöntemini kullanarak numune hazırlama
NOT: Şekil 1 , amonyum format ile QuEChERS yönteminin şematik bir temsilini göstermektedir.
<ol><li>50 mL'lik bir santrifüj tüpünde her bir avokado örneğinden 5 g tartın (Malzeme Tablosuna bakınız).</li>
	<li>200 μg/kg'lık bir konsantrasyon elde etmek için 50 μL P-IS çözeltisi ekleyin. Geri kazanım değerlendirmesi için, 10, 100 ve 400 μg/kg (her biri n = 5) konsantrasyonlar elde etmek için adım 1.4'te hazırlanan pestisit solüsyonlarını da ekleyin.</li>
	<li>Sivri ucun numuneye tam olarak entegrasyonunu sağlamak için tüpü 30 saniye boyunca vorteksleyin.</li>
	<li>Santrifüj tüpüne 10 mL asetonitril ekleyin. Tüpü 70 rpm'de 5 dakika çalkalayın.</li>
	<li>2,5 g amonyum format ekleyin, tüpü tekrar 70 rpm'de 5 dakika çalkalayın ve ardından 5 dakika boyunca 1.800 × g'da santrifüjleyin.</li>
	<li>150 mg susuz MgS04, 50 mg birincil-ikincil amin (PSA), 50 mg oktadesilsilsen (C18), 10 mg grafitleştirilmiş karbon siyahı (GCB) ve 60 mg zirkonyum oksit bazlı sorbent Z-Sep + içeren 2 mL'lik bir santrifüj tüpüne, dağıtıcı-katı faz ekstraksiyonu (d-SPE) kullanılarak saflaştırma için 1 mL ekstrakt ekleyin. Tüpü 30 saniye boyunca vorteksleyin ve 5 dakika boyunca 1.800 × g'da santrifüjleyin.</li>
	<li>Ekstraktın 200 μL'sini bir otomatik örnekleyici şişesine aktarın, 20 μL'lik analit koruyucu solüsyonu adım 1.6'da hazırlayın ve 50 μL'lik TPP solüsyonu ekleyin.</li>
	<li>Bir GC-MS/MS sistemi kullanarak enstrümantal analiz yapın (bkz. bölüm 4).</li>
	<li>D-SPE adımı (adım 3.6) sırasında, 15 mL'lik tüplerde 5 mL süpernatanı temizlemek dışında, boş ekstraktlar kullanarak yukarıda tarif edilenle aynı prosedürü izleyerek matris uyumlu kalibrasyon gerçekleştirin. Adım 3.7'de spike ve P-IS çözümlerini ekleyin. TPP ile birlikte 5, 10, 25, 50, 100, 200, 400 ve 600 μg/kg elde etmek için kalibrasyon standart çözeltilerini otomatik numune alma cihazı şişelerine ekleyin ve 270 μL'lik bir nihai hacim elde edin. NOT: Genel olarak, her avokado çeşidi için matris uyumlu kalibrasyon eğrileri ve yalnızca asetonitril kalibrasyonları oluşturduğunuzdan emin olun.</li>
</ol>4. GC-MS/MS kullanarak enstrümantal analiz
<ol><li>Analizleri, bir elektron iyonizasyon arayüzü (-70 eV) ve bir otomatik örnekleyici ile donatılmış üçlü dört kutuplu (TQ) bir GC-MS/MS sistemi kullanarak gerçekleştirin (bkz. Malzeme Tablosu).</li>
	<li>1,2 mL/dk sabit akış hızında taşıyıcı gaz olarak ultra yüksek saflıkta Helyum ile birlikte bir MS GC kolonu (30 m uzunluk, 0,25 mm iç çap, 0,25 μm film kalınlığı silika Bağı) kullanın.</li>
	<li>Ekipmanın çalışmasına devam etmeden önce aşağıdaki parametreleri doğrulayın:<ol><li>Gaz basınçlarının doğru olduğundan emin olun: 140 psi'de helyum ve 65 psi'de Argon.</li>
		<li>Berrak ve uygun seviyede olduğundan emin olmak için döner pompa yağının durumunu kontrol edin.</li>
		<li>Enjeksiyon şırıngasının önceki enjeksiyonlardan herhangi bir engeli olmadığından emin olun.</li>
		<li>Yıkama şişelerinin her bir çözücüden yeterli miktarda içerdiğini onaylayın.</li>
		<li>Sarf malzemesi sayacının (septum, astar) sınırına ulaşmadığını kontrol edin.</li>
	</ol></li>
	<li>Ön panelde bulunan ana GC anahtarını açın ve arkada bulunan MS anahtarını açın.</li>
	<li>GC-MS/MS sisteminin tüm parametrelerini kontrol eden GCMS Gerçek Zamanlı Analiz yazılımını açın. NOT: Cihaz sistemi varsayılan olarak GCMS Gerçek Zamanlı Analiz yazılımını içerir.</li>
	<li>Vakum Kontrolüne Tıklayın | İleri Düzey | Vakum sistemini başlatmak için Döner Pompa 1. NOT: Bu pencerede, 9.0 Pa'dan düşük olması gereken optimum vakum değerlerini belirlemek için basıncı izleyin. Yaklaşık 12 saat sürecektir.</li>
	<li>Turbo moleküler pompa 1 ve turbo moleküler pompa 2'yi açmak için Başlat'a tıklayın.</li>
	<li>İyon Kaynaklı Isıtıcı seçeneği için Başlat'a tıklayın. NOT: Önerilen 1 saatlik bir süre sonra, önerilen değerin 1.6e-3 Pa'dan düşük olduğunu doğrulamak için sistemin vakumunu kontrol edin.</li>
	<li>MS arayüz sıcaklığını 250 °C'ye ve iyon kaynağı sıcaklığını 300 °C'ye ayarlayın.</li>
	<li>GC fırını 1 dakika boyunca 50 °C'lik bir başlangıç sıcaklığında tutun, ardından 25 °C/dk hızında 180 °C'ye yükseltin. Ardından, sıcaklığı 5 °C/dk'da 230 °C'ye ve ardından 25 °C/dk'da 290 °C'ye yükseltin. Son olarak, sıcaklığı 6 dakika boyunca 290 °C'de sabit tutun. Toplam analiz süresi 24,6 dakikadır.</li>
	<li>Tüm bu sistemler açıldıktan sonra Kapat'a tıklayın.</li>
	<li>Analiz yazılımından Ayarlama seçeneğine tıklayın ve kütle spektrometresi koşullarının ilk doğrulamasını gerçekleştirmek için Peak Monitor View'a tıklayın. NOT: Gerekirse, otomatik ayarlama gerçekleştirin.</li>
	<li>Edinim'e tıklayın ve görüntülenen pencereden İlk Parametreleri İndir'e tıklayın. Ekipmanın GC ve MS'ye hazır olduğunu doğrulayın.</li>
</ol>5. Veri toplama
<ol><li>Yazılımdan Yeni Toplu İş Dosyası'na tıklayın ve örnek adı, örnek kimliği, yöntem dosyası, veri dosyası, enjeksiyon hacmi ve ayarlama dosyası gibi bilgileri içeren bir dizi oluşturun. Gerektiği gibi satırlar ekleyin ve Kaydet'e tıklayın.</li>
	<li>Toplu Başlat'a tıklayın ve enjeksiyon işleminin başlamasına izin verin.</li>
	<li>Enjeksiyonu 250 °C'de, bölünmez modda, 1 μL'lik bir enjeksiyon hacmini koruyarak gerçekleştirin. Enjeksiyonu takip ettikten 1 dakika sonra, bölmeyi açın. NOT: Enjeksiyonlar arasında, 10 μL'lik şırıngayı metanol, etil asetat ve asetonitril ile her çözücü ile tek bir durulama kullanarak temizlediğinizden emin olun. Tüm enjeksiyonlar üç kopya halinde gerçekleştirilir.</li>
	<li>TQ'lu MS/MS sistemlerinde kullanılan standart mod olan çoklu reaksiyon izleme (MRM) modunu kullanarak analitleri analiz edin. NOT: Tablo 1 , çok sınıflı pestisitler, P-IS ve I-IS için alıkonma sürelerini (dakika cinsinden) ve niceleyici ve niteleyici geçişlerini sağlar. Kantitatif analiz, kantitasyon iyonunun tepe alanının P-IS iyonuna oranına dayanır. I-IS, enjeksiyon sırasında kalite kontrol için kullanılır. Ek Dosya 1 , analiz edilen 45 pestisitin tümü için kromatogramlar içerir.</li>
	<li>Veri analizi için Postrun Analysis yazılımını açın. NOT: Cihaz sistemi varsayılan olarak GCMS Postrun Analysis yazılımını içerir.</li>
	<li>Analiz edilecek enjeksiyona tıklayın, analitleri içeren tabloda gezinin ve ilgilenilen zirveyi seçin.</li>
	<li>Kromatogramı görselleştirmek için zirveye veya ilgilenilen bölgeye tıklayın. En yüksek entegrasyonları gözden geçirin ve gerekirse manuel entegrasyon gerçekleştirin. Gerekli hesaplamaları ve yöntem değerlendirmesini gerçekleştirmek için tüm analitlerin alanlarını doğrulayın.</li>
</ol>

Avokadodaki Pestisitlerin QuEChERS Yöntemi ve CG-MS/MS Kullanılarak Analiz Edilmesi

<ol>
	<li>Raposo, F., Barcel&#243;, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+and+strategies+of+matrix+effects+using+chromatography-mass+spectrometry:+An+overview+from+research+versus+regulatory+viewpoints.">Challenges and strategies of matrix effects using chromatography-mass spectrometry: An overview from research versus regulatory viewpoints.</a> Trends Analyt Chem. 134, 116068 (2021).</li><li>Rahman, M. M., Abd El-Aty, A. M., Shim, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+enhancement+effect:+a+blessing+or+a+curse+for+gas+chromatography?-A+review.">Matrix enhancement effect: a blessing or a curse for gas chromatography?-A review.</a> Anal Chim Acta. 801, 14-21 (2013).</li><li>Poole, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix-induced+response+enhancement+in+pesticide+residue+analysis+by+gas+chromatography.">Matrix-induced response enhancement in pesticide residue analysis by gas chromatography.</a> J Chromatogr A. 1158 (1-2), 241-250 (2007).</li><li>Anastassiades, M., Ma&#353;tovsk&#225;, K., Lehotay, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+analyte+protectants+to+improve+gas+chromatographic+analysis+of+pesticides.">Evaluation of analyte protectants to improve gas chromatographic analysis of pesticides.</a> J Chromatogr A. 1015 (1-2), 163-184 (2003).</li><li>Trufelli, H., Palma, P., Famiglini, G., Cappiello, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+matrix+effects+in+liquid+chromatography-mass+spectrometry.">An overview of matrix effects in liquid chromatography-mass spectrometry.</a> Mass Spectrom Reviews. 30 (3), 491-509 (2011).</li><li>European Commission SANTE/11312/2021. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidance+document+on+analytical+quality+control+and+method+validation+procedures+for+pesticide+residues+analysis+in+food+and+feed.">Guidance document on analytical quality control and method validation procedures for pesticide residues analysis in food and feed.</a> European Commission. , (2021).</li><li>Kwon, H., Lehotay, S. J., Geis-Asteggiante, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variability+of+matrix+effects+in+liquid+and+gas+chromatography-mass+spectrometry+analysis+of+pesticide+residues+after+QuEChERS+sample+preparation+of+different+food+crops.">Variability of matrix effects in liquid and gas chromatography-mass spectrometry analysis of pesticide residues after QuEChERS sample preparation of different food crops.</a> J Chromatogr A. 1270, 235-245 (2012).</li><li>Lehotay, S. J., Ma&#353;tovsk&#225;, K., Yun, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+two+fast+and+easy+methods+for+pesticide+residue+analysis+in+fatty+food+matrixes.">Evaluation of two fast and easy methods for pesticide residue analysis in fatty food matrixes.</a> J AOAC Int. 88 (2), 630-638 (2005).</li><li>Gonz&#225;lez-Curbelo, M. &. #. 1. 9. 3. ;., Gonz&#225;lez-S&#225;lamo, J., Varela-Mart&#237;nez, D. A., Hern&#225;ndez-Borges, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+pesticide+residues+in+pollen+and+dairy+products.">Analysis of pesticide residues in pollen and dairy products.</a> Sustainable Agriculture Reviews 47. 47, 47-89 (2020).</li><li>Madej, K., Kalenik, T. K., Piekoszewski, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+preparation+and+determination+of+pesticides+in+fat-containing+foods.">Sample preparation and determination of pesticides in fat-containing foods.</a> Food Chem. 269, 527-541 (2018).</li><li>Yanty, N. A. M., Marikkar, J. M. N., Long, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+varietal+differences+on+composition+and+thermal+characteristics+of+avocado+oil.">Effect of varietal differences on composition and thermal characteristics of avocado oil.</a> J Am Oil Chem Soc. 88, 1997-2003 (2011).</li><li>Pano-Farias, N. S., Ceballos-Maga&#241;a, S. G., Muniz-Valencia, R., Gonzalez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+and+assessment+of+matrix+effect+and+uncertainty+of+a+gas+chromatography+coupled+to+mass+spectrometry+method+for+pesticides+in+papaya+and+avocado+samples.">Validation and assessment of matrix effect and uncertainty of a gas chromatography coupled to mass spectrometry method for pesticides in papaya and avocado samples.</a> J Food Drug Anal. 25 (3), 501-509 (2017).</li><li>Pano-Farias, N. S., Ceballos-Maga&#241;a, S. G., Jurado, J. M., Aguayo-Villarreal, I. A., Mu&#241;iz-Valencia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytical+method+for+pesticides+in+avocado+and+papaya+by+means+of+ultra-high+performance+liquid+chromatography+coupled+to+a+triple+quadrupole+mass+detector:+Validation+and+uncertainty+assessment.">Analytical method for pesticides in avocado and papaya by means of ultra-high performance liquid chromatography coupled to a triple quadrupole mass detector: Validation and uncertainty assessment.</a> J Food Sci. 83 (8), 2265-2272 (2018).</li><li>Pano-Farias, N. S., Ceballos-Maga&#241;a, S. G., Gonzalez, J., Jurado, J. M., Mu&#241;iz-Valencia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supercritical+fluid+chromatography+with+photodiode+array+detection+for+pesticide+analysis+in+papaya+and+avocado+samples.">Supercritical fluid chromatography with photodiode array detection for pesticide analysis in papaya and avocado samples.</a> J Sep Sci. 38 (7), 1240-1247 (2015).</li><li>Lozano, A., Rajski, &. #. 3. 2. 1. ;., Ucl&#233;s, S., Belmonte-Valles, N., Mezcua, M., Fern&#225;ndez-Alba, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+zirconium+dioxide-based+sorbents+to+decrease+the+matrix+effect+in+avocado+and+almond+multiresidue+pesticide+analysis+followed+by+gas+chromatography+tandem+mass+spectrometry.">Evaluation of zirconium dioxide-based sorbents to decrease the matrix effect in avocado and almond multiresidue pesticide analysis followed by gas chromatography tandem mass spectrometry.</a> Talanta. 118, 68-83 (2014).</li><li>Han, L., Matarrita, J., Sapozhnikova, Y., Lehotay, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+recent+product+to+remove+lipids+and+other+matrix+co-extractives+in+the+analysis+of+pesticide+residues+and+environmental+contaminants+in+foods.">Evaluation of a recent product to remove lipids and other matrix co-extractives in the analysis of pesticide residues and environmental contaminants in foods.</a> J Chromatogr A. 1449, 17-29 (2016).</li><li>Chamkasem, N., Ollis, L. W., Harmon, T., Lee, S., Mercer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+136+pesticides+in+avocado+using+a+modified+QuEChERS+method+with+LC-MS/MS+and+GC-MS/MS.">Analysis of 136 pesticides in avocado using a modified QuEChERS method with LC-MS/MS and GC-MS/MS.</a> J Agric Food Chem. 61 (10), 2315-2329 (2013).</li><li>Rajski, &. #. 3. 2. 1. ;., Lozano, A., Ucl&#233;s, A., Ferrer, C., Fern&#225;ndez-Alba, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+pesticide+residues+in+high+oil+vegetal+commodities+by+using+various+multi-residue+methods+and+clean-ups+followed+by+liquid+chromatography+tandem+mass+spectrometry.">Determination of pesticide residues in high oil vegetal commodities by using various multi-residue methods and clean-ups followed by liquid chromatography tandem mass spectrometry.</a> J Chromatogr A. 1304, 109-120 (2013).</li><li>Hern&#225;ndez-Borges, J., Ravelo-P&#233;rez, L. M., Hern&#225;ndez-Su&#225;rez, E. M., Carnero, A., Rodr&#237;guez-Delgado, M. &. #. 1. 9. 3. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+abamectin+residues+in+avocados+by+high-performance+liquid+chromatography+with+fluorescence+detection.">Analysis of abamectin residues in avocados by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection.</a> J Chromatogr A. 1165 (1-2), 52-57 (2007).</li><li>Moreno, J. F., Li&#233;banas, F. A., Frenich, A. G., Vidal, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+different+sample+treatments+for+determining+pesticide+residues+in+fat+vegetable+matrices+like+avocado+by+low-pressure+gas+chromatography-tandem+mass+spectrometry.">Evaluation of different sample treatments for determining pesticide residues in fat vegetable matrices like avocado by low-pressure gas chromatography-tandem mass spectrometry.</a> J Chromatogr A. 1111 (1), 97-105 (2006).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commission+Directive+2002/63/EC+of+11+July+2002+establishing+Community+methods+of+sampling+for+the+official+control+of+pesticide+residues+in+and+on+products+of+plant+and+animal+origin+and+repealing+Directive+79/700/EEC.">Commission Directive 2002/63/EC of 11 July 2002 establishing Community methods of sampling for the official control of pesticide residues in and on products of plant and animal origin and repealing Directive 79/700/EEC.</a> Official Journal of the European Union. L187, 30-43 (2002).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=European+Regulation,+396/2005,+Regulation+(EC)+NO+396/2005+of+the+European+Parliament+and+of+the+Council+of+23+February+2005+on+maximum+residue+levels+of+pesticides+in+or+on+food+and+feed+of+plant+and+animal+origin+and+amending+Council+Directive+91/414/EEC.">European Regulation, 396/2005, Regulation (EC) NO 396/2005 of the European Parliament and of the Council of 23 February 2005 on maximum residue levels of pesticides in or on food and feed of plant and animal origin and amending Council Directive 91/414/EEC.</a> Official Journal of the European Union. L70, 1-16 (2005).</li><li>Gonz&#225;lez-Curbelo, M. &. #. 1. 9. 3. ;., Lehotay, S. J., Hern&#225;ndez-Borges, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+modified+QuEChERS+version+for+high-throughput+analysis+of+a+wide+range+of+pesticides+in+foods.">Validation of a modified QuEChERS version for high-throughput analysis of a wide range of pesticides in foods.</a> Abstracts of Papers of the American Chemical Society. 246, (2013).</li><li>Gonz&#225;lez-Curbelo, M. &. #. 1. 9. 3. ;., Lehotay, S. J., Hern&#225;ndez-Borges, J., Rodr&#237;guez Delgado, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ammonium+formate+buffer+in+QuEChERS+for+high+throughput+analysis+of+pesticides+in+food+by+fast,+low-pressure+GC-MS/MS+and+LC-MS/MS.">Ammonium formate buffer in QuEChERS for high throughput analysis of pesticides in food by fast, low-pressure GC-MS/MS and LC-MS/MS.</a> Abstracts of Papers of the American Chemical Society. 248, (2014).</li><li>Gonz&#225;lez-Curbelo, M. &. #. 1. 9. 3. ;., Lehotay, S. J., Hern&#225;ndez-Borges, J., Rodr&#237;guez-Delgado, M. &. #. 1. 9. 3. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+ammonium+formate+in+QuEChERS+for+high-throughput+analysis+of+pesticides+in+food+by+fast,+low-pressure+gas+chromatography+and+liquid+chromatography+tandem+mass+spectrometry.">Use of ammonium formate in QuEChERS for high-throughput analysis of pesticides in food by fast, low-pressure gas chromatography and liquid chromatography tandem mass spectrometry.</a> J Chromatogr A. 1358, 75-84 (2014).</li><li>Varela-Mart&#237;nez, D. A., Gonz&#225;lez-S&#225;lamo, J., Gonz&#225;lez-Curbelo, M. &. #. 1. 9. 3. ;., Quick Hern&#225;ndez-Borges, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quick,+easy,+cheap,+effective,+rugged,+and+safe+(QuEChERS)+extraction.">Quick, easy, cheap, effective, rugged, and safe (QuEChERS) extraction.</a> Handbooks in Separation Science. , 399-437 (2020).</li><li>Gonz&#225;lez-Curbelo, M. &. #. 1. 9. 3. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+organochlorine+pesticides+in+a+soil+sample+by+a+modified+QuEChERS+approach+using+ammonium+formate.">Analysis of organochlorine pesticides in a soil sample by a modified QuEChERS approach using ammonium formate.</a> J Vis Exp. 191, e64901 (2023).</li><li>Gonz&#225;lez-Curbelo, M. &. #. 1. 9. 3. ;., Dionis-Delgado, S., Asensio-Ramos, M., Hern&#225;ndez-Borges, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pesticide+analysis+in+toasted+barley+and+chickpea+flours.">Pesticide analysis in toasted barley and chickpea flours.</a> J Sep Sci. 35 (2), 299-307 (2012).</li><li>Varela-Mart&#237;nez, D. A., Gonz&#225;lez-Curbelo, M. &. #. 1. 9. 3. ;., Gonz&#225;lez-S&#225;lamo, J., Hern&#225;ndez-Borges, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+analysis+of+pesticides+in+minor+tropical+fruits+from+Colombia.">High-throughput analysis of pesticides in minor tropical fruits from Colombia.</a> Food Chem. 280, 221-230 (2019).</li><li>Li, L., Li, W., Qin, D. M., Jiang, S. R., Liu, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+graphitized+carbon+black+to+the+QuEChERS+method+for+pesticide+multiresidue+analysis+in+spinach.">Application of graphitized carbon black to the QuEChERS method for pesticide multiresidue analysis in spinach.</a> J AOAC Int. 92 (2), 538-547 (2009).</li></ol>

Yazarların açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Matris eşleştirmeli kalibrasyon ile ilişkili birincil sınırlama, kalibrasyon standartları olarak boş numunelerin kullanılmasından kaynaklanmaktadır. Bu, analiz için işlenecek numune sayısının artmasına ve her analitik dizide matris bileşenlerinin daha fazla enjeksiyonuna yol açarak potansiyel olarak daha yüksek cihaz bakım taleplerine yol açar. Bununla birlikte, bu strateji, her numune için bir kalibrasyon eğrisi gerçekleştirme ihtiyacı nedeniyle enjekte edilecek çok daha fazla sayıda numune ?...

Kimyasal analizde, matris etkisi (ME) çeşitli şekillerde tanımlanabilir, ancak yaygın olarak kabul edilen genel bir tanım şu şekildedir: sinyaldeki değişikliği, özellikle spesifik bir analitin analizi sırasında numune matrisi veya bunun bir kısmı mevcut olduğunda kalibrasyon eğrisinin eğimindeki bir değişikliği ifade eder. Kritik bir husus olarak, ME, hedef analitler için kantitatif ölçümün doğruluğunu doğrudan etkilediğinden, herhangi bir analitik yöntemin doğrulama süreci sırasında kapsamlı bir araştırma gerektirir1. İdeal olarak, bir numune ön işlem prosedürü, numune matrisinden herhangi bir bileşenin çıkarılmasını önleyecek kadar seçici olmalıdır. Bununla birlikte, önemli çabalara rağmen, bu matris bileşenlerinin çoğu, çoğu durumda hala nihai belirleme sistemlerinde sona ermektedir. Sonuç olarak, bu tür matris bileşenleri genellikle geri kazanım ve hassasiyet değerlerini tehlikeye atar, ek gürültüye neden olur ve yöntemde yer alan toplam maliyeti ve işçiliği artırır.
Gaz kromatografisinde (GC), ME, GC sistemi içinde çeşitli mekanizmalar yoluyla hedef analitlerle etkileşime giren aktif bölgelerin varlığına bağlı olarak ortaya çıkar. Bir yandan, matris bileşenleri, aksi takdirde hedef analitlerle etkileşime girecek olan bu aktif bölgeleri bloke eder veya maskeler, bu da sık sık sinyal artışınaneden olur 2. Öte yandan, engellenmeden kalan aktif bölgeler, güçlü etkileşimler nedeniyle pik kuyruğuna veya analit ayrışmasına neden olabilir ve bu da negatif bir ME'ye yol açabilir. Bununla birlikte, bu, belirli durumlarda potansiyel faydalar sağlayabilir2. Bir GC sisteminde tam eylemsizlik elde etmenin, yüksek derecede inert bileşenler kullanılmasına ve uygun bakıma rağmen son derece zor olduğunu vurgulamak çok önemlidir. Sürekli kullanımla, GC sistemindeki matris bileşenlerinin birikimi daha belirgin hale gelir ve bu da ME'nin artmasına neden olur. Günümüzde, oksijen, azot, fosfor, kükürt ve benzeri elementler içeren analitlerin, bu aktif bölgelerle kolayca etkileşime girdikleri için daha büyük bir ME sergiledikleri yaygın olarak kabul edilmektedir. Tersine, hidrokarbonlar veya organohalojenler gibi oldukça kararlı bileşikler bu tür etkileşimlere maruz kalmaz ve analiz sırasında gözlemlenebilir ME göstermezler 2,3.
Genel olarak, ME tamamen ortadan kaldırılamaz, bu da matris bileşenlerinin tamamen çıkarılmasının mümkün olmadığı durumlarda telafi veya düzeltme için çeşitli stratejilerin geliştirilmesine yol açar. Bu stratejiler arasında, döteryumlu iç standartların (IS'ler), analit koruyucuların, matris uyumlu kalibrasyonun, standart ekleme yönteminin veya enjeksiyon tekniklerinin modifikasyonunun kullanımı bilimsel literatürde belgelenmiştir 1,2,4,5. SANTE/11312/2021 yönergeleri de bu stratejileri önermiştir6.
ME'leri telafi etmek için matris eşleştirmeli kalibrasyonun uygulanmasıyla ilgili olarak, pratik durumlarda numune dizileri, çeşitli gıda türlerini veya aynı emtiadan çeşitli numuneleri kapsar. Bu durumda, aynı emtiadan herhangi bir numunenin kullanılmasının, tüm numunelerde ME'yi etkili bir şekilde telafi edeceği varsayımı yapılır. Bununla birlikte, mevcut literatürde bu konuyu özel olarak araştıran yeterli çalışma eksikliği vardır7.
Kayda değer bir oranda yağ ve pigment içeren matrislerdeki pestisitlerin çoklu kalıntı tayini zorlu bir görev teşkil eder. Önemli miktarda birlikte ekstrakte edilen malzeme, ekstraksiyon verimliliğini önemli ölçüde etkileyebilir ve sonraki kromatografik belirlemeye müdahale edebilir, kolona, kaynağa ve dedektöre potansiyel olarak zarar verebilir ve önemli ME'lereneden olabilir 8,9,10. Sonuç olarak, pestisitlerin bu tür matrislerde eser seviyelerde analizi, yüksek geri kazanım değerleri sağlarken, analizden önce matris bileşenlerinde önemli bir azalma gerektirir7. Pestisit analizlerinin güvenilir, doğru ve düzenleyici standartlarla uyumlu kalmasını sağlamak için yüksek geri kazanım değerleri elde etmek çok önemlidir. Bu, tarım ve ilgili alanlarda gıda güvenliği, çevre koruma ve bilinçli karar vermenin sağlanması için hayati önem taşır.
Avokado, dünya çapında tropikal ve Akdeniz iklimlerinde yetiştirilen ve hem menşe bölgelerinde hem de çok sayıda ihracat pazarında yaygın olarak tüketilen, ticari değeri yüksek bir meyvedir. Analitik bakış açısına göre, avokado, fındıklara benzer şekilde önemli sayıda yağ asidi (yani oleik, palmitik ve linoleik), yeşil yapraklarda olduğu gibi önemli bir pigment içeriği ve ayrıca diğer meyvelerde bulunanlara benzer şekerler ve organik asitler içeren karmaşık bir matristir11. Yağlı doğası nedeniyle, analiz için herhangi bir analitik yöntem kullanılırken özel dikkat gösterilmelidir. Bazı durumlarda 8,12,13,14,15,16,17,18,19,20 GC-MS kullanılarak avokado üzerinde pestisit kalıntı analizi yapılmış olsa da, diğer matrislere kıyasla nispeten daha az sıklıkta olmuştur. Çoğu durumda, Quick-E asy-Ch eap-E fuffective-R ugged-S afe (QuEChERS) yönteminin bir versiyonu uygulanmıştır 8,12,13,14,15,16,17,18. Bu çalışmaların hiçbiri, farklı avokado çeşitleri arasındaki ME'lerin tutarlılığını araştırmamıştır.
Bu nedenle, bu çalışmanın amacı, amonyum format ve GC-MS/MS ile QuEChERS yöntemini kullanarak farklı avokado türlerinde (yani Criollo, Hass ve Lorena) 45 temsili pestisit için ME'lerin tutarlılığını ve geri kazanım değerlerini incelemekti. Bildiğimiz kadarıyla, bu tür yağlı matris örnekleri üzerinde bu tür bir çalışma ilk kez gerçekleştirilmektedir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-Ethoxy-1,2-propanediol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>260428-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1006652500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium formate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>156264-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AOAC 20i/s autosampler</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td>221-723115-58</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic shaker MX-T6-PRO</td>
			<td>SCILOGEX</td>
			<td>8.23222E+11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balance</td>
			<td>OHAUS</td>
			<td>PA224</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes, 15 mL</td>
			<td>Nest</td>
			<td>601002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes, 2 mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>4610-1815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes, 50 mL</td>
			<td>Nest</td>
			<td>602002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Z206A</td>
			<td>MERMLE</td>
			<td>6019500118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Choper 2L</td>
			<td>Oster</td>
			<td>2114111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Column SH-Rxi-5sil MS, 30 m x 0.25 mm, 0.25 &#181;m</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td>221-75954-30</td>
			<td>MS GC column&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispensette 5-50 mL</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>4600361</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DSC-18</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>52600-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Sorbitol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>240850-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1313181212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GCMS-TQ8040&#160;</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td>211552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphitized carbon black</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>57210-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection syringe</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td>LC2213461800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Gulonic acid &#947;-lactone</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>310301-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linner splitless</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td>221-4887-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate anhydrus</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M7506-2KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>131091.12.12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q ultrapure (type 1) water</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>F4H4783518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips 10 - 100 &#181;L</td>
			<td>Biologix</td>
			<td>200010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips 100 - 1000 &#181;L</td>
			<td>Brand</td>
			<td>541287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips 20 - 200 &#181;L</td>
			<td>Brand</td>
			<td>732028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes Pasteur</td>
			<td>NORMAX</td>
			<td>5426023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pippette Transferpette S variabel 10 - 100 &#181;L</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>704774</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pippette Transferpette S variabel 100 - 1000 &#181;L</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>704780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pippette Transferpette S variabel 20 - 200 &#181;L</td>
			<td>SCILOGEX</td>
			<td>7.12111E+11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary-secondary amine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>52738-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shikimic acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5375-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Filter PTFE/L 25 mm, 0.45 &#181;m</td>
			<td>NORMAX</td>
			<td>FE2545I</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triphenyl phosphate (QC)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>241288-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vials with fused-in insert</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>29398-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Z-SEP+</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>55299-U</td>
			<td>zirconium oxide-based sorbent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pesticides</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CAS registry number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4,4&#180;-DDD</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>35486-250MG</td>
			<td>72-54-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4,4&#180;-DDE</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>35487-100MG</td>
			<td>72-55-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4,4&#180;-DDT</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>31041-100MG</td>
			<td>50-29-3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alachlor</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45316-250MG</td>
			<td>15972-60-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aldrin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36666-25MG</td>
			<td>309-00-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atrazine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45330-250MG-R</td>
			<td>1912-24-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atrazine-d5 (IS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>34053-10MG-R</td>
			<td>163165-75-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprofezin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>37886-100MG</td>
			<td>69327-76-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbofuran</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32056-250-MG</td>
			<td>1563-66-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorpropham</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45393-250MG</td>
			<td>101-21-3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorpyrifos</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45395-100MG</td>
			<td>2921-88-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorpyrifos-methyl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45396-250MG</td>
			<td>5598-13-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deltamethrin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45423-250MG</td>
			<td>52918-63-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloran</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45435-250MG</td>
			<td>99-30-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichlorvos</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45441-250MG</td>
			<td>62-73-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dieldrin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>33491-100MG-R</td>
			<td>60-57-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diphenylamine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45456-250MG</td>
			<td>122-39--4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endosulfan A</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32015-250MG</td>
			<td>115-29-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endrin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32014-250MG</td>
			<td>72-20-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EPN</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36503-100MG</td>
			<td>2104-64-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Esfenvalerate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>46277-100MG</td>
			<td>66230-04-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethion</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45477-250MG</td>
			<td>563-12-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fenamiphos</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45483-250MG</td>
			<td>22224-92-6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fenitrothion</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45487-250MG</td>
			<td>122-14-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fenthion</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36552-250MG</td>
			<td>55-38-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fenvalerate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45495-250MG</td>
			<td>51630-58-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCB</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45522-250MG</td>
			<td>118-74-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iprodione</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36132-100MG</td>
			<td>36734-19-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lindane</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45548-250MG</td>
			<td>58-89-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malathion</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36143-100MG</td>
			<td>121-75-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metalaxyl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32012-100MG</td>
			<td>57837-19-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methidathion</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36158-100MG</td>
			<td>950-37-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myclobutanil</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>34360-100MG</td>
			<td>88671-89-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxyfluorfen</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>35031-100MG</td>
			<td>42874-03-3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parathion-methyl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36187-100MG</td>
			<td>298-00-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penconazol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36189-100MG</td>
			<td>66246-88-6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pirimiphos-methyl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32058-250MG</td>
			<td>29232-93-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propiconazole</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45642-250MG</td>
			<td>60207-90-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propoxur</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45644-250MG</td>
			<td>114-26-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propyzamide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45645-250MG</td>
			<td>23850-58-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyriproxifen</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>34174-100MG</td>
			<td>95737-68-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tolclofos-methyl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>31209-250MG</td>
			<td>5701804-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triadimefon</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>45693-250MG</td>
			<td>43121-43-3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triflumizole</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32611-100MG</td>
			<td>68694-11-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-HCH</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>33377-50MG</td>
			<td>319-86-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-HCH</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>33376-100MG</td>
			<td>319-85-7</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

determination of 45 pesticides in avocado varieties by the quechers method and gas chromatography-tandem mass spectrometry

Gaz kromatografisi (GC) tandem kütle spektrometresi (MS/MS), gıdalardaki pestisit kalıntılarının gözetimi için yaygın olarak kullanılan önde gelen bir analitik araçtır. Bununla birlikte, bu yöntemler, analit ve matrisin spesifik kombinasyonuna bağlı olarak doğru miktar tayinini potansiyel olarak etkileyebilen matris etkilerine (ME'ler) karşı savunmasızdır. ME'leri azaltmaya yönelik çeşitli stratejiler arasında, matris uyumlu kalibrasyon, maliyet etkinliği ve basit uygulaması nedeniyle pestisit kalıntı uygulamalarında hakim yaklaşımı temsil eder. Bu çalışmada, üç farklı avokado çeşidinde (yani Criollo, Hass ve Lorena) toplam 45 temsili pestisit, Quick-E asy-Ch eap-E etkili-Rugged-S afe (QuEChERS) yöntemi kullanılarak amonyum format ve GC-MS/MS ile analiz edilmiştir.
Bu amaçla, 5 g avokado numunesi 10 mL asetonitril ile ekstrakte edildi ve daha sonra faz ayrımını indüklemek için 2.5 g amonyum format ilave edildi. Daha sonra, süpernatant, 150 mg susuzMgS4, 50 mg birincil-ikincil amin, 50 mg oktadesilsilan, 10 mg grafitleştirilmiş karbon siyahı ve 60 mg zirkonyum oksit bazlı sorbent (Z-Sep+) kullanılarak dağıtıcı katı faz ekstraksiyonu yoluyla bir temizleme işlemine tabi tutuldu. GC-MS/MS analizi 25 dakikadan daha kısa bir sürede başarıyla gerçekleştirildi. Yöntemin performansını değerlendirmek için titiz doğrulama deneyleri yapılmıştır. Her bir avokado çeşidi için matris eşleştirilmiş bir kalibrasyon eğrisinin incelenmesi, ME'nin çoğu pestisit / çeşit kombinasyonu için nispeten tutarlı ve %20'den az (yumuşak bir ME olarak kabul edilir) kaldığını ortaya koydu. Ayrıca, yöntemin miktar belirleme limitleri, her üç çeşit için de 5 μg/kg'dan düşüktü. Son olarak, çoğu pestisit için geri kazanım değerleri, nispi standart sapma değerleri %20'nin altında olmak üzere, kabul edilebilir %70-120 aralığında kalmıştır.

In chemical analysis, the matrix effect (ME) can be defined in various ways, but a widely accepted general definition is as follows: it refers to the change in the signal, particularly a change in the slope of the calibration curve when the sample matrix or portion of it is present during the analysis of a specific analyte. As a critical aspect, ME necessitates thorough investigation during the validation process of any analytical method, as it directly affects the accuracy of quantitative measurement for the target analytes1. Ideally, a sample pretreatment procedure should be selective enough to avoid extracting any components from the sample matrix. However, despite significant efforts, many of these matrix components still end up in the final determination systems in most cases. Consequently, such matrix components often compromise the recovery and precision values, introduce additional noise, and escalate the overall cost and labor involved in the method.
In gas chromatography (GC), ME arises due to the presence of active sites within the GC system, which interact with the target analytes through various mechanisms. On the one hand, the matrix constituents block or mask these active sites that would otherwise interact with the target analytes, resulting in frequent signal enhancement2. On the other hand, active sites that remain unobstructed may cause peak tailing or analyte decomposition due to strong interactions, leading to a negative ME. However, this can offer potential benefits in certain cases2. It is crucial to emphasize that achieving complete inertness in a GC system is exceedingly challenging, despite using highly inert components and proper maintenance. With continuous use, the accumulation of matrix components in the GC system becomes more pronounced, causing an increased ME. Nowadays, it is widely recognized that analytes containing oxygen, nitrogen, phosphorus, sulfur, and similar elements, exhibit a greater ME as they readily interact with these active sites. Conversely, highly stable compounds such as hydrocarbons or organohalogens do not undergo such interactions and do not show observable ME during analysis2,3.
Overall, ME cannot be fully eliminated, leading to the development of several strategies for compensation or correction when complete removal of matrix components is not feasible. Among these strategies, the utilization of deuterated internal standards (ISs), analyte protectants, matrix-matched calibration, the standard addition method, or the modification of injection techniques have been documented in scientific literature1,2,4,5. The SANTE/11312/2021 guidelines have also recommended these strategies6.
Regarding the application of matrix-matched calibration to compensate for MEs, sample sequences in practical situations encompass diverse types of foods or various samples from the same commodity. In this case, the assumption is made that employing any sample from the same commodity will effectively compensate for ME in all samples. However, there is a lack of sufficient studies in the existing literature that specifically investigate this issue7.
The multiresidue determination of pesticides in matrices containing an appreciable percentage of fat and pigments constitutes a challenging task. The considerable amount of coextracted material can significantly affect the extraction efficiency and interfere with the subsequent chromatographic determination, potentially damaging the column, source, and detector, and resulting in significant MEs8,9,10. Consequently, the analysis of pesticides at trace levels in such matrices necessitates a significant reduction of matrix components before analysis while ensuring high recovery values7. Obtaining high recovery values is crucial to ensure that pesticide analyses remain reliable, accurate, and compliant with regulatory standards. This is vital for ensuring food safety, environmental protection, and informed decision-making in agriculture and related fields.
Avocado is a fruit of high commercial value cultivated in tropical and Mediterranean climates worldwide and widely consumed both in its regions of origin and in the numerous export markets. From the analytical point of view, avocado is a complex matrix containing a significant number of fatty acids (i.e., oleic, palmitic, and linoleic), similar to nuts, a significant pigment content, as in green leaves, as well as sugars and organic acids, similar to those found in other fruits11. Due to its fatty nature, special attention must be given when employing any analytical method for analysis. While pesticide residue analysis has been conducted on avocados using GC-MS in some instances8,12,13,14,15,16,17,18,19,20, it has been relatively less frequent compared to other matrices. In most cases, a version of the Quick-Easy-Cheap-Effective-Rugged-Safe (QuEChERS) method has been applied8,12,13,14,15,16,17,18. None of these studies have investigated the consistency of MEs among different avocado varieties.
Therefore, the aim of this work was to study the consistency of MEs and recovery values for 45 representative pesticides across different varieties of avocado (i.e., Criollo, Hass, and Lorena) using the QuEChERS method with ammonium formate and GC-MS/MS. To the best of our knowledge, this is the first time that this type of study has been conducted on such fatty matrix samples.

Pestisit Analizi için Amonyum Format ile QuEChERS Yöntemi Kullanılarak Avokado Numunesi Hazırlama

Avokado Çeşitlerinde Bulunan 45 Pestisitin QuEChERS Yöntemi ve Gaz Kromatografisi-Tandem Kütle Spektrometresi ile Belirlenmesi

To begin the sample preparation using the QuEChERS method, weigh five grams of an avocado sample of interest in a 50 milliliter centrifuge tube. Add 50 microliters of the procedural internal standard or P-IS solution to the tube. Add 10 milliliters of aceto nitrile to the centrifuge tube and shake the tube at 70 RPM for five minutes.Then add 2.5 grams of ammonium formate to it and shake the tube again at 70 RPM for five minutes. Subsequently, centrifuge the tube at 1, 800 G for five minutes. Next, in a two milliliter centrifuge tube, take the appropriate amounts of the reagents displayed on the screen.Then add one milliliter of the extract into the tube for purification using dispersive solid phase extraction. Vortex the tube for 30 seconds before centrifuging it at 1, 800 G for five minutes. Transfer 200 microliters of the purified extract to an auto-sampler vial, and add 20 microliters of the analyte protectant solution, followed by adding 50 microliters of a pre-prepared triphenyl phosphate solution.Finally, perform instrumental analysis using a GC-MS/MS system.

Analitik yöntemin kapsamlı doğrulaması, doğrusallık, ME, geri kazanım ve tekrarlanabilirlik değerlendirmelerini kapsayan SANTE/11312/2021 yönergelerine6'ya göre gerçekleştirilmiştir.
Doğrusallık değerlendirmesi için, matris eşleştirilmiş kalibrasyon eğrileri, çoklu konsantrasyon seviyelerinde (5 ila 600 μg/kg arasında değişen) çivili boş numuneler kullanılarak oluşturulmuştur. Seçilen pestisitlerin çoğu için belirleme katsayılarının...

Read this Scientific Article Protocol about Author Spotlight: A Matrix-Matched Calibration Approach for Mitigating Matrix Effects in Avocado Pesticide Residue Analysis at JoVE.com

Mevcut protokol, avokado çeşitlerinde çok sınıflı pestisit kalıntılarının Quick-E asy-Ch eap-E etkili-Rugged-S afe (QuEChERS) yöntemi kullanılarak amonyum format ile analizini ve ardından gaz kromatografisi-tandem kütle spektrometresini açıklamaktadır.

Gas chromatography (GC) tandem mass spectrometry (MS/MS) stands as a preeminent analytical instrument extensively employed for the surveillance of ...

QuEChERS yöntemini kullanarak numune hazırlamaya başlamak için, 50 mililitrelik bir santrifüj tüpünde ilgilenilen bir avokado numunesinin beş gramını tartın. Tüpe 50 mikrolitre prosedürel dahili standart veya P-IS çözeltisi ekleyin. Santrifüj tüpüne 10 mililitre aseto nitril ekleyin ve tüpü 70 RPM'de beş dakika çalkalayın.Daha sonra üzerine 2.5 gram amonyum format ekleyin ve tüpü beş dakika boyunca 70 RPM'de tekrar çalkalayın. Daha sonra, tüpü beş dakika boyunca 1.800 G'de santrifüjleyin. Daha sonra, iki mililitrelik bir santrifüj tüpünde, ekranda görüntülenen reaktiflerin uygun miktarlarını alın.Daha sonra, dağıtıcı katı faz ekstraksiyonu kullanılarak saflaştırma için tüpe bir mililitre ekstrakt ekleyin. Beş dakika boyunca 1.800 G'de santrifüjlemeden önce tüpü 30 saniye boyunca vorteksleyin. Saflaştırılmış ekstraktın 200 mikrolitresini bir otomatik örnekleyici şişesine aktarın ve 20 mikrolitre analit koruyucu solüsyon ekleyin, ardından 50 mikrolitre önceden hazırlanmış bir trifenil fosfat solüsyonu ekleyin.Son olarak, bir GC-MS/MS sistemi kullanarak enstrümantal analiz gerçekleştirin.

determination-45-pesticides-avocado-varieties-quechers-method-gas

Research

JoVE Journal

Chemistry

Determination of 45 Pesticides in Avocado Varieties by the QuEChERS Method and Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

408 Görüntüleme.  Universidad EAN. QuEChERS yöntemini kullanarak numune hazırlamaya başlamak için, 50 mililitrelik bir santrifüj tüpünde ilgilenilen bir avokado numunesinin beş gramını tartın. Tüpe 50 mikrolitre prosedürel dahili standart veya P-IS çözeltisi ekleyin. Santrifüj tüpüne 10 mililitre aseto nitril ekleyin ve tüpü 70 RPM'de beş dakika çalkalayın.Daha sonra üzerine 2.5 gram amonyum format ekleyin ve tüpü beş dakika boyunca 70 RPM'de tekrar çalkalayın. Daha sonra, tüpü beş dakika...

Video: Pestisit Analizi için Amonyum Format ile QuEChERS Yöntemi Kullanılarak Avokado Numunesi Hazırlama

Gas chromatography (GC) tandem mass spectrometry (MS/MS) stands as a preeminent analytical instrument extensively employed for the surveillance of pesticide residues in food. Nevertheless, these methods are vulnerable to matrix effects (MEs), which can potentially affect accurate quantification depending on the specific combination of analyte and matrix. Among the various strategies to mitigate MEs, matrix-matched calibration represents the prevailing approach in pesticide residue applications due to its cost-effectiveness and straightforward implementation. In this study, a total of 45 representative pesticides were analyzed in three different varieties of avocado (i.e., Criollo, Hass, and Lorena) using the Quick-Easy-Cheap-Effective-Rugged-Safe (QuEChERS) method with ammonium formate and GC-MS/MS. 
For this purpose, 5 g of the avocado sample was extracted with 10 mL of acetonitrile, and then 2.5 g of ammonium formate was added to induce phase separation. Subsequently, the supernatant underwent a cleanup process via dispersive solid-phase extraction employing 150 mg of anhydrous MgSO4, 50 mg of primary-secondary amine, 50 mg of octadecylsilane, 10 mg of graphitized carbon black, and 60 mg of a zirconium oxide-based sorbent (Z-Sep+). The GC-MS/MS analysis was successfully performed in less than 25 min. Rigorous validation experiments were carried out to assess the performance of the method. The examination of a matrix-matched calibration curve for each variety of avocado revealed that the ME remained relatively consistent and less than 20% (considered as a soft ME) for most pesticide/variety combinations. Furthermore, the method&#180;s limits of quantification were lower than 5 &#181;g/kg for all three varieties. Finally, the recovery values for most pesticides fell within the acceptable range of 70-120%, with relative standard deviation values below 20%.

The present protocol describes the analysis of multiclass pesticide residues in avocado varieties using the Quick-Easy-Cheap-Effective-Rugged-Safe (QuEChERS) method with ammonium formate, followed by gas chromatography-tandem mass spectrometry.