Mouse Wound Models and Preparation of Single-Cell Suspensions

המחקר שלנו התמקד בעיקר בהשפעת חבל הטבור של כלי רכב חוץ-תאיים שמקורם ב-MSC על ריפוי פצעים ברמת התא הבודד. והמטרה העיקרית בחלק זה של המחקר היא לבסס מודל מסת פציעה יציבה, חריפה ועובי מלא, המהווה בסיס מכריע לניסויים שלנו. תהליך ריפוי הפצע הוא מורכב ביותר, וכולל משחק גומלין מסונכרן של תאים שונים בזמן ובמרחב.

תא בודד וריצוף הפכו לשיטה העדכנית ביותר לחקר כושר המצאה תאי וחיזוי התמיינות תאים ומסלולי התפתחות במהלך ריפוי העצם. והשגת תרחיף תאים בודדים באיכות גבוהה מרקמות מעוותות היא המפתח למחקר זה. הפרוטוקול שלנו יוצר מודל עכברים פצועים בעובי מלא יותר, מונע בעיות במחזור השיער ובמתח הצד, ומונע שריטות עכבר ופעילות טבעית להשפיע על התוצאות.

ובנוסף, אנו משתמשים באנזימים המעורבים לפירוק יעיל של רקמות, המניב תרחיפי תא בודד באיכות גבוהה. כדי להתחיל, הקצו באופן אקראי עכברים לקבוצות ביקורת וניסוי ושיכנו אותם במתקן ספציפי ללא פתוגנים. ספק לעכברים גישה בלתי מוגבלת למזון סטנדרטי ולמי ברז חיטוי.

אבטח בעדינות את העכבר במצב נוטה ונקה את הבטן בעזרת צמר גפן אלכוהולי. לאחר הרדמת העכבר, מרחו קרם אפילציה על הגב והמתינו שתי דקות. נגב בעדינות את הקרם עם גזה לחה כדי למנוע נזק לעור.

ואז נגב את העור בגזה סטרילית מיובשת. סדרו את אגרוף ביופסיית העור של החיטוי, המספריים, המלקחיים והמטלית הכירורגית הטרייה על פלטפורמה סטרילית. הנח את העכבר המורדם במצב שכיבה וחטא את עור הגב עם שלוש ספוגיות לסירוגין של בטדין ו-70% אלכוהול.

טובלים את החותמת בדיו ומסמנים את החלק האמצעי העליון של גב העכבר. בעזרת מספריים כירורגיים כורתים בזהירות את כל שכבת העור של הגב לאורך הסימן המעגלי, וחושפים את שכבת השריר לחלוטין. השאירו את הפצע פתוח ללא חבישה, ואפשרו לו ליצור גלד באופן טבעי.

יש לתת 0.1 מיליליטר של 10% בופרנורפין הידרוכלוריד תת עורי ליד הפצע. הנח את העכבר בחזרה לכלוב האישי שלו במצב שכיבה. לאחר ההרדמה, התבוננו וצלמו את פצע העכבר כל יומיים כדי למדוד את גודל הפצע.

תת עורית, יש להזריק 100 מיקרוגרם של אקסוזום שמקורו בתאי גזע מזנכימליים מחבל הטבור האנושי סביב אתר החתך של עכבר מורדם מקבוצת הטיפול. הזרקו 200 מיקרוליטר PBS סביב אתר החתך של עכבר קבוצת הביקורת. הנחת פצעים משני צידי העכבר הביאה להבדלים ניכרים באזור הפצע עקב גמישות עור העכבר.

קבוצת הטיפול באקסוזומים שמקורם בתאי גזע מזנכימליים מחבל הטבור האנושי הראתה ריפוי מהיר יותר בהשוואה לקבוצת הביקורת. ריפוי מלא התרחש מהר יותר בדגם הבול מאשר בקבוצת טבעות המתכת התפורות.