עבודה זו נתמכה בחלקו על ידי מענק מNIH מענק R01 GM087609 (לHPL), מתנות מאינגריד Lai וביל שו לכבוד אנתוני שו (לHPL), HL099776 U01 מענק NIH (לMTL), המעבדה Hagey ל ילדים רפואת רגנרטיבית וקרן האלון (לMTL וHPL). GGW נתמכה על ידי בית הספר לרפואה של אוניברסיטת סטנפורד, תכנית הכשרת המדען הרפואי סטנפורד, וGM07365 מענק הכשרת NIGMS. MSH נתמכה על ידי CIRM קליני עמית הדרכת גרנט TG2-01159. WXH נתמכה על ידי מימון מסארנוף הלב וכלי דם הקרן.

הערה: כל ההליכים המתוארים במאמר זה מבוצעים על פי הנחיות שנקבעו על ידי סטנפורד המנהלי הלוח במעבדת טיפול בבעלי חיים (APLAC). 1. מתוזמן הריונות - טכניקת Superovulation (איור 1) הערה: תזמון מדויק גיל ההריון של עוברי עכבר לניתוח עוברי בE16.5 וE18.5 היא בעל חשיבות קריטית. בפירוט שסעיף זה הפרוטוקול שלנו לתזמון הריונות עכבר תוך שימוש בסרום בהריון סוסות (PMS) וזריקות גונדוטרופין כוריוני האנושי (HCG) כדי לגרום לsuperovulation. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק נקבות עכברים (&lt;5 לכלוב) intraperitoneally (IP) עם 3.0-5.0 יחידות בינלאומיות (IU) של PMS בהיקף של 100 μl PBS 1:00-15:00 ליום 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בין שעתי 12:00 ו14:00 יום 3 (ארבעים וחמישה עד 47 שעות לאחר הזרקת PMS), להזריק נקבות עכברי IP עם 3.0-5.0 IU של HCG בהיקף של 100 μl PBS. הערה: גורמת הזרקת HCG<html> ביוץ לאחר הזרקה כ 12 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד לאחר זריקות HCG, להזדווג עם נקבות גברים בגילים 8-16 שבועות. הערה: אנחנו בדרך כלל למקם את שתי נקבות לכלוב של זכרים בודדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקבות נפרדות מזכרים בבוקרו של יום 4 (6:00-10:00) ושיא כE0.5 גיל העובר. הערה: ניתן לבדוק תקעי הנרתיק בזמן הזה; עם זאת, ההתבוננות בתוסף נרתיק אינה מבטיחה הריון ונקבות יכולות להיכנס להריון כאשר אין תקע הוא ציין. בהתחשב בכך שההריון הוא בדרך כלל נצפים על ידי בדיקה ו / או מישוש חזותי בE16.5 וE18.5 גילאי הריון, בדיקה לתקעי נרתיק בבוקרו של יום 4 הוא לא הכרחי. מניסיוננו, ובהתאם לזן, כ 30-50% מהנשים-בייץ סופר להריון תוך שימוש בטכניקה שתוארה כאן. </li></ol>pg &quot;/&gt; איור 1. סכמטי לטכניקת Superovulation. הליך מראה סכמטי להריונות superovulation מתוזמן בעכברים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52297/52297fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> 2. ניתוח Murine העוברי (הגבי פציעה) על E16.5 וE18.5 עוברים (איור 2) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני ההליך, לנקות את כל המשטחים של חדר הניתוח וציוד עם 70% אלכוהול איזופרופיל. בנוסף, לעקר את כל הציוד כירורגי ומכשירים שישמש בהליך על ידי המעוקר. מוסדות מסוימים עשויים לאפשר השימוש הבא של עיקור חרוז חם. לפעולה, להשתמש בחבילות סטרילי הכוללות גזה ומכשירי ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרום הרדמה באמהות בהריון (E16.5 גיל העובר או E18.5) תחת 2.5% תערובת isoflurane / חמצן ב2 ליטר לדקה ואחריו הרדמה תחזוקה בL 1 לדקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להונותהרדמה ראויה משרד, להבטיח את הרפלקסים של הדוושה העמוקה של העכבר מדוכאים ומניח את העכבר בעמדה נוטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחת עיני וטרינר כגון Puralube כדי למנוע גירוי בעיניים או יובש במהלך ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן בטן על ידי מתן יישום אור של קרם מקריח לא יותר מ -30 שניות (איור 2 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן בטן לניתוח ספטית עם povidone- יוד ואלכוהול (איור 2 ו2C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע laparotomy קו האמצע מתחת למיקרוסקופ באמצעות מספריים מייקרו (איור 2 ד ו 2E). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לחשוף רחם והעובר שנבחר לניתוח (איור 2F). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשקות שדה ניתוח עם חם (38 מעלות צלזיוס) פוספט שנאגרו מלוח (PBS) באמצעות מחט בוטה, קצה הערה: אחת יכול להתבצע על ידי כיפוף קצה מחט גדול נשא בזהירות. (איור 2G ו2H). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את העובר באופן שיאפשרזה גישה מלאה לdorsum. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעבור תפר מחרוזת ארנק באמצעות תפר 7-0 ניילון דרך הרחם מעל האתר של פציעת גב המיועד (איור ט 2). מחרוזת עמדת ארנק מעל אזור של dorsum לשמאל או לימין של עמוד השדרה, ובאזור של קיר הרחם נטול כלי דם גדולים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך 3 מ&quot;מ דרך דופן רחם וצק מי שפיר במרכז מחרוזת הארנק (איור י 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשקות אתר חתך עם חם (38 מעלות צלזיוס) PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מספריים מייקרו, חתך פצע בודד בעובי מלא excisional, 1 מ&quot;מ בערך באורך, בdorsum של העובר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות אתר חתך כתם יבש עם המוליך כותנה-טיפ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק תת עורי דיו 3 μl נפח הודו לאתר הפצע כדי לסמן את המיקום של פצע (איור 2K). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשקות עם חם (38 מעלות צלזיוס) PBS כדי להבטיח דיו נשמר בתוך אתר פצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לי עוזר כירורגיתnject החם (38 מעלות צלזיוס) PBS באמצעות בוטה, קצה 10 מזרק G לצק מי השפיר כמחרוזת הארנק סגור (איור 2L). לחזור בו מזרק כמו סגירת מחרוזת ארנק מתקרבת להשלמה (איור 2M). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לחזור רחם לתוך חלל הבטן (איור 2N). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עור אוורט והצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האם עוזר כירורגית להשקות חלל בטן עם חם (38 מעלות צלזיוס) PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בטן לסגור במהירות על ידי הידוק עור הצפק סגורה (איור 2 טו). הסגירה סטנדרטית מתבצעת בשתי שכבות; הצפק ושרירי בטן בשכבה אחת, רקמה התת עורית ועור בשכבה השנייה. להקרבה וקציר של העובר מיידיים, ההפגנה שלנו מראה סגירה בשכבה אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החיה תחת השגחה בחממה חמה נקבעה על 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות או עד שהחיה להכרתו מספיק כדי לשמור על כיבה sternal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אל מילכד בעלי החיים לחברה של בעלי חיים אחרים, עד שהתאושש לחלוטין מההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על התעוררות מהרדמה ובמהלך שעות 48 לאחר מכן, לנהל הזרקה תת עורית של עצירות (0.05 מ&quot;ג / קילוגרם) כל 12 שעות לשיכוך כאבים לפי צורך בהתבסס על הערכת כאב. לנהל carprofen (5 מ&quot;ג / קילוגרם) באמצעות הזרקה תת עורית להקלה על כאב לאחר ניתוח נוסף לפי צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור בעלי חיים לכלוב ולספק להם כרצונך מזון ומים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפקח על גילויי כאב מקרוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ניתוח 48 שעות, להקריב את אמא בהריון עם מנת יתר של isoflurane והעובר קציר נפצע. כדי לעשות זאת, להתאים ריכוז isoflurane עד 5% ומעלה, ולשמור על חשיפת דקות 1 לאחר הפסקת הנשימה. לאשר המתת חסד עם נקע בצוואר הרחם. קציר עובר unwounded לביקורת שווה גיל. עוברים המאוחר צריכים שיטה נפרדת של המתת חסד בקנה אחד עם המלצות IACUC, כגון deהקפיטציה, נקע בצוואר הרחם, או הזרקה כימית. </li></ol><img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52297/52297fig2highres.jpg" /> איור 2. סכמטי לכירורגיה Murine עוברי. צעדים כלליים לגב פצעו בE16.5 ועוברי עכברי E18.5. () אפילציה של בטן עכבר. (B ו- C) הכנה של בטן עכבר. (ד) מיקרוסקופ ניתוחי המשמשת ל חתך יצירת הליך. (E) קו האמצע laparotomy. (F) חשיפה של רחם. בריאה (G) של מחט קהה קצה. (H) השקיה של רחם עם מי מלח חמים. (I) של תפר מחרוזת ארנק. (J) דרך רחם מ&quot;מ קיר ודור 1 פצע מלא עובי excisional. (K) הזרקה תת עורית של דיו הודו. (L ו- M) סגירת תפר מחרוזת ארנק. (N ו- O)סגירת הבטן. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52297/52297fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

<ol>
	<li>Larson, B. J., Longaker, M. T., Lorenz, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scarless+fetal+wound+healing:+a+basic+science+review.">Scarless fetal wound healing: a basic science review.</a> Plastic and reconstructive surgery. 126, 1172-1180 (2010).</li><li>Wilgus, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+healing+in+fetal+skin:+a+review+of+the+literature.">Regenerative healing in fetal skin: a review of the literature.</a> Ostomy/wound management. 53, 16-31 (2007).</li><li>Wulff, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mast+cells+contribute+to+scar+formation+during+fetal+wound+healing.">Mast cells contribute to scar formation during fetal wound healing.</a> The Journal of investigative dermatology. 132, 458-465 (2012).</li><li>Lorenz, H. P., Adzick, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scarless+skin+wound+repair+in+the+fetus.">Scarless skin wound repair in the fetus.</a> The Western journal of medicine. 159, 350-355 (1993).</li><li>Longaker, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+in+the+fetus.+Possible+role+for+inflammatory+macrophages+and+transforming+growth+factor-beta+isoforms.">Wound healing in the fetus. Possible role for inflammatory macrophages and transforming growth factor-beta isoforms.</a> Wound repair and regeneration : official publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 2, 104-112 (1994).</li><li>Longaker, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+in+fetal+wound+healing.+IV.+Hyaluronic+acid-stimulating+activity+distinguishes+fetal+wound+fluid+from+adult+wound+fluid.">Studies in fetal wound healing. IV. Hyaluronic acid-stimulating activity distinguishes fetal wound fluid from adult wound fluid.</a> Annals of surgery. 210, 667-672 (1989).</li><li>Colombo, J. A., Napp, M., Depaoli, J. R., Puissant, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trophic+influences+of+human+and+rat+amniotic+fluid+on+neural+tube-derived+rat+fetal+cells.">Trophic influences of human and rat amniotic fluid on neural tube-derived rat fetal cells.</a> International journal of developmental neuroscience : the official journal of the International Society for Developmental Neuroscience. 11, 347-355 (1993).</li><li>Colwell, A. S., Longaker, M. T., Peter Lorenz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+differentially+regulated+genes+in+fetal+wounds+during+regenerative+repair.">Identification of differentially regulated genes in fetal wounds during regenerative repair.</a> Wound repair and regeneration : official publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 16, 450-459 (2008).</li><li>Hu, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+in+fetal+murine+keratinocytes+and+fibroblasts.">Gene expression in fetal murine keratinocytes and fibroblasts.</a> The Journal of surgical research. , (2014).</li><li>Colwell, A. S., Krummel, T. M., Longaker, M. T., Lorenz, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vivo+mouse+excisional+wound+model+of+scarless+healing.">An in vivo mouse excisional wound model of scarless healing.</a> Plastic and reconstructive surgery. 117, 2292-2296 (2006).</li><li>Wilgus, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+cyclooxygenase-2+mediated+inflammation+on+scarless+fetal+wound+healing.">The impact of cyclooxygenase-2 mediated inflammation on scarless fetal wound healing.</a> The American journal of pathology. 165, 753-761 (2004).</li><li>Iocono, J. A., Ehrlich, H. P., Keefer, K. A., Krummel, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronan+induces+scarless+repair+in+mouse+limb+organ+culture.">Hyaluronan induces scarless repair in mouse limb organ culture.</a> Journal of pediatric surgery. 33, 564-567 (1998).</li><li>Chopra, V., Blewett, C. J., Krummel, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transition+from+fetal+to+adult+repair+occurring+in+mouse+forelimbs+maintained+in+organ+culture.">Transition from fetal to adult repair occurring in mouse forelimbs maintained in organ culture.</a> Wound repair and regeneration : official publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 5, 47-51 (1997).</li><li>Adzick, N. S., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+the+study+of+fetal+tissue+repair.">Animal models for the study of fetal tissue repair.</a> The Journal of surgical research. 5, 47-51 (1991).</li><li>Block, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+in+the+new-born+opossum+(Didelphis+virginianam).">Wound healing in the new-born opossum (Didelphis virginianam).</a> Nature. 187, 340-341 (1960).</li><li>Longaker, M. T., Dodson, T. B., Kaban, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rabbit+model+for+fetal+cleft+lip+repair.">A rabbit model for fetal cleft lip repair.</a> Journal of oral and maxillofacial surgery : official journal of the American Association of Oral and Maxillofacial Surgeons. 48, 714-719 (1990).</li><li>Longaker, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+for+fetal+cleft+lip+repair+in+lambs.">A model for fetal cleft lip repair in lambs.</a> Plastic and reconstructive surgery. 90, 750-756 (1992).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

הפרוטוקול כירורגית המוצג כאן מתאר מודל excisional של ריפוי צלקות עכבריות העוברי שפורסם לראשונה בשנת 2006 על ידי המעבדה שלנו 10. בנוסף למודלים מבוססים אחרים של פציעת excisional 11, מודלים incisional של ריפוי צלקות עכברי עוברי קיימים גם 12,13. חקירות של ריפוי פצע צלקות עוב...

פצעים בעור עוברי לרפא במהירות וscarlessly עד מאוחר בהריון 1. תיקון פצע צלקות עוברי מתאפיין בהתחדשות של מבנה רקמה תקין ותפקוד. המעבר מצלקות לפנוטיפ הצטלקות מתרחש בשליש השלישי של הריון בבני אדם וסביב יום עוברי 18 (E18) בעכברים 2,3. בהשוואה למבוגרים, תיקון פצע עוברי מתאפיין בepithelialization המהיר, בתצהיר רקמות חיבור, ונדידת פיברובלסטים. מחקרים רבים הציעו הסברים אפשריים לתופעה של ריפוי פצע צלקות במהלך התפתחות עוברית מוקדמת. דלקת היא מרכיב בסיסי של תיקון פצע מבוגר; עם זאת, פצעים עובריים מתאפיינים בחוסר דלקת חריפה 4. בין אם זה היא תוצאה של חוסר בגרות הפעילות של המערכת החיסונית בשלבים עובריים עדיין לא ברורה. מחקר שנערך לאחרונה הציע כי הבדלים בשפע, המחצלתurity, ותפקוד של תאי פיטום בE15 לעומת עור עוברי E18 עשוי להיות אחראים למעבר מפנוטיפ צלקות, לפחות בעכבר 3. מחקרים אחרים מניחים כי הבדלים בתכונות והשפע של מקרופאגים פצע העובריים והבוגרים אחראים ליצירה מחדש של מטריצה ​​הנורמלית תאית (ECM) במהלך תיקון פצע עוברי 5. הבדלים בגורמים סביבתיים במהלך התפתחות עוברית ובוגרת עשויים להשפיע גם על תיקון פצע. Longaker ועמיתיו הראו כי נוזל פצע מהעובר הוא בעל רמות גבוהות של פעילות גירוי-חומצה היאלורונית בהשוואה לאף אחד במבוגרי פצע נוזל 6. כתוצאה מכך, רמות גבוהות יותר של חומצה היאלורונית, glycosaminoglycan שמקדם מייקרו-סביבה תורם לתנועתיות של תאים והתרבות, בסביבת הפצע העוברית יכולות להיות אחראית לפנוטיפ הצלקות ראה במהלך התפתחות עוברית מוקדמת. קווים אחרים של נקודת ראיות לכך שפטהסביבת פצע l היא יחסית hypoxemic ושקוע בנוזל מי שפיר סטרילי עשיר בגורמי גדילה 7. עם זאת, אין תשובה סופית כבר סיפקה לאירוע קריטי או גורם בעובר שמפעיל את המעבר מהתחדשות צלקות לתיקון fibrotic. הבנת המנגנונים אחראים לריפוי צלקות בעובר מחייבת מודל מדויק ושחזור. כאן אנו פירוט מודל לשחזור של ריפוי צלקות עוברי פצע בdorsum של E16.5 (צלקות) ועוברי E18.5 עכבר (הצטלקות). בנוסף, שינויים קלים של מודל זה יכול להיות מנוצל כדי לבצע מספר מחקרים נוספים, כגון ניתוח ביטוי גנים מפצעים עובריים ו8,9 עור. בהתחשב בכך שהריונות בעיתוי המדויק הם קריטיים לסיכום מוצלח של מודל ריפוי זו עוברי צלקות פצעים, אנחנו גם פירוט הפרוטוקול שלנו להריונות superovulation מתוזמן.

<table><tbody><tr><td>7-O MONOSOF Suture</td><td>eSuture</td><td>SN-1647G</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Forceps</td><td>Kent Scientific</td><td>INS650916</td><td></td></tr><tr><td>Micro-scissors</td><td>Kent Scientific</td><td>INS600127</td><td></td></tr><tr><td>Autoclip 9 mm</td><td>Texas Scientific Instruments</td><td>205060</td><td></td></tr><tr><td>Insulin Syringe</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>22-272-382</td><td></td></tr><tr><td>Black Pigment</td><td>AIMS</td><td>242</td><td></td></tr><tr><td>BD Safety-Lok 3 ml Syringe</td><td>BD Biosciences</td><td>309596</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline</td><td>Life Technologies</td><td>10010-049</td><td></td></tr><tr><td>OPMI-MD Surgical Microscope</td><td>Carl Zeiss Surgical Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pregnant Mares Serum (PMS)</td><td>Millipore</td><td>367222</td><td></td></tr><tr><td>Human Chorionic Gonadotropin (HCG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CG10</td><td></td></tr><tr><td>Povidone Iodine Prep Solution</td><td>Dynarex</td><td>1415</td><td></td></tr><tr><td>Nair (depilatory cream)</td><td>Church and Dwight Co.</td><td>22600267058</td><td></td></tr></tbody></table>

a mouse fetal skin model of scarless wound repair

Early in utero, but not in postnatal life, cutaneous wounds undergo regeneration and heal without formation of a scar. Scarless fetal wound healing occurs across species but is age dependent. The transition from a scarless to scarring phenotype occurs in the third trimester of pregnancy in humans and around embryonic day 18 (E18) in mice. However, this varies with the size of the wound with larger defects generating a scar at an earlier gestational age. The emergence of lineage tracing and other genetic tools in the mouse has opened promising new avenues for investigation of fetal scarless wound healing. However, given the inherently high rates of morbidity and premature uterine contraction associated with fetal surgery, investigations of fetal scarless wound healing in vivo require a precise and reproducible surgical model. Here we detail a reliable model of fetal scarless wound healing in the dorsum of E16.5 (scarless) and E18.5 (scarring) mouse embryos.

לניתוח היסטולוגית, פצעי cutaneous בעור הגב של עוברי עכברי E16.5 וE18.5 צריכים להיות שנקטפו לאחר פציעה-48 שעות, קבוע PFA 4%, ו- מוטבע פרפין. במודלים מהונדסים ניאון, הקפאה עם אוקטובר עשויה להיות מתאימה. יש כמה כתמים שעשויים לשמש כדי לחזות מבנה רקמת חיבור סלולארי ו. Hematoxylin ו eosin הוא כתם ?...

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Fetal Skin Model of Scarless Wound Repair at JoVE.com

A Mouse Fetal Skin Model of Scarless Wound Repair

During mammalian development, early gestational skin wounds heal without a scar. Here we detail a reliable and reproducible model of fetal scarless wound healing in the cutaneous dorsum of E16.5 (scarless) and E18.5 (scarring) mouse embryos.

דגם עור עכבר עוברי של תיקון פצע צלקות

Early in utero, but not in postnatal life, cutaneous wounds undergo regeneration and heal without formation of a scar. Scarless fetal wound healing occurs ...

a-mouse-fetal-skin-model-of-scarless-wound-repair

Research

JoVE Journal

Medicine

12.2K Views.  Stanford University School of Medicine. During mammalian development, early gestational skin wounds heal without a scar. Here we detail a reliable and reproducible model of fetal scarless wound healing in the cutaneous dorsum of E16.5 (scarless) and E18.5 (scarring) mouse embryos.

Video: A Mouse Fetal Skin Model of Scarless Wound Repair

The Three-Dimensional Human Skin Reconstruct Model: a Tool to Study Normal  Skin and Melanoma Progression

Most in vitro studies in experimental skin biology have been done in 2-dimensional (2D) monocultures, while accumulating evidence suggests that cells behave differently when they are grown within a 3D extra-cellular matrix and also interact with other cells (1-5). Mouse models have been broadly utilized to study tissue morphogenesis in vivo. However mouse and human skin have significant differences in cellular architecture and physiology, which makes it difficult to extrapolate mouse studies to humans. Since melanocytes in mouse skin are mostly localized in hair follicles, they have distinct biological properties from those of humans, which locate primarily at the basal layer of the epidermis. The recent development of 3D human skin reconstruct models has enabled the field to investigate cell-matrix and cell-cell interactions between different cell types. The reconstructs consist of a "dermis" with fibroblasts embedded in a collagen I matrix, an "epidermis", which is comprised of stratified, differentiated keratinocytes and a functional basement membrane, which separates epidermis from dermis. Collagen provides scaffolding, nutrient delivery, and potential for cell-to-cell interaction. The 3D skin models incorporating melanocytic cells recapitulate natural features of melanocyte homeostasis and melanoma progression in human skin. As in vivo, melanocytes in reconstructed skin are localized at the basement membrane interspersed with basal layer keratinocytes. Melanoma cells exhibit the same characteristics reflecting the original tumor stage (RGP, VGP and metastatic melanoma cells) in vivo. Recently, dermal stem cells have been identified in the human dermis (6). These multi-potent stem cells can migrate to the epidermis and differentiate to melanocytes.

In this report, we describe the three-dimensional skin reconstruct model which mimics human skin in architecture and composition. Melanocyte physiology, melanoma progression and the fate of dermal stem cells have been investigated using the skin reconstruct model. The model is also useful as a preclinical tool for drug assessment.

עור תלת ממדי האדם לשחזר דגם: ככלי מחקר עור רגיל התקדמות מלנומה

Most in vitro studies in experimental skin biology have been done in 2-dimensional (2D) monocultures, while accumulating evidence suggests that cells ...

Bioengineering

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

Insufficient vascularization is considered to be one of the main factors limiting the clinical success of tissue-engineered constructs. In order to evaluate new strategies that aim at improving vascularization, reliable methods are required to make the in-growth of new blood vessels into bio-artificial scaffolds visible and quantify the results. Over the past couple of years, our group has introduced a full skin defect model that enables the direct visualization of blood vessels by transillumination and provides the possibility of quantification through digital segmentation. In this model, one surgically creates full skin defects in the back of mice and replaces them with the material tested. Molecules or cells of interest can also be incorporated in such materials to study their potential effect. After an observation time of one&#8217;s own choice, materials are explanted for evaluation. Bilateral wounds provide the possibility of making internal comparisons that minimize artifacts among individuals as well as of decreasing the number of animals needed for the study. In comparison to other approaches, our method offers a simple, reliable and cost effective analysis. We have implemented this model as a routine tool to perform high-resolution screening when testing vascularization of different biomaterials and bio-activation approaches.

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

Vascularization is key to approaches in successful tissue engineering. Therefore, reliable technologies are required to evaluate the development of vascular networks in tissue-constructs. Here we present a simple and cost-effective method to visualize and quantify vascularization in vivo.

עור מלא פגמים דגם להערכת כלי דם של Biomaterials<em&gt; בVivo</em

Insufficient vascularization is considered to be one of the main factors limiting the clinical success of tissue-engineered constructs. In order to ...

Murine Model of Wound Healing

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. Impaired wound healing, which occurs in diabetic patients for example, can lead to severe unfavorable outcomes such as amputation. There is, therefore, an increasing impetus to develop novel agents that promote wound repair. The testing of these has been limited to large animal models such as swine, which are often impractical. Mice represent the ideal preclinical model, as they are economical and amenable to genetic manipulation, which allows for mechanistic investigation. However, wound healing in a mouse is fundamentally different to that of humans as it primarily occurs via contraction. Our murine model overcomes this by incorporating a splint around the wound. By splinting the wound, the repair process is then dependent on epithelialization, cellular proliferation and angiogenesis, which closely mirror the biological processes of human wound healing. Whilst requiring consistency and care, this murine model does not involve complicated surgical techniques and allows for the robust testing of promising agents that may, for example, promote angiogenesis or inhibit inflammation. Furthermore, each mouse acts as its own control as two wounds are prepared, enabling the application of both the test compound and the vehicle control on the same animal. In conclusion, we demonstrate a practical, easy-to-learn, and robust model of wound healing, which is comparable to that of humans.

A murine model of cutaneous wound healing that can be used to assess therapeutic compounds in physiological and pathophysiological settings.

מודל עכברי של ריפוי פצע

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models reflect the human wound situation better than animal models. Although two-dimensional models are widely used to investigate processes such as cellular migration and proliferation, models that are more complex are required to gain a deeper knowledge about wound healing. Besides a suitable model system, the generation of precise and reproducible wounds is crucial to ensure comparable results between different test runs. In this study, the generation of a three-dimensional full thickness skin equivalent to study wound healing is shown. The dermal part of the models is comprised of human dermal fibroblast embedded in a rat-tail collagen type I hydrogel. Following the inoculation with human epidermal keratinocytes and consequent culture at the air-liquid interface, a multilayered epidermis is formed on top of the models. To study the wound healing process, we additionally developed an automated wounding device, which generates standardized wounds in a sterile atmosphere.

The goal of this protocol is to build up a three-dimensional full thickness skin equivalent, which resembles natural skin. With a specifically constructed automated wounding device, precise and reproducible wounds can be generated under maintenance of sterility.

דור של עור בעובי מלא תלת ממדי Equivalent ואוטומטי פציעה

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are still occurring, particularly in reconstructive flap surgery. Multiple experimental flap models have been developed to analyze underlying causes and mechanisms and to investigate treatment strategies to prevent ischemic complications. The limiting factor of most models is the lacking possibility to directly and repetitively visualize microvascular architecture and hemodynamics. The goal of the protocol was to present a well-established mouse model affiliating these before mentioned lacking elements. Harder et al. have developed a model of a musculocutaneous flap with a random perfusion pattern that undergoes acute persistent ischemia and results in ~50% necrosis after 10 days if kept untreated. With the aid of intravital epi-fluorescence microscopy, this chamber model allows repetitive visualization of morphology and hemodynamics in different regions of interest over time. Associated processes such as apoptosis, inflammation, microvascular leakage and angiogenesis can be investigated and correlated to immunohistochemical and molecular protein assays. To date, the model has proven feasibility and reproducibility in several published experimental studies investigating the effect of pre-, peri- and postconditioning of ischemically challenged tissue.

The window of the murine dorsal skinfold chamber presented visualizes a zone of acute persistent ischemia of a musculocutaneous flap. Intravital epi-fluorescence microscopy permits for direct and repetitive assessment of the microvasculature and quantification of hemodynamics. Morphologic and hemodynamic results can further be correlated with histological and molecular analyses.

פגיעה ברקמות איסכמי בהגבו skinfold לשכת העכבר: דגם דש עור לחקור איסכמיה מתמיד חריפה

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are ...

Assessment of Acute Wound Healing using the Dorsal Subcutaneous Polyvinyl Alcohol Sponge Implantation and Excisional Tail Skin Wound Models.

Wound healing is a complex process that requires the orderly progression of inflammation, granulation tissue formation, fibrosis, and resolution. Murine models provide valuable mechanistic insight into these processes; however, no single model fully addresses all aspects of the wound healing response. Instead, it is ideal to use multiple models to address the different aspects of wound healing. Here, two different methods that address diverse aspects of the wound healing response are described. In the first model, polyvinyl alcohol sponges are subcutaneously implanted along the mouse dorsum. Following sponge retrieval, cells can be isolated by mechanical disruption, and fluids can be extracted by centrifugation, thus allowing for a detailed characterization of cellular and cytokine responses in the acute wound environment. A limitation of this model is the inability to assess the rate of wound closure. For this, a tail skin excision model is utilized. In this model, a 10 mm x 3 mm rectangular piece of tail skin is excised along the dorsal surface, near the base of the tail. This model can be easily photographed for planimetric analysis to determine healing rates and can be excised for histological analysis. Both described methods can be utilized in genetically altered mouse strains, or in conjunction with models of comorbid conditions, such as diabetes, aging, or secondary infection, in order to elucidate wound healing mechanisms.

Here, two murine wound healing models are described, one designed to assess cellular and cytokine wound healing responses and the other to quantify the rate of wound closure. These methods can be used with complex disease models such as diabetes to determine mechanisms of various aspects of poor wound healing.

הערכה של ריפוי בפצע חריפה באמצעות השרכה העור מפוליויניל כוהל של הרקמה העורית והזנב Excisional הפצע מודלים.

Wound healing is a complex process that requires the orderly progression of inflammation, granulation tissue formation, fibrosis, and resolution. Murine ...

Immunology and Infection

A Mouse Model of Mechanotransduction-driven, Human-like Hypertrophic Scarring

Hypertrophic scarring (HTS) is an abnormal process of wound healing that results in excessive scar tissue formation. Over the past decade, we have demonstrated that mechanotransduction&#8212;the conversion of mechanical stimuli into cellular responses&#8212;drives excessive fibrotic scar healing. A mouse model to assess human-like hypertrophic scarring would be an essential tool for examining various therapeutics and their ability to reduce scarring and improve healing. Specifically, our laboratory has developed a murine wound model that increases mechanical strain to promote human-like HTS. This&#160;protocol utilizes biomechanical loading devices, made from modified 13 mm palatal expanders, whose arms are placed on either side of the incision and distracted incrementally apart in order to apply continuous tension across the wound bed during healing. Over nearly two decades of use, this model has been significantly advanced to improve efficacy and reproducibility. Using the murine HTS model, significant dermal fibrotic scars can be induced to be histologically comparable to human hypertrophic scars. This murine model provides an environment to develop biologics involved in the treatment of HTS and mechanotransduction-related conditions such as foreign body response.

This protocol will explain how to establish a hypertrophic scarring murine model that increases mechanotransduction signaling to simulate human-like scarring. This method involves increasing mechanical tension across a healing incision in a mouse and using a specialized device to create reproducible, excessive scar tissue for detailed histological and bioinformatic analyses.

מודל עכבר של צלקות היפרטרופיות דמויות אדם המונעות על ידי מכניקה

Hypertrophic scarring (HTS) is an abnormal process of wound healing that results in excessive scar tissue formation. Over the past decade, we have ...

Digital Planimetry for Assessing Wound Closure Kinetics in a Mouse Model

Chronic wounds, due to their high prevalence, are a serious global health concern. Effective therapeutic strategies can significantly accelerate healing, thereby reducing the risk of complications and alleviating the economic burden on healthcare systems. Although numerous experimental studies have investigated wound healing, most rely on qualitative observations or quantitative direct measurements. The objective of this study was to standardize an indirect wound measurement method using digital planimetry, incorporating digital scaling and segmentation. This approach addresses the lack of detailed, step-by-step methodologies for accurate wound assessment. A photodocumentation booth was designed and constructed, and computer-assisted digital planimetry tools were employed to minimize variability in measurements of the wound area, perimeter, and the distance from the wound center to its edges. A circular traumatic wound (5 mm in diameter) was created on the dorsal midline at the shoulder blade level of male CD1 mice (n = 4, 10 weeks old, 30-35 g). Wound evolution was photodocumented for 14 days using the custom-designed photo booth, which controlled lighting conditions, focal distance, and subject positioning. Scaling and wound measurements were performed using segmentation in ImageJ software, and statistical analysis was conducted using statistical analysis software. The kinetics of wound closure showed a slight increase in wound size and perimeter between day 0 and day 2, followed by a gradual decrease until complete closure by day 14. The photodocumentation booth and computer-assisted digital planimetry enabled quantitative measurements with minimal variability. In conclusion, these tools provide a reliable and reproducible method for evaluating wound closure kinetics in pre-clinical models.

Wounds represent a global health challenge. This study developed a standardized photo booth utilizing digital planimetry to minimize wound measurement variability. Monitoring wounds in mice over 14 days revealed an initial increase in wound area and perimeter, followed by gradual closure. This methodology may aid in evaluating wound closure kinetics in pre-clinical models.

פלנימטריה דיגיטלית להערכת קינטיקה של סגירת פצע במודל עכבר

Chronic wounds, due to their high prevalence, are a serious global health concern. Effective therapeutic strategies can significantly accelerate healing, ...

A Murine Model of a Burn Wound Reconstructed with an Allogeneic Skin Graft

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and require surgical debridement and skin grafting. Successful integration of the donor graft into a recipient wound bed depends on timely recruitment of immune cells, robust angiogenic response and new extracellular matrix formation. The development of novel therapeutic agents, which target some key processes involved in wound healing, are hindered by the lack of reliable preclinical models with optimized objective assessment of wound closure. Here, we describe an inexpensive and reproducible model of experimental full thickness burn wound reconstructed with an allogeneic skin graft. The wound is induced on the dorsum surface of anaesthetized inbred wild type mice from the BALB/C and SKH1-Hrhr backgrounds. The burn is produced using a brass template measuring 10 mm in diameter, which is preheated to 80 &#176;C and delivered at a constant pressure for 20 s. Burn eschar is excised 24 hours after the injury and replaced with a full thickness graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse. No specialized equipment is required for the procedure and surgical techniques are straightforward to follow. The method may be effortlessly implemented and reproduced in most research settings. Certain limitations are associated with the model. Due to technical difficulties, the harvest of thinner split thickness skin grafts is not possible. The surgical method we describe here allows for the reconstruction of burn wounds using full thickness skin grafts. It may be used to carry out preclinical therapeutic testing.

The aim of this study was to develop a murine model of burn wound healing. A thermal burn was induced on the dorsal skin of mice using a preheated brass template. Burned tissue was debrided and overlaid with a skin graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse.

מודל מורנה של פצע צריבה שוחזר עם שתל העור Allogeneic

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and ...

Biology

Optimized Protocol for Mouse Wound Healing Model with Stem Cell-Derived Exosomes

Mouse Wound Models and Preparation of Single-Cell Suspensions 

The management of acute full-thickness skin injuries presents a considerable challenge in clinical practice. The complexity of wound healing, involving diverse cell populations and the intricate wound microenvironment, complicates the assessment of treatment effects and their interactions using traditional experimental approaches. Single-cell transcriptome sequencing technology has revolutionized the understanding of cellular functions and mechanisms during wound healing. However, the variability in methodologies for creating mouse wound models introduces confounding factors that can impact experimental results. Furthermore, the process of dissociating mouse skin tissues presents significant technical hurdles, highlighting the critical need for high-quality single-cell suspensions for accurate transcriptome sequencing. Therefore, this study aims to optimize the construction of mouse wound models to accurately assess changes in wound closure while eliminating variables that could influence the subsequent sequencing result. Additionally, the preparation of single-cell suspensions was performed using both enzyme preparation protocols and test kit protocols to optimize cost and effectiveness.

Mouse Wound Models and Preparation of Single-Cell Suspensions

This study presents two crucial experimental techniques: the construction of a murine wound model for assessing wound closure and the preparation of single-cell suspensions from murine skin to preserve cellular viability.

The management of acute full-thickness skin injuries presents a considerable challenge in clinical practice. The complexity of wound healing, involving ...

דגם עור עכבר עוברי של תיקון פצע צלקות

Summary

Explore More Videos

עור תלת ממדי האדם לשחזר דגם: ככלי מחקר עור רגיל התקדמות מלנומה

עור מלא פגמים דגם להערכת כלי דם של Biomaterials

מודל עכברי של ריפוי פצע

דור של עור בעובי מלא תלת ממדי Equivalent ואוטומטי פציעה

פגיעה ברקמות איסכמי בהגבו skinfold לשכת העכבר: דגם דש עור לחקור איסכמיה מתמיד חריפה

הערכה של ריפוי בפצע חריפה באמצעות השרכה העור מפוליויניל כוהל של הרקמה העורית והזנב Excisional הפצע מודלים.

מודל עכבר של צלקות היפרטרופיות דמויות אדם המונעות על ידי מכניקה

פלנימטריה דיגיטלית להערכת קינטיקה של סגירת פצע במודל עכבר

מודל מורנה של פצע צריבה שוחזר עם שתל העור Allogeneic

Mouse Wound Models and Preparation of Single-Cell Suspensions