The authors would like to acknowledge funding support from the University of South Florida, Department of Surgery (Mack Wu, MD, PhD).

הערה: אישור לכל נהלים בבעלי החיים המוצגים להלן התקבל מאוניברסיטת הדרום פלורידה הוועדה של טיפול בבעלי חיים (IACUC) ולציית לכל הדרישות של צער בעלי החיים החוק והמדריך לטיפול ושימוש בחי מעבדה. 1. הכנת גיליונות סיליקון ומכשירי ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רצועות חתוכות (10.5 סנטימטרים x 3.0 סנטימטרים) של אי-חיזקו 0.01 עובי, יריעות סיליקון כיתה רפואית ולעקר באמצעות החיטוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנקות ולחטא מכשירי ניתוח (מספריים, מלקחיים ווילאות או מגבות כדי ליצור שדה סטרילי במהלך ניתוח) מתאימים. </li></ol> 2. בעלי חיים ניסויי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בזכר בוגר או חולדות נקבות במשקל בטווח 250-350 g מתקבל ממגדל מסחרי. אם חולדות בגילים מנוצלות, הם צריכים להיות ≥350 g כדי להבטיח את הישרדות טובה יותר לאחר ניתוח. לפני תחילתו של כל ניסויים להסתגל כל בעלי החיים לפחות7 ימים בתנאים סטנדרטיים של מחזור אור-חושך 12 שעות עם כרצונך מזון ומים. </li></ol> 3. הרדמה, שיכוך כאבים לפני ניתוח והכנת Operative <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרום הרדמה כללית על ידי שימוש בisoflurane 3% -4% באמצעות תא אינדוקציה ולשמור (באמצעות שימוש בחרטום) בשעה 1% -2% עם O 2 במהלך הכנת עור וניתוחים. לפקח על עומק ההרדמה על ידי התבוננות בשיעור ועומק הנשימה, קמצוץ interdigital או רפלקס מצמוץ palpebral. הערה: בשלב זה, משחה וטרינר יכולה להיות ממוקמת על העיניים כדי למנוע יובש ואילו בעלי החיים נמצאים תחת הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלט רחוק מיקום כירורגים באזור סטרילי, למקם את העכברוש במצב שכיבה ולגלח את dorsum עם קוצץ מבסיס הצוואר ומטה כ -11 סנטימטרים. סטנסיל עם סמן קבוע, את קווי המתאר ל3.0 סנטימטרים x 10.5 סנטימטרים הדש (ראו איור 1 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את העכבר לsurgica נקי, המיועדאזור l המצויד בכרית חימום אושרה ווילאות כירורגי סטרילי או מגבות. להזריק 5 מ&quot;ג / קילוגרם Ketoprofen תת עורי לפני החתכים הניתוחיים הראשונים לטיפול בכאב. נוזלים נוספים (מלוח) יכולים להינתן (עד 5 סמ&quot;ק) תת עורי במידת הצורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את העור עוד יותר על ידי השטיפה ראשונה עם 70% אלכוהול איזופרופיל והשני עם chlorhexidine 0.2%, ולאחר מכן להחיל סדינים מעוקרים כדי ליצור שדה סטרילי. גם 10% povidone- יוד (פולידין) ניתן להשתמש. הערה: אנטיביוטיקה (אמפיצילין ב 15 מ&quot;ג / קילוגרם) יכולה להיות מנוהלת תת עורי, אבל אם טכניקות ספטית טובות משמשות היא אינה נדרשת. </li></ol> 4. יצירת פצעי excisional וBipedicled דש <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בכלי סטרילי, חד פעמי 6 מ&quot;מ ביופסיה, ליצור שני פצעים &quot;איסכמי&quot; עגולים במרכז אזור הדש המיועד (איור 1). העומק של הפצע צריך להיות עד ל( לא דרך) fascia הבסיסי של קארנו מִרפָּדשריר sus (הבלעה 1B איור). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במלקחיים להרים את העור באמצע המתווה הפצע שנוצרה על ידי הביופסיה ולאחר מכן להשתמש במספרי איריס (עם טיפים מעוגלים) שיחתכו את החתיכה העגולה של רקמה (כולל שריר carnosus מִרפָּד). התוצאה תהיה בעובי מלא פצע עם fascia כבסיס של הפצע. הערה: הרקמה נכרתה (תקעי פצע) ניתן להצמיד קפואה בחנקן נוזלי או קבוע ב 10% O נאגר פורמלין / N לעיבוד מאוחר יותר כשליטה, עור רגיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צור דש bipedicled על ידי ביצוע חתכים עם אזמל סטרילי בכל צד של הפצעים איסכמיים לאורך הקווים מצוירים מראש (איור 1 ג), כי הם 10.5 סנטימטר אורך ו -3.0 סנטימטר זה מזה. עומק החתכים צריך להיות עד לשרירי paraspinous. בעזרת המספריים איריס, להפריד fascia carnosus מִרפָּד משרירי paraspinous, להיות זהיר, כדי לשמור על fascia שלם בשם &quot;הבסיס&quot; של האגרופים מ&quot;מ 6 (Figure 1D). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח 1 גיליון סיליקון מראש לחתוך סטרילית ולמקם אותו בין fascia carnosus מִרפָּד ושרירי paraspinous (איור 1E) להבטיח שהגיליון לא יתקפל או לקפל. שימוש בתפרים שחורים, שאינם נספגים (גודל 4.0) לסגור את שני החתכים על ידי עיגון גיליון סיליקון לעור עם לפחות 8 תפרים נקטעו בכל צד, לאורכו של הדש (איור 1F ו1G). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בכלי סטרילי, חד פעמי ביופסיה, ליצור שני פצעים פנימיים שליטה &quot;אינם איסכמי&quot; (עד fascia הקדמי של שריר carnosus מִרפָּד) 1 סנטימטר לרוחב הפצעים איסכמיים בכל צד של הדש (איור 1G). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח שליט מתחת לפצעים ולקחת את תמונות דיגיטליות למטרות מדידת פצע (ראה איור 3 א). בשלב זה, את זרימת דם (זלוף) יכולה להיות במעקב על ידי שימוש בליזר דופלר או מניפולציות אחרות (מיקום תרופתי מקומי) שבוצעו.</li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל דבק נוזלי אושר שתי גולגולת וזנב לפצעים וסרט שקוף הלבשה כדי לשמור על סביבת הפצע לח ונקי (סטרילי). הלבשה נוספת עשויה להיות ממוקמת בסוף הזנב של הדש כדי למנוע את החיה מהסרת תפרי הזנב ביותר. </li></ol> נהלים 5. לאחר ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח בעלי חיים בכלובים (שוכנו בנפרד) מצוידים במתקני האכלה רדודים כדי למנוע מהאתר כירורגית מתחכך המזין. לא צריכים להשאיר בעלי חיים ללא השגחה או חזרו לחברה של בעלי חיים אחרים, עד שהם יחזרו להכרה מספיק כדי לשמור על כיבה sternal ולהציג תנועה תכליתית. מחצלות חימום צריכה להיות ממוקמות מתחת מחצית מהכלוב עד 2 ימים במהלך התאוששות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטיפול בכאב לאחר הניתוח, לנהל Ketoprofen (5 מ&quot;ג / קילוגרם) תת עורי לבעלי חיים בוקר ו1x ליום הבא שללאחר ניתוח עד 48 שעות. גם לבעלי חיים צריכים להיות במעקב יומי לסימנים מתמשכים של כאב, ירידה במשקל או זיהומים באתר ניתוח. </li></ol> 6. מדידות פצע לאחר שינויים וגימור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדדו פצעים איסכמיים ולא-איסכמי לעתים קרובות בהרדמה כללית באמצעות isoflurane ב -3% -4% באמצעות תא אינדוקציה ומתוחזק (דרך חרטום) בשעה 1% -2% עם O 2 כמו בשלב 3.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את האיפור בעדינות כדי לא למשוך את הדבק מהעור. בשלב זה תמונות דיגיטליות נוספות נלקחות למדידות פצע, טיפול מקומי מוחל מחדש, הדמיה דופלר הלייזר (LDI) או מניפולציות אחרות המבוצעות בהתאם לצרכיה של החוקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל דבק והלבשה נקייה ולאפשר לבעלי החיים להתאושש כמו בשלב 5.1. </li></ol> 7. פצע איסוף והמתת חסד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסכמי קציר ופצעים שאינם איסכמי (בימי החוקר ימצאו לנכון) ואילו בעלי החיים הוא בהרדמה כללית באמצעות isoflurane ב -3% -4% באמצעות indתא uction ומתוחזק (דרך חרטום) בשעה 1% -2% עם O 2 כמו בשלב 3.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות אזמל, לבצע כריתה בצורת ריבוע סביב הפצע לכלול כמה רקמות בריאות סביב הפצע. הנח את הכריתה ל1.5 מיליליטר הצמד צינור כובע ולהצמיד הקפאה בחנקן נוזלי (חנות ב -80 ° C) לצורך הניתוח מולקולרי עתיד או לדגור ב 10% O נאגר פורמלין / N ב RT לעיבוד היסטולוגית. הערה: ניתן גם לחתוך חתכים בפצע במחצית לספק יותר דגימות לבדיקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הסרת רקמת פצע, להרדימו בשיטה שאושרה של CO 2 שאיפה. </li></ol>

<ol>
	<li>Ansell, D. M., Holden, K. A., Hardman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+wound+repair:+Are+they+cutting+it.">Animal models of wound repair: Are they cutting it.</a> Experimental dermatology. 21 (8), 581-585 (2012).</li><li>Dorsett-Martin, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+models+of+skin+wound+healing:+a+review.">Rat models of skin wound healing: a review.</a> Wound repair and regeneration : official publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 12 (6), 591-599 (2003).</li><li>Davidson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+wound+repair.">Animal models for wound repair.</a> Arch Dermatol Res. 290 (S1-11), (1998).</li><li>Finn, G., Magnus, S. A., Tonny, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+for+use+in+wound+healing+research:+A+survey+focusing+on+in+vitro+and+in+vivo+adult+soft+tissue).">Models for use in wound healing research: A survey focusing on in vitro and in vivo adult soft tissue).</a> Wound Repair and Regeneration. 8, (2000).</li><li>Gould, L. J., Leong, M., Sonstein, J., Wilson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+and+validation+of+an+ischemic+wound+model.">Optimization and validation of an ischemic wound model.</a> Wound repair and regeneration : official publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 13 (6), 576-582 (2004).</li><li>Loots, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+cellular+infiltrate+and+extracellular+matrix+of+chronic+diabetic+and+venous+ulcers+versus+acute+wounds.">Differences in cellular infiltrate and extracellular matrix of chronic diabetic and venous ulcers versus acute wounds.</a> The Journal of investigative dermatology. 111 (5), 850-857 (1998).</li><li>Schwartz, D. A., Lindblad, W. J., Rees, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+collagen+metabolism+and+delayed+healing+in+a+novel+model+of+ischemic+wounds.">Altered collagen metabolism and delayed healing in a novel model of ischemic wounds.</a> Wound Repair Regen. 3 (2), 204-212 (1995).</li><li>Chen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+mechanistic+validation+of+delayed+healing+rat+wounds+as+a+model+for+human+chronic+wounds.">Molecular and mechanistic validation of delayed healing rat wounds as a model for human chronic wounds.</a> Wound Repair and Regeneration. 7, (1999).</li><li>Zhang, Q., Chang, Q., Cox, R. A., Gong, X., Gould, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperbaric+oxygen+attenuates+apoptosis+and+decreases+inflammation+in+an+ischemic+wound+model.">Hyperbaric oxygen attenuates apoptosis and decreases inflammation in an ischemic wound model.</a> The Journal of investigative dermatology. 128 (8), 2102-2112 (2008).</li><li>Zhang, Q., Gould, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperbaric+oxygen+reduces+matrix+metalloproteinases+in+ischemic+wounds+through+a+redox-dependent+mechanism.">Hyperbaric oxygen reduces matrix metalloproteinases in ischemic wounds through a redox-dependent mechanism.</a> The Journal of investigative dermatology. 134 (1), 237-246 (2013).</li><li>Moor, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consequences+of+age+on+ischemic+wound+healing+in+rats:+altered+antioxidant+activity+and+delayed+wound+closure.">Consequences of age on ischemic wound healing in rats: altered antioxidant activity and delayed wound closure.</a> Age (Dordrecht, Netherlands). 36 (2), 733-748 (2014).</li><li>Roy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+preclinical+model+of+chronic+ischemic+wound).">Characterization of a preclinical model of chronic ischemic wound).</a> Physiological genomics. 37 (3), 211-224 (2009).</li><li>Biswas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+inducible+microRNA+210+attenuates+keratinocyte+proliferation+and+impairs+closure+in+a+murine+model+of+ischemic+wounds.">Hypoxia inducible microRNA 210 attenuates keratinocyte proliferation and impairs closure in a murine model of ischemic wounds.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (15), 6976-6981 (2010).</li><li>Winocour, S., Vorstenbosch, J., Trzeciak, A., Lessard, L., Philip, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD109,+a+novel+TGF-beta+antagonist,+decreases+fibrotic+responses+in+a+hypoxic+wound+model.">CD109, a novel TGF-beta antagonist, decreases fibrotic responses in a hypoxic wound model.</a> Exp Dermatol. 23 (7), 475-479 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

<html> ריפוי פצעים בחולדות היה לעתים קרובות הנושא לוויכוח בשל יכולתם לרפא את הפצעים נגועים ושיעור גבוה של שונות interanimal 5. אחת מהמטרות המקוריות של המודל במהלך פיתוחו היה כדי להקטין וריאציה זו. שינויים ברוחב של הדש, צמצום מספר הפצעים במיקום ספציפי (התמקד בדש עם מיקום ?...

פיתוח תרופות יעיל ותרופות ריפוי פצע אחרות דורשים מתאימים בדגמי vivo, למרות בעיות ידועות בתרגום ממצאים במודלים של בעלי חיים לטיפולים אנושיים 1. להלן תיאור של פרוטוקול מפורט לשימוש במודל עכברים של ריפוי עור איסכמי פצע לחקור מנגנונים שעוד יותר את ההבנה של ריפוי פצע פתולוגי. מיני החולדה, לעתים קרובות מועסק בשל הזמינות רחבה, גודלה והטבע הצייתן משמש לפצע לימודי ריפוי כפי שהוא גדול מספיק כדי לספק שטח עור מתאים לפציעת incisional וexcisional, הדמיה ורקמות אוסף 2. עם זאת יש לקחת בחשבון זהיר שהעור של עכברים ובני אדם הוא שונים מבחינה אנטומית, עם חולדות שהופנו לבעלי חיים רופפים עור כ. מאפיין מובהק זה מאפשר להתכווצות פצע, ולא epithelialization לתרום באופן משמעותי לסגירת העור של העכברים wounds 2. בנוסף, הנוכחות של שריר carnosus מִרפָּד תת-עורי בחולדות, תורמת לריפוי על ידי שתי היווצרות ההתכווצות וקולגן 3,4. הבחנות אנטומיים חשובות מאוד אלה נחשבו בפיתוח מודל פצע עור איסכמי חולדה ושינויים ספציפיים יושמו כדי להקטין התכווצות פצע ולהפחית את ההשפעה של השריר carnosus מִרפָּד 5. בכיבי רגל סוכרתיים, כיבים ברגלי ורידים, וכיבי לחץ, ריפוי מתעכב ופצעים אלה נחשבים כרוניים. הפצעים מתאפיינים בדלקת מופרזת, המונעת את הפצע מהתקדמות לשלבים הבאים של תיקון פצע 6. אחד הגורמים העיקריים בהתפתחות של פצע כרוני הוא איסכמיה המקומית רקמה (זרימת דם מופחתת) 5 תורמת לחוסר היכולת לנקות את הדלקת. בזמן שבמהלכו מודל זה היה מפותח ותקף (ב2003-4), לא היו מודלים של בעלי חיים סטנדרטיים שיכול לספק מספיק רקמה לבדיקת אינדוקציה של אנגיוגנזה במיטת הפצע, שלב מפתח בריפוי פצע נורמלי והמוטיבציה לפיתוח מודל זה 5. שאמרו, המודל שהוצג כאן הוא שינוי של מודל פצע איסכמי המתואר במקור על ידי שוורץ et al. 7 ולאחר מכן השתמש בצורה שונה על ידי et al חן. 8 במודל פצע איסכמי שונה, שינויים נעשו כדי לעקוף את המאפיינים אנטומיים שהוזכרו לעיל של העכברוש שיובילו לריפוי על ידי התכווצות ולא epithelialization: (1) שני פצעי excisional עובי מלאים נוצרים בתוך דש עור הגב וbipedicled שריר carnosus מִרפָּד מוסר מהפצע למיטה על ידי לנתח בדיוק מעל fascia השריר. (2) יש הדש עצמו ממדים צרים יותר, על מנת להבטיח שאספקת דם היא אקראית ופצעים הממוקמים בנקודת האמצע של tהוא הדש הוא איסכמי. (3) גיליון סיליקון מוחדר מתחת לדש, מניעת readherence וreperfusion של הדש מהרקמה בסיסית. התכווצות פצע מוגבלת (לא בוטל) על ידי עיגון או תפירת הדש לגיליון סיליקון 5. לאחרונה המודל נעשה שימוש במחקרים שנעו בין השפעות לחץ חמצן על פצע איסכמי ריפוי 9,10 לריפוי פצע איסכמי בצעיר לעומת חולדות בגילי 11 והוכיח להיות מודל אמין של איסכמיה רקמות הממושכת. הממדים של הדש bipedicled גם הותאמו לזני עכברוש שונים, כוללים ספראג Dawley (ארוך 11 סנטימטרים על ידי 2 סנטימטרים רוחב) וחולדות F344 (ארוך 10.5 סנטימטר על 3.0-3.5 סנטימטרים רוחב) ומינים אחרים, ובכלל זה חזירים 12 ועכברים 13,14. סרט הווידאו הזה מנצל את מתח החולדה טהור F344 בהפגנה של מודל פצע עור איסכמי. אישור לכל נהלים בבעלי החיים המוצגים להלן היה להשיגed מאוניברסיטת הדרום פלורידה הוועדה של טיפול בבעלי חיים (IACUC) ולציית לכל הדרישות של צער בעלי החיים החוק והמדריך לטיפול ושימוש בחי מעבדה.

<table><tbody><tr><td>Sil-Tec medical grade sheeting</td><td>Technical Products Inc.</td><td>500-3</td><td>nonreinforced, 0.01 inches in thickness</td></tr><tr><td>Mini Iris scissors, 8 cm, curved, SS</td><td>World Precision Instruments</td><td>#503671</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon Nylon Sutures</td><td>Ethicon</td><td>1964G</td><td>black, size 4.0, PC-3 16&amp;nbsp;mm needles (3/8 circle)</td></tr><tr><td>Laser Doppler Imager</td><td>Moor Instruments</td><td>moorLDI2-IR</td><td>Standard blood flow imager: http://us.moor.co.uk/product/moorldi2-laser-doppler-imager/8</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>NIH</td><td>free download</td><td>http://rsb.info.nih.gov/ij/</td></tr><tr><td>Mastisol</td><td>Henry Schein</td><td>Cat # 7289210</td><td>Fisher Scientific NC9774929</td></tr><tr><td>Tegaderm</td><td>Medical Specialties&amp;nbsp;</td><td>3M1624W</td><td>Fisher Scientific NC9922128</td></tr></tbody></table>

demonstration of the rat ischemic skin wound model

הנטייה לפצעים כרוניים בבני אדם עולה עם הזדקנות, תנאי מחלה כמו סוכרת ותפקוד לב וכלי דם פגום, ולחץ תמידי עקב חוסר תנועה. מודלים של בעלי החיים פותחו ניסיון שכדי לחקות את התנאים האלה לצורך קידום ההבנה של המורכבות של פצעים כרוניים שלנו. המודל המתואר כאן הוא מודל דש עור איסכמי חולדה המאפשר הפחתה ממושכת של זרימת דם וכתוצאה מכך פצעים שהפכו איסכמי ודומה פנוטיפ כרוני פצע (כלי דם מופחתים, דלקת מוגברת וסגירת פצעים מתעכבת). הוא מורכב מדש גב bipedicled עם 2 פצעים איסכמיים ממוקמים במרכז ו -2 פצעים אינם איסכמי לרוחב הדש כפקדים. בנוסף רומן למודל דש עור איסכמי זה הוא המיקום של גיליון סיליקון מתחת לדש שמתפקד כמחסום וסד למניעת revascularization ולהפחית התכווצות כלרפא את הפצעים. למרותדיון של שימוש בחולדות לריפוי פצע לימודים בשל ההבדלים אנטומיים ופיסיולוגיים שונים לגמרי שלהם בהשוואה לבני אדם (כלומר, הנוכחות של שריר carnosus מִרפָּד, תוחלת חיים קצרה, מספר הגדל של זקיקי שיער, וביכולתם לרפא את הפצעים נגועים) השינויים מועסקים במודל זה הופכים אותו לאלטרנטיבה יקרה לדגמי דש עור איסכמי שפותחו בעבר.

פרוטוקול מודל ריפוי עכברוש איסכמי פצע צריך לקחת כ 20 דקות לכל בעל חיים אם ביצע ביעילות. לפני היישום של הלבשת המודל אמור להופיע כפי שהוא מיוצג באיור 1G. זה יהיה חשוב כדי לוודא שהדש ופצעי bipedicled בי הם איסכמי. מתח חמצן תת עורי (PscO 2) ברמה של הפצעים כבר נמדד במהלך...

Watch this Scientific Journal Video about Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model at JoVE.com

Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model

החולדה, בשל הגודל, הזמינות, וההתנהגות לא הצייתנית שלה, נוצלה כמודל מחקר במשך שנים רבות. המטרה של פרוטוקול זה היא לנצל את החולדה כמודל ריפוי עור פצע איסכמי לספק תובנה חשובה הפתופיזיולוגיה של פצעים כרוניים.

הפגנה של דגם פצע עור העכברוש איסכמי

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and ...

demonstration-of-the-rat-ischemic-skin-wound-model

Research

JoVE Journal

Medicine

21.2K Views.  University of South Florida.  החולדה, בשל הגודל, הזמינות, וההתנהגות לא הצייתנית שלה, נוצלה כמודל מחקר במשך שנים רבות. המטרה של פרוטוקול זה היא לנצל את החולדה כמודל ריפוי עור פצע איסכמי לספק תובנה חשובה הפתופיזיולוגיה של פצעים כרוניים. 

Video: Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work well in non-ischemic wounds may not work in human diabetic wounds because vasculopathy is one major factor that hinders healing of these wounds. We published an article in 2007 describing a rabbit ear ischemic wound model created by a minimally invasive surgical technique. Since then, we have further simplified the procedure for easier operation. On one ear, three small skin incisions were made on the vascular pedicles, 1-2 cm from the ear base. The central artery was ligated and cut along with the nerve. The whole cranial bundle was cut and ligated, leaving only the caudal branch intact. A circumferential subcutaneous tunnel was made through the incisions, to cut subcutaneous tissues, muscles, nerves, and small vessels. The other ear was used as a non-ischemic control. Four wounds were made on the ventral side of each ear. This technique produces 4 ischemic wounds and 4 non-ischemic wounds in one animal for paired comparisons. After surgery, the ischemic ear was cool and cyanotic, and showed reduced movement and a lack of pulse in the ear artery. Skin temperature of the ischemic ear was 1-10 &deg;C lower than that on the normal ear and this difference was maintained for more than one month. Ear tissue high-energy phosphate contents were lower in the ischemic ear than the control ear. Wound healing times were longer in the ischemic ear than in the non-ischemic ear when the same treatment was used. The technique has now been used on more than 80 rabbits in which 23 were diabetic (diabetes time ranging from 2 weeks to 2 years). No single rabbit has developed any surgical complications such as bleeding, infection, or rupture in the skin incisions. The model has many advantages, such as little skin disruption, longer ischemic time, and higher success rate, when compared to many other models. It can be safely used in animals with reduced resistance, and can also be modified to meet different testing requirements.

We have developed a minimally invasive technique to create a rabbit ischemic ear wound model by dividing the central artery and nerve and the cranial neurovascular bundle. A subcutaneous tunnel then cuts all subcutaneous tissues. This procedure causes minimal skin disruption and can be safely used in diabetic animals.

טכניקה פשוטה לייצור דגם פצע איסכמי

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ischemia and reperfusion. Immune response includes cytokine expression and release or secretion of endogenous ligands of innate immune receptors. Activation of innate immunity can potentially modulate infarct size. We have modified an existing murine closed-chest model using hanging weights which could be useful for studying myocardial pre- and postconditioning and the role of innate immunity in myocardial ischemia and reperfusion. This model allows animals to recover from surgical trauma before onset of myocardial ischemia.
Volatile anesthetics have been intensely studied and their preconditioning effect for the ischemic heart is well known. However, this protective effect precludes its use in open chest models of coronary artery ligation. Thus, another advantage could be the use of the well controllable volatile anesthetics for instrumentation in a chronic closed-chest model, since their preconditioning effect lasts up to 72 hours. Chronic heart diseases with intermittent ischemia and multiple hit models are other possible applications of this model.
For the chronic closed-chest model, intubated and ventilated mice undergo a lateral blunt thoracotomy via the 4th intercostal space. Following identification of the left anterior descending a ligature is passed underneath the vessel and both suture ends are threaded through an occluder. Then, both suture ends are passed through the chest wall, knotted to form a loop and left in the subcutaneous tissue. After chest closure and recovery for 5 days, mice are anesthetized again, chest skin is reopened and hanging weights are hooked up to the loop under ECG control.
At the end of the ischemia/reperfusion protocol, hearts can be stained with TTC for infarct size assessment or undergo perfusion fixation to allow morphometric studies in addition to histology and immunohistochemistry.

Surgical trauma induces an inflammatory response. Cytokines and endogenous ligands are known to modulate myocardial infarct size following ischemia and reperfusion. We present a modified closed-chest model of murine ischemia and reperfusion using hanging weights to minimize effects of thoracotomy.

דגם Murine סגור החזה של איסכמיה של שריר הלב reperfusion

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide. Medical therapies for symptomatic relief are limited. Surgical or endovascular interventions are useful for some individuals, but long-term results are often disappointing. As a result, there is a need for developing new therapies to treat PAD. The murine hindlimb ischemia preparation is a model of PAD, and is useful for testing new therapies. When compared to other models of tissue ischemia such as coronary or cerebral artery ligation, femoral artery ligation provides for a simpler model of ischemic tissue. Other advantages of this model are the ease of access to the femoral artery and low mortality rate. 
In this video, we demonstrate the methodology for the murine model of unilateral hindimb ischemia. The specific materials and procedures for creating and evaluating the model will be described, including the assessment of limb perfusion by laser Doppler imaging. This protocol can also be utilized for the transplantation and non-invasive tracking of cells, which is demonstrated by Huang et al.1.

Murine Model of Hindlimb Ischemia

The surgical procedure for induction of unilateral hindlimb ischemia is demonstrated, with confirmation of ischemia by laser Doppler perfusion imaging.

דגם Murine של איסכמיה Hindlimb

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Biology

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite tissue. Ischemia reperfusion injury (IRI) is a known cause of partial free flap failure and has no effective treatment. Establishing a laboratory model of this injury can prove costly both financially as larger mammals are conventionally used and in the expertise required by the technical difficulty of these procedures typically requires employing an experienced microsurgeon. This publication and video demonstrate the effective use of a model of IRI in rats which does not require microsurgical expertise. This procedure is an in situ model of a transverse abdominis myocutaneous (TRAM) flap where atraumatic clamps are utilized to reproduce the ischemia-reperfusion injury associated with this surgery. A laser Doppler Imaging (LDI) scanner is employed to assess flap perfusion and the image processing software, Image J to assess percentage area skin survival as a primary outcome measure of injury.

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

Free tissue transfer is widely employed in reconstructive surgery to restore form and function following oncological resection and trauma. Preconditioning this tissue prior to surgery may improve outcome. This article describes an in situ transverse rectus abdominis myocutaneous flap (TRAM) in rats as a means for testing preconditioning strategies.

באתרו מדף רוחבי Rectus abdominis Myocutaneous: מודל עכברוש של הפגיעה reperfusion איסכמיה Myocutaneous

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite ...

Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are still occurring, particularly in reconstructive flap surgery. Multiple experimental flap models have been developed to analyze underlying causes and mechanisms and to investigate treatment strategies to prevent ischemic complications. The limiting factor of most models is the lacking possibility to directly and repetitively visualize microvascular architecture and hemodynamics. The goal of the protocol was to present a well-established mouse model affiliating these before mentioned lacking elements. Harder et al. have developed a model of a musculocutaneous flap with a random perfusion pattern that undergoes acute persistent ischemia and results in ~50% necrosis after 10 days if kept untreated. With the aid of intravital epi-fluorescence microscopy, this chamber model allows repetitive visualization of morphology and hemodynamics in different regions of interest over time. Associated processes such as apoptosis, inflammation, microvascular leakage and angiogenesis can be investigated and correlated to immunohistochemical and molecular protein assays. To date, the model has proven feasibility and reproducibility in several published experimental studies investigating the effect of pre-, peri- and postconditioning of ischemically challenged tissue.

The window of the murine dorsal skinfold chamber presented visualizes a zone of acute persistent ischemia of a musculocutaneous flap. Intravital epi-fluorescence microscopy permits for direct and repetitive assessment of the microvasculature and quantification of hemodynamics. Morphologic and hemodynamic results can further be correlated with histological and molecular analyses.

פגיעה ברקמות איסכמי בהגבו skinfold לשכת העכבר: דגם דש עור לחקור איסכמיה מתמיד חריפה

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for myocardial infarction and cardiac complications of thoracic surgery. The ability of certain drugs to precondition the myocardium against ischemia reperfusion injury has led to multiple clinical trials, with little success. The isolated heart model allows acute observation of the functional effects of ischemia reperfusion injury in real time, including the effects of various pharmacological interventions administered at any time-point before or within the ischemia-reperfusion injury window. Since brief periods of ischemia can precondition the heart against ischemic injury, in situ aortic cannulation is performed to allow for functional assessment of non-preconditioned myocardium. A saline filled balloon is placed into the left ventricle to allow for real-time measurement of pressure generation. Ischemic injury is simulated by the cessation of perfusion buffer flow, followed by reperfusion. The duration of both ischemia and reperfusion can be modulated to examine biochemical events at any given time-point. Although the Langendorff isolated heart model does not allow for the consideration of systemic events affecting ischemia and reperfusion, it is an excellent model for the examination of acute functional and biochemical events within the window of ischemia reperfusion injury as well as the effect of pharmacological intervention on cardiac pre- and postconditioning. The goal of this protocol is to demonstrate how to perform in situ aortic cannulation and heart excision followed by ischemia/reperfusion injury in the Langendorff model.

The isolated rat heart is an enduring model for ischemia reperfusion injury. Here, we describe the process of harvesting the beating heart from a rat via in situ aortic cannulation, Langendorff perfusion of the heart, simulated ischemia-reperfusion injury, and infarct staining to confirm the extent of ischemic insult.

אינדוקציה והערכה של איסכמיה reperfusion פגיעה בלבבות עכברוש Langendorff-perfused

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many areas of biomedical research due to its cost-effectiveness and its translation to humans. This protocol describes a method to create a preclinical free skin flap model in rats with ischemia-reperfusion injury. The described 3 cm x 6 cm rat free skin flap model is easily obtained after the placement of several vascular ligatures and the section of the vascular pedicle. Then, 8 h after the ischemic insult and completion of the microsurgical anastomosis, the free skin flap develops the tissue damage. These ischemia-reperfusion injury-related damages can be studied in this model, making it a suitable model for evaluating therapeutic agents to address this pathophysiological process. Furthermore, two main monitoring techniques are described in the protocol for the assessment of this animal model: transit-time ultrasound technology and laser speckle contrast analysis.

Here, we describe a pre-clinical animal model for studying the pathophysiology of ischemia-reperfusion injury in reconstructive microsurgery. This free skin flap model based on the superficial caudal epigastric vessels in the rat may also allow for the evaluation of different therapies and compounds to counteract ischemia-reperfusion injury-related damage.

מודל מפרה קליני לחקר איסכמיה-reperfusion פציעה במיקרו-כירורגיה משחזרת

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Improved Rodent Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury

Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence suggests that thrombolytic therapy or primary percutaneous coronary intervention (PPCI) does not prevent reperfusion injury. There is still no ideal animal model for MIRI. This study aims to improve the MIRI model in rats to make surgery easier and more feasible. A unique method for establishing MIRI is developed by using a soft tube during a key step of the ischemic period. To explore this method, thirty rats were randomly divided into three groups: sham group (n = 10); experimental model group (n = 10); and existing model group (n = 10). Findings of triphenyltetrazolium chloride staining, electrocardiography, and percent survival are compared to determine the accuracies and survival rates of the operations. Based on the study results, it has been concluded that the improved surgery method is associated with a higher survival rate, elevated ST-T segment, and larger infarct size, which is expected to mimic the pathology of MIRI better.

Myocardial ischemia-reperfusion model of rat heart is improved by using a self-made retractor, polyvinyl chloride tube, and a unique knotting method. Electrocardiogram, triphenyltetrazolium chloride and histological staining, and percent survival analysis results showed that the improved model group has higher success and survival rates than the already existing model group.

מודל מכרסמים משופר של איסכמיה שריר הלב ופציעת רפרפוזיה

Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence ...

Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats with Preserved Vascular Anatomy

A Rat Model of Middle Cerebral Artery Occlusion/Reperfusion Without Damaging the Anatomical Structure of Cerebral Vessels

Ischemic stroke stands as the primary cause of long-term disability and mortality among adults worldwide. Animal models of ischemic stroke have significantly contributed to our understanding of its pathological mechanisms and the development of potential treatments. Presently, there are two common methods involving filament (endovascular suture) techniques to induce animal models of cerebral ischemia. However, these methods have inherent limitations, such as reduced blood perfusion to the brain, damage to the external carotid artery system, impaired food and/or water intake, and sensory dysfunction of the face. This article introduces a new method for inducing a rat ischemic stroke model without compromising the cerebral vascular anatomy. In this study, the common carotid artery (CCA) of Sprague-Dawley rats was exposed, and an incision was made. A filament was then inserted through the incision into the internal carotid artery to occlude the middle cerebral artery. After 1.5 h of induced ischemia, the occluding filament was fully removed from both the internal carotid artery and the CCA. The incision in the CCA was subsequently sutured using 11-0 microsurgical sutures under a microscope (magnification 4x). Through the utilization of microsurgical techniques to repair the CCA, this study successfully developed a unique method to induce an ischemic stroke model in rats while preserving the anatomical integrity of cerebral blood vessels.

The current protocol describes a rat model of middle cerebral artery occlusion/reperfusion that preserves the anatomical structure of cerebral vessels without causing damage.

Ischemic stroke stands as the primary cause of long-term disability and mortality among adults worldwide. Animal models of ischemic stroke have ...

Neuroscience

Model of Ischemia and Reperfusion Injury in Rabbits

The protocol here provides a simple, highly replicable methodology to induce in situ acute regional myocardial ischemia in the rabbit for non-survival and survival experiments. New Zealand White adult rabbit is sedated with atropine, acepromazine, butorphanol, and isoflurane. The animal is intubated and placed on mechanical ventilation. An intravenous catheter is inserted into the marginal ear vein for the infusion of medications. The animal is pre-medicated with heparin, lidocaine, and lactated Ringer&#39;s solution. A carotid cut-down is performed to obtain arterial line access for blood pressure monitoring. Select physiologic and mechanical parameters are monitored and recorded by continuous real-time analysis.
With the animal sedated and fully anesthetized, either a fourth intercostal space small left thoracotomy (survival) or midline sternotomy (non-survival) is performed. The pericardium is opened, and the left anterior descending (LAD) artery is located.
A polypropylene suture is passed around the second or third diagonal branch of the LAD artery, and the polypropylene filament is threaded through a small vinyl tube, forming a snare. The animal is subjected to 30 min of regional ischemia, achieved by occluding the LAD by tightening the snare. Myocardial ischemia is confirmed visually by regional cyanosis of the epicardium. Following regional ischemia, the ligature is loosened, and the heart is allowed to re-perfuse.
For both survival and non-survival experiments, the myocardial function can be assessed via an echocardiography (ECHO) measurement of the fractional shortening. For non-survival studies, data from sonomicrometry collected using three digital piezoelectric ultrasonic probes implanted within the ischemic area and the left ventricle developed pressure (LVDP) using an apically inserted left ventricle (LV) catheter can be continuously acquired for evaluating the regional and global myocardial function, respectively.
For survival studies, the incision is closed, a left needle thoracentesis is performed for pleural air evacuation, and postoperative pain control is achieved.

The present study demonstrates a highly reproducible animal model of acute regional myocardial ischemia and reperfusion injury in rabbits using a left mini-thoracotomy for survival cases or a midline sternotomy for non-survival cases.

מודל של איסכמיה ופגיעה רפרפוזיה בארנבים

The protocol here provides a simple, highly replicable methodology to induce in situ acute regional myocardial ischemia in the rabbit for non-survival and ...