Sviluppo di un modello di inalazione preclinica per testare i distillati di cannabis vaporizzati

Riepilogo

Le cartucce per vaporizzatori di distillato di cannabis sono dispositivi alimentati a batteria che aerosolizzano estratti contenenti alte concentrazioni di cannabinoidi. L'assenza di modelli preclinici consolidati per questi prodotti crea sfide nello studio dei loro effetti fisiologici. Per colmare questa lacuna, è stato sviluppato un modello murino standardizzato di inalazione preclinica per distillati di cannabis vaporizzati.

Abstract

Nonostante la loro crescente popolarità, i prodotti per lo svapo di cannabis rimangono poco studiati. Le cartucce per vaporizzatori di cannabis vengono utilizzate con dispositivi alimentati a batteria che aerosolizzano estratti di fiori di cannabis contenenti alte concentrazioni di cannabinoidi come il THC. Questi tipi di prodotti sono comunemente noti come distillati di cannabis. La potenza di questi prodotti presenta sfide nello stabilire un dosaggio efficace per gli studi preclinici. Attualmente, non esistono modelli preclinici consolidati e standardizzati per testare la sicurezza e l'efficacia di questi prodotti in modi analoghi ai modelli di utilizzo umano. Pertanto, il regime di esposizione in vivo al distillato di cannabis necessario per raggiungere dosi fisiologicamente rilevanti rispetto a ciò che si ottiene nell'uomo rimane indeterminato. Per colmare questa lacuna, è stato sviluppato un modello murino preclinico standardizzato per l'inalazione di distillati di cannabis vaporizzati utilizzando un sistema di somministrazione controllato da computer. Questo protocollo descrive in dettaglio le procedure per somministrare distillati di cannabis utilizzando una topografia a sbuffo irreggimentata ai topi da una torre di esposizione solo al naso. Vengono inoltre forniti metodi per monitorare gli esiti comportamentali dei topi dopo l'esposizione e l'utilizzo di un ELISA semiquantitativo per confermare la somministrazione di THC nella circolazione sistemica. Questo protocollo consentirà di studiare le risposte polmonari e sistemiche ai prodotti distillati di cannabis da svapo da parte di ricercatori interessati a esplorare l'impatto dello svapo di cannabis utilizzando protocolli di somministrazione nel mondo reale, fornendo così l'opportunità di una rigorosa valutazione terapeutica e di sicurezza.

Introduzione

Con la legalizzazione della cannabis in tutto il mondo, l'uso di cannabis è in aumento. I cambiamenti significativi nel mercato della cannabis al dettaglio non solo stanno aumentando l'accessibilità, ma stanno anche guidando lo sviluppo e la produzione di nuovi tipi di prodotti a base di cannabis per il consumo¹. I vaporizzatori, che riscaldano i prodotti a base di cannabis senza combustione, stanno diventando un metodo di consumo sempre più popolare ^2,3. I vaporizzatori includono cartucce per vaporizzatori di cannabis che utilizzano la tecnologia delle sigarette elettroniche per riscaldare e aerosolizzare i distillati di cannabis. Questi distillati vengono estratti dal fiore di Cannabis sativa per produrre un liquido viscoso con alte concentrazioni di cannabinoidi come il Δ 9-tetraidrocannabinolo (THC), il principale componente psicoattivo della cannabis⁴. Questi dispositivi sono facili da usare e da nascondere, il che li rende attraenti per gli utenti inesperti⁵. In Canada, dove la cannabis è stata legalizzata per scopi ricreativi nel 2018, i dati del sondaggio ottenuti mostrano un aumento dell'accettabilità sociale percepita dello svapo di cannabis, nonché un aumento significativo dell'uso di penne/cartucce per vaporizzatori di cannabis⁶.

I consumatori di cannabis potrebbero credere che vaporizzare i distillati di cannabis sia più sicuro che fumare il fiore essiccato sotto forma di spinello, contribuendo alla sua crescente popolarità². Nonostante la possibile riduzione dell'esposizione ai prodotti di combustione inalati quando si utilizzano distillati di cannabis da svapo, questi prodotti potrebbero non essere privi di rischi. Una preoccupazione è l'esposizione ad alte dosi di cannabinoidi presenti nelle cartucce di vaporizzazione commerciali. Il fiore di cannabis essiccato può essere acquistato con un massimo del 36% di THC, mentre la concentrazione di THC nelle cartucce di distillato di cannabis può raggiungere il 96%⁷. Gli aerosol delle cartucce di distillato di cannabis contengono circa il doppio delle concentrazioni di THC rispetto al fumo di cannabis ^8,9. Non è ancora noto quali effetti abbiano queste elevate concentrazioni di THC sulle vie respiratorie. Inoltre, le alte concentrazioni di THC rappresentano una sfida nello stabilire un dosaggio efficace per gli studi preclinici murini, poiché un'eccessiva esposizione al THC può avere effetti negativi sui topi¹⁰. È essenziale iniziare con livelli minimi di esposizione e aumentare gradualmente fino a raggiungere dosi fisiologicamente rilevanti per garantire che queste esposizioni siano rilevanti.

Ad oggi, non ci sono studi che esaminino i potenziali effetti dei distillati di cannabis vaporizzati per via inalatoria. Ciò è dovuto, in parte, alla mancanza di modelli preclinici standardizzati esistenti. Le sfide della ricerca si aggravano nelle regioni in cui questi prodotti rimangono illegali, spingendo i ricercatori a produrre internamente distillati che potrebbero non riflettere accuratamente i prodotti commerciali¹¹. Inoltre, l'ampia gamma di prodotti disponibili complica la standardizzazione. Per colmare questa lacuna, questo studio è stato avviato utilizzando prodotti legali e disponibili in commercio accessibili ai consumatori canadesi. I prodotti e i dispositivi elencati come i più venduti sull'Ontario Cannabis Store sono stati selezionati per l'uso. L'obiettivo di questo protocollo è quello di stabilire un regime di esposizione ai murini facile da usare che fornisca dosi di THC paragonabili ai livelli umani fisiologicamente rilevanti, creando una base per i ricercatori per condurre ulteriori studi sugli effetti respiratori e sistemici dei distillati di cannabis vaporizzati.

Protocollo

Le procedure seguenti sono state approvate dal Comitato Istituzionale per la Cura degli Animali della McGill University (Protocollo Numero 8087) in conformità con le linee guida del Canadian Council on Animal Care (CCAC).

1. Preparazione dell'attrezzatura

NOTA: Il seguente protocollo si applica al sistema SCIREQ inExpose supportato dal software flexiWare 8.

1. Assicurarsi che l'assemblaggio corretto di tutti i componenti del sistema sia simile all'esempio mostrato nella Figura 1A. Assicurarsi che sia inserito un tubo chiuso nella camera tampone della pompa di soffiaggio per evitare perdite dal sistema, come mostrato nella Figura 1B.
2. Accendere il sistema e avviare il software. Seleziona il modulo Sessioni di sperimentazione .
3. Seleziona Nuovo studio e definisci i gruppi sperimentali e i soggetti da studiare. Selezionare il modello sperimentale che corrisponde al regime di esposizione desiderato.
4. Nella finestra Proprietà sessione, completare la sezione Operatore per tenere traccia dell'utilizzo dell'attrezzatura.
5. Per eseguire la calibrazione, selezionare il canale desiderato e seguire i passaggi descritti nel software operativo.
6. (Passaggio critico) Per eseguire il test di flusso dell'impianto, selezionare la pompa desiderata e seguire i passaggi descritti nel software operativo. Verificare che il flusso del sistema sia diretto verso il rotametro. Questa calibrazione serve a garantire che non vi siano perdite nel sistema. Se il sistema non supera il test di flusso, pulire i componenti e i tubi prima di ritentare il test.
7. Annulla richiede di avviare la registrazione dei dati a meno che non sia pronto per avviare l'esperimento.

2. Creazione di profili Puff

1. Creare un profilo di flusso di polarizzazione di 2 L/min per garantire un'adeguata aerazione dei soggetti durante l'esperimento. A tale scopo, fare riferimento alla nota tecnica 037: Guida alla creazione di profili in un documento esterno disponibile presso il produttore.
2. Crea un tiro per i profili delle sigarette elettroniche. A tale scopo, fare riferimento alla nota tecnica 037. Nel protocollo qui descritto, il technote è stato modificato per fornire un volume di 78 mL, con una durata di 2,4 s e 1, 2 o 4 sbuffi/min come precedentemente pubblicato 12,13,14,15,16,17.

3. Preparazione degli animali

1. Utilizzare topi C57BL/6 maschi e femmine, di età compresa tra 10 e 12 settimane e con un peso di circa 20-30 g per questo protocollo. Acclimatare i topi al sistema gradualmente nel corso di 3 giorni.
   1. Iniziare l'acclimatazione con il posizionamento dei topi all'interno del sistema di ritenuta morbido, quindi avviare il flusso di polarizzazione a 2 L/min con aria ambiente per un periodo che corrisponda alla durata della loro esposizione sperimentale. Utilizzare un periodo di acclimatazione di 10 minuti, 20 minuti o 30 minuti per abbinare le esposizioni sperimentali qui descritte. Queste misure sono state adottate per ridurre al minimo gli impatti indotti dallo stress sui risultati di interesse.
   2. Per posizionare gli animali in sistemi di ritenuta morbidi, ritrarre completamente il componente della rete, tenere l'intero sistema di ritenuta davanti all'animale e attendere che l'animale si sposti nel componente dello stantuffo.
   3. Verificare che il naso dell'animale sia visibile nel componente dello stantuffo del sistema di ritenuta, quindi fissare una clip per raccoglitore appena dietro l'animale per evitare qualsiasi movimento fuori dal sistema di ritenuta.
      NOTA: Gli animali più giovani e più piccoli possono manovrare più facilmente all'interno del sistema di ritenuta, quindi è essenziale verificare che il loro naso rimanga visibile all'esterno del componente dello stantuffo.
2. Quando si lavora con topi di sesso o genotipi diversi, prendere in considerazione l'utilizzo di clip per leganti con codice colore per distinguere tra gli animali.

4. Esposizione degli animali

1. Posizionare sei animali immobilizzati nella torre di sola muso del sistema di esposizione e avviare il flusso di polarizzazione a 2 L/min con aria ambiente per garantire un flusso d'aria sufficiente.
2. Nella finestra mobile delle attività sul lato destro dello schermo, fai clic con il pulsante destro del mouse sul profilo della sigaretta elettronica creato, quindi seleziona Proprietà attività.
3. In Frequenza soffio, inserisci la frequenza desiderata per avviare un soffio. Ad esempio, un regime di 2 sbuffi/min richiede un input di 30 s. Fare clic su OK, quindi su Sì quando il software richiede la conferma di questa modifica. Per salvare questo regime di sbuffi per un uso futuro, alla fine della sessione segui le istruzioni per salvarlo come modello.
4. Quando sei pronto per eseguire l'esposizione, fai doppio clic sul profilo della sigaretta elettronica creato e ora modificato. Assicurati di avviare un timer per monitorare la durata dell'esposizione.
5. Per valutare la dose su lunghezze di esposizione crescenti, eseguire esposizioni di 10 min, 20 min e 30 min a 1 boccata/min. Quindi, per valutare l'aumento dell'intensità dell'esposizione, mantenere una lunghezza di esposizione di 10 minuti e aumentare la frequenza dei soffi a 1 boccata/min, 2 boccate/min e 4 boccate/min.
6. Al termine dell'esposizione, riavviare il flusso di polarizzazione mentre si riportano gli animali nelle loro gabbie.
7. Per rimuovere gli animali dai sistemi di ritenuta, staccare la clip del raccoglitore e ritrarre completamente la rete fino allo stantuffo, consentendo all'animale di uscire dal sistema di ritenuta da solo. Se l'animale rimane nel sistema di contenzione, tirare delicatamente la coda per segnalare che è libero di muoversi all'indietro fuori dal sistema di contenzione.

5. Test di ipolocomozione

1. Immediatamente dopo l'esposizione, trasferire gli animali in una suite di test comportamentali per eseguire un test in campo aperto utilizzando il software ANY-Maze. Per eseguire registrazioni di base del comportamento degli animali, assicurarsi che siano esposti solo al flusso di polarizzazione.
2. Assicurati che la stanza sia ben illuminata e riduci al minimo i livelli di rumore per evitare stress inutili sugli animali, in quanto ciò potrebbe influenzare il loro comportamento.
3. Apri il software e seleziona Nuovo esperimento vuoto. Nella scheda Protocollo nella parte superiore dello schermo, seleziona Aggiungi elemento, quindi fai clic su Nuova sorgente video dall'elenco a discesa per aggiungere la sorgente della fotocamera da utilizzare per l'esperimento.
4. Nel menu sul lato sinistro dello schermo, nella sezione Tracciamento, selezionare Apparato per definire il campo aperto in cui verrà posizionato l'animale.
5. Nella scheda Protocollo, selezionare lo strumento Rettangolo per disegnare l'area del campo aperto e inserirne le dimensioni nel software.
6. Nel menu sul lato sinistro dello schermo, nella sezione Tracciamento, seleziona Colore animale per specificare se l'animale è più chiaro o più scuro dello sfondo. Queste informazioni aiutano il software a tracciare con precisione il movimento dell'animale.
7. Nel menu a sinistra, nella sezione Test, seleziona Fasi per specificare la durata del test per l'esperimento. Immettere una durata del test di 60 s.
8. Nella scheda Esperimento, definire il trattamento sperimentale e il numero di animali per trattamento.
9. Ora, per eseguire il test, fai clic sulla scheda Test . Posiziona l'animale nel campo aperto e fai clic sul pulsante verde Riproduci sopra la registrazione del campo aperto per avviare il test.
10. Al termine del test, nel menu a sinistra, nella sezione Analisi e risultati, selezionare Risultati, report e dati e selezionare Distanza totale percorsa per includere queste informazioni nel report.
11. Per generare il report, fare clic sulla scheda Risultati ed esportare i dati nel formato desiderato.

6. Raccolta di campioni di siero

1. A 30 minuti dall'esposizione, anestetizzare gli animali con un'iniezione intraperitoneale di 250 mg/kg di avarte (2,2,2-tribromoetanolo). Per garantire una corretta anestesia, stimolare il riflesso di ritiro del pedale pizzicando la pelle tra le dita dei piedi con una pinza smussata. Una volta che il riflesso è scomparso completamente, l'animale viene anestetizzato abbastanza profondamente da essere soppresso mediante dissanguamento mediante puntura cardiaca. Il punto temporale di 30 minuti viene selezionato per raggiungere le concentrazioni sieriche massime di THC-COOH dopo l'esposizione¹⁸.
2. Raccogliere il sangue mediante puntura cardiaca in provette per la raccolta del sangue, quindi centrifugare a 10.000 x g per 10 minuti per separare il siero.
3. Utilizzare campioni di siero per eseguire un test ELISA forense di THC per quantificare i livelli di THC-COOH secondo le istruzioni del produttore e come precedentemente pubblicato¹⁹.

Risultati

L'obiettivo iniziale era quello di determinare un regime di esposizione in grado di fornire livelli fisiologicamente rilevanti di THC nel sangue rispetto agli esseri umani. Pertanto, una componente chiave per la selezione dei parametri di esposizione è stata l'utilizzo di caratteristiche che imitassero i modelli di utilizzo umano^20,21. I topi maschi e femmine C57BL/6 sono stati esposti a un Pineapple Express Pax Era Pod contenente ~85% di THC per 10 minuti, 20 minuti e 30 minuti a 1 boccata/min con un volume di soffio di 78 ml e una durata di 2,4 secondi. I topi sono stati sacrificati 30 minuti dopo l'esposizione per misurare i livelli di THC-COOH. Il THC-COOH è un metabolita secondario del THC²². Nei topi, il THC sierico raggiunge il picco immediatamente dopo l'esposizione e viene successivamente idrossilato dagli enzimi CYP450 per formare 11-OH-THC, che viene rapidamente ossidato a THC-COOH ^23,24. Il THC-COOH si accumula quindi nel siero, raggiungendo le concentrazioni di picco circa 30 minuti dopo l'esposizione, fornendo un marcatore affidabile per il rilevamento¹⁸. Le concentrazioni sieriche di THC-COOH erano inferiori al limite di rilevamento nei topi esposti all'aria, ma sono aumentate significativamente a circa 11,2 ng/mL, 15,2 ng/mL e 16,1 ng/mL nei topi esposti al prodotto di svapo THC per 10 minuti, 20 minuti e 30 minuti, rispettivamente (Figura 2A). Quindi, l'intensità delle esposizioni è stata variata aumentando il numero di boccate erogate al minuto mantenendo gli stessi tutti gli altri parametri durante un tempo di esposizione di 10 minuti. Qui, il THC-COOH sierico è aumentato significativamente a circa 11,4 ng/mL, 21,8 ng/mL e 25,2 ng/mL nei topi esposti al prodotto di svapo THC rispettivamente a 1, 2 e 4 boccate/min (Figura 2B). I livelli di THC-COOH raggiunti nei regimi di esposizione di 10 minuti, 2 boccate/min e 4 boccate/minuto si avvicinano ai livelli di THC-COOH trovati nel siero dei consumatori umani di cannabis dopo l'inalazione 22,25,26,27,28.

Dopo aver identificato un regime di esposizione che forniva dosi di cannabinoidi fisiologicamente rilevanti ai topi, il passo successivo è stato quello di confermare che questo regime avrebbe anche suscitato risultati comportamentali significativi. Per valutare ciò, è stato eseguito un test di ipolocomozione, in quanto è un componente del test della tetrade comunemente usato per valutare le risposte comportamentali al THC nei roditori²⁹. Le misurazioni di base nei topi esposti solo all'aria di polarizzazione hanno portato a uno spostamento di 3,41 m. Dopo l'esposizione a 10 minuti di prodotto da svapo THC a 2 boccate/min, lo spostamento è stato significativamente ridotto a 0,29 m e a 4 boccate/min è stato ulteriormente ridotto a 0,05 m (Figura 3). Non c'era alcuna differenza significativa nello spostamento dei topi tra le esposizioni di 2 sbuffi/min e 4 sbuffi/min. Pertanto, il regime di esposizione a 2 sbuffi/min per 10 minuti è stato selezionato per l'uso in studi futuri perché tende verso un recupero più agevole per i topi dopo l'esposizione, pur continuando a fornire dosi fisiologicamente rilevanti.

Figura 1: Rappresentazione del sistema. (A) Assicurarsi che l'apparecchiatura sia assemblata correttamente, compreso il boccaglio appropriato per il dispositivo specifico, i tubi puliti e la direzione accurata del flusso del sistema verso la torre di esposizione solo nasale. (B) Assicurarsi che la camera tampone contenga un tubo chiuso per evitare perdite, come indicato dalla freccia nella vista dall'alto. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 2: Livelli sierici di THC-COOH dopo l'esposizione al prodotto da svapo THC. Un totale di sei topi sono stati esposti a un prodotto da svapo THC contenente l'85% di THC. A 30 minuti dall'esposizione, il siero è stato raccolto per quantificare i livelli di THC-COOH mediante THC ELISA. I grafici rappresentano i livelli di THC-COOH dopo un'esposizione di (A) 10, 20 o 30 minuti a 1 boccata/min o (B) dopo un'esposizione di 10 minuti a 1, 2 o 4 boccate/min. I risultati sono espressi come media ± SEM. I punti dati rappresentano i singoli topi. La linea tratteggiata rappresenta il limite di rilevamento. Per determinare la significatività è stata utilizzata un'analisi unidirezionale della varianza (ANOVA), con differenze tra i gruppi esaminate utilizzando i test di confronto multipli di Tukey (*p = 0,0348; **p = 0,0022; ****p < 0,0001 rispetto ai topi esposti all'aria). Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 3: Test di ipolocomozione dopo l'esposizione al prodotto da svapo THC. Un totale di sei topi sono stati esposti all'aria del flusso di polarizzazione per 10 minuti, quindi trasferiti in un campo aperto per condurre un test di ipolocomozione. Al termine delle misurazioni di base, i topi sono stati esposti a un'esposizione di 10 minuti a 2 sbuffi/min o 4 sbuffi/min. Un secondo test di ipolocomozione è stato condotto subito dopo l'esposizione. La durata del test è stata di 60 s. I risultati sono espressi come media ± SEM. I punti dati rappresentano i singoli topi. Per determinare la significatività è stata utilizzata un'analisi unidirezionale della varianza (ANOVA), con differenze tra i gruppi esaminate utilizzando i test di confronto multipli di Tukey (****p < 0,0001).  Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Discussione

I prodotti da svapo a base di distillato di cannabis contengono alte concentrazioni di cannabinoidi, tra cui fino all'85% di THC per il prodotto utilizzato in questo protocollo. Poiché il fiore di cannabis raggiunge attualmente solo il 36% di THC⁷, la potenza dei prodotti da svapo a base di distillato di cannabis rappresenta una sfida quando si sviluppa un modello per l'esposizione per inalazione. L'obiettivo era quello di determinare un regime di esposizione che potesse fornire efficacemente dosi rilevanti di cannabinoidi ai topi senza causare effetti negativi da livelli eccessivi di esposizione al THC.

L'ampia gamma di prodotti a base di cannabis disponibili per l'acquisto complica i confronti tra gli studi; tuttavia, la selezione di prodotti con una potenza di THC simile favorisce la riproducibilità. Sebbene i parametri del soffio siano adattabili a vari prodotti, l'uso di prodotti a bassa potenza può richiedere esposizioni prolungate per garantire la riproducibilità, insieme alla verifica della dose sistemica erogata. Inoltre, è importante notare che questo studio ha esposto sei topi contemporaneamente. Ad esempio, un'esposizione di 10 minuti a 2 sbuffi/min viene distribuita su sei topi, il che significa che la modifica del numero di topi per sessione di esposizione potrebbe influire sulla dose individuale ricevuta. La comunicazione trasparente del numero di animali per esposizione è essenziale negli studi futuri che utilizzano apparecchiature simili, in quanto potrebbe avere un impatto significativo sulla dose efficace ricevuta da ciascun animale e, di conseguenza, sui risultati complessivi dello studio. Inoltre, nonostante gli sforzi per sviluppare profili di sbuffo che replichino i modelli di utilizzo umano, è importante notare che i topi esposti non inalano completamente ogni soffio prodotto. Una parte considerevole dell'aerosol viene rilasciata nell'ambiente circostante. Pertanto, la verifica della dose erogata nella circolazione sistemica a seguito dell'esposizione è fondamentale per l'interpretazione finale dei dati. Inoltre, le tecniche di monitoraggio degli aerosol, come l'incorporazione di filtri specializzati in politetrafluoroetilene (PFTE) all'interno del sistema di esposizione per catturare le particelle di aerosol, possono essere utilizzate per valutare la deposizione di particelle^30,31. Dopo l'esposizione, il contenuto di THC depositato su questi filtri può essere estratto e quantificato utilizzando la cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS)³². Inoltre, la dimensione delle particelle può essere misurata utilizzando la diffrazione laser³³. Integrando i dati sulla concentrazione di aerosol, la dimensione delle particelle e i parametri respiratori murini come il volume corrente e la frequenza respiratoria, le dosi teoriche inalate possono essere stimate con maggiore precisione utilizzando modelli di dosimetria computazionale 34,35,36.

Negli studi per inalazione, vengono utilizzate due modalità di esposizione primaria: esposizioni di tutto il corpo e esposizioni solo al naso. Nelle esposizioni di tutto il corpo, gli animali sono liberi di essere trattenuti, consentendo all'intera superficie corporea di entrare in contatto con l'atmosfera di prova³⁷. Uno svantaggio di questo metodo è la possibilità che gli agenti in esame si depositino sulla pelliccia, che può essere ingerita quando l'animale si pulisce, introducendo una via di esposizione non intenzionale³⁸. Questo può essere evitato utilizzando una torre di inalazione solo nasale. Tuttavia, anche le esposizioni al solo naso hanno dei limiti. Trattenere gli animali può aumentare lo stress e alcune restrizioni possono compromettere la termoregolazione³⁹. Questo approccio può anche diventare laborioso quando si lavora con gruppi più grandi di animali. Nel tentativo di mitigare questi fattori ed evitare risultati confondenti, è essenziale posizionare gli animali di controllo in sistemi di ritenuta all'interno della torre di esposizione, ricevendo solo il flusso d'aria di polarizzazione.

Qui viene proposta una dose di esposizione standardizzata che raggiunga livelli fisiologicamente rilevanti di cannabinoidi rispetto agli esseri umani. Questa misurazione di base stabilisce una base per i ricercatori per esplorare gli impatti di dosi di esposizione più basse e più elevate, modificando la frequenza del soffio e la durata dell'esposizione per determinare la dose efficace desiderata per specifiche esigenze sperimentali. Gli studi futuri mirano a confrontare vari prodotti e dispositivi commerciali e a valutarne gli effetti respiratori utilizzando il protocollo qui descritto. Dato che i ricercatori respiratori utilizzano frequentemente topi C57BL/6 e Balb/c, è anche essenziale determinare se i risultati qui presentati sono applicabili ai topi Balb/c per guidare la ricerca futura. Inoltre, la dose proposta dal protocollo è adatta per studi estesi che indagano sugli effetti acuti o cronici dei prodotti da svapo a base di distillato di cannabis, offrendo l'opportunità di una rigorosa valutazione della sicurezza. Dato che la via di esposizione è l'inalazione, è essenziale comprendere a fondo gli effetti di questi prodotti sui polmoni. Studiare come le esposizioni croniche influenzano la meccanica polmonare, la funzione delle cellule immunitarie residenti nei tessuti e la suscettibilità alla malattia può fornire una comprensione iniziale del loro impatto sulla fisiologia polmonare. Inoltre, le preoccupazioni relative agli effetti a lungo termine di questi prodotti si estendono oltre i polmoni ad altri organi. Ad esempio, gli effetti cronici della potente esposizione allo svapo di THC sul cervello rimangono poco compresi; tuttavia, l'esposizione cronica al THC è stata collegata a deterioramento cognitivo, dipendenza e alterazioni strutturali nel cervello 40,41,42,43. Inoltre, data la popolarità di questi prodotti tra i giovani, il loro potenziale impatto sullo sviluppo del cervello merita un'indagine. Il perseguimento di questi endpoint sarà importante man mano che il mercato della cannabis continua a crescere e c'è bisogno di ricerche per indagare sulla sicurezza dei nuovi prodotti. Questo è fondamentale perché contribuisce a una migliore comprensione degli effetti della cannabis e aiuta a garantire la sicurezza di milioni di consumatori di cannabis in tutto il mondo.

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,2,2-Tribromoethanol	Sigma-Aldrich	T48402-5G	Avertin
inExpose	SCIREQ	sales@scireq.com	www.scireq.com
Microtainer Serum Separator Tubes	BD	365967
Pax Era Vape Pen	PAX		Purchased from Ontario Cannabis Store
Pineapple Express Pax Pod	Good Supply		Purchased from Ontario Cannabis Store
SoftRestraints	SCIREQ	IX-XN1-SR-AL	www.scireq.com
THC Forensic ELISA Kit	Neogen	131019