Per iniziare, fai un ciclo di inoculazione per prelevare una colonia monoclonale di candida albicans da una piastra YPD. Trasferire la colonia in cinque millilitri di terreno liquido YPD, integrato con 50 microgrammi per millilitro di carbenicillina. Agitare le celle a una velocità costante di 220 giri/min a 30 gradi Celsius per una notte.
Quindi centrifugare la sospensione cellulare a 400 g per cinque minuti a temperatura ambiente. Dopo aver scartato il surnatante, risospendere le cellule in una normale soluzione salina e regolare la concentrazione cellulare facendo corrispondere la torbidità della sospensione cellulare a uno standard McFarland di 0,5. Per creare una soluzione salina normale allo 0,9%, pesare 0,9 grammi di cloruro di sodio e scioglierlo in 100 millilitri di acqua deionizzata.
Successivamente, sterilizzare in autoclave gli strumenti chirurgici in filo di lega di titanio nichel-nido a 121 gradi Celsius per 30 minuti prima dell'uso. Quindi dividere in modo casuale 30 topi maschi C57BL/6 in un impianto bianco di controllo e in un gruppo PJI. Dopo aver anestetizzato i topi, rimuovere i peli dall'arto posteriore sinistro e utilizzare lo iodio per disinfettare l'area rasata.
Verificare la profondità dell'anestesia osservando la perdita del riflesso di raddrizzamento. Per i topi del gruppo di controllo, non somministrare alcun trattamento. Per i topi nell'impianto vuoto e nel gruppo PJI, utilizzare una lama numero 10 per creare un'incisione longitudinale di cinque millimetri sul ginocchio dell'arto posteriore sinistro per esporre le articolazioni per ulteriori procedure.
Ora, inserisci un ago da siringa sterile per creare un foro lungo cinque millimetri nel canale intramidollare femorale. Inserire con cautela un filo in lega di nichel titanio nel foro prima di tagliarlo con le forbici. Quindi somministrare due microlitri di YPD medium goccia a goccia lungo il filo in lega di nichel-titanio per i topi nel gruppo implantare in bianco.
Usando una sutura di nylon, chiudere la ferita strato per strato. Successivamente, inoculare due microlitri di cellule di candida albicans nello spazio articolare dei topi lungo il filo in lega di nichel titanio nel gruppo PJI. Usando una sutura di nylon, chiudere la ferita strato per strato.
Ospita i topi con libero accesso all'acqua e al cibo per 14 giorni.
