Per iniziare, posizionare gli strumenti chirurgici autoclavati sul tavolo operatorio. Radere l'addome del ratto anestetizzato e posizionare il ratto in posizione supina sulla tavola chirurgica. Pulire l'addome con iodio povidone seguito da etanolo al 70%.
Metti un unguento oftalmico sotto gli occhi del ratto per prevenire la secchezza. Fissare il ratto in posizione sulla tavola chirurgica. Avviare il software di acquisizione dati e iniziare la registrazione.
Accendi il ventilatore a quattro millilitri per chilogrammo e assicurati che la pressione positiva di fine espirazione sia di circa due centimetri di acqua. Usando le forbici, eseguire una laparotomia sulla linea mediana dal processo xifoideo alla sinfisi pubica. Quindi, con l'aiuto di uno strumento contundente, eseguire una rotazione viscerale mediale-laterale e visualizzare la vena cava inferiore infraepatica.
Iniettare l'eparina nella vena cava inferiore con un ago calibro 20. Usando un paio di forbici, taglia la pelle dalla tacca sternale fino a poco sotto l'angolo della mandibola e inizia a sezionare verso la trachea. Quindi, sezionare senza mezzi termini i muscoli della cinghia necessari per esporre la trachea.
Praticare un'incisione trasversale sulla trachea anteriore tra gli anelli cartilaginei facendo attenzione a non tagliare la parte posteriore della trachea. Posizionare una sutura di seta 5-0 attorno alla trachea. Inserire il tubo endotracheale negli anelli cartilaginei e fissarlo con la sutura di seta 5-0.
Collegare il tubo endotracheale al ventilatore e garantire una corretta risalita del torace. Usando le forbici, eseguire una sternotomia mediana ed entrare nella cavità toracica. Posizionare i divaricatori della parete toracica per esporre il cuore e i polmoni, evitando qualsiasi manipolazione involontaria dei polmoni.
Con la combinazione di dissezione acuta e smussata, rimuovere il timo dal mediastino anteriore. Identificare l'arteria polmonare e posizionare una sutura di seta 5-0 attorno ad essa per prepararsi all'incannulamento. Praticare un'incisione di due o tre millimetri nel tratto di efflusso ventricolare destro usando le forbici per posizionare la cannula arteriosa all'interno dell'arteria polmonare e fissarla con la sutura 5-0.
Dopo l'eutanasia del ratto, collegare rapidamente il liquido di conservazione polmonare disaerato alla cannula arteriosa per lavare i polmoni per gravità. Collegare la cannula arteriosa al circuito EVLP. Accendere la pompa a rulli e lasciare che una piccola quantità di perfusato fluisca attraverso il polmone e fuori dal ventricolo sinistro nella cavità toracica.
Una volta che il perfusato inizia a fuoriuscire dall'atrio sinistro, spegnere la pompa a rulli. Quindi, posizionare una piccola pinza nel ventricolo sinistro e allungare delicatamente l'anulus della valvola mitrale. Metti una cravatta di seta 5-0 intorno al cuore e lega liberamente.
Inserire la cannula dell'atrio sinistro nel ventricolo sinistro e far avanzare la cannula fino a quando non può essere vista all'interno dell'atrio. Fissare l'atrio sinistro con la sutura 5-0 pre-legata. Identificare l'esofago e bloccarlo con un emostatico il più vicino possibile al diaframma.
Quindi, tagliare l'esofago sotto l'emostato. Usando la colonna vertebrale come guida, tagliare con le forbici tutti gli attacchi legamentosi che collegano il blocco cuore-polmone alle strutture circostanti. Quindi sezionare la trachea dal collo e tagliare la trachea sopra il tubo endotracheale per liberare il blocco cuore-polmone.
Spostare il blocco cuore-polmone sulla camicia toracica all'interno del circuito EVLP e collegare la cannula dell'atrio sinistro al circuito. Accendere la pompa a rulli e collegare il monitor del ventilatore. Controllare la trappola per bolle per assicurarsi che non vengano introdotti emboli d'aria nel sistema.
Modificare lentamente le impostazioni di ventilazione e perfusione ai livelli sperimentali desiderati durante i primi 15 minuti. Inoltre, aumentare la portata di perfusione alla velocità e alla pressione desiderate. Nei punti temporali designati, controllare i livelli di gas perfusato e i test di funzionalità polmonare.
Tutti i perfusi testati hanno mostrato una leggera diminuzione della pressione parziale dell'ossigeno nell'atrio sinistro, con il perfusato a base di globuli rossi che diminuiva significativamente a un'ora. Per le ore successive, sia il polihHB che i perfusi di controllo hanno avuto una pressione parziale stabile dell'ossigeno nell'atrio sinistro. La pressione parziale delta dell'ossigeno è diminuita significativamente a un'ora nel gruppo perfusato di globuli rossi, mentre è rimasta stabile nel polihHB e il controllo perfonde con un andamento non significativo.
La pressione parziale dell'anidride carbonica nell'atrio sinistro era significativamente più bassa nei globuli rossi e nel perfusato di controllo rispetto al polihHB dopo la prima ora, e questa tendenza continua nelle ore successive. La pressione parziale delta dell'anidride carbonica è stata significativamente aumentata nel perfusato RBC dopo un'ora e successivamente è rimasta stabile sia nel polihHB che nel perfusato di controllo. I dati fisiologici polmonari in tempo reale dimostrano che il perfusato dei globuli rossi ha aumentato significativamente la resistenza vascolare polmonare entro la prima ora.
Mentre sia il polihHB che i perfusi di controllo hanno mantenuto una resistenza vascolare polmonare bassa e stabile nel corso del periodo, la variazione del peso polmonare è stata significativa inizialmente nel perfusato dei globuli rossi, con un aumento continuo di tutti i perfusi, leggermente maggiore nel polihHB. La compliance è diminuita significativamente nel perfusato RBC entro la prima ora, mentre è diminuita in modo non significativo in altri perfusi. PolyhHB ha avuto la massima conformità dopo quattro ore.
