Questo lavoro di ricerca è stato sostenuto finanziariamente da sovvenzioni fornite da Innovatief Actieprogramma Groningen (IAG-3), Jan de Cock Kornelis Stichting e Tekke Huizingafonds, tutto nei Paesi Bassi. Siamo grati a tutti i coordinatori di trapianto olandesi per identificare i potenziali scartato fegatini e ottenere il consenso informato.

Questo protocollo è stato approvato dal Comitato Etico Medico (Medisch Ethische Toetsingscommissie) del University Medical Center di Groningen, Paesi Bassi. 1. Preparazione del liquido di perfusione Nota: Il volume totale del fluido di perfusione preparato per normotermica perfusione macchina secondo questo protocollo è 2.233 ml e l&#39;osmolarità mirata del liquido di perfusione è 302 mOsmol / L. <ol><li> Dai componenti del liquido di perfusione descritto in Tabella 1, mantenere le umane imballato globuli rossi, plasma congelato fresco e albumina umana separati. Mescolare il resto dei componenti in modo sterile e conservare la soluzione in un sacchetto sterile per il trasporto in sala operatoria (OR). Fate questo in un ambiente sterile (idealmente una buona struttura Manufacturing Practice) o in una cappa a flusso laminare in una stanza della cultura. </li></ol><table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Componenti </td><td fo:width="2in" style="width:80px"> Quantità </td></tr><tr><td> Globuli rossi concentrati (ematocrito 60%) </td><td style="text-align:right"> 840 ml </td></tr><tr><td> Il plasma fresco congelato </td><td style="text-align:right"> 930 ml </td></tr><tr><td> L&#39;albumina umana 200 g / L (Albuman, Sanquin) </td><td style="text-align:right"> 100 ml </td></tr><tr><td> Modificata la nutrizione parenterale (Clinimix N17G35E, Baxter International Inc.) </td><td style="text-align:right"> 7.35 ml </td></tr><tr><td> Multivitaminici per infusione (Cernevit, Baxter International Inc.) </td><td style="text-align:right"> 7 ml </td></tr><tr><td> Oligoelementi concentrati per infusione (Nutritrace, B. Braun Melsungen AG) </td><td style="text-align:right"> 7.35 ml </td></tr><tr><td> Metronidazol per somministrazione endovenosa (5 mg / ml) (Flagyl, Sanofi-Aventis) </td><td style="text-align:right">40 ml </td></tr><tr><td> Cefazolina 1.000 mg pallone da 5 ml polvere per somministrazione endovenosa (Servazolin, Sandoz) </td><td style="text-align:right"> 2 ml </td></tr><tr><td> L&#39;insulina ad azione rapida (100 UI / ml) (Actrapid®, Novo Nordisk) </td><td style="text-align:right"> 20 ml </td></tr><tr><td> Glubionate calcio, soluzione endovenosa 10%, 137,5 mg / ml (Sandoz) </td><td style="text-align:right"> 40 ml </td></tr><tr><td> H 2 O sterile </td><td style="text-align:right"> 51.3 ml </td></tr><tr><td> NaCl soluzione 0,9% </td><td style="text-align:right"> 160 ml </td></tr><tr><td> Il bicarbonato di sodio soluzione 8,4% </td><td style="text-align:right"> 31 ml </td></tr><tr><td> Eparina 5.000 IE / ml per la somministrazione intravenosa </td><td style="text-align:right"> 4 ml </td></tr><tr><td> Totale </td><td style="text-align:right"> 2.233 ml </td></tr></tbody></table> Tabella 1: Components della perfusione fluido 16. <ol start="2"><li> Trasferimento umana globuli rossi (840 ml), plasma congelato fresco (930 ml), albumina umana 200 g / L (100 ml) e la soluzione preparata al punto 1.1 al, o somministrato al dispositivo perfusione. </li></ol> 2. Adescamento del dispositivo di perfusione <ol><li> Aggiungere i componenti del liquido di perfusione, compresi gli umani imballato globuli rossi, plasma fresco congelato, albumina umana e la soluzione preparata al punto 1.1 alla macchina tramite il connettore sopra le ossigenatori e rimuovere tutte le bolle d&#39;aria dal tubo. </li><li> Accendere la pompa venosa e seguire le istruzioni del produttore sullo schermo. Quindi, accendere la pompa arteriosa e seguire le istruzioni del produttore sullo schermo. </li><li> Nulla la misuratori di pressione contro la pressione atmosferica seguendo le istruzioni sullo schermo. Questo assicura che la pressione misurata durante le perfusione è la pressione reale a livello della vena porta e l&#39;arteria epatica. </li><li> Avviare l&#39;ossigenazione utilizzando CarboGen (95% O 2 + 5% CO 2) ad una portata di 4 l / min. Il flusso d&#39;aria sarà diviso tra i due ossigenatori (2 L / min per ossigenatore) e questo dovrebbe portare a un pO 2 di circa 60 kPa (o 450 mmHg) nel liquido di perfusione. Per perfusioni più lunghi, è consigliabile utilizzare sorgenti separate di ossigeno e anidride carbonica. Ciò consente piccoli aggiustamenti del rapporto O 2 / CO 2, che possono essere utilizzati per regolare il pH e pCO 2 del liquido di perfusione. </li><li> Prendere un campione per la misurazione della perfusione emogasanalisi 15-20 min dopo che il dispositivo è stato innescato e controllare il pH e elettroliti conseguenza. NOTA: assicurarsi di eliminare circa 3 ml di liquido di perfusione prima di prendere dei campioni, in quanto questo fluido è nel tubo periferico e non rappresenta il fluido di perfusione nel sistema. Aggiungi un 8,4% di bicarbonato di sodio sOLUZIONE per potere tampone, l&#39;obiettivo di un pH fisiologico (7,35-7,45). Ad esempio, aggiungere 25-35 ml di una soluzione di bicarbonato di sodio 8,4% e controllare i livelli di pH e bicarbonato nel liquido di perfusione prendendo campioni per la misurazione del gas di sangue ad intervalli regolari. </li></ol> 3. Appalti e preparazione di Vivi donatori Nota: Procurare dell&#39;organo utilizzando la tecnica standard di raffreddamento in situ e lavare con liquido di conservazione fredda (0-4 ° C) 19. Per facilitare incannulamento dell&#39;arteria, lasciare un segmento dell&#39;aorta supratruncal attaccato alla arteria epatica (Figura 2A). <ol><li> Lavare le vie biliari con il fluido di conservazione (cioè, University of Wisconsin soluzione). Legare il dotto cistico con una sutura chirurgica. </li><li> Imballare e conservare l&#39;organo in un sacchetto di donatore di organi sterili di serie e box con ghiaccio tritato per il successivo trasporto al centro di MP. </li><li> Iniziola procedura tavolo indietro immediatamente all&#39;arrivo del fegato donatore in sala operatoria. <ol><li> Prendete un campione di almeno 10 ml di liquido di conservazione per i test microbiologici. </li><li> Rimuovere gli allegati diaframmatica all&#39;area nuda del fegato così come qualsiasi muscolo cardiaco restante dal gambetto della vena cava con forbici chirurgiche. </li><li> Staccare l&#39;arteria e vena porta con le forbici dissezione e rami laterali legare con suture chirurgiche o hemoclips. </li><li> Chiudere l&#39;estremità distale del segmento dell&#39;aorta supratruncal usando una sutura non assorbibile monofilamento (ad esempio, 3-0 Prolene). Inserire la cannula arteriosa nell&#39;estremità prossimale dell&#39;aorta supratruncal e fissare con suture (Figura 2A). Utilizzare la cannula fornito nella confezione monouso come fornito dal produttore del dispositivo di perfusione. </li><li> Inserire la cannula venosa nella vena porta e fissare con punti di sutura. Utilizzare la cannula fornite nelle disposPacchetto grado. La vena epatica rimane uncannulated. </li><li> Lavare il dotto biliare con la soluzione di conservazione. Inserire un catetere di silicone nel dotto biliare e fissare con punti di sutura. NOTA: Non inserire il catetere troppo in profondità nel dotto biliare in quanto ciò potrebbe causare lesioni dell&#39;epitelio biliare. </li><li> Lavare il fegato con 0,9% NaCl tramite la cannula vena porta come segue: <ol><li> Se l&#39;innesto è stato conservato in University of Wisconsin soluzione come soluzione di conservazione, risciacquare il fegato con 2.000 ml di freddo (C 0-4 °) 0,9% NaCl seguita da 500 ml di caldo (37 ° C) 0,9% di NaCl soluzione. </li><li> Se l&#39;innesto è stato conservato in soluzione Istidina-triptofano-chetoglutarato come la soluzione di conservazione, scovare il fegato con 1.000 ml di freddo (0-4 ° C) 0,9% NaCl seguiti da 500 ml di caldo (37 ° C) 0,9 soluzione NaCl%. Lo scopo del filo caldo è per evitare un calo significativo della temperaturaliquido di perfusione. </li><li> Eseguire immediatamente il colore caldo prima di collegare il fegato per il dispositivo di perfusione. NOTA: Tenere sempre la durata tra filo caldo e l&#39;inizio di NMP meno di 1-2 minuti. </li></ol></li></ol></li></ol><table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Caratteristiche del donatore (N = 12) </td><td> Numero (%) o medio (IQR) </td></tr><tr><td> Età (anni) </td><td> 61 (50-64) </td></tr><tr><td> Genere maschile) </td><td> 8 (67%) </td></tr><tr><td> Tipo di donatore DCD, Maastricht Tipo III DBD </td><td> 10 (83%) 2 (17%) </td></tr><tr><td> Indice di massa corporea (BMI) </td><td> 27 (25-35) </td></tr><tr><td> Motivo del rifiuto DCD + età&gt; 60 anni DCD + alto indice di massa corporea DCD + vari motivi * Grave steatosi </td><td> 5 (41%) 3 (25%) 2 (17%) <br<html> /&gt; 2 (17%) </td></tr><tr><td> Soluzione di conservazione Soluzione UW Soluzione HTK </td><td> 6 (50%) 6 (50%) </td></tr><tr><td> Donatori tempo di ischemia calda a DCD (min) </td><td> 14 (17-20) </td></tr><tr><td> Tempo di ischemia a freddo (min) </td><td> 389 (458-585) </td></tr><tr><td> Indice di rischio dei donatori (DRI) </td><td> 2,35 (2,01-2,54) </td></tr></tbody></table> Tabella 2: donatori caratteristiche * storia del donatore di abuso di droghe per via endovenosa per un trapianto e donatore prolungata SO 2 &lt;30% dopo la sospensione del supporto vitale per un altro trapianto.. Abbreviazioni: DCD, donazione dopo la morte circolatorio; DBD, donazione dopo la morte cerebrale; UW, Università del Wisconsin; HTK, istidina-triptofano-chetoglutarato <html> g2.jpg &quot;/&gt; Figura 2: (A) le immagini di un innesto donatore umano che è stato preparato sul tavolo posteriore e (B - D) è stata successivamente perfuso normothermically. (A) La cannula arteriosa viene inserito nell&#39;aorta surpratruncal e la cannula venosa viene inserito nella vena porta. Il dotto biliare è cannulata con un catetere biliare silicio. (B) Il fegato è posizionato nella camera di organo con la superficie anteriore rivolta verso il basso e cannule sono collegati ai tubi del dispositivo di perfusione. (C) 30 min dopo l&#39;inizio della perfusione normotermico macchina. (D) 6 ore dopo l&#39;inizio della perfusione normotermico macchina. Durante il funzionamento la camera organo è coperto da un coperchio trasparente per mantenere un ambiente umido sterile per il fegato (non mostrato in queste immagini).&quot;&gt; Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura. 4. normotermica macchina di perfusione <ol><li> Posizionare il fegato nella camera organo con la superficie anteriore rivolta verso il basso. Collegare immediatamente il fegato al dispositivo perfusione primed collegando la cannula vena al tubo afflusso portale del dispositivo perfusione e la cannula arteriosa al tubo flusso arterioso del dispositivo. </li><li> Inizia perfusione su entrambi i lati del portale e arteriosa seguendo le istruzioni del produttore sullo schermo. Impostare la pressione arteriosa media a 70 mmHg e la pressione venosa portale medio a 11 mmHg. </li><li> Dai campioni di liquido di perfusione ogni 30 minuti per l&#39;analisi immediata dei parametri di gas nel sangue (pO 2, pCO 2, SO 2, HCO 2 - e pH) e parametri biochimici (glucosio, calcio, lattato, potassio e sodio) utilizzando un analizzatore di gas del sangue convenzionali . Assicuratevi di scartare circa 3 ml di perfusionefluido prima di prendere i campioni, come questo fluido è nel tubo periferico e non rappresenta il fluido di perfusione nel sistema. <ol><li> Per prendere questi campioni aspirare il liquido di perfusione utilizzando una siringa da 1 ml dai connettori di campionamento che fanno parte del set di tubi monouso del dispositivo perfusione. Per ogni campione utilizzare una nuova siringa e immediatamente rimuovere eventuali bolle d&#39;aria dalla siringa su aspirazione del liquido di perfusione. Quindi inserire la siringa nel analizzatore di gas di sangue e seguire le istruzioni del produttore riportate nel manuale dell&#39;analizzatore. </li></ol></li><li> Raccogliere il plasma dal liquido di perfusione, congelare e conservare a -80 ° C per la determinazione della fosfatasi alcalina (ALKP), gamma-glutamil transferasi (gamma-GT), alanina aminotransferasi (ALT), urea e bilirubina totale. Raccogliere plasma dopo 5 minuti di centrifugazione del liquido di perfusione a 1.500 xg e 4 ° C. </li></ol>

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Gli autori di questo manoscritto non hanno alcun conflitto di interessi di rivelare.

Questo video offre un passo per passo protocollo per normotermica macchina di perfusione di fegatini di donatori umani utilizzando un dispositivo che consente a pressione controllata a doppio perfusione attraverso la arteria epatica e vena porta. Seguendo questo protocollo, guasti tecnici della macchina di perfusione non si è verificato e tutti gli innesti sono stati ben perfuso e ben ossigenato. I situ perfuso fegati ex avevano emodinamica stabile ed erano metabolicamente attiva, come definito dalla ...

L&#39;attuale metodo di conservazione dell&#39;organo nel trapianto di fegato è a filo con e successivo stoccaggio di fegatini di donatori a freddo (0-4 ° C) del liquido di conservazione (come ad esempio l&#39;Università di Wisconsin soluzione o la soluzione Istidina-triptofano-chetoglutarato). Questo metodo è denominato frigoconservazione statica (SCS). Sebbene il tasso metabolico di fegati a 0-4 ° C è molto basso, vi è ancora richiesta per / min / g di tessuto epatico 0,27 mmol ossigeno, che non possono essere forniti durante SCS 1. Il metodo convenzionale di SCS, quindi, si traduce in un certo grado di (ulteriore) lesione di fegatini di donatori. Anche se questa quantità di lesioni conservazione non è un problema nel fegato del donatore di buona qualità, può diventare un fattore critico e limitante fegati non ottimali che hanno già subito un certo grado di lesione del donatore. Per questo motivo, fegatini con una qualità non ottimale o cosiddetti criteri esteso donatore (ECD) fegati sono spesso respinte per il trapianto come il rischio of fallimento precoce innesto viene considerato troppo alto. Alti tassi di funzione in ritardo trapianto, non funzione primaria, e stenosi biliari non anastomotiche (NAS) sono stati descritti nei riceventi di fegati da donazione dopo la morte circolatorio (DCD), i donatori di età superiore o destinatari di innesti steatosico 2. NAS sono una delle principali cause di morbilità e mortalità dopo trapianto di fegato. NAS può verificarsi in entrambi i dotti biliari extra-donatore e intraepatiche e può essere accompagnata da intraduttale fango biliare e la formazione di fusione 3,4. Sebbene l&#39;eziologia di NAS è pensato per essere multifattoriale, danno da ischemia / riperfusione dei dotti biliari durante la conservazione del trapianto e trapianto è stato identificato come uno dei principali sottostante meccanismo di 2,5. Il trapianto di un innesto DCD è stato identificato come uno dei più forti fattori di rischio per lo sviluppo di NAS. La combinazione di un periodo di ischemia calda in un donatore DCD, ischemia fredda durante la conservazione di organi, e successiva riperfusionelesioni nel ricevente è pensato per essere responsabile per lesione irreversibile delle vie biliari, che, in combinazione con una scarsa capacità rigenerativa dei dotti biliari, provoca cicatrici fibrotica e restringimento delle vie biliari dopo trapianto di fegato 2,5. NAS sono stati segnalati nel 30% dei pazienti che hanno ricevuto un fegato DCD 6-8. È ormai chiaro che l&#39;attuale metodo di SCS di fegati per il trapianto non è sufficiente per preinjured fegati ECD come quelli da donatori DCD. Metodi alternativi sono necessari per aumentare e ottimizzare l&#39;utilizzo di fegati ECD per il trapianto. Macchina perfusione (MP) è un metodo di conservazione di organi che possono fornire una migliore conservazione di organi, rispetto a SCS. MP potrebbe essere particolarmente rilevante per la conservazione di innesti ECD. Un importante vantaggio di MP è la possibilità di fornire l&#39;ossigeno per l&#39;innesto durante il periodo di conservazione. MP può essere eseguita a varie temperature,che sono stati classificati come ipotermico (0-10 ° C), subnormothermic (10-36 ° C) e normotermica (36-37 ° C) MP (NMP). A seconda della temperatura utilizzata per MP, il tipo di liquido di perfusione deve essere regolata e con l&#39;aumentare della temperatura più ossigeno deve essere fornito. La prima applicazione clinica di MP nel trapianto di fegato umano è stato basato sulla perfusione ipotermica senza l&#39;ossigenazione attiva del 9,10 liquido di perfusione. In modelli animali, ipotermia MP ossigenata (0-10 ° C) ha dimostrato di avere effetti protettivi contro l&#39;ischemia / riperfusione del fegato innesti 11 e per fornire una migliore conservazione del plesso vascolare peribiliare della bile condotti 12. Subnormothermic ossigenato MP a 20 ° C o 30 ° C è stato anche studiato in modelli animali e ha dimostrato di fornire prima il recupero della funzione del trapianto di fegati DCD, rispetto a SCS 13,14. La fattibilità di subnormothermic MP ossigenato di fegato umano è stata recdipendentemente riportato in una serie di sette fegati donatori umani scartati 15. NMP (37 ° C), permette la valutazione della fattibilità del trapianto e la funzionalità prima del trapianto 16,17. Inoltre, MP consente graduale rewarming dell&#39;innesto epatica prima del trapianto, che è stato dimostrato per facilitare il recupero e rianimazione dell&#39;innesto 18. Il dispositivo perfusione utilizzato nel protocollo corrente epatica perfusione macchina consente dual perfusione (attraverso la vena porta e l&#39;arteria epatica) utilizzando due pompe centrifughe, che forniscono un continuo flusso portale e un flusso pulsatile arteriosa. Il sistema è a pressione controllata, permettendo autoregolazione del flusso attraverso il fegato, a seconda della resistenza intraepatica. Due cavi ossigenatori a membrana fibra consentono l&#39;ossigenazione del trapianto di fegato, come pure per la rimozione di CO 2. La temperatura può essere impostata in base al tipo previsto di MP (temperat minima<html> ure di 10 ° C). Portata, pressione e temperatura vengono visualizzati sul dispositivo in tempo reale consentendo un controllo continuo del processo di perfusione. Un nuovo set monouso sterile tubi, serbatoio e ossigenatori è disponibile per la perfusione di ogni innesto (figura 1). Lo scopo di questo articolo il video è quello di fornire un passo per passo protocollo per ex situ macchina normotermica perfusione di fegati di donatori umani che utilizzano questa macchina di perfusione epatica di nuova concezione. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52688/52688fig1.jpg" /> Figura 1: (A) Un disegno schematico, (B) una foto della macchina perfusione, (C) una vista ravvicinata della ossigenatore, e (D) pompa centrifuga usata per la perfusione normotermica di fegati di donatori umani.ottenere = &quot;_ blank&quot;&gt; Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Liver Assist</td>
			<td>Organ Assist</td>
			<td>OA.Li.Li.140</td>
			<td>Perfusion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liver Assist disposable package</td>
			<td>Organ Assist</td>
			<td>OA.Li.DP.540</td>
			<td>Disposable set and cannulas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meredith No.8</td>
			<td>Vygon Nederlands B.V.</td>
			<td>1362082</td>
			<td>Bile duct cannula</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human albumin 200g/l / ALBUMAN</td>
			<td>Sanquin</td>
			<td>15522598</td>
			<td>100 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified parenteral nutrition</td>
			<td>Baxter Nederland B.V.</td>
			<td>N14G30E</td>
			<td>7.35 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multivitamins for infusion / CERNEVIT</td>
			<td>Baxter International Inc.</td>
			<td>9800927</td>
			<td>7 ul</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Concentrated trace elements for infusion / NUTRITRACE</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG</td>
			<td>14811332</td>
			<td>7.35 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metronidazole 5mg/ml</td>
			<td>Baxter Nederland B.V.</td>
			<td>98181882</td>
			<td>40 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cefazoline / SERVAZOLIN</td>
			<td>Sandoz B.V.</td>
			<td>15611337</td>
			<td>2 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast acting insulin&#160;</td>
			<td>various vendors</td>
			<td></td>
			<td>20 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium glubionate, intravenous solution 10%, 137.5 mg/mL</td>
			<td>Sandoz</td>
			<td>97038695</td>
			<td>40 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile H2O</td>
			<td>Fresenius Kabi Nederland B.V.</td>
			<td>98084453</td>
			<td>51.3 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl 0.9%</td>
			<td>Baxter Nederland B.V.</td>
			<td>15262510</td>
			<td>160 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin 5000 IE/ml for i.v. administration</td>
			<td>LEO Pharma B.V.</td>
			<td>98026178</td>
			<td>4 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate 8,4%</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG</td>
			<td>97973874</td>
			<td>The amount depends on the pH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Packed red blood cell (in SAGM)</td>
			<td>Blood bank (Sanquin)</td>
			<td>N0012000</td>
			<td>750 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fresh frozen plasma</td>
			<td>Blood bank (Sanquin)</td>
			<td>N04030A0/N04030B0</td>
			<td>900 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex situ normothermic machine perfusion of donor livers

In contrasto con conservazione a freddo statico convenzionale (0-4 ° C), ex situ perfusione macchina può fornire una migliore conservazione di fegati di donatori. Perfusione continua degli organi offre l&#39;opportunità di migliorare la qualità di organi e permette ex valutazione della vitalità economica situ di fegati donatori prima del trapianto. Questo articolo video fornisce un passo per passo protocollo per ex situ perfusione macchina normotermica (37 ° C) di fegati di donatori umani utilizzando un dispositivo che fornisce una pressione e temperatura controllate pulsatile perfusione dell&#39;arteria epatica e perfusione continua della vena porta. Il liquido di perfusione viene ossigenata da due ossigenatori a membrana a fibre cave e la temperatura può essere regolata tra 10 ° C e 37 ° C. Durante la perfusione, l&#39;attività metabolica del fegato così come il grado di lesione può essere valutata mediante analisi biochimica dei campioni prelevati dal liquido di perfusione. Perfusione macchina è uno strumento molto promettenteper aumentare il numero di fegati che sono adatti per il trapianto.

12 fegati umani che sono stati declinati per il trapianto a causa di vari motivi sono stati utilizzati dopo aver ottenuto il consenso informato per la ricerca provenienti da famiglie di donatori. Caratteristiche donatori sono descritte in Tabella 2. I fegati di donatori umani sono stati perfusi normothermically per 6 ore utilizzando il protocollo descritto in questo documento. La qualità dei fegati sono stati valutati attraverso il monitoraggio omogeneità macroscopica della perfusione del fegato <stro...

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Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Qui vi presentiamo un protocollo che descrive ossigenato ex situ macchina di perfusione di fegati donatore. Questo articolo contiene un passo per passo protocollo di procurarsi e preparare il trapianto di fegato per la macchina di perfusione, preparare il liquido di perfusione, primo la macchina di perfusione ed eseguire ossigenato normotermica macchina perfusione del trapianto di fegato.

Ex Situ normotermica macchina di perfusione di Vivi donatori

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

ex-situ-normothermic-machine-perfusion-of-donor-livers

Research

JoVE Journal

Medicine

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

11.1K Views.  University of Groningen, University Medical Center Groningen.  Qui vi presentiamo un protocollo che descrive ossigenato ex situ macchina di perfusione di fegati donatore. Questo articolo contiene un passo per passo protocollo di procurarsi e preparare il trapianto di fegato per la macchina di perfusione, preparare il liquido di perfusione, primo la macchina di perfusione ed eseguire ossigenato normotermica macchina perfusione del trapianto di fegato. 

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Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a serious problem. Therefore, the acceptance criteria for organ donors have been extended leading to the usage of marginal kidney grafts. These marginal organs tolerate cold storage poorly resulting in increased preservation injury and higher rates of delayed graft function. To overcome the limitations of cold storage, extensive research is focused on alternative normothermic preservation methods.
Ex vivo normothermic organ perfusion is an innovative preservation technique. The first experimental and clinical trials for ex vivo lung, liver, and kidney perfusions demonstrated favorable outcomes.
In addition to the reduction of cold ischemic injury, the method of normothermic kidney storage offers the opportunity for organ assessment and repair. This manuscript provides information about kidney retrieval, organ preservation techniques, and isolated ex vivo normothermic kidney perfusion (NEVKP) in a porcine model. Surgical techniques, set up for the perfusion solution and the circuit, potential assessment options, and representative results are demonstrated.

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

The severe organ shortage has resulted in increased use of marginal kidney grafts for transplantation. This has triggered interest in alternative storage methods, since marginal grafts especially tolerate cold storage poorly. The technique of normothermic ex vivo kidney perfusion (NEVKP) represents a novel preservation method for kidney grafts prior to &#160;transplantation.

Normotermica<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Rene perfusione per la Preservazione della Kidney Innesti prima del trapianto

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

Ricerca

Medicina

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been introduced as a method to evaluate and modify organ function. NEVLP has many advantages in comparison to hypothermic and subnormothermic perfusion including reduced preservation injury, restoration of normal organ function under physiologic conditions, assessment of organ performance, and as a platform for organ repair, remodeling, and modification. Both murine and porcine NEVLP models have been described. We demonstrate a rat model of NEVLP and use this model to show one of its important applications &#8212; the use of a therapeutic molecule added to liver perfusate. Catalase is an endogenous reactive oxygen species (ROS) scavenger and has been demonstrated to decrease ischemia-reperfusion in the eye, brain, and lung. Pegylation has been shown to target catalase to the endothelium. Here, we added pegylated-catalase (PEG-CAT) to the base perfusate and demonstrated its ability to mitigate liver preservation injury. An advantage of our rodent NEVLP model is that it is inexpensive in comparison to larger animal models. A limitation of this study is that it does not currently include post-perfusion liver transplantation. Therefore, prediction of the function of the organ post-transplantation cannot be made with certainty. However, the rat liver transplant model is well established and certainly could be used in conjunction with this model. In conclusion, we have demonstrated an inexpensive, simple, easily replicable NEVLP model using rats. Applications of this model can include testing novel perfusates and perfusate additives, testing software designed for organ evaluation, and experiments designed to repair organs.

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant liver donor shortage, and criteria for liver donors have been expanded. Normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been developed to evaluate and modify organ function. This study demonstrates a rat model of NEVLP and tests the ability of pegylated-catalase, to mitigate liver preservation injury.

Un piccolo modello animale di aspersione epatica normotermica Ex Vivo

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Normothermic Ex Situ Heart Perfusion in Working Mode: Assessment of Cardiac Function and Metabolism

The current standard method for organ preservation (cold storage, CS), exposes the heart to a period of cold ischemia that limits the safe preservation time and increases the risk of adverse post-transplantation outcomes. Moreover, the static nature of CS does not allow for organ evaluation or intervention during the preservation interval. Normothermic ex situ heart perfusion (ESHP) is a novel method for preservation of the donated heart that minimizes cold ischemia by providing oxygenated, nutrient-rich perfusate to the heart. ESHP has been shown to be non-inferior to CS in the preservation of standard-criteria donor hearts and has also facilitated the clinical transplantation of the hearts donated after the circulatory determination of death. Currently, the only available clinical ESHP device perfuses the heart in an unloaded, non-working state, limiting assessments of myocardial performance. Conversely, ESHP in working mode provides the opportunity for comprehensive evaluation of cardiac performance by assessment of functional and metabolic parameters under physiologic conditions. Moreover, earlier experimental studies have suggested that ESHP in working mode may result in improved functional preservation. Here, we describe the protocol for ex situ perfusion of the heart in a large mammal (porcine) model, which is reproducible for different animal models and heart sizes. The software program in this ESHP apparatus allows for real-time and automated control of the pump speed to maintain desired aortic and left atrial pressure and evaluates a variety of functional and electrophysiological parameters with minimal need for supervision/manipulation.

Normothermic ex situ heart perfusion (ESHP), preserves the heart in a beating, semi-physiologic state. When performed in a working mode, ESHP provides the opportunity to perform sophisticated assessments of donor heart function and organ viability. Here, we describe our method for myocardial performance evaluation during ESHP.

Normotermica Ex Situ cuore aspersione in modalità di lavoro: valutazione della funzione cardiaca e il metabolismo

The current standard method for organ preservation (cold storage, CS), exposes the heart to a period of cold ischemia that limits the safe preservation ...

Normothermic Negative Pressure Ventilation Ex Situ Lung Perfusion: Evaluation of Lung Function and Metabolism

Lung transplantation (LTx) remains the standard of care for end-stage lung disease. A shortage of suitable donor organs and concerns over donor organ quality exacerbated by excessive geographic transportation distance and stringent donor organ acceptance criteria pose limitations to current LTx efforts. Ex situ lung perfusion (ESLP) is an innovative technology that has shown promise in attenuating these limitations. The physiologic ventilation and perfusion of the lungs outside of the inflammatory milieu of the donor body affords ESLP several advantages over traditional cold static preservation (CSP). There is evidence that negative pressure ventilation (NPV) ESLP is superior to positive pressure ventilation (PPV) ESLP, with PPV inducing more significant ventilator-induced lung injury, pro-inflammatory cytokine production, pulmonary edema, and bullae formation. The NPV advantage is perhaps due to the homogenous distribution of intrathoracic pressure across the entire lung surface. The clinical safety and feasibility of a custom NPV-ESLP device have been demonstrated in a recent clinical trial involving extender criteria donor (ECD) human lungs. Herein, the use of this custom device is described in a juvenile porcine model of normothermic NPV-ESLP over a 12 h duration, paying particular attention to management techniques. Pre-surgical preparation, including ESLP software initialization, priming, and de-airing of the ESLP circuit, and the addition of anti-thrombotic, anti-microbial, and anti-inflammatory agents, is specified. The intraoperative techniques of central line insertion, lung biopsy, exsanguination, blood collection, cardiectomy, and pneumonectomy are described. Furthermore, particular focus is paid to anesthetic considerations, with anesthesia induction, maintenance, and dynamic modifications outlined. The protocol also specifies the custom device's initialization, maintenance, and termination of perfusion and ventilation. Dynamic organ management techniques, including alterations in ventilation and metabolic parameters to optimize organ function, are thoroughly described. Finally, the physiological and metabolic assessment of lung function is characterized and depicted in the representative results.

Normothermic Negative Pressure Ventilation Ex Situ Lung Perfusion: Evaluation of Lung Function and Metabolism

This paper describes a porcine model of negative pressure ventilation ex situ lung perfusion, including procurement, attachment, and management on the custom-made platform. Focus is made on anesthetic and surgical techniques, as well as troubleshooting.

Perfusione polmonare ex situ di ventilazione a pressione negativa normothermica: valutazione della funzione polmonare e del metabolismo

Lung transplantation (LTx) remains the standard of care for end-stage lung disease. A shortage of suitable donor organs and concerns over donor organ ...

Normothermic Ex Vivo Pancreas Perfusion for the Preservation of Pancreas Allografts before Transplantation

Pancreas transplantation (PTx) is a curative treatment for people who live with the burden of a diagnosis of diabetes mellitus (DM). However, due to organ shortages and increasing numbers of patients being listed for PTx, new strategies are needed to increase the number of available grafts for transplantation. 
Static cold storage (SCS) is considered the gold standard for standard criteria organs. However, standard criteria donors (SCD) are becoming scarce and new strategies that can increase the rate of organ acceptance from extended criteria donors (ECD) are urgently needed. 
Normothermic ex vivo perfusion (NEVP) is one of the strategies that has become increasingly popular over the past couple of decades. This preservation method has already been used successfully in other organs (liver, kidneys, and lungs) but has been minimally explored in pancreas transplantation. The few papers that describe the method for pancreas show little success, edema being one of the major issues. The following manuscript describes the successful NEVP method and setup developed by our group to perfuse swine pancreas.

Normothermic Ex Vivo Pancreas Perfusion for the Preservation of Pancreas Allografts before Transplantation

Normothermic ex vivo machine perfusion (NEVP) has scarcely been explored for the preservation of pancreas allografts. We present an innovative preservation technique for pancreas allografts before transplantation.

Perfusione Pancreatica Ex Vivo Normothermic per la Conservazione degli Allotrapianti Pancreatici prima del Trapianto

Pancreas transplantation (PTx) is a curative treatment for people who live with the burden of a diagnosis of diabetes mellitus (DM). However, due to organ ...

Lung Rapid Recovery Procurement Combined with Abdominal Normothermic Regional Perfusion in Controlled Donation after Circulatory Death

Controlled donation after circulatory death (cDCD) has contributed to increasing donor numbers all over the world. Experiences published in the last years confirm that the outcomes after lung transplantation from cDCD are similar to those from brain death donors; however, the utilization of lungs from asystole donors remains low. Several reasons may be involved: different legal frameworks among countries and centers with different premortem interventions, inadequate lung donor care before procurement, or even poor experience with cDCD procedures and protocols.
Initially, the rapid recovery technique was commonly employed for the procurement of thoracic and abdominal organs in cDCD, but, in the last decade, abdominal normothermic regional perfusion (ANRP) with extracorporeal membrane oxygenation devices has become a useful method to restore blood flow to abdominal organs, allowing their quality improvement and their functional assessment prior to transplantation. This makes the donation procedure more complex and generates doubts about injury to the grafts due to dual temperature.
The aim of this article is to describe a protocol based on a single center experience with Maastricht III donors combining lung cooling rapid recovery in the thorax and abdominal normothermic regional perfusion. Tips and tricks focused on premortem interventions and lung procurement procedure techniques are explained. This may help to minimize the reluctance among professionals to use this combined technique and encourage other donor centers to use it, despite the increased complexity of the procedure.

The protocol combines a lung cooling rapid recovery technique with abdominal normothermic regional perfusion for abdominal graft procurement in controlled asystole donors, which is a safe and useful method to expand the donor pool.

Approvvigionamento di recupero rapido polmonare combinato con perfusione regionale normomica addominale nella donazione controllata dopo morte circolatoria

Controlled donation after circulatory death (cDCD) has contributed to increasing donor numbers all over the world. Experiences published in the last years ...

Functional Assessment of the Donor Heart During Ex Situ Perfusion: Insights from Pressure-Volume Loops and Surface Echocardiography

Heart transplantation remains the gold standard treatment for advanced heart failure. However, the current critical organ shortage has resulted in the allocation of a growing number of donor hearts with extended criteria. These marginal grafts are associated with a high risk of primary graft failure and may benefit from ex situ perfusion before transplant. This technology allows for extended organ preservation using warm oxygenated blood perfusion with continuous metabolic monitoring. The only NESP device currently available for clinical practice perfuses the organ in an unloaded non-working state, which does not allow for functional assessment of the beating heart. We therefore developed an original platform of NESP in working mode conditions with adjustment of left ventricular preload and afterload. This protocol was applied in porcine hearts. Ex situ functional assessment of the heart was achieved with intracardiac conductance catheterization and surface echocardiography. Along with a description of the experimental protocol, we herein report the main results, as well as pearls and pitfalls associated with the acquisition of pressure-volume loops and myocardial power during NESP. Correlations between hemodynamic findings and ultrasound variables are of major interest, especially for further rehabilitation of donor hearts before transplantation. This protocol aims to improve the assessment of donor hearts to both increase the donor pool and reduce the incidence of primary graft failure.

Functional Assessment of the Donor Heart During Ex Situ Perfusion: Insights from Pressure-Volume Loops and Surface Echocardiography

A reliable noninvasive approach for functional assessment of the donor heart during normothermic ex situ heart perfusion (NESP) is lacking. We herein describe a protocol for ex situ assessment of myocardial performance using the epicardial echocardiography and conductance catheter method.

Valutazione funzionale del cuore del donatore durante la perfusione ex situ : approfondimenti dai loop pressione-volume e dall'ecocardiografia di superficie

Heart transplantation remains the gold standard treatment for advanced heart failure. However, the current critical organ shortage has resulted in the ...

Rat Model of Normothermic Ex-Situ Perfused Heterotopic Heart Transplantation

Heart transplantation is the most effective therapy for end-stage heart failure. Despite the improvements in therapeutic approaches and interventions, the number of heart failure patients waiting for transplantation is still increasing. The normothermic ex situ preservation technique has been established as a comparable method to the conventional static cold storage technique. The main advantage of this technique is that donor hearts can be preserved for up to 12 h in a physiologic condition. Moreover, this technique allows resuscitation of the donor hearts after circulatory death and applies required pharmacologic interventions to improve donor function after implantation. Numerous animal models have been established to improve normothermic ex situ preservation techniques and eliminate preservation-related complications. Although large animal models are easy to handle compared to small animal models, it is costly and challenging. We present a rat model of normothermic ex situ donor heart preservation followed by heterotopic abdominal transplantation. This model is relatively cheap and can be accomplished by a single experimenter.

Here, we present an assessment protocol of a heterotopically implanted heart after normothermic ex situ preservation in the rat model.

Modello di ratto del trapianto di cuore eterotopico perfuso ex-situ normothermic

Heart transplantation is the most effective therapy for end-stage heart failure. Despite the improvements in therapeutic approaches and interventions, the ...

<meta charset="utf8"></head><body>Avanzamento del trapianto di polmone con perfusione basata su polihHb nei modelli EVLP di ratto

Exploring Alternative Perfusion Solutions Using Next-Generation Polymerized Hemoglobin-Based Oxygen Carriers in a Model of Rat Ex Vivo Lung Perfusion

Lung transplantation is hampered by the lack of suitable donors. Previously, donors that were thought to be marginal or inadequate were discarded. However, new and exciting technology, such as ex vivo lung perfusion (EVLP), offers lung transplant providers extended assessment for marginal donor allografts. This dynamic assessment platform has led to an increase in lung transplantation and has allowed providers to use donors that were previously discarded, thus expanding the donor pool. Current perfusion techniques use cellular or acellular perfusates, and both have distinct advantages and disadvantages. Perfusion composition is critical to maintaining a homeostatic environment, providing adequate metabolic support, decreasing inflammation and cellular death, and ultimately improving organ function. Perfusion solutions must contain sufficient protein concentration to maintain appropriate oncotic pressure. However, current perfusion solutions often lead to fluid extravasation through the pulmonary endothelium, resulting in inadvertent pulmonary edema and damage. Thus, it is necessary to develop novel perfusion solutions that prevent excessive damage while maintaining proper cellular homeostasis. Here, we describe the application of a polymerized human hemoglobin (PolyhHb)-based oxygen carrier as a perfusate and the protocol in which this perfusion solution can be tested in a model of rat EVLP. The goal of this study is to provide the lung transplant community with key information in designing and developing novel perfusion solutions, as well as the proper protocols to test them in clinically relevant translational transplant models.

<meta charset="utf8"></head><body>Autore in primo piano: Utilizzo dell'emoglobina umana polimerizzata di nuova generazione per migliorare la valutazione e la conservazione del polmone del donatore

Here, we describe the application of a polymerized human hemoglobin (PolyhHb)-based oxygen carrier as a perfusate and the protocol in which this perfusion solution can be tested in a model of rat ex vivo lung perfusion.

Esplorazione di soluzioni alternative di perfusione utilizzando vettori di ossigeno polimerizzati a base di emoglobina di nuova generazione in un modello di perfusione polmonare ex vivo di ratto