Questo protocollo identifica quattro aree chiave per contribuire a migliorare la metodologia e avere un trapianto di polmone affidabile. Il primo è una tecnica di cuffing riproducibile. Il secondo è identificare in modo accurato e riproducibile il quarto spazio intercostale, una chiusura completa della ferita e quindi come recuperare e ottenere campioni per l'analisi.
Queste tecniche aiutano a sviluppare un metodo affidabile di trapianto di polmone per lavorare sui meccanismi molecolari e sviluppare interventi terapeutici. Iniziare con la configurazione del dispositivo chirurgico accendendo l'apparecchiatura di monitoraggio della frequenza cardiaca / saturazione di ossigeno e riscaldando la scheda a 42 gradi Celsius. Inoltre, accendere la macchina di ventilazione e anestesia per preriscaldare l'evaporatore di isoflurano.
Riempire una siringa per anestesia con 10 millilitri di isoflurano liquido e montare la siringa sulla macchina di ventilazione e anestesia. Quindi, accendere il microscopio chirurgico con l'altezza e la messa a fuoco regolate in base alle preferenze e avviare il dispositivo di elettrocauterizzazione. Allo stesso modo, preparare e disporre gli strumenti chirurgici.
Determinare la corretta dimensione del calibro dell'angiocatetere da utilizzare per realizzare i polsini in base al peso corporeo del ratto facendo riferimento alla tabella uno. Dopo aver preparato i polsini per l'arteria polmonare, il bronco e la vena polmonare, posizionare l'angiocatetere delle dimensioni appropriate su una superficie sterile al microscopio chirurgico. Quindi, utilizzare una lama chirurgica rib-back numero 11 per tagliare il catetere angio-catetere con un angolo di 90 gradi per formare un corpo del bracciale lungo due millimetri con una larghezza e un'altezza di un millimetro nella parte superiore del corpo del bracciale.
Dopo aver preparato l'involucro per l'intervento chirurgico, effettuare un'incisione cutanea della linea mediana lunga tre o quattro centimetri, a metà collo, con le forbici, e sezionare attentamente i tessuti e i muscoli sottocutanei usando una pinza. Per l'intubazione endotracheale, infilare una sutura di seta 4-0 intorno alla trachea. Quindi, inserire un angio-catetere di gauge 16 nella trachea e legare saldamente la sutura attorno alla trachea con un doppio nodo, seguito da un singolo nodo per mantenere l'angio-catetere in posizione.
Collegare l'angio-catetere al ventilatore per mantenere un piano chirurgico di anestesia nel ratto con isoflurano dall'1 al 2%. Utilizzare le forbici per eseguire una laparo-sternotomia, come una linea mediana combinata e un'incisione trasversale. Quindi, iniettare 1.000 unità per chilogrammo di eparina con una siringa da insulina attraverso la vena cava inferiore, o IVC, e lasciare 10 minuti per la circolazione sistemica.
Mentre i polmoni sono in ventilazione, tagliare i padiglioni auricolari destro e sinistro con micro forbici a molla dissecanti e quindi introdurre un angio-catetere di gauge 18 attraverso l'arteria polmonare per lavare gravitativamente i polmoni con 20 millilitri di soluzione di conservazione in una siringa appesa a 28 centimetri di acqua, collegata al tubo e all'angio-catetere. Scollegare il ventilatore dal tubo endotracheale per collegarlo a una siringa da cinque millilitri riempita con un volume d'aria adeguato in base al peso corporeo. Dopo un'ora di ischemia calda, asportare il blocco cuore-polmone con le micro forbici e pinze a molla dissecanti e posizionare su una garza sterile inumidita con PBS ghiacciato su una piastra di Petri sterile su ghiaccio.
Tagliare con cura l'area ilare polmonare sinistra con la forbice a molla Vannas-Tubingen e procurarsi la vena polmonare sinistra, l'arteria polmonare e il bronco. Usa un emostatico di zanzara per afferrare la linguetta del bracciale. Quindi, prendere l'estremità distale della vena polmonare, dell'arteria polmonare o del bronco attraverso il corpo appropriato del bracciale e rimuovere il tessuto extra intorno al bracciale prima di fissare con 8-0 sutura in nylon.
Una volta fatto, utilizzare le forbici a molla Vannas-Tubingen per tagliare il tessuto extra e il bracciale intorno al corpo del bracciale. Per preparare il ratto ricevente, tracciare una linea sul petto del ratto dalla tacca soprasternale al processo xifoideo. Al centro di questa linea, traccia una linea lungo il lato sinistro del torace che misura metà della misurazione dalla tacca soprasternale al processo xifoideo.
Utilizzando il cavo in fibra ottica collegato a una luce LED dal kit di intubazione endotracheale, visualizzare e intubare il ricevente con un angio-catetere calibro 16. Una volta estratti i polmoni, posizionare una garza sterile attorno al polmone sinistro mentre la si tiene con il morsetto del bulldog Dieffenbach e applicare un morsetto Yasargil sull'area ilare del polmone sinistro il più prossimalmente possibile. Quando il ratto è pronto, procedere per l'anastomosi della vena polmonare posizionando la sutura di nylon 7-0 attorno alla vena polmonare del ricevente.
Incidere la vena polmonare del ricevente usando le forbici a molla Vannas-Tubingen tagliando trasversalmente le vene segmentali superiori e inferiori il più distalmente possibile e lavare il sangue con 0,2 millilitri di un'unità internazionale per millilitro di soluzione salina eparinizzata usando una siringa da insulina. Posizionare il polmone del donatore avvolto con una garza sterile ghiacciata, bagnata e gelile nella cavità toracica e inserire la vena polmonare ammanettata del donatore nella vena polmonare del ricevente prima di fissare l'anastomosi con la sutura di nylon 7-0 preposizionata. Per l'anastomosi bronchiale o bronchiale, posizionare una sutura di nylon 7-0 attorno al bronco del ricevente prima di incidere il bronco del ricevente tagliando trasversalmente le vie aeree segmentali superiori e inferiori il più distalmente possibile.
Dopo aver inserito il bronco ammanato del donatore nel bronco del ricevente, fissare l'anastomosi con la sutura di nylon 7-0 preposizionata. Quindi, eseguire l'anastomosi dell'arteria polmonare come descritto in precedenza. Per consentire la reprofusione e la ventilazione del polmone donatore trapiantato, rimuovere il morsetto Yasargil sull'ilo, seguito dalla chiusura dell'incisione toracotomia con una sutura di nylon 6-0.
Raccogliere il liquido BAL dai polmoni nativi o trapiantati come desiderato. Il rapporto peso umido / secco dei lobi è stato calcolato per misurare l'edema polmonare. Il lobo trapiantato ha mostrato un aumento significativo del rapporto tra peso umido e secco rispetto al lobo nativo del donatore o del ricevente, indicando che non c'è edema polmonare.
A nostro avviso, i due passaggi critici di questa procedura sono: uno, utilizzare accuratamente i punti di riferimento anatomici per identificare il quarto spazio intercostale, e poi due, selezionare e utilizzare appropriatamente i polsini per avere una tecnica di cuffing riproducibile. Un modello di trapianto di polmone di ratto che sia riproducibile e coerente è una base per indagini molecolari sulla reprofusione di ischemia e sul trapianto in generale.
